提高可溶性半乳糖凝集素-3作为乳腺癌患者化疗疗效的标志物:一项前瞻性研究

摘要

目的．半乳糖凝集素-3 (Gal-3)是一种聚糖结合凝集素，由于其多种功能和表达模式，在癌症进展中的作用备受争议。目前的研究是探讨乳腺癌预后与分泌Gal-3之间的关系。方法．首次确诊而未接受治疗的乳癌患者( ）根据他们的治疗方式进行辅助治疗或新辅助治疗。分别用免疫组化(IHC)和ELISA检测患者诊断时的基质和血浆Gal-3水平，然后在整个治疗过程中进行检测。健康女性(>18岁， ）被用来建立等离子体加尔-3的基线水平。术后随访84个月无病生存分析。结果．发现增强血浆（佐剂）和基质（Neoadjuvant）Gal-3的水平是化疗疗效的标志物。化疗诱导的细胞外加仑-3患者增加的无病间间隔，与分泌不变或减少的患者相比，84个月的随访期间的复发率明显降低。结论．该研究结果支持使用血浆Gal-3作为化疗疗效的标记物，当通过影像学看不到肿瘤残留时。此外，化疗后残留肿瘤间质水平也可用于预测患者的长期预后。

1.介绍

虽然在诊断乳腺癌的技术上有了显著的进步，但在治疗过程中仍然缺乏准确的预后工具。目前，根据癌症的类型和级别，抗癌治疗也有所不同。低级别或局部肿瘤在手术切除(辅助治疗)后可通过少量化疗进行治疗，而高级别肿瘤可能需要在手术前进行早期积极化疗以缩小肿块(新辅助治疗)[1］.治疗疗效监测至关重要，因此可以不断优化治疗以减少剩余的癌症负担和疾病复发的可能性[2，3.］.然而，持续存在癌症难以确定。开发了各种测量，包括（1）原发性肿瘤和节点转移的大小和细胞性[3.]，（2）诸如MRI和PET / CT成像的成像技术[2，4（3）循环肿瘤细胞DNA（CTDNA）检测[5］.基于组织的生物标志物，如雌激素受体（ER），孕酮受体（PR）和人表皮生长因子受体（HER2），并通过Ki67的测定有丝分裂活性的测定通常也在诊断时用于确定治疗方案的有效性[2，6］.最近，缺乏Galectin-3（Gal-3），一种聚糖结合凝集素，已经与较高有关在活的有机体内小鼠乳腺肿瘤的生长[7和淋巴结阳性乳腺癌预后差[8］.

Gal-3是一种31 kDa的糖蛋白，可与细胞外和细胞内的靶标相互作用，调节各种生物途径，包括细胞生长、分化、粘附、炎症和凋亡。它存在于细胞表面、细胞质和细胞核中，也可分泌到细胞外空间[9］.研究表明，Gal-3在肿瘤形成、生长和进展中的作用与肿瘤定位有关[10.，11.］.例如，细胞内和细胞外Gal-3表达升高与甲状腺抵抗有关[12.，13.]和乳房[14.胰腺癌中的癌症和促进转移[15.，16.］.另一方面，已经发现细胞外分泌Gal-3在一些细胞系中诱导凋亡，包括人T细胞白血病和外周血单个核细胞[17.］.此外，细胞内Gal-3的下调与乳腺转移有关[7，18.]和胃[19.癌症。

此前的研究也关注了Gal-3表达和定位的调控。一项特别的研究发现，在p53激活后，癌细胞的培养基中存在Gal-3 [20.，提示其可能参与细胞周期调控或凋亡。然而，Gal-3不是p53的转录靶点，无论p53状态如何，Gal-3的总体表达都是相似的。相反，它是通过非经典的外泌体介导途径分泌的，主要由TSAP6蛋白控制，TSAP6蛋白是p53的转录靶点[21.］.

许多化疗药物在p53通路活跃的肿瘤中更有效。由于细胞外Gal-3与细胞凋亡有关，我们推测它是否可能在肿瘤对化疗的反应中发挥作用。在本研究中，我们研究了可溶Gal-3作为辅助或新辅助治疗中接受化疗和手术的乳腺癌患者化疗疗效的可能生物标志物。基于目前的文献，我们假设化疗反应患者的肿瘤间质或血浆中可溶性Gal-3水平升高。

2。材料和方法

2.1。样品收集和患者信息

本研究议定书由Shaukat Khanum纪念癌医院和研究中心机构审查委员会批准（IRB协议编号07-01）。乳腺癌患者第一次诊断癌症和未经证实的治疗，并在2007年3月和2008年3月之间获悉这两位前瞻性随机临床研究。样品收集持续，直到收集其治疗过程中的所有必需样品或者患者从研究中退出。八十八（88）名患者患有谢克特Khanum纪念癌医院和研究中心（SKMCH＆RC）的女性患者被列入最终研究。该研究中包括的患者接受了化疗和手术肿瘤去除的组合。研究中的所有患者都接受了紫杉烷治疗作为其治疗方案的一部分。在治疗之前，从所有88名患者收集血样。非笨重的控制amples（ ）是在Skmch＆Rc的健康女性中获得的（ ）巴基斯坦拉合尔旁遮普大学生物化学与生物技术研究所( )．

癌症患者分为辅助治疗组( ）和新辅助治疗( ）基于它们的治疗方案。血液样品在每次化疗访问采取在这两个群体，以及之前立即手术，并再次2周术后。血液样本在EDTA涂层的管收集在2000×g下立即离心10分钟，并储存分离出的血浆在-70℃下直到使用。肿瘤和邻近的正常乳腺组织手术摘除期间收集。测定试样的一部分冷冻并保存在液氮中而其余的是石蜡包埋的以备将来使用。的各组患者汇总列于表1．每组患者的详细信息，包括发病年龄、肿瘤大小和组织学类型、淋巴结累及、ER/PR和Her2状态均列于补充表我和二．患者在治疗结束后随访84个月进行无病生存分析。生存时间被定义为从诊断之日到乳腺癌死亡之日以月为单位的时间。复发时间定义为从诊断到临床确诊复发的几个月内的时间。在研究设计和分析期间，所有努力均遵循REMARK准则[22.］.

２.２.粗血浆样品中的蛋白质定量

用Bradford法计算血浆粗蛋白浓度[23.]根据制造商的协议。简单地说，5 μ.将每个样品的L加入1ml Bradford试剂中。将样品孵育10分钟，然后在Biorad-Smart Spec Plus分光光度计（美国BioRad，USA）上的595nm处测量吸光度。根据使用Biorad BSA标准溶液的连续稀释液绘制的标准曲线计算蛋白质浓度。

2.3。免疫组化分析（IHC）

所有研究患者的石蜡包埋组织样本均使用苏木精和伊红染色进行检查，以确定肿瘤级别和类型。辅助治疗组患者在手术时仅获得1个样本，而新辅助治疗组患者获得2个样本;一个在诊断前，一个在化疗后手术时。分别用小鼠多克隆抗Gal-3 (Santa Cruz, CA, USA, SC-14364, 1: 500)和兔多克隆抗Ki67 (Abcam, Cambridge, MA, USA, ab92742, 1: 2500)抗体进行免疫组化检测Gal-3和Ki67表达。标准脱乙酰化后，根据制造商的协议(Dako-Behring, Glostrup，丹麦)，使用Envision双链dakocytomation试剂盒对样品进行测试。对照组采用无关IgG作为一抗。评分由三名盲观察人员完成:两名研究人员和一名病理学家分别在三个不同的领域(200倍和400倍放大)对每个样本进行评分。三名观察员的平均分数被记录为最终结果。

２.４.Galectin-3 ELISA

使用提供的制造商协议通过ELISA（BENDER MEDSYSTEMS，奥地利）量化血浆样品中的分泌GAL-3浓度。简而言之，将来自每个患者或对照样品的各种稀释液和未稀释的血浆用生物素 - 缀合的GAL-3抗体孵育2小时，然后加入链霉抗生物素蛋白-HRP。使用提供的重组GAL-3的连续稀释液抽出标准曲线以外喷涂样品中的实际量。所有样品一式三份测试。ELISA使用掺入TMB底物，在Biorad微板读取器（微孔板管理器5.2.1）上以450nm（参考波长= 620nm）在450nm（参考波长= 620nm）中检测到的色度终点。

2.5。TUNEL染色细胞死亡

通过TUNEL染色使用“冷冻组织切片中的细胞凋亡”原位细胞死亡检测套件，AP“（德国Roche）。在靶检索后，施加高（70倍）微波辐射1分钟。然后将样品在0.1M Tris-HCl（pH：7.5）中封闭，含有3％BSA（ ）20％（ ）正常的牛血清。用1X PBS冲洗玻片，阻断，TUNEL混合物染色。使用ap转化器将荧光染料转化为基于铬的结果。最后用0.1%伊红( )，采用水性安装介质安装，在光学显微镜下分析。

2.6。统计分析

血浆和基质Gal-3作为连续评分进行测量，通过log转换Gal-3进行分析，并使用这个log (Gal-3)作为协变量来研究是否随着Gal-3值的增加复发概率呈线性增加。采用Statview和Excel数据分析软件包进行统计分析。由于没有临床定义血浆Gal-3水平的截止点，高于95%的中位数非肿瘤控制值被认为是升高。此外，根据紫杉烷治疗后血浆Gal-3水平的变化将患者分为两组(血清Gal-3水平升高vs不变/下降)。血浆Gal-3水平对最终复发的影响是使用一个简单的二元指标作为变量进行测试的，该指标只有在水平随时间至少增加两倍时才为阳性。由此产生的列联表用费舍尔精确试验进行了分析。接下来，我们分别使用Levene’s和Kolmogorov-Smirnov检验等方差和正态假设，评估Gal-3的平均间质水平在有无复发的患者之间是否存在显著差异。双尾未配对 -测试用于比较来自两组数据的差异的统计显着性，适当使用Excel统计包。COX回归模型与可溶性GAL-3一起使用，作为暴露变量和整体存活（从手术时间到死亡时间或当前随访时间）的结果。无病存活（DFS）被定义为从手术到下列事件中的第一个事件的时间：在局部或遥远的部位或死亡中的复发而不复发。如果患者被排除在存活分析之外，如果他们丢失了随访。通过KAPLAN-MEIER方法绘制生存曲线，并使用SPSS软件（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）的日志秩检验进行比较; 被认为是统计学意义。分析同时进行性别，年龄，肿瘤规模（世界卫生组织）和阶段。通过单因素ANOVA和配对，化疗诱导的GAL-3水平统计学分析 -测试。Pearson相关系数用于测量通过Tunel反应性预先测量的GAL-3水平与细胞凋亡之间的关系。

结果

3．1.细胞外Gal-3水平随乳腺癌级别的增加而降低

一些研究已经检测了Gal-3在来自多种组织的肿瘤样本中的表达。大多数研究发现细胞内Gal-3水平随着转移和晚期癌症而增加[12.- - - - - -16.］.然而，很少有研究外加-3的水平。因此，我们首先检查在诊断时收集的研究患者的肿瘤活组织检查加尔-3的表达水平和模式（ )．通常在正常乳腺组织的基质中不存在GAL-3。相比之下，在低级（I和II等级）乳腺癌细胞的基质中观察到显着水平的细胞外加仑-3（图1(一)和1 (b))．这些水平随恶性程度显着下降（ ）(图1 (b))．这些发现与其他有关乳腺的研究结果一致[8，18.]子宫内膜癌[24.］.

接下来，我们检查了是否可以在患者的血浆中观察到不同的Gal-3水平。首先从乳腺癌患者血浆中定量总蛋白( ）以及健康女性对照组( )．所有研究组的血浆总蛋白水平保持相似(补充图。1A)．同样，两种佐剂的初始血浆Gal-3水平保持不变( ）和新辅助( ）与非肿瘤对照组相比( ）(图1（c））ELISA结果表明，在90％的对照女性中，均为11.0 ng / ml GAL-3蛋白的中位数，根据以前的研究结果[25.］.与非肿瘤对照组相比，低级别(I级和II级)肿瘤患者血浆Gal-3水平显著升高。与从肿瘤间质中观察到的结果相似，血浆Gal-3水平与乳腺癌级别的增加呈负相关(图)1（d）)．western blot分析证实了这些结果(补充图。1B.)．

3.2。在接受佐剂化疗时，升高的GAL-3水平是预测患者的反应

由于乳腺癌患者间质和血浆中分泌的Gal-3水平在不同程度上发生改变，我们接下来检查间质Gal-3水平是否随化疗而改变，以及它们是否与原发肿瘤切除后接受辅助治疗的患者的反应相关。化疗前采集肿瘤样本，用H&E和Gal-3染色，观察Gal-3蛋白的表达模式和定位。45%的患者的肿瘤间质中可见Gal-3高水平，而其余的样本要么没有表达，要么主要表现为胞内Gal-3，胞外空间释放很少(图)2（a）)．在84个月的随访期间，缓解期患者更有可能在原发肿瘤中有中到高水平的间质Gal-3(图)2（b）； )．

接下来，在诊断时、术后两周和每次化疗后采集血浆样本，以检查血浆Gal-3水平是否因化疗而改变。在化疗前，血浆中Gal-3水平与非肿瘤对照组相似，但在治疗开始后显著升高( 和 ）化疗周期2和3 (CTX-2和CTX-3)后，分别与初始(Pre)水平比较(图2（c）和表格2；补充图。2B.)．ELISA结果经western分析证实(补充图。2A)．59.6%(31/52)的患者血浆Gal-3水平显著升高，而其余患者对化疗无明显反应。与化疗前水平相比，84个月无病的患者血浆Gal-3平均升高5倍(范围2.5-11.0倍)(图)2 (d)； )．这些结果暗示Gal-3的血浆水平可以是化疗疗效的有用预测因子，特别是在没有成像的情况下留下残留肿瘤的情况下。

３．３．Gal-3在肿瘤间质中的释放可用于监测新辅助治疗的化疗疗效

为了阐明升高的血浆和间质Gal-3是否因化疗本身而增强，我们接下来测量了在原发肿瘤切除术前接受紫杉烷治疗的患者(新辅助治疗设置)的Gal-3水平。在初始诊断活检(化疗前)和化疗后手术切除的肿瘤中评估Gal-3的水平和肿瘤组织中的表达模式。一般而言，几乎所有患者化疗前均观察到间质Gal-3水平较低( ）（数字3(一个)和3 (b)顶板）。在84个月的随访期间，残留患者患有2倍或更多的中质GAL-3水平增加，响应化疗（图3(一个)， C和D3 (c)， )．在另一方面，患有复发性疾病通常显示出gal-3水平或与化学疗法施用表达模式（图无变化3 (b)， C和D3 (c))．这一数据也表明间质Gal-3是新辅助治疗患者化疗反应的阳性标记物。然而，与辅助治疗不同，接受新辅助化疗的患者血浆Gal-3水平未见增强或显著变化(图)3 (d)和补充图。2C)．

3．4．肿瘤基质中细胞外Gal-3与化疗后细胞凋亡相关

为了确定基质GAL-3的增强水平是否与肿瘤培育疗法较高的细胞凋亡率相关，用TUNEL测定检查组织切片。结果被量化为具有TUNEL阳性核的肿瘤细胞的百分比。在患者中，具有较高水平的基质GAL-3培育疗法，表明细胞凋亡（补充图3），患者患者中观察到更高水平的TUNEL染色。3A和图3B)．Pearson的相关试验还显示出在洗水疗法样品中的基质GAL-3水平和TUNEL反应性之间的正相关（补充图。3C＆D.； 洗手间疗法）。这些结果提出了细胞外加仑-3在诱导肿瘤细胞凋亡中的可能作用，以应对化疗。

3．5．细胞外分泌Gal-3对紫杉烷治疗的反应是无病生存的预后

最后，我们评估了血浆中升高的GAL-3水平的预后值（佐剂; ）和肿瘤基质（新辅助; ）通过Kaplan-Meier生存率分析84个月的研究患者随访后（图4(一)和4 (b)；数字5)．在辅助治疗中，与化疗后Gal-3水平降低或不变的患者相比，化疗后Gal-3血浆水平升高的患者无病间隔时间(22个月vs 11个月)和无病生存时间(77.4% vs 50.0%)明显更长(图)4(一)； )．新辅助研究组患者有更长的无病间隔（35个月对6个月）和较高的无病生存（81％比40％）（图4 (b)； ）肿瘤间质中Gal-3升高。这些结果有助于支持细胞外Gal-3作为预后的积极指标。

4。讨论

在本研究中，我们分析了基质和血浆Gal-3水平对新诊断乳腺癌患者的辅助和新辅助治疗的响应。我们假设在治疗过程中血浆Gal-3水平的变化可能与疾病预后和治疗疗效相关。对治疗前肿瘤组织的分析显示，未经治疗的肿瘤组织中分泌的Gal-3水平与恶性肿瘤的分期呈明显的负相关关系。这一结果与Ilmer等人(2016)最近的一项研究一致，该研究表明，在更高级别的乳腺肿瘤中Gal-3有下降的趋势，且Gal-3下降与淋巴血管侵犯显著相关[8］.Castronovo等人之前在乳腺癌和Okada等人在胃癌中也发现了类似的结果[18.，19.］.

与之前发表的研究不同，我们在研究患者的治疗过程中跟踪Gal-3的表达和定位。在新辅助治疗中，近60%的研究人群化疗后间质Gal-3显著增加(图)5)．较高的浓度可表示该组化疗诱导该组的GAL-3的分泌。然而，血浆水平保持不变，暗示分泌的GAL-3可以与肿瘤微环境或肿瘤细胞本身的伴侣结合。已经发现很少的比较研究表明，在Neoadjuvant与佐剂紫杉烷治疗的环境中区分基质和血浆Gal-3水平，特别是在没有先前治疗历史的患者中。一些研究在预先检查GAL-3的指定参数，例如在体外，在活的有机体内, postchemotherapy [8，没有化疗[7，19.］.然而，许多研究使用了更轻松的参数来增加研究参与，从而导致响应治疗的GAL-3定位和功能的变化有限。Ilmer等人的研究。使用了非常具体的含有标准（没有现有恶性历史和多柔比星治疗），发现患者患者丧失GAL-3的患者的致肿瘤性和耐药性增加，导致预后差[8］.这些结果与目前的研究结果具有可比性，即可溶性Gal-3水平与疾病进展之间的逆关系被证明。然而，Ilmer等人的研究是一项回顾性分析，未检测治疗前或血浆中水平的变化。

为了阐明化疗对GAL-3表达和定位的确切效果，检查每种化疗周期的血浆水平的GAL-3。与Neoadjuvant患者的不笨拙对照相比，GAL-3的血浆水平没有显着变化。后一种观察表明，分泌的GAL-3最可能与细胞表面上的配体结合，这直接导致观察到的凋亡反应的诱导。可溶性GAL-3在细胞表面上与30多个乳糖胺配体相互作用;其中一些具有很好的特征，并且包括几种细胞外基质（ECM）组分，例如层粘蛋白，胶原蛋白IV，纤连蛋白，vitronectin和弹性蛋白，以及类似CD4，CD66和CD98，FcGrii，Ncam和Lamp-1的信号受体另外，它已被显示为绑定α.1β1和CD11b / 18整合素[9，26.］.显然，需要进一步的工作来确定这些已知配体是否能够介导细胞外Gal-3的凋亡效应，并可能在肿瘤细胞中表达更高水平。

在辅助治疗中，检查血浆Gal-3水平尤其必要，因为患者术后无残余肿瘤，且仅能在组织中观察到初始Gal-3水平。在本研究中，只有化疗阳性的患者血浆Gal-3水平显著升高。这可能是由于循环中的肿瘤细胞释放Gal-3，而Gal-3不能与肿瘤微环境中正常存在的伴侣结合。此前发表的研究结果显示，与正常对照组相比，癌症患者的Gal-3水平更高[27.- - - - - -29.，尽管这些研究通常涉及接受过某种形式的癌症治疗的患者，从而混淆了结果。Cheng等人的一项研究[29.]，检测了未接受任何治疗的患者的Gal-3，但也限制了治疗前血清Gal-3水平的分析。然而，Cheng等人的研究测量的初始Gal-3水平与本研究的结果一致。尽管存在这些问题，血浆中Gal-3水平已被建议作为转移潜能的标志物[11.，12.，27.- - - - - -29.］.我们的结果专门研究对治疗的反应，并表明Gal-3的血浆水平可用于在疾病监测中没有可见的肿瘤时进行化疗响应。

结果进一步表明，与不变或减少的GAL-3水平的患者相比，对佐剂或Neoadjuvant化疗响应GAL-3升高的升高患者的升高患者也在84个月的随访期间享有较长的疾病存活率．因此，我们建议在先前研究中看到的增加的血浆Gal-3可能实际上是对癌症治疗的反应，而不是肿瘤细胞本身的直接结果。虽然这些发现表明Gal-3作为乳腺恶性肿瘤的标志物的临床意义，在体外使用化疗敏感和耐药乳腺癌细胞系的研究将是必要的，以验证这些结果，以便进一步转化为临床实践。的确，伊尔默在2016年的研究进行了几次在体外研究阐明Gal-3在乳腺癌干细胞(BCSCs)中的作用。该研究发现，与gal -3阳性细胞相比，gal -3阴性的BCSCs具有高度的致瘤性和耐药性[8］.

最后，增加间质和半乳糖等离子体-3具有增强的TUNEL染色化疗后相关​​的水平，表明在那些肿瘤细胞凋亡增加。GAL-3在细胞质中，它可以通过拮抗糖基化无关的机制的内在细胞死亡途径行之有效的抗凋亡作用[30.］.我们的结果还表明，可溶性Gal-3通过诱导凋亡抑制肿瘤细胞生长，部分是通过将细胞内Gal-3转移到细胞外空间。这可能是由于p53通过外泌体介导的途径诱导Gal-3的分泌。事实上，在之前的研究中已经观察到p53激活时Gal-3的分泌增强[20.］.我们检查了研究患者的p53状态，发现wt-p53状态与化疗诱导的Gal-3释放之间存在类似的相关性，但样本量有限(数据未显示)。本研究样本量小，纳入标准明确，随访时间长。尽管如此，即使队列规模较小，可溶Gal-3水平与生存之间仍有很强的统计学意义上的关系。因此，需要进一步的研究在更大的人群中证实这些结果。

最近的研究还示出了嵌合可溶性GAL-3的强凋亡效应，该嵌合可溶性GAL-3设计为通过添加经典分泌信号来分泌。在那项研究中，李等人。证明可溶性GAL-3杀死异常糖基化的肿瘤细胞并通过新的整联蛋白拮抗肿瘤生长β1依赖性细胞外部凋亡途径[26.］.类似的后翻译修改β在肿瘤细胞表面发现的整合素或Gal-3的其他结合伙伴也可能对我们的研究中观察到的促凋亡作用负责。基于我们的研究结果和同行发表的研究结果，我们提出了一种机制，即化疗激活p53可诱导Gal-3释放，导致效应细胞和包含Gal-3异常结合伙伴的旁观者细胞凋亡(图)6)．进一步的研究需要调查患者组织中的这些修饰和结合伙伴，以阐明可溶性Gal-3抗癌特性的相关途径。未来在体外研究还可以通过检测Gal-3在肿瘤细胞中对化疗反应的动员来研究可溶性Gal-3确切的抗肿瘤机制。

总之，这项研究遵循在任何抗癌治疗之前呈现的乳腺癌患者，以便清楚地检查手术，化疗和疾病本身如何改变血浆和肿瘤基质中的GAL-3分泌水平。我们的结果表明，乳腺癌患者的基质和/或血浆中升高的GAL-3水平与化疗反应之间存在良好的关系。因此，监测细胞外和血浆GAL-3水平可用作化疗疗效的标志物。这对于通过典型的成像方法可以遵循无可测量的肿瘤的佐剂设置中特别有用。我们进一步提供了第一种证据，即响应于紫杉烷治疗的细胞外分泌的GAL-3水平导致更好的预后和较长的无病生存率。结果表明，GAL-3的潜在用途作为预测长期患者预后的指示。

数据可用性

用于支持本研究发现的半乳糖凝集素-3数据可根据要求从通讯作者处获得。用于支持本研究结果的临床数据可能会在Shaukat Khanam纪念癌症医院和研究中心的机构审查委员会申请后公布，可以通过临床研究办公室联系该机构crc3@skm.org.pk．

附加分

关键点．化疗增加的Gal-3分泌导致更好的预后和更长的无病生存期。分析Gal-3的可溶性表达可作为一种支持工具，用于预测影像学随访中未见肿瘤残留的患者的治疗效果。

伦理批准

在涉及人类参与者的研究中进行的所有程序都是根据机构和/或国家研究委员会的道德标准，并与1964年赫尔辛基宣言及其后期修正案或可比的道德标准。

同意

从研究中包含的所有个人参与者获得知情同意书。

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

作者的贡献

项目概念和实验设计由FKR、AS和JM开发。患者通过NS进行识别。患者招募、登记和样本采购由AA完成。免疫组化分析采用SF、AS、AL进行分析解释，所有实验均采用SF、AS、ALS进行，OB进行统计分析。

致谢

我们非常欣赏那些自愿成为这项研究的一部分的人，并为我们的研究捐赠了他们的组织和血液。这项工作得到了Shaukat Khanum纪念癌医院和研究中心到法蒂玛khwaja rehman（相应作者）的研究资助。

补充材料

补充图1：乳腺癌患者中肿瘤的增加降低了Galectin-3的血浆水平。补充图2：血浆GAL-3水平响应化疗而增加。补充图3：化学疗法诱导的细胞外加仑-3与癌细胞中的凋亡相关。补充表I：乳腺癌患者的患者特征，接受原发性肿瘤手术后接受佐剂化疗。补充表II：接受Neoadjuvant化疗的乳腺癌患者的患者特征，然后进行手术。（补充材料）

参考

1. A. M. Thompson和S. L. Moulder-Thompson，《乳腺癌的新辅助治疗》，肿瘤学史， vol. 23, pp. x231-x236, 2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. J.罗，Z.周，Z. yang等，“18F-FDG PET / CT成像的价值与Pretherapeutic Ki67联合用于局部晚期乳腺癌新辅助化疗后病理反应的早期预测”药物，卷。95，没有。8年，2016年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
3. W. F. Symmans，F.Peintinger，C. Hatzis等人，“测量残留的乳腺癌负担，以预测新辅助化疗后生存，”临床肿瘤学杂志，第25卷，第2期28，第4414-4422,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
4. G. J. Bansal和D. Santosh，“与其他亚型乳腺癌相比，MRI预测三阴性乳腺癌对新辅助化疗反应的准确性，”印度放射学和成像杂志，卷。26，不。4，pp。475-481,2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. F. Riva，F. C. Bidard，A.Houy等人，“患者特异性循环肿瘤DNA检测在三阴性乳腺癌中的新辅助化疗，”临床化学，第63卷，第2期3，页691-699,2017。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
6. G. A. Ulaner, C. C. Riedl, M. N. Dickler, K. Jhaveri, N. Pandit-Taskar，和W. Weber，“乳腺癌生物标志物的分子成像”，核医学杂志，第57卷，增刊1，第53S-59S页，2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
7. J. X.Pereira，M.C.Azeredo，F.S.Martins等，“基质细胞中的半乳糖蛋白-3的缺陷导致增强的肿瘤生长和骨髓转移，”BMC癌症， 2016年第16卷，第636页。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
8. M. Ilmer, N. mazrek, M. Z. Gilcrease et al.，“低表达半乳糖凝集素-3与乳腺癌淋巴结阳性乳腺癌的低生存率和乳腺癌干细胞的间充质表型有关。”乳腺癌研究第18卷第2期1, p. 97, 2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
9. 宋亮，唐建文，吴建文，张建文，“Galectin-3在癌症中的作用”，《中国癌症杂志》，Clinica Chimica Acta， vol. 431, pp. 185-191, 2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
10. A. HANN，A. Gruner，Y. Chen，T. M. Gress和M. Buchholz，“细胞半乳糖蛋白-3的综合分析显示胰腺癌细胞中没有一致的致癌功能”普罗斯一体，第6卷，第2期6 e20859 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
11. Wang Y.， Liu S.， Tian Y.等，“半乳糖凝集素-3在实体肿瘤患者中的预后作用:36项合格研究的荟萃分析，”癌细胞国际第18卷第2期2018年1日。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
12. C.-I.林，E. E.黄正，D. B.唐纳等人，“半乳凝素3靶向治疗用小分子抑制剂激活细胞凋亡并增强在甲状腺癌两者化学敏感性和放射敏感性，”分子癌研究，卷。7，不。10，pp。1655-1662,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
13. L. Lavra, A. Ulivieri, C. Rinaldo等，“Gal-3在未分化甲状腺癌中被p53功能获得突变刺激，并调节化疗耐药性。”病理学杂志第218卷第1期1，第66-75页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
14. H. Zhang，M. Luo，X. Liang等，“Galectin-3作为乳腺癌中的标记和潜在的治疗靶标”，普罗斯一体，第9卷，第5期。9日,2014年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
15. S. Song, B. Ji, V. Ramachandran等，“胰腺癌中过表达半乳糖凝集素-3通过结合Ras和激活Ras信号诱导细胞增殖和侵袭，”普罗斯一体，卷。7，不。2012年8日。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
16. W. Zhao, J. A. Ajani, G. Sushovan等，“半乳糖凝集素-3通过整合素信号激活胰腺星状细胞产生细胞因子介导肿瘤细胞间相互作用，”胃肠病学，卷。154，否。5，PP。1524-1537.E6,2018。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
17. T. Fukumori，Y. Takeaka，T. Yoshii等，“CD29和CD7介导Galectin-3诱导的II型T细胞凋亡”癌症研究，第63卷，第2期23，pp。8302-8311,2003。视图:谷歌学术搜索
18. V. Castronovo, F. A. Van den Brûle, P. Jackers等人，“半胱氨酸-3表达减少与人类乳腺癌的进展有关，”病理学杂志，卷。179年，没有。1，第43-48,1996。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
19. K. Okada, T. Shimura, T. Suehiro, E. Mochiki，和H. Kuwano，“减少半凝集素-3表达是胃癌不良预后的一个指标，”抗癌的研究，卷。26，不。2b，pp。1369-1376,2006。视图:谷歌学术搜索
20. F. W. Khwaja, P. Svoboda, M. Reed, J. Pohl, B. Pyrzynska, E. G. Van Meir，“wt-p53调节的肿瘤细胞分泌组的蛋白质组学鉴定”，致癌基因，第25卷，第2期58，页7650-7661,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
21. N. Amzallag, B. J. Passer, D. Allanic等，“TSAP6通过非经典途径促进翻译控制的肿瘤蛋白/组胺释放因子的分泌，”生物化学杂志第279卷第2期44，页46104-46112,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
22. L. M. McShane, D. G. Altman, W. Sauerbrei等，“肿瘤标志物预后研究的推荐报告(REMARK)”，乳腺癌研究和治疗号，第100卷。2，页229-235,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
23. M. M. Bradford，“利用蛋白质染料结合原理定量微克数量蛋白质的快速和敏感方法，”分析生物化学，第72卷，第248-254页，1976年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
24. J. Al-Maghrabi, A. S. Abdelrahman, T. Ghabrah, N. S. Butt, B. Al-Maghrabi, M. N. Khabaz，“galectin-3的免疫组化表达与子宫内膜癌的分级、分期和分化显著相关，”病理学，研究和实践，卷。213，没有。4，pp。348-352,2017。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
25. M. Krintus, M. Kozinski, T. Fabiszak, J. Kubica, M. Panteghini，和G. Sypniewska，“建立血清中半凝集素-3浓度的参考区间需要仔细考虑其生物学决定因素，”临床生化，卷。50，不。10-11，第599-604，2017。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
26. E. G. Van Meir，S.-h。Lee，F. K.Rehman等，“嵌合信号肽 - 半乳糖凝集蛋白-3缀合物诱导糖基化依赖性癌细胞特异性细胞凋亡”临床癌症研究2020年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
27. I. Iurisci，N.田霏宇，C.纳托利，D. Angelucci的，E. Cianchetti和S. Iacobelli“在正常对照和癌症患者的血清中半乳凝素-3的浓度，”临床癌症研究，第6卷，第2期4，pp。1389-1393,2000。视图:谷歌学术搜索
28. M. Sakaki，N. Oka，R. Nakanishi，K. yamaguchi，T.Fukumori和H. O. Kanayama，“人类膀胱癌中的半乳糖蛋白-3血清水平”，“医学调查杂志，卷。55，不。1,2，pp。127-132,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
29. D. Cheng，B.梁和Y.Li，“血清Galectin-3作为胃癌的潜在标志物”医学科学监控，卷。21，pp。755-760,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
30. T.Fukumori，N. Oka，Y. Takeaka等人，“Galectin-3调节线粒体稳定性和抗曝光功能，以应对前列腺癌中的抗癌药物”癌症研究，卷。66，没有。6，第3114-3119，2006年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

版权

版权所有©2020 Arooj沙菲克等人。这是分布下的开放式访问文章知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。