文摘

无刺的蜜蜂是昆虫所普遍培育农民在泰国东部地区的授粉果园。产品从无刺的蜜蜂育种包括蜂蜜和蜂胶。这个实验的目的是研究开发的可能性无刺的蜂胶蜡成固体脂质纳米粒(SLN)比较五种表面活性剂(721年玻雷吉,Cremophor我们7日Myrj 52岁,188年泊咯沙姆和渐变80)。每个表面活性剂用于三个浓度:10%,20%,30%。主公式按照下列选择:物理特性,粒子大小、电动电势和圈套。结果表明,721年玻雷吉和Myri 52 20%可用于准备SLN和维生素E有良好的保护属性(大小:451.2和416.8 nm,电动电势:- 24.0和- 32.7;% EE: 92.32%和92.00%,分别地)。因此,它们进一步发展以低溶解性:通过添加以下药物姜黄素,布洛芬,虾青素。发现一个公式使用表面活性剂721年玻雷吉Myrj 52 20%有类似的药物。诱捕的研究涉及姜黄素82%,布洛芬40%,虾青素67%。 Moreover, the cytotoxicity test of blank solid lipid nanoparticle found no toxicty in fibroblast cell line (CRL-2522). Therefore, from this study, it is determined that stingless bee propolis wax has the potential to be developed to provide more efficient SLN in the future.

1。我ntroduction

固体脂质纳米粒(SLN)自1990年以来,一个有趣的药物输送系统。蜡的系统是由固体状态在室温和体温,表面活性剂,和水,造成脂质纳米粒子与功能,包括固体矩阵(1]。有遍布全国各地的重要药物。的人气,颗粒大小主要是在50 - 500纳米的范围2- - - - - -4]。一般来说,使用固体蜡在公式0.1 - -30% w / w。蜡的熔点高于40°C是普遍使用,因为该产品将在室温下稳定,不容易融化。尤其是医药产品运送到热带国家使用这种蜡。可以使用超过一种类型的蜡,如甘油三酯,Glyceryltristearate (Dynasan®118), Glycerylbehenate (Compritol®888 ATO),硬脂酸,巴西棕榈蜡,米糠蜡。然而,SLN从蜡使用,发现问题等情况下,蜡在活性物质加载能力较低。还有药物推出后从系统中存储一段时间。因此,研究开发类型的蜡仍持续不断。无刺的蜜蜂是昆虫,只是蜜蜂没有刺,所以他们在繁殖授粉果园是受欢迎的,尤其是在泰国东部地区。这些蜜蜂大量繁殖,除了没有讽刺者,他们的习惯寻找花蜜不同于印度蜜蜂蜂房蜜蜂或岩石。 That is, the stingless bee finds nectar not so far away, usually within 100–200 meters, and it swarms to flowers indiscriminately. The benefits of stingless bees are honey from the hive, beeswax, and propolis, which is a resinous substance gathered by stingless bees from natural sources such as broken bark, leaf buds, flower nectar, and pollen grain. Therefore, the color and composition of the wax are different according to the area. Generally, the components of propolis are different according to the source. Mostly, they include resin, vegetable balsam 50%, wax 30%, essential oil and aromatic oil 10%, pollen 5%, and other substances 5% [5- - - - - -7]。无刺蜜蜂与唾液混合收集的蜂胶和蜂蜡,这使得其属性类似于芳香的胶水,固体和脆弱。当加热时,它变得又粘又软。它使用无刺蜜蜂筑巢和修复蜂巢。蜂胶是用来插破巢。蜂胶的研究显示,这种物质从蜂胶中提取酒精提供药理作用,如抑菌效果和抗氧化活性。

基于前面提到的信息关于蜂胶的好处,蜂蜜在业内是分开的蜂窝,蜂胶是吃剩的行业。不过,村民将使用剩下的蜂蜡日用产品,如蜡烛。尽管如此,这仍然是不够的高残留蜡。在本研究中,研究进一步发展残留蜡药用增加药物行业的效率,减少浪费,预计从蜡的性质。它应该被用作替代合成蜡在未来发展的药物输送系统。

2。材料和方法

无刺的蜂胶在Chanthaburi来自水果花园,泰国。乙醇、甲醇和己烷从默克密理博购买。721年玻雷吉从Croda。旗下购买188年泊咯沙姆Myrj 52、生育酚乙酸酯和姜黄素是从西格玛奥德里奇购买的。Cremophor WO7,二层80年,布洛芬从电脑购买药物和化学。虾青素被富士化学友情提供。杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)购买的擤鼻涕。胎牛血清的边后卫,L-glutamax和抗生素/抗真菌的从英杰公司购买。

2.1。无刺的蜜蜂蜡提取

无刺的蜂胶在己烷浸渍24小时,之后提取是用一张布过滤。提取浓缩蒸发成用旋转蒸发器的机器。蜡当时使用水浴蒸发,直到所有己烷蒸发,紧随其后的是存储在一个浅棕色瓶子在冰箱4 - 8°C到使用。

2.2。与气相描述组件的无刺的蜂蜡

物质溶解在正己烷(正己烷;气相色谱女士SupraSolv®年级,1.00795 EMD微孔,默克公司)。然后,样例是一个注射器过滤器过滤(聚四氟乙烯膜,亲水类型,0.45μ米)在注入分析gc - ms跟踪1300年之前,在坚持一套自动化液体抽样称为TriPlus RSH Autosampler以及一个叫做三重四极质谱仪串联质谱仪,模型:8000年TSQ Evo热科学。列用于色谱TR5-MS(5%苯基甲基聚硅氧烷;30米×0.25毫米ID, 0.25μ膜厚,热费希尔科学)。的注射量是1μl分裂1:10临时喷射器300°C。柱温箱的温度设定程序,初始值为80°C,这是维持两分钟,后增加到350°C的速度5°C /分钟,维持10分钟。分析的总时间是66分钟/分析。载气或使用氦1毫升/分钟的流量。质谱条件,大规模电离电子70电动汽车的影响。传输管使用的温度为300°C,和离子源的温度为250°C。质谱数据收集在一个女士全扫描模式。质量范围在50到750年阿姆河在扫描时间(停留时间)的0.2秒。

2.3。蜡与红外光谱、DSC表征

蜡的四种类型如下:(1)从繁殖无刺的蜜蜂蜜蜂蜡;(2)合成蜜蜂蜡;(3)大米分支蜡;(4)胆固醇。独特性的那些时光6700和测试和红外光谱分析了NICOLET差示扫描热量计(DSC)(梅特勒-托利多)通过增加温度10°C /分钟使用温度在0°C到400°C。

2.4。使用无针的蜜蜂蜡制备的固体脂质纳米粒

每个表面活性剂用于三个浓度:10%,20%,30%。表面活性剂是如下:721年玻雷吉,Myrj 52岁,80年补间,188年泊咯沙姆,Cremophor WO7。

在公式开发中,SLN的第一步发展使用醋酸生育酚(维生素E)作为模型药物。制备方法是微乳液技术通过混合辅料,如表1,紧随其后的是水浴融化。阶段是注入的水油相,然后混合与均质器的速度10000转30分钟。之后,一个微乳液是巩固立即浸泡在冰浴。然后,选择合适的公式与其他药物研究加载实验,如姜黄素、布洛芬、虾青素。

2.5。固体脂质纳米粒的特征

粒子大小和表面电荷测量使用纳米尺度系列Zetasizer,而特征进行评估用扫描电子显微镜(SEM)。

2.6。截留效率(% EE)

SLN配方是离心机离心器(Amicon) MW 100 K的速度10000转30分钟,然后用50%乙醇和离心两次删除卸载药物。膜上的粒子滤波器与甲醇溶解使用紫外分光光度法测量吸光度系列u - 2900 -紫外线醋酸生育酚(维生素E),波长为295 nm。分析了姜黄素在波长549 nm,布洛芬的波长264 nm,虾青素的波长470 nm。姜黄素、布洛芬和虾青素将检查所选配方信息的生育酚乙酸酯。

2.7。细胞系和文化

人类成纤维细胞(crl - 2522)是从美国购买的我们的机构类型文化集合(写明ATCC)。细胞被播种与10%胎牛血清的DMEM培养基含有1%的抗生素/抗真菌的培养在37°C 5%的二氧化碳。培养基是改变每三天。

2.8。细胞的细胞毒性

细胞细胞毒性评估使用3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)测定。100年μl空白固体脂质纳米粒准备从721年玻雷吉或Myrj 52稀释在细胞培养中包含900年完成μl。当1×105成纤维细胞已完成24小时孵化96孔板,培养基取而代之的是粒子的解决方案,另一个24小时的细胞被孵化。完成后24小时孵化,麻省理工在5毫克/毫升浓度增加了10点μ信用证和孵化为另一个4个小时37°C和5%的公司₂,然后提取是排水和DMSO 100% 100年μl /添加甲瓒溶解于细胞内。最后,标仪是用来测量在570 nm和评估一个倒置显微镜。

3所示。结果与讨论

3.1。无刺的蜜蜂蜡的特点通过傅里叶变换红外光谱(FTIR)

无刺的蜜蜂蜡的红外光谱谱图所示1和表2。无刺的蜜蜂蜡要点,包括峰值在2800 - 2900点,也就是sp3碳氢键拉伸CH2和CH3的峰值。这个结果代表了功能烷烃或烷基(碳氢键)在1400年达到顶峰,这是sp3碳氢键弯曲的高峰期,而峰值在1670 - 1780 C = O拉伸,这表明羰基官能团(C = O)。结果表明,无刺的蜜蜂蜡是一种脂肪酸的主要组成部分。与另一种类型的红外光谱谱图的蜡2显示的一致性的重要元素无刺的蜜蜂蜡含有脂肪酸以及其他类型的蜡,因为它建立了相同的峰值位置,除了无刺的蜜蜂蜡的位置在1300没有找到任何其他类型的蜡。发现有切断的峰值在脂肪酸酯,它是一个重要组成部分的无刺的蜜蜂蜡。

3.2。无刺的蜜蜂蜡的特性差示扫描热量计(DSC)

差示扫描热量计(DSC)是用来测量时样品的热流加热。加热样品的物理和化学变化可以用来融化和模式的主要组件。

从DSC热谱的结果(图3)相比,合成蜜蜂蜡,米糠蜡的山峰,有不同的熔点与无刺的蜜蜂蜡相比,对脂肪酸的比例量也是不同的。无刺的蜜蜂蜡熔点更高,这可能是由于脂肪酸的组件在饱和烃8]。这是一个优势的脂质粒子输送系统因为其优越的稳定与其他类型的蜡在胆固醇的一部分,主要成分的类固醇(9,10]。热变化是不同于其他物质。

3.3。无刺的蜜蜂蜡的特点通过气相色谱分析-质谱法(gc - ms)

从气相色谱图(图4),发现无刺的蜜蜂蜡的主要组件包括脂质,即形式的长链脂肪酸酯(3.24%)、碳氢化合物和39.18%的总长度。胆固醇和常用药用也发现从48.37分钟,总计为42.1%(表3)。这符合由DSC实验,热法显示,无刺的蜜蜂蜡熔点有两个职位。澄清,熔点为58.6°C是接近胆固醇。其他的熔点在87 - 88°C高于蜜蜂蜡,米糠蜡,蜡的组件可能,主要是饱和烃。出于这个原因,熔点高于不饱和碳氢化合物的脂质。因此,利用无刺的蜜蜂蜡制备固体脂质纳米粒是它比其他天然脂质更稳定,因为它是不容易氧化。晶体的排列也低于不饱和脂质。此外,常用药用符合先前的研究发现,从天然蜜蜂发现蜂胶有抗菌活性(10]。物质的无刺的蜂胶中找到β19-cyclo-9 -amyrone、酯衍生品和9日β-lanost-24-en-3βol有抗氧化和抗菌特性11- - - - - -13准备]因此,应用固体脂质纳米颗粒用于医疗或美容会是有益的。

3.4。无刺的蜜蜂蜡固体纳米粒子的特性

SLN制备的粒子与五种表面活性剂,发现Cremophor我们7不能SLN做好准备。奶油很厚,无法单独的粒子,从而导致无法收集任何粒子物理质量评估。关于其他表面活性剂,721年玻雷吉,Myrj 52岁,80年渐变,泊咯沙姆188(表4和图5),他们显示出类似的结果的类型和浓度/颗粒大小。10%浓度,粒径更小。表面活性剂降低表面张力的能力尚未完成,因此创建粒子非常小非常大。此外,维生素E的陷阱是不完整的。例如,10%的188年泊咯沙姆截留效率比使用低浓度的20%和30%。因此,这代表不完整的粒子的形成,影响药物滞留。然而,当表面活性剂的浓度增加时,粒子尺寸略大,尽管提高了粒子的结果由于降低表面张力和截留效率就越高。然而,粒度增加时使用非离子表面活性剂的浓度范围。研究Hazzah et al。14可以解释这一现象,当表面活性剂的浓度增加,粒径会更大。的碳氢链表面活性剂的力量吸引了范德瓦尔斯力中羟基的烃链,导致蜡滴凝固前合并成大水滴。另外,粒子将再次变得更小,当表面活性剂的浓度增加。表面张力降低的机制是强大到足以覆盖了热力学的力量。因此,粒子可以留在他们的形状,甚至具有高表面积,导致较小的和更稳定的粒子15]。虽然高浓度的表面张力最小的粒子,截留的百分比也减少了。诱捕的减少是因为非常高浓度的表面活性剂作为增溶剂;与胶束疏水性药物可以溶解机制。因此,一些药物溶于表面活性剂,如胶束、和分散在水相,但不溶于油相(16,17]。一滴蜡时创建的凝固成颗粒比它应该是药物含量较低。实验结果的维生素E加载SLN制备(表5),一个合适的表面活性剂的浓度是20%的最大比例的圈套,当考虑到参数和物理特性,如前所述。关于表面活性剂的类型、玻雷吉721和Myrj 52提供最好的粒子属性与一个较小的规模和较高的截留。721年还发现玻雷吉和Myrj 52线性分子结构,和碳链的数量低于80年渐变,和泊咯沙姆188(图6)。渐变80有一个长碳侧链,一个分支链类型,而泊咯沙姆188还有一个线性聚合物,但是分子量更高。因此,结构弯成U形当泊咯沙姆188形成胶束,与亲水部分朝外(18]。这就是为什么721年玻雷吉分子和Myrj 52小,可以覆盖粒子的表面更具有稳定性。关于微乳液制备使用小颗粒的表面活性剂或通过,比使用表面活性剂微乳液保持更稳定的大颗粒(15,19- - - - - -22]。图7显示了SLN的形态从两种类型的表面活性剂(玻雷吉721;Myrj 52),扫描电镜下球体状的粒子。为电动电势值的结果,纳米粒子大小通常需要收取−30或30 + mv (23- - - - - -25)以上保持粒子的稳定性。电动电势值接近于零将导致粒子聚合。研究结果显示,一个负电荷的粒子由于脂肪酸的羧基在蜡。结果发现,非离子表面活性剂不会明显影响电动电势的价值。

研究结果表明,该配方准备从721年玻雷吉,20%,平均粒径小于Myrj 52岁的20%,但研究结果相似,当评估%截留效率(表4)。结果表明,姜黄素具有最高的药物由于其高分子量;蜡越高溶解度为蜡溶度(创建一个更好的可能性26]。此外,布洛芬的截留效率比较少,因为其化学结构有极性基团如羧基组。因此,该药物可能很容易推出的液体蜡蜡凝固期间(27,28]。

3.5。细胞毒性

细胞毒性的SLN无刺的蜂胶决心使用MTT测定方法在纤维母细胞细胞系。数据显示从721年玻雷吉SLN制备和Myrj 52没有毒性与对照组相比显著差异或玻雷吉和Myrj(图的准备8)。在显微镜下观察来确定粒子大小的不能做,因为SLN太小了。此外,另一个研究也发现,人体细胞的SLN输送系统是安全的。研究还发现,成纤维细胞可以交付SLN通过内吞作用进入细胞通路与溶菌酶降解之前释放药物(29日,30.]。这也可能是为什么SLN粒子是无形的在显微镜下细胞外。前面的卡丁车运动的研究等。31日),关于交货SLN的糖皮质激素,表明SLN可增加糖皮质激素的渗透与控制的三倍。此外,细胞的存活率是94.5%经过18小时的潜伏期。符合本研究的结果。此外,SLN系统减少皮肤刺激刺激的质量在动物试验(32]。从先前的研究,可以得出结论,SLN输送系统是安全的,可以开发对人体使用。此外,它增加了机会吸收速率,减少毒素的药物。这个观察支持固体脂质纳米粒的发展为未来的医药用途的无刺的蜂胶。

4所示。结论

根据研究结果,发现麦蜂的蜡可以开发和作为药物输送系统。研究发现,不锈钢蜜蜂蜡的组件包括脂肪酸和萜类化合物。抗菌活性的萜类化合物被报道。因此,它可能会进一步研究或开发用于医药治疗局部感染。此外,DSC的理化测试发现,无刺的蜜蜂蜡有很高的物理化学稳定性与其他类型的蜡相比,导致长期存储下更稳定。最后,毒性试验显示成纤维细胞没有毒性,准备公式从721年玻雷吉或Myrj 52。因此,固体脂质纳米粒的交付系统可用于实际情况在未来,通过透皮给药或口服药物治疗。然而,这个研究仅仅是一个基本的评价无刺的蜜蜂蜡的特点。进一步的研究必须深入评估执行交付系统的稳定和发展。

数据可用性

本研究中使用的数据的可按照客户要求定制。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者要感谢的支持Burapha大学医药科学的教师提供研究设备,允许进行这项研究。