来自巴基斯坦的定量审查不同香料的黄曲霉毒素

文摘

当前的研究工作旨在访问的污染水平黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2的家用香料被广泛大量的消耗。200种不同的香料样品,100和100年打开包装,分析了采用高效液相色谱法测定黄曲霉毒素概要发病率61.5%污染样品超过欧盟的53.66%。结果透露,打开样品相比更受污染的包装样品除了白色的孜然籽。在包装和打开的香料,样品中发现黄曲霉毒素的最大价值是茴香,即27.93μ和67.04克/公斤μ克/公斤。黄曲霉素中检测出的最低浓度肉桂包装形式(0.79μ克/公斤),打开白色孜然籽样品是1.75μ克/公斤。香菜种子和香菜打开的形式显示阳性结果而黑胡椒(包装和打开)被发现黄曲霉毒素。这是第一次报告的发生黄曲霉毒素的包装和打开样本来自巴基斯坦的香料。确保安全的食用香料,应该有常数监测黄曲霉素和更多的研究需要执行的意图防止霉菌毒素吸积在这个商品。

1。介绍

次生代谢物有毒真菌毒素是由真菌孢子(1,2]。他们可以通过不同的自然途径进入生命体;他们可能摄取,通过皮肤吸收,或通过鼻子吸入3,4]。由于他们的多才多艺的营养需求,他们容易传播有用的商品在适宜的条件下不同的湿度和温度作为有毒废物(5,6]。黄曲霉毒素是最广泛地综述了真菌毒素被认为是危险的污染物为人类健康而言7- - - - - -9]。黄曲霉毒素的不利影响包括基因毒性、致畸性和免疫抑制活性10- - - - - -12]。黄曲霉毒素也视为各种农产品的自然毒素(13- - - - - -15]。最突出的污染一直面临着玉米、花生、开心果、栗子、棉籽、酿酒葡萄、香料、和其他粮食作物(16- - - - - -18]。金字塔的毒性、致癌性和致突变性的房颤的顺序不同的黄曲霉毒素B1 > AF G1 > AF B2 > AF G2 (19,20.]。

农业的重要组可销售的是香料使用世界各地美食的目的,也就是说,作为风味成分不同类型的食品或饮料,作为医药成分,香水,香,作为调味品。他们不仅是很好的对我们的味觉,也对我们的健康(21]。与真菌污染的一个主要问题,也可以影响人类福祉和降低质量和口味的香料22]。由于严重的健康危险与黄曲霉毒素的表现香料、霉菌毒素的分析尤其黄曲霉毒素在香料的复杂的任务是研究人员如今由于重大的健康风险。

本研究的目的是评价的患病率水平常用的香料和黄曲霉毒素污染的突出他们的风险评估。二百包装和打开香料被广泛使用在巴基斯坦进行了分析后,使用C18柱高效液相色谱法和荧光检测器immunoaffinity列清理建立数据收集这些毒素的发生在习惯性地使用香料。文献表明,高效液相色谱法是最常见的真菌毒素的分析和广泛使用的方法。很敏感,有相当数量的低水平的检测毒素自然荧光AFs, OTA等等(23]。尽管不同的探索真菌毒素从许多国家在农业产品,几乎没有信息可以在黄曲霉毒素污染的不同的香料从巴基斯坦。结果会给一些重要引用突出危险评估和调查质量的香料有关黄曲霉毒素污染。

2。实验

2.1。样品

共有二百名香料样品()随机购买从不同的超市和集市位于巴基斯坦,从9月到2014年12月。样品与100包装和100打开香料包括肉桂,香菜种子、香菜、茴香、姜黄、黑胡椒、白胡椒,黑孜然籽,白色的孜然籽,连撞两球种子。每个样本的样本地面和40克是存储在塑料袋中,在黑暗的条件下,在低相对湿度在−4°C和真菌毒素的分析。香料抽样是依照抽样条款中描述的欧洲监管数量401/2006。所有样本提取和分析一式三份。

2.2。化学药品和试剂

高效液相色谱级乙腈、甲醇、组织和冰醋酸从默克公司(德国)购买。双重蒸馏水被用于制备的解决方案。黄曲霉毒素的分析标准(AFB1, AFB2、AFG1 AFG2)买来Sigma-Aldrich(纯度98%)。工作标准解决方案的黄曲霉毒素的浓度25μ7.5克/公斤AFB1 AFG1和μ克/公斤AFB2和AFG2准备在甲醇和乙腈的混合物。高效液相色谱洗脱液消化了5分钟和过滤混合纤维素酯0.45毫米过滤器(Advantec MFS,,而钙、美国)之前的分析。实验室玻璃器皿使用保持在10% (v / v)硝酸(默克公司、德国)一夜之间在使用前和超纯水冲洗几次。

2.3。黄曲霉毒素的分析香料

清除黄曲霉毒素。在本研究的第一部分,关于提取方法的验证,为每个矩阵的两个样品,确认aflatoxin-free,使用如下:一个整除的样本进行了分析,而另一个整除与一个已知的真菌毒素的浓度标准上升。

25克的均质香料样品,加入1 g的氯化钠,提取在100毫升的乙腈:水(84:16 v / v)的解决方案。悬浮液都摇动了1小时使用Ultra-Turrax均质器(Polytron、瑞士)。均质是通过绘画纸1滤纸过滤解决方案。滤液(9毫升)被稀释在醋酸(24 mL),并应用于一个Aflatest世行immunoaffinity列(美国Vicam) 1毫升/分钟的流量。列然后用蒸馏水洗净(30毫升)和黄曲霉毒素筛选了与甲醇(2毫升)琥珀瓶。蒸发干燥后在40°C下一连串的N₂,干残渣再溶解在20所示μL正己烷和50μL的组织(三氟乙酸)和动摇。然后,1.95μL(乙腈:水(10:90 v / v)添加在每个瓶子里,放置5分钟的分离层。5分钟后,混合物倒在高效液相色谱样品瓶的帮助下Millex聚四氟乙烯0.45毫米为黄曲霉毒素分析(美国微孔)。

2.4。高效液相色谱参数

安捷伦1100系列高效液相色谱系统(美国安捷伦科技)是使用一套荧光检测在360 nm励磁和440海里排放对黄曲霉毒素G1和G2和黄曲霉毒素B1和B2 425海里排放。黄曲霉毒素分析使用的流动相水:甲醇:乙腈(300毫升:100毫升:100 mL v / v / v)。流量是1毫升/分钟和列温度是40°C。黄曲霉素的混合物的标准被用于建设的五点校准曲线的峰面积与浓度(μg / L)。注射量是20μL标准溶液和样品的提取。

2.5。方法验证

验证方法是增强通过评审检测极限(LOD)和量化的限制(定量限),基于IUPAC定义。验证提取方法及色谱性能、可重复性的复苏(RSD)计算。RSD, LOD和定量限分别为每个香料样品测定。样本上升三个标准溶液的浓度黄曲霉毒素AFB1, AFB2, AFG1, AFG2 2、6、10μ克/公斤的标准解决方案。相对标准偏差和平均%计算,通过分析香料样品2,6和10μ克/公斤。每个测试了三次。LOD被定义为电子的三倍基线噪音和定量限为基线噪音水平的10倍。基线噪声得到每个矩阵有一个空白样品处理后测试程序。使用8“校准曲线线性评估由注入校准解决方案和使用相关系数定义()和斜率。以下校准解决方案准备:AFB1和AFG1 -35(0.2磅)和AFB2 AFG2(0.2 8磅)。线性的研究进行了一式三份。精度评估是基于相对标准偏差。

3所示。统计分析

包装和打开的所有测量的香料样品重复三次和数据统计分析。应用回归分析找出确定系数()。一个学生的搭配t以及应用于分析AF水平之间的差异在包装和打开的香料样品20使用IBM SPSS统计软件版本。校准曲线用于量化的计算是通过最小二乘法。样品浓度的AFs高于LOD被认为是积极的,而样品浓度低于LOD被认为是负面的。

4所示。结果与讨论

烹饪药草与模具产生黄曲霉毒素污染非常敏感,因此有必要对黄曲霉毒素的检测和量化的香料。黄曲霉毒素继续在人类立场健康忧虑的接触这些污染的香料24- - - - - -26]。

考虑线性分析方法验证,标准偏差(SD),重复性的复苏(标准偏差),检测极限(LOD),并限制的量化(定量限)。通过执行数据分析方法在表中做了总结1。

LOD和定量限获得白胡椒是高于其它香料测试和躺在0.14到-0.47之间μ-2.35克/公斤和0.30μ克/公斤。结果解释是由于矩阵化合物增加基线噪声干扰分析信号。总AFs恢复值高于80%的所有香料测试。

在这个研究中,共有200个样本的香料包括100包装和100打开样本进行分析,以评估在烹饪药草黄曲霉毒素的污染水平。59%香料显示污染充满了AFs的34%样本显示毒性水平高于欧盟限制哪些是10μ克/千克总AFs。样品的黑胡椒,香菜种子,和香菜显示负面结果,而黄曲霉毒素的发病率64%打开样本中,检测出除了黑胡椒和46%超过建议的限制。

香料中黄曲霉毒素的定量分析表明,在包装样品,茴香包含总黄曲霉毒素的浓度最高,即28.0μ克/公斤,黑孜然籽(6.26紧随其后μ克/公斤)。0.8的最低浓度μ克/公斤总AFs估计样本的肉桂。一百装香料样品,17个样品显示AFB1污染(17%)和42包含AFG1(42%)而36打开香料AFB1污染的样本(36%)和十八包含AFG1(18%)污染,十八AFB2污染的样品(18%),和10% AFG2污染。

浓度最高的打开香料样品中检测出白胡椒是89.50μ克/公斤总黄曲霉毒素而白色孜然种子表现出1.75的最低浓度μ克/公斤的黄曲霉毒素B1。十八打开样品(9%)和29包装样品(14.5%)浓度低于建议的限制,而剩下的包装和打开样本中的黄曲霉毒素浓度限制欧盟推荐的。AFs的值显示在表中2和3。

时得到了高效液相色谱色谱标准和样本分析通过系统,如图1和2。真菌毒素被确定通过保留时间并与参考标准,量化是通过峰面积的平均值。

结果表明,打开香料比包装更污染的香料;然而,包装样品的白色孜然籽显示相反的结果。这个高黄曲霉素水平可能是由于干燥和储存过程中环境因素可能促进黄曲霉毒素的生长比打开样本。实验数据显示,打开示例中的黄曲霉素量的白胡椒(89.50μ克/公斤)远远大于包装形式(2.96μ克/公斤),而打开样本茴香和黑孜然籽含有黄曲霉毒素浓度值67.04μ和17.21克/公斤μ克/公斤,分别比包装样品的茴香和黑孜然籽的27.93μ和6.26克/公斤μ相应的g / kg。香料如香菜种子(Kalonji)和香菜打开的形式显示,但没有透露任何霉菌毒素检测黄曲霉毒素污染的包装形式。所有这些样本,有些黄曲霉毒素浓度在欧盟设定的严格限制,是10μ克/千克总黄曲霉毒素(欧洲霉菌毒素感知网络(埃曼),食品添加剂系列40,联合专著黄曲霉毒素)虽然大多数香料超过欧盟设定的水平,这表明,他们是高度受黄曲霉毒素污染和不稳定的健康消费的人作为食物链的一部分。图3显示的比较中黄曲霉毒素的浓度不同香料的包装和打开样本收集来自不同地区的巴基斯坦。

这项研究提供了第一手的描述黄曲霉毒素污染的香料市场在巴基斯坦,《条例》对真菌毒素的影响较少的控制没有严格的检查食品保护担忧。目前的研究工作提供了有用的信息关于霉菌毒素危害的风险和创建意识在消费者中,研究人员和农民的改善处理方法包括收集、干燥、运输和储存条件。

5。结论

当前的分析是一个重要的包容性评价探究表现黄曲霉毒素污染的包装和打开的样本来自巴基斯坦的香料。,香料和黄曲霉毒素的污染被检测到高于欧盟推荐的,这是令人讨厌的当代发展中国家vie的整洁的拱廊。对消费者安全,监管当局应该考虑这个问题的污染和质量控制和质量保证策略应该实现。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢大学的兽医学(uva)和中央的LCWU实验室提供实验室设备。

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