疫苗研发治疗阿尔茨海默病神经病理学在APP / PS1转基因小鼠

文摘

一种新型疫苗解决阿尔茨海默病(AD)的主要特征,老年plaque-like淀粉样β蛋白(的沉积β)、神经纤维tangle-like结构和神经胶质促炎细胞因子,已开发。目前的疫苗需要新的方法来规避失败之前的测试在小鼠和人类,包括Elan-Wyeth疫苗(AN1792),造成大量的t细胞活化,导致meningoencephalitis-like反应。EB101疫苗包括在一本小说immunogen-adjuvant由liposomes-containing sphingosine-1-phosphate (S1P)。被EB101 APPswe / PS1dE9转基因老鼠广告前后病理症状被检测到。EB101治疗结果的显著减少β斑块负担,减少神经元tangle-like结构密度,和astrocytosis衰减。在这种转基因小鼠模型,EB101降低基底免疫T细胞之间的相互作用和免疫激活标记影响海马/皮质,符合amyloidosis-induced减少炎症。因此,免疫EB101阻止和逆转广告神经病理学以显著的方式阻止疾病进展不发展行为空间赤字在转基因小鼠。

1。介绍

阿尔茨海默病(AD)是老年痴呆的最常见的形式在发达国家,患病率约为1%,享年65岁,超过25%的人年龄超过85岁。临床上,它的特点是渐进认知退化,行为障碍,和功能下降。众所周知,广告是一种多基因/复杂疾病的数百个基因,分布在人类基因组,可能与环境密切合作参与抗病诱导剂,脑血管功能障碍,和表观遗传现象<一个href="#B1">1]。广告的主要神经病理特征包括-淀粉样蛋白的积累β(一个β)肽,神经原纤维tangle-like结构(非功能性测试)与磷酸化tau蛋白质主要由成对螺旋细丝组成,神经元和突触丢失(<一个href="#B2">2],减少整体大脑海马和内嗅皮层的特定损害体积(<一个href="#B3">3),神经炎症,神经胶质过多症,自由基的形成<一个href="#B4">4)、神经递质和神经营养因子赤字、代谢障碍(<一个href="#B5">5),蛋白酶体和女伴失调(<一个href="#B6">6]。在过去的十年中,Aβ基于免疫疗法已被证明是最有前途的治疗方法(<一个href="#B7">7- - - - - -<一个href="#B12">12),目前有超过10000名患者参与主动或被动β免疫疗法,显示到目前为止的成功一定程度上减少β淀粉样蛋白(<一个href="#B13">13- - - - - -<一个href="#B17">17)和扭转记忆缺陷(<一个href="#B18">18- - - - - -<一个href="#B20">20.]。然而,在2001年首次临床试验由Elan和惠氏主动免疫,组成的聚合合成一个β₄₂肽在QS21佐剂,导致6%的患者死亡由于meningoencephalitis-like反应(<一个href="#B13">13,<一个href="#B21">21),可能引起一个over-extensive T-cell-mediated免疫反应(<一个href="#B22">22,<一个href="#B23">23]。值得注意的是,缩写为患者治疗从生成的β抗体,降低脑脊髓水平的τ和报道较慢的认知能力下降<一个href="#B24">24,<一个href="#B25">25]。临床试验之前,大量的实验治疗免疫策略是利用转基因小鼠模型的广告病理,包括APPswe / PS1dE9双重转基因小鼠,研究紧急治疗专注于预防和/或治疗AD神经病理学(<一个href="#B26">26,<一个href="#B27">27]。转基因小鼠的基因表达变异形式的人类淀粉样前体蛋白(没说完)过早显示海拔的标记β蛋白质水平和沉积在大脑皮层和海马(<一个href="#B28">28- - - - - -<一个href="#B30">30.),如在AD患者的大脑<一个href="#B31">31日]。Presenilin-1 (PS1-)突变体转基因老鼠也显示增加(一个β₄₂肽一代,更容易大脑中的淀粉样蛋白沉积在大约6个月大的时候<一个href="#B32">32]。在目前的研究中,我们使用APPswe / PS1dE9 double-transgenic老鼠来自coexpression的突变应用程序和PS1基因,表现出过早加速积累β存款在大脑中,相比之下,那些单独表达应用程序或PS1单独突变(<一个href="#B33">33- - - - - -<一个href="#B37">37]。这个特性,以及各种其他临床相关广告改变,指出该模型是一个有价值的工具发展的新的广告治疗方法(<一个href="#B38">38]。在目前的研究中,我们提出EB101疫苗,旨在成为具有成本效益和持久,被针对的减少β负担和放缓的主要广告病理改变,包括炎症反应,诱导的抗炎辅助(Th) 2免疫反应。所有这些需求将通过设计一个生理天然磷脂组成的辅助,证明在其他类型的安全、有效的疫苗,包括流感、添加生物活性磷脂,S1P,刺激抗炎反应和作为神经元再生剂在体外和在活的有机体内研究[<一个href="#B39">39]。

本研究的目的是调查的效果和安全性β疫苗(EB101) APPswe / PS1dE9小说引发的转基因小鼠免疫佐剂,旨在减少β沉积但避免大量T-cell-mediated激活免疫反应,可能造成了严重的负面影响。

2。材料和方法

2.1。动物

APPswe / PS1dE9 double-transgenic老鼠(B6C3F1 / J),表达了嵌合小鼠/人类淀粉样前体蛋白(Mo / HuAPP695swe)和人类presenilin 1 (PS1-dE9)突变体,都指向神经元的中枢神经系统(CNS)被用于这项研究。这两个构造coinjected进B6C3HF2 pronuclei和插入的转基因发生在一个鼠标轨迹。从杰克逊实验室购买使用的转基因小鼠。所有实验程序符合欧洲共同体建立的准则理事会指令(86/609 / EEC)和西班牙皇家法令1201/2005的动物实验,并经伦理委员会批准EuroEspes生物医学研究中心。

2.2。实验设计

两个实验治疗研究进行了;之前广告开始,从7周的年龄(预防性治疗)和第二个广告出现后,在35周的年纪,当神经病理广告特点完善(治疗)。小鼠随机分为这两个实验组,每组细分为三个,如下。

2.2.1。预防治疗

A组由6转基因小白鼠免疫的鸡尾酒β₄₂/ S1P /脂质体(EB101);B组6转基因小鼠免疫脂质体没有β₄₂(EB102);C组4转基因小鼠接种车辆,PBS。每组两个野生型老鼠还包括安全免疫控制,在预防和治疗治疗。

2.2.2。治疗治疗

A组由6转基因小鼠免疫EB101;B组6小鼠免疫EB102;C组4转基因小鼠接种PBS。小鼠免疫与九注射了七个月,然后把另外2个月之前牺牲。老鼠11个月大的预防治疗和18个月的治疗治疗。

2.3。实验的程序

2.3.1。准备的β

两个毫克的人工合成β₄₂(TOCRIS生物科学;Tocris Cookson)溶解在0.9毫升水,和0.1毫升的PBS是补充道。混合物是漩涡,整除、冻干和存储为干粉−20°C到使用。

2.3.2。脂质体的制备

脂质体是准备从1,2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphocholine (DOPC) 1-Palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylglycerol,钠盐(POPG)、胆固醇(CH;脂质INC .)北部,+ / - D-erythro-Sphingosine-1-Phosphate (S1P), (AVANTI 0.3 / 0.3 / 0.39/0.01摩尔比率resp)。一百毫克的每个脂质溶解在1毫升氯仿和储存在−20°C到S1P脂质体的制备,10毫克溶解在1.5毫升(1 2:氯仿/甲醇)和存储在−20°C到使用。脂质,在最后的上述比例,彻底混合有机溶剂,蒸发在氮。相应的混合物,包含总脂质100毫克和S1P 0.6毫克,在热压处理过的超纯水resuspended,彻底涡混合直到银河系解决方案成立或所谓的“multilamellar泡”(mlv)。小(SLV)或单一的单膜囊泡(suv)随后由用MLV 2分钟30秒的间隔在冰浴,直到解决方案是明确和离心机在2500 g / 15分钟消除碎片。SUV的准备是冻结和resuspended PBS-containing干β(10毫克)和完全混合。冷冻干燥混合物是resuspended在相应数量的热压处理过的超纯水,准备免疫。100年μL EB101用于免疫的一步。包含S1P和脂质体β被称为EB101并称为EB102没有S1P和Ab。

2.3.3。免疫接种程序

44 APPswe / PS1dE9转基因小鼠腹腔注射100μ每注入EB101 L (A组),只有脂质体复杂EB102 (B组)或PBS (C组),在七个月注射(9)为每个治疗周期。以往的研究中使用的免疫系统协议(<一个href="#B40">45,<一个href="#B41">47),每两周3组成的注射,在第一个月,然后一个注射后每个月方案遵循预防和治疗组。

2.3.4。脾细胞的准备

从这些小鼠脾细胞收获从脾组织机械破坏钳。溶解的红细胞在100毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液,进行pH值7.5,包含140毫米氯化铵。脾细胞与PBS洗两次pH值7.0和离心5分钟每分钟1600转。细胞计数和resuspended完全rpmi - 1640中含10% FSC 50μ米β巯基乙醇,40μ克/毫升⁻¹庆大霉素在10⁶细胞/毫升。

2.3.5。制备B-Cell-Enriched悬浮液

B-cell-enriched悬浮液获得如下:从脾细胞巨噬细胞被选择性耗尽坚持玻璃培养皿为2 h 37°C,和不依从细胞悬浊液耗尽T细胞通过磁性细胞分选使用反-你- 1.2 -涂磁珠(Dynal生物技术、法国),遵循制造商的指示。这个过程产生了一个丰富的b细胞> 90% CD19人口⁺细胞CD3 < 1%⁺细胞和CD11c < 5%⁺细胞,通过流式细胞仪分析,确定可行的细胞> 95%,由台盼蓝排斥。

2.3.6。B - t细胞表型分析是由流式细胞术

简单地说,red-cell-depleted脾细胞与anti-mouse孵化CD32 / CD16抗体(控制抗体)阻止通过Fc受体特异性的搞笑捕获。以下PE-conjugated anti-mouse马伯被用于分析:anti-CD4, anti-CD19, anti-IgM, anti-CD138(美国圣地亚哥BD PharMingen CA)。数据从彩色样本获得使用流式细胞仪流式细胞术。15000事件进行了分析使用溶解II软件。

2.3.7。Lymphoproliferation化验

扩散分析是建立在96 -好平底盘子一式三份(美国Nunc Naperville, IL)。每种文化包括提纯B和T细胞在200年最后一卷μ与有限合伙人(20 L和孵化μ克/毫升⁻¹)、il - 4 (100 U /毫升⁻¹),anti-CD40 (5μ克/毫升⁻¹),β(1μg / mL)。48 h后孵化有限公司37°C的5%₂MTT检测监控的增殖反应,劈理的基础上紫色的水晶甲瓒的肝癌和黄色四唑盐代谢活跃的细胞。然后甲瓒可溶性和浓度由光学密度在570海里。细胞被播种到96孔组织培养板的密度大约5000个细胞/。刺激后,10μL (MTT的解决方案是添加到每个。盘子被简要地摇晃混合在一个轨道振动器和孵化为4小时37°C。中被200人μL DMSO溶液添加到每个溶解甲瓒。吸光度测量的ELISA板读者波长570纳米。一式三份化验的结果表示为刺激指数(比率从如果平均OD来自刺激文化和平均OD的)。值代表至少有三个独立的实验。

2.3.8。测量的抗体滴度

96 -微量滴定板(EIA板演对手戏)被涂上一层1μg / mLwell-coating缓冲区(0.1磷酸钠,pH值8.5,0.1%叠氮化钠)和孵化一夜之间在室温下(RT)。井是吸气和血清添加到井在标本稀释剂稀释1/100开始(0.014磷酸钠,pH值7.4,0.15 M氯化钠,0.6%的牛血清白蛋白,0.05%硫柳汞)。6系列稀释(1/400 1/1.600 1/6.400 1/25.600),样本,直接在盘子两个步骤来达成最后1/102.400稀释。样本在涂井一小时孵化rt,然后洗五次板块和PBS含有0.05%渐变20日和第二抗体,一只山羊anti-mouse Ig共轭,辣根过氧化物酶(从勃林格曼海姆)被添加到井(100μ信用证在1/4.000的稀释标本稀释剂)和孵化一小时在rt,盘子洗五次在PBS /渐变20和发色体发达,100年μL三甲(3,3,5,5′四甲基联苯胺化学从皮尔斯),添加到每个好和孵化15分钟在rt,反应是停止的50μL 0.5 H₂所以₄。ELISA板的颜色强度当时读读者(BioRad 680 ELISA读者)。滴度被定义为血清的稀释的倒数为1/2最大OD。最大OD通常被从最初1/100稀释。

2.4。免疫组织化学

与生理盐水灌注动物麻醉transcardially解决方案之后,4%多聚甲醛。他们的大脑被切除,在多聚甲醛浸泡48小时,其次是沉浸在磷酸缓冲0.1 12小时和cryoprotected 30%蔗糖在PB,嵌入在10月化合物(美国组织Tek,托兰斯,CA)和冷冻液体nitrogen-cooled异戊烷。平行的横向部分(18/20μ米厚的)削减在低温恒温器安装在Superfrost + (WI门泽尔格拉瑟,麦迪逊,美国)幻灯片。免疫组织化学分析,并行部分使用H₂O₂在PBS 37°C 15分钟消除内源性过氧化物酶,在0.05 Trizma缓冲盐水冲洗两次(TBS)含0.1% Tween-20 pH值在7.4 (TBS-T) 10分钟,用阻塞亲和素、生物素预处理设备,然后一夜之间孵化与主抗体(表<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/tab1/" target="_blank">1)。提供的程序mouse-on-mouse过氧化物酶immunodetection系统(M.O.M.设备;向量)被用来消除非特异性结合anti-mouse二级抗体与内生老鼠免疫球蛋白的组织,根据制造商的指示。部分在TBS-T先后冲洗,孵化山羊免疫球蛋白anti-rabbit (Dako)或山羊免疫球蛋白anti-mouse (Dako)为1小时,在TBS-T冲洗,然后孵化30分钟在ABC装备系统(Vectastain,矢量)。过氧化物酶反应是执行3,3-diaminobenzidine色原体和过氧化氢作为氧化剂。在几个相邻的部分,消极的控制由省略主,二级或三级抗体没有免疫染色。部分然后在分级脱水乙醇和覆盖着快速嵌入剂(Eukitt,丙烯酰胺)。

2.5。神经病理学指标量化

一个β斑块量化确定7每治疗动物随机选择的微小的横向部分(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1和<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2立体定位定义的),前囱坐标(−0.94;−1.34;−1.70;−2.30;−2.70;−3.64;−4.60毫米)。总共有7所选部分/动物评估在PC上使用因HIH形象J公司破产引发程序通过定义感兴趣的区域和设置一个阈值来区分非特异性染色。同样的程序进行神经纤维tangle-like结构部分和激活星形神经胶质,B和T细胞。数据分析和测量都是盲目的治疗协议,由调查人员没有意识到,在这种情况下重要的测量两个调查之间的差异,评价是重复了三分之一。 Quantitative analysis of amyloid burden area was also performed in the hippocampal regions (oriens, pyramidal layer, stratum radiatum, and dentate gyrus) and parietal/temporal cortical regions in the three experimental groups (Figures<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1和<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2)。区域/像素分析软件(Pixcavator 4)被用来量化的外边界内像素的数量各一个β斑块的大脑部分。因此,Pixcavator成像用于分析所占据的区域β淀粉样蛋白(β负载)相对于背景和用百分比表示单位。的面积β三个治疗组的大脑斑块是在图形(图表示<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2)。

2.6。成像

图像可视化使用显微镜(奥林巴斯BX50)和数字化使用数码相机(DP-10,奥林巴斯)。照片是调整亮度和对比度的Corel Photo-Paint(加拿大渥太华Corel)和盘子和矢量图绘图软件组成。

2.6.1。共焦成像分析

每个immunofluorescent部分被拍到与光谱共焦激光扫描显微镜(徕卡TCS-SP2)。斑块成像的最大截面时,和他们的大小取决于使用徕卡的处理软件。这种方法论的方法被用来比较NFTs-Aβ、NFTs-GFAP NFTs-Bcell疣状。两个脑区(海马和内嗅皮层)/动物进行了分析。成像的非功能性测试免疫染色显示了异硫氰酸荧光素滤光片(激发488海里),和一个βGFAP / b细胞染色与德州成像红色滤光片(激发568海里)。

2.7。评价运动协调和平衡

机动力量,能力,平衡和协调能力的实验小鼠在两个治疗周期评估rota-rod运营10 rpm(哥伦布仪器,哥伦布,哦,美国开始在7周的年龄(预防组)和35周的年龄(治疗组),分别。动物被接收训练适应装置在两个试验中,足以达到一个基线水平的性能(<一个href="#B42">48]。本程序旨在评估运动行为。如果鼠标杆1分钟,测试完成后,取得了1分钟。每只动物测试在三个交易日六周中,每个会话相隔15分钟,杆上的每个鼠标仍然注册时自动停止,当动物下降或反向(爬)旋转桶的顶部。两个调查人员进行实验,一个评估rota-rod性能,不知道治疗的老鼠,第二把老鼠。

2.8。统计分析

所有统计参数进行SPSS(11.0版本;SPSS . n:行情),芝加哥);一个值< 0.05显示统计学意义。的平均范围β斑块密度、负担面积和抗体滴度由小鼠治疗期间进行了分析使用双因素重复测量方差分析(方差分析)紧随其后事后当相关分析。所有数据被表示为均值±SEM。

2.9。研究的局限性

临床前研究广告与转基因小鼠模型的使用范围广泛,可以概括一些临床病理特征的人类的广告。尽管到目前为止,没有一个模型开发完全整个疾病背景(<一个href="#B38">38];作者认为APPswe / PS1dE9转基因老鼠现在正确的病理特性回答特定的问题解决的研究。另一个问题是一个活跃的一个可能的缺点β免疫疗法。尽管它可能更有效和持久的成本和产生有效率的结果在减少广告表现,某些方面,比如一个不良的辅助引发的免疫反应,免疫反应调节,年龄抚养,炎症,microhemorrhages,必须被考虑。因为本研究的目的是评估的影响EB101疫苗在APP / PS1老鼠的神经病理特点,记忆功能测试没有执行虽然他们将包括在未来的研究中。然而,运动协调测试执行,以验证整个免疫治疗过程中运动的完整性,类似以前的研究报道。作者意识到这些问题,设计了本研究旨在解决和克服这些缺点。

3所示。结果

3.1。预防EB101对类似于病理学的影响在APPswe / PS1dE9 tg老鼠

老鼠大脑中的淀粉样蛋白斑块在场的除了野生型控件(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(一)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (o)),尽管区域的密度和负担β存款更高在B组的小鼠(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (d)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (f))和C(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (g)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(我))。图像分析的大脑部分表示相当的价值减少平均负担β存款EB101-treated转基因小鼠的海马和皮质层(A组;42.5β斑块/大脑)与小鼠相比对待EB102 (B组;102.2β斑块/大脑)和PBS (C组;106.9β斑块/大脑)(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2(一个))。在每个EB101-treated转基因老鼠的大脑部分,我们观察到更少的β存款,主要位于齿状回的外部层(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(一)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (c)),代表斑块early-stage-like形态特征的微小稀疏斑块扩散核心染色(2型)。组织学分析显示四种不同的老鼠的大脑部分β斑:1型,2 a、b和c,根据形态特征描述Bussiere et al。<一个href="#B43">44),观察数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(一)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(我)。这些β淀粉样斑块主要是出现在转基因小鼠大脑的海马组织B和C(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (d)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(我)),主要位于齿状回(粒状层),紧随其后的是皮层等地区retrosplenial地区,鼻外的皮层,和梨状皮质层。所占据的区域β存款在海马体和大脑皮层的转基因小鼠的大脑部分A组(EB101;数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(一)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (c))预防性治疗后明显降低(4.83%,;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b))和不同的显著升高β存款的记者大脑部分区域观察到B组(12.6%,;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b))和C组(12.81%,;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b))。野生型老鼠每组显示没有β存款在任何大脑区域(见平方面积数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (g)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(我))。

平衡、协调、和运动规划在这个老鼠研究评估最终的治疗后使用rota-rod测试。运动能力结果显示改善的运动协调EB101-treated老鼠相比其他两个控件,显示严重受损的运动协调(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (c))。

EB101疫苗的发展的影响神经原纤维tangle-like结构(非功能性测试)也研究了使用特定抗体非功能性测试(表<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/tab1/" target="_blank">1)。染色观察非功能性测试的转基因老鼠除了野生型控件(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(一个)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(我))。观察到的类似β存款,这些彩色缠结密度在B组的老鼠的大脑(更高的数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (d)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (f))和C(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (g)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(我))相比EB101-treated组a这些immunopositive结构主要是位于小鼠的海马脑区处理EB102和PBS和聚合过度磷酸化τ蛋白在神经元组成的螺旋细丝与plaque-like免疫反应性的核心和一个树突顶端变量扩展(经常有火焰形状的外观,图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3)。老鼠的大脑区域处理EB101 (A组)大多是缺乏非功能性测试(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(一个)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (c)),分散在齿状回(图免疫反应性的缠结<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (b)(图)和内嗅皮质层<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (c))。同一地区的B组(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (d)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (f))特别是在老鼠身上所观察到的类似C组(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (g)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(我)),显示一个广泛的非功能性测试密度占据所有的海马区域,retrosplenial地区,鼻外的,和梨状皮层。非功能性测试的染色强度组中观察到B和C,包括密度和负担区域,形成鲜明对照的是稀缺和几乎没有这些小鼠的神经病理特征EB101对待。

3.2。治疗效果类似于病理学的EB101 APPswe / PS1dE9 tg老鼠

EB101疫苗的疗效在APPswe / PS1dE9 tg老鼠开始在35-week-old老鼠的外观类似于神经病理学的定义的大脑区域。确定EB101疫苗逆转的巨大发展β淀粉样斑块,非功能性测试和反应性神经胶质,大脑部分从野生型和转基因小鼠的实验组应用特定的抗体(表<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/tab1/" target="_blank">1)。获得的结果显示,治疗后治疗β存款几乎缺席EB101-treated老鼠的大脑部分的A组(20.3β斑块/大脑)(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (j)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(左)和<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2(一个)),从一个明显不同β负担水平观察小鼠接受EB102 (134.3β斑块/大脑;数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(米)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (o)和<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2(一个))和PBS (128.6β斑块/大脑)。为数不多的一个β斑块中观察到A组小鼠呈现一个微小的核心包围稀缺的纤维材料(2型),较低的一个β沉积区(5.27%,;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b)),主要位于外部皮质层(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (j)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(左)),几乎完全没有在海马区域。在相同的大脑部分横向区域,B组老鼠提供了一个广泛的一个β斑块面积(14.32%,;数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1(米)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig1/" target="_blank">1 (o)和<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b)),显示一个分散分布在海马和皮质层,类似于观察C组(14.07%,;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (b))。

rota-rod延迟测试,解决了运动协调治疗治疗期间,没有显示出负面的性能由EB101-treated-group(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (c)),但老鼠接受EB102和PBS(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig2/" target="_blank">2 (c))中等至严重受损的运动能力和协调能力。

组织学分析组的老鼠表现出更少的密集分布的非功能性测试模式(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (j)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(左))比观察预防性治疗。然而,B组的老鼠显示一个类似的密度升高的非功能性测试(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3(米)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig3/" target="_blank">3 (o))与小鼠的预防性治疗。

3.3。双重免疫荧光检测神经病理标记APPswe / PS1dE9 tg老鼠

同时执行双重免疫荧光检测colocalizationβ在老鼠的大脑斑块和神经纤维tangle-like结构(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(一)-<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(′′))。一些稀疏的斑块小鼠的海马和内嗅区中被观察到,与在齿状回分子层(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(一)-<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(′′)和内嗅皮层。免疫荧光CD45RA (B细胞)和非功能性测试也分析了共焦显微镜,显示B细胞周围的非功能性测试的一些观察codistribution变形和齿状回分子层(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(b) -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(b′′))。双重免疫荧光GFAP和非功能性测试表明,齿状回神经胶质细胞周围的非功能性测试(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(c) -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4(c′′)和内嗅皮层,尽管没有colocalization被观察到。

3.4。EB101对免疫反应的影响

评估免疫对神经胶质反应的影响(astrocytosis)和活性淋巴细胞,胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的分布,b细胞(CD45RA)和t细胞(CD3)表面标记分析了横断面的老鼠的大脑(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(一个)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(右))。预防治疗后,激活或反应性神经胶质,astrocytosis-like形态学观察聚合星形胶质细胞取代死亡的神经元周围的一个β斑块和非功能性测试的转基因小鼠的大脑皮质和海马区域B组(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (b))和C(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (c))。同一地区的转基因小鼠的大脑组织反应性神经胶质(图的几乎没有<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(一个))。没有观察到astrocytosis野生型小鼠(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(左))。EB101-treated转基因老鼠的大脑部分显示一些免疫反应性的B细胞在海马区域(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (d)),与更低密度群体B (EB102;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (e))和C (PBS;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (f))。没有观察到显著的b细胞和t细胞聚集的野生型小鼠大脑部分(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (o))。预防治疗,免疫反应性的T细胞被发现在所有转基因老鼠的大脑,形成明显的聚集在海马(数字<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (g)- - - - - -<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(我))和皮层区域,尽管这些淋巴细胞集群在EB101-treated小转基因小鼠(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (g))。

治疗后治疗,神经胶质分布在转基因小鼠的大脑处理EB101(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (j)野生型老鼠)也有类似的模式,除了明显没有反应在大脑神经胶质在特定的皮层区域。整体GFAP免疫反应性的细胞分布格局没有反应astrocytosis EB101处理,组与B组(图对比<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (k))和C,突出GFAP-associated免疫反应性是出现在海马和皮层区域。b细胞密度EB101-treated组(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(米))治疗治疗后的预防机制。然而,B组(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (n))和C显示明显增加CD45RA表面标记在大脑皮层区域致密纤维β包含斑块。B组(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (p))和C显示t细胞大量聚集在海马和皮层,CD3-immunoreactive细胞组成的地区丰富的淀粉样斑块(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(问);参见双染色结果图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig4/" target="_blank">4)。t细胞小胶质细胞几乎未被发现在EB101-treated组(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5 (p)),类似于观察野生型控制(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5(右))。

从目前的数据相关实验如图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig5/" target="_blank">5,以下观察来自两个治疗组在我们的研究中执行。

预防治疗:横向的大脑部分11莫小鼠接受EB101显示几乎完全缺乏astrocytosis齿状回(a),对比与人口营养不良的反应性星形胶质细胞在相应的老鼠大脑的部分组织B (EB102-treated老鼠;(b))和C(接受pbs;(c))。海马体的详细部分展示了一个丰富的B-ir EB101免疫小鼠细胞密度(d)与EB102和PBS相比治疗小鼠((e) - (f)),和几乎不存在于野生型的大脑部分。横向海马部分显示显著减少t细胞聚合(g)与小鼠免疫与EB102 (h),在许多小胶质集群B-ir细胞,观察主要在齿状回的外层。稀缺T-ir细胞中观察到的大脑部分野生型小鼠(i)。

治疗治疗:横向的大脑部分18莫老鼠表现出几乎完全减少astrocytosis retrosplenial皮层和海马区CA1 EB101疫苗免疫后(j)。注意对比EB101——EB102-immunized老鼠(k)和没有大脑的部分野生型小鼠(l)。中等密度的B-ir细胞观察转基因老鼠在横向皮质/ CA1地区对待EB101 (m),对比明显的大规模集群免疫反应性的B细胞中观察到EB102-immunized老鼠(n),表明神经病理学炎症过程。B-ir大脑细胞缺失的部分野生型小鼠(o)。横向EB101-treated老鼠的海马部分显示稀缺的齿状回T-ir细胞密度(p),对比显著增加相同的大脑区域EB102-immunized老鼠(q)。T-ir细胞在野生型小鼠的大脑部分稀缺(r),缩写,看到列表。酒吧规模:100m。

3.5。一个β抗体滴度在APPswe / PS1dE9转基因小鼠

预防治疗EB101导致显著提高免疫球蛋白β₄₂5个中的6动物的抗体生产。四5免疫小鼠开发和维护之间的血清抗体滴度1:1400和1:2000年和6000年1:在第五鼠标。没有检测到抗体在治疗后对照组B和c,所有老鼠对待EB101产生免疫球蛋白抗体(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig6/" target="_blank">6(一))。滴度类似发现后预防性治疗;6的老鼠比1/35,000高滴度。在预防和治疗组、EB101诱导强烈的B -淋巴细胞增殖反应和T细胞(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig6/" target="_blank">6 (b)),而几乎没有反应是观察EB102 -和接受pbs组。从lymphoproliferation试验获得的数据表明,EB101导致一个增强的增生性反应,相比EB102和PBS对照组(;图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig6/" target="_blank">6 (b))。

检测Th1、Th2细胞因子类型在所有治疗小鼠进行了通过分析细胞因子在小鼠血清(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ijad/2012/376138/fig6/" target="_blank">6 (c))。多个分析物检测的结果表明接种疫苗和控制组织之间的显著差异(EB102和PBS)在血清细胞因子IL-5和使用IL13,而il - 6和il - 10显示接种疫苗和对照组之间的显著差异,这表明抗体介入免疫本研究中观察到的诱导t细胞类型Th2反应。

4所示。讨论

我们已经开发出一种小说从ßliposome-formulated疫苗成本效益,持久的效应,不仅诱发强烈的从ß抗体反应,但也减少神经纤维tangle-like结构形成和之前见过的炎症免疫反应与其他疫苗。由伟大的有效潜在liposome-based疫苗在预防或治疗的广告<一个href="#B49">54),第一个活跃的疫苗的有效性降低ß水平(<一个href="#B21">21),我们已采取了一种新方法来规避AN1792失败,明智地选择一个辅助解决上述所有目标。天然磷脂的脂质体辅助使用包括:磷脂酰胆碱,磷脂酰甘油,和胆固醇,证明在其他类型的安全、有效的疫苗。这种混合磷脂,生物活性鞘脂类,sphingosine-1-phosphate (S1P)补充道。一个ß成立于磷脂/ S1P-liposomes使用hydration-rehydration方法通常用于脂质体/蛋白质配方。S1P,磷酸化鞘氨醇的产物,已经涉及作为一种重要的脂质中介代理内外细胞(<一个href="#B50">55,<一个href="#B51">56]。细胞外地,S1P GTP-binding成员结合蛋白(蛋白)耦合S1P受体家族(S1P15),触发不同的细胞效应包括血管生成、心脏发育,免疫,细胞活性,neurite42扩展(<一个href="#B25">25,<一个href="#B52">57),通过自分泌和旁分泌的方式行动[53-55]。细胞S1P已被证明函数通过调解细胞钙动员、细胞生长,和抑制细胞凋亡[56-58],而exogenously-added S1P本身导致谷氨酸突触前网站和强化glutamate-induced发射机分泌物分泌在初级海马神经元(<一个href="#B59">64年),这可能促进积极的形成等兴奋性神经元的激活周期glutaminergic神经元。事实上,S1P似乎有治疗潜力作为再生剂在神经系统因为它最近报道,细胞内S1P增强神经生长因素在老鼠感觉神经元兴奋性(<一个href="#B60">65年)和控制神经干细胞的迁移对脊髓损伤的一个网站(<一个href="#B61">66年]。此外,S1P1activation也是诱发细胞骨架重组通过小g蛋白Rac激活(<一个href="#B62">67年],它似乎促进突触囊泡融合等离子体膜诱导发射机分泌。因此,它不会意外,这样一个强大的生物活性鞘脂类可能在神经再生中发挥非常重要的作用,细胞生长、抑制细胞凋亡,AD患者谷氨酸突触前分泌物网站。利用这些特性,我们整合S1P磷脂混合形成脂质体矩阵作为佐剂活性抗原,aß(<一个href="#B63">68年]。这个辅助添加再生和抗炎作用ß42个疫苗,有比以前发达saponin-based相当大的优势ß疫苗,关键要素增加大脑的神经活动,防止炎症APPswe / PS1dE9转基因小鼠(数据没有公布),改善以前公布ß7 - 17的免疫治疗研究[]。这种新的疫苗和AN1792克服遇到的炎症反应,这可能是由于使用皂素佐剂(QS-21)和交付使用的洗涤剂聚山梨酯80ß,这被认为是诱导促炎Th1反应(<一个href="#B33">33]。我们已经表明,EB101 liposomal-based疫苗配方,满足长期需要安全and42有效治疗疫苗对预防或改善广告神经病理学,改善报告的有利影响以前的类似研究[<一个href="#B7">7,<一个href="#B10">10,<一个href="#B19">19]。结果观察到预防性和治疗性治疗表明EB101疫苗有效预防广告不仅在神经病理学也在减少。以前APPswe / PS1dE9转基因小鼠的研究报道,前6个月的大脑ß斑块是微小但紧凑,随着年龄的增加(<一个href="#B31">31日,<一个href="#B64">69年]。我们的研究结果也与这些观察结果一致。APPswe / PS1dE9转基因小鼠显示小,紧凑nonfibrillary淀粉样斑块积聚在初始沉积时期,主要是在大脑皮层和海马,而在后期分散纤维斑块越来越代表也在附近的大脑区域。与EB101预防接种后,我们检测到一个显著的低密度ß斑块APPswe / PS1dE9老鼠的大脑,以及减少负担的地区相比,APPswe / PS1dE9老鼠EB102处理或PBS。图像分析的事实证实了这早期有效的减少ß存款EB101老鼠大脑表明EB101疫苗作为预防治疗淀粉样斑块的出现阿尔茨海默病的老鼠。类似的预防免疫方法已经报道在PDAPP老鼠Schenk et al。<一个href="#B7">7),尽管不同的疫苗免疫接种效率和构象在目前的研究已得到改进。在早期,接种EB101也显著预防大规模发展的神经原纤维tangle-like等其他广告病理特征结构,星形胶质细胞激活,并在运动协调障碍。成功的关键之一的预防免疫是巨大的障碍神经胶质激活回应的早期发展ß存款(<一个href="#B12">12,13岁,35岁,64 - 66]。目前的数据从我们的预防免疫协议表明,与EB102和PBS鼠标治疗组相比,EB101也阻止了星形胶质细胞活化的发展。小胶质细胞和星形胶质细胞激活以来报道降解ß(<一个href="#B64">69年,<一个href="#B67">72年,<一个href="#B68">73年),不久的缺乏ß相关astrocytosis EB101-treated老鼠证实预防效应的发展广告病理学的小鼠模型。结果double-staining脑组织APPswe / PS1dE9老鼠还演示了这种病态的交互,因为大量的GFAP-positive星形胶质细胞周围神经纤维tangle-like结构密切相关的淀粉样斑块和神经炎症标记,与先前的报告相一致(<一个href="#B44">49,<一个href="#B69">74年,<一个href="#B70">75年]。综上所述,EB101疫苗明显防止积累,初始沉积时期,nonfibrillary amyloidplaques和astrogliosis反应背景APPswe / PS1dE9皮质和海马体的老鼠。大部分相关文献都集中在治疗方面的ß免疫(<一个href="#B71">76年]。而一个ß免疫疗法目前是最有前途的方法治疗的广告,一个负面影响是发生microhemorrhages如下描述的应用转基因小鼠被动(<一个href="#B16">16,<一个href="#B72">77年)或活动ß免疫(<一个href="#B16">16),包括与AN1792在临床试验(<一个href="#B21">21,<一个href="#B73">78年]。没有观察到microhemorrhages然而APPswe / PS1dE9老鼠EB101处理。最引人注目的有益影响ß免疫治疗中观察到以前的研究是淀粉样蛋白的减少负担广告小鼠模型[7-19,26岁,65]。这种效应也观察到在目前的研究中,在治疗后的结果清楚地表明,EB101可以减少和扭转ß斑块和相关的病理特征。免疫组织化学和ELISA分析证明EB101治疗的强烈影响ß负担间隙,从升高ß效价水平,缺乏astrocytosis附近和一个正常的运动协调任务与EB102相比,接受pbs老鼠。为了解决EB101的完整效果,我们还进行了运动协调测试记忆的任务,而不是因为先前的报道(<一个href="#B37">37)认为,这只老鼠模型展品可检测行为更改并发斑块沉积,这一个ß病理学在不同年龄不与突触和认知赤字,暗示ß水平不是一个记忆衰退的标志。运动能力结果显示改善的运动协调EB101-treated老鼠相比其他两个对照组,显示中度到严重受损的运动协调。在一起,这些影响,在预防和治疗治疗,演示的效率EB101疫苗在预防和减少负担,因此,淀粉样蛋白生成的神经退化。促炎和免疫反应,评估结束时预防性和治疗性治疗,显示没有明显的炎症反应在EB101-immunized老鼠的大脑,与之前报道应用tg老鼠研究[<一个href="#B74">79年)和一个ß接种疫苗AD患者(<一个href="#B21">21]。众所周知,Th1 T细胞激活某些白细胞介素(il - 12),生产促炎细胞因子,如干扰素-γ和肿瘤坏死因子-一个参与的机制,这是自身免疫性脑炎(<一个href="#B73">78年),一个激活模式认为导致6%的接种脑膜炎患者,连同moderate-to-high CD45水平免疫反应性,这可能会导致大脑纤维增强吞噬和降解ß加载其他报道(<一个href="#B18">18,<一个href="#B75">80年]。然而,Th2 T细胞产生il - 4、6、10、13,我们大多数激活EB101疫苗APPswe / PS1dE9转基因小鼠和相信帮助体液免疫,对于帮助抗体生产和抑制自身免疫性脑炎。EB101老鼠T细胞增殖水平和免疫反应性的增加,以及Th - 2细胞因子(IL-5、6、10、13)和A的水平ß反应性T细胞、B细胞和GFAP总量。与高水平的免疫球蛋白抗体生产,这表明EB101不诱导自身免疫性脑炎或其他重要的迹象炎症过程,以促炎细胞因子(<一个href="#B49">54)或astrocytosis标记(<一个href="#B76">81年在EB101immunized老鼠,相比那些观察EB102和PBS老鼠组。之前的研究使用ß免疫疗法在APP-tg老鼠报道不同ß抗体水平,这取决于使用的小鼠模型,免疫方法,和类型的佐剂的疫苗配方。佐剂引起的免疫反应产生重大影响(<一个href="#B77">82年),因此我们的战略计划小说adjuvant-liposomal疫苗配方与弗氏佐剂(明显不同<一个href="#B7">7,<一个href="#B16">16]或Quil-A [<一个href="#B6">6以往的研究中使用。此外,EB101的显著的影响,观察到老鼠后建立ß沉积和随后的神经病理变化,表明EB101疫苗有巨大潜力作为治疗剂反向广告大脑病理,免疫治疗方法[不可或缺的功能<一个href="#B19">19,<一个href="#B80">40,<一个href="#B47">52,<一个href="#B79">84年]。虽然免疫计划减少广告的机制神经病理学和防止或逆转神经退化和行为赤字尚未阐明,不同的代谢方面,并不排斥可以负责斑块间隙,包括交通的ß抗体,抗体表位特异性(<一个href="#B72">77年),运输的可溶性ß进入等离子体与随后的抗体介入退化(外围下沉假说)[<一个href="#B81">41),免疫球蛋白运输系统(<一个href="#B45">50]。概念,提供增加特异性的免疫反应的概率降低激活炎症反应已经被许多作者支持(<一个href="#B82">42,<一个href="#B45">50),似乎证实了我们目前的发现。然而,我们都知道,尽管明显减少astrocytosis EB101引发的促炎反应,如图所示的减少特定标记检查,包括激活GFAP的明显减少,B,和Timmunoreactive细胞和Th2-elicited反应,这种效果需要进一步临床前和临床调查。此外,在临床背景下,人们越来越清楚的认识到不同形式的药理干预的治疗反应是genotype-specific [<一个href="#B83">43,<一个href="#B84">46]。在这方面,一个微分响应ß免疫接种可以预期,根据每个病人的基因组概要文件。转基因模型用于目前免疫范式,我们的研究结果明确证明EB101疫苗不仅可以停止AD-related病理学和行为障碍但实际上可能扭转,导致一个强大的免疫反应和抗炎作用。

总之,我们已经证明交付ßliposomal-S1P-adjuvant导致了有效的免疫反应与广泛的活动,包括淀粉样蛋白的减少负担,减少非功能性测试,和感应Th2 t细胞的反应,有效地预防神经炎症动物模型的广告。我们的研究结果表明,EB101免疫治疗作为预防和治疗有显著影响,不仅在广告神经病理学的主要特征也在减少amyloidosis-induced炎症。此外,我们表明,脂质体/ S1P佐剂可以作为一个有效的Th2免疫调制剂,刺激先天免疫和启用有效吞噬清除淀粉样蛋白和/或非功能性测试,从而减少神经炎症反应其他免疫治疗研究中观察到的风险。

5。结论

本研究的主要发现表明,(我)广告标志,β淀粉样斑块和神经纤维tangle-like结构强烈阻止或减少在不同的转基因小鼠治疗用于我们的实验;(2)激活星形胶质细胞和神经炎症反应,表现为自然的AD病理APPswe / PS1dE9转基因老鼠,是减少我们的EB101疫苗治疗;(3)一个健壮的免疫反应是我们EB101治疗后观察,由一个决定β血清抗体滴度检测;(iv) EB101疫苗也导致精神运动的改善活动以轮值表杆性能测试;(v)大脑细胞结构上没有负面影响,身体运动协调,或行为模式观察EB101-treated老鼠。研究解决EB101疫苗是否有效抑制AD-related病理学在其他小鼠模型需要在进入临床试验。

缩写

广告:	阿尔茨海默病
一个β:	β淀粉样蛋白
应用:	淀粉样前体蛋白
恰当的:	前pretectal核
CA1:	场海马CA1
CA3:	场海马CA3
Cpu:	尾状核(纹状体)
残雪:	皮质
DG:	齿状回
等:	鼻外的皮质
GrDG:	细粒度的齿状回
IL:	白介素
LPMR:	外侧丘脑后核(mediorostral)
MODG:	齿状回分子
Pir:	梨状皮层
PoDG:	变羊齿状回
RSGb:	Retrosplenial粒状皮层b区
Tg:	转基因
Th:	辅助T。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢理查德Manivahn Alex Roher回顾纸和有用的评论。

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