总酚、类黄酮、Tomatine和番茄碱含量和番茄提取物的抗氧化和抗菌活动

文摘

本研究的目的是评估提取物的抗氧化和抗菌性不同的两个番茄品种的分数。茎,根,叶,全植物分数进行评估。Tomatine和番茄碱被HPLC-DAD确认。两个品种的叶提取物显示最高的类黄酮,叶绿素,类胡萝卜素和总酚醛物质内容和最高的抗氧化活性取决于DPPH, abt和氧自由基吸收。积极的相关性观察提取物的抗氧化能力与总酚、类黄酮素,叶绿素含量。Pitenza品种提取物抑制病原体的生长等大肠杆菌O157: H7,沙门氏菌沙门氏菌感染、金黄色葡萄球菌,李斯特菌ivanovii,抑制光环直径8.0 - 12.9毫米,麦克风的值12.5至3.125毫克/毫升。这些结果表明,番茄显示潜在的不同来源生物活性化合物,抗氧化剂,抗菌素。

1。介绍

番茄属于茄科的家人和酚类化合物的良好来源,色素,抗氧化剂和其他营养物质,在人类饮食(1]。大量的番茄加工成果汁和果酱,产生浪费。在农业领域,番茄植物收割后被丢弃,因为他们为工业过程被认为是毫无价值的。剩余的植物材料通常作为不平衡的食物喂养牲畜(主要是牛),没有任何明显经济效益的番茄生产商。

一些报道表明,番茄果实提取物具有抗菌和抗癌的特性(2,3]。番茄果实的酚醛内容已经与他们的抗氧化能力。这些化合物还能防止氧化细胞通过减少自由基的水平的变化(4,5),和流行病学报告表明番茄的抗氧化能力之间的直接相关性,降低患心血管疾病和癌症的风险(6]。除了这些属性之外,番茄的副产品,如种子,代表一个有吸引力的纤维来源(7),还显示抗菌活动(8]。番茄植物还具有生物活性成分与药理和营养属性(9]。

植物组织研究的焦点,因为生物活性化合物的分离。不同部分的植物富含多种生物活性化合物,其中许多被丢弃食品工业的副产品,而只利用某些地区的水果。角质层、皮、果肉、种子、茎,和叶子的植物是抗菌药物的潜在来源,抗病毒,抗氧化化合物,如酚类、类黄酮,和维生素等。在过去的十年中,可用的文学处理植物副产品的抗氧化和抗菌活动大大增加,特别是关于葡萄籽提取物,橄榄废物10]。

目前,农业部门恢复的趋势,评估,和找到更好的使用等所有的副产品,皮、种子、茎和叶。番茄作物副产品含有生物活性物质,可能的潜在来源抗菌,抗病毒,抗氧化化合物,给他们在食品工业的经济价值。在这种背景下,本研究的目的是探讨作文(steroidic生物碱、总类黄酮、酚类、类胡萝卜素和叶绿素)和提取物的抗氧化和抗菌能力两个番茄品种(Pitenza和Floradade),在材料的选择可能是有用的生物活性化合物和保健品的生产。

2。材料和方法

2.1。化学物质

过硫酸钾2 2-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)联胺盐(abt), 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Folin-Ciocalteu试剂、6-hydroxy-2, 5, 7, 8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸(Trolox)、碳酸钠、没食子酸、槲皮素,阿莫西林,tomatine,番茄碱,丙酮也购买了从西格玛化工有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。Mueller-Hinton琼脂,DMSO(二甲亚砜),和所有其他nonspecified试剂和溶剂从j.t购买贝克(Baker-Mallinckrodt、墨西哥)。

2.2。植物材料

在这项研究中,我们使用残留的番茄植物(Lycopersicon esculentumPitenza)和Floradade品种,从温室在索诺拉雅基河河谷,墨西哥。二十个样品新鲜植物收集每个植物品种,用蒸馏水洗净。植物的部分被用来获得提取的根,茎,叶,和整株植物。

2.3。菌株和生长条件

大肠杆菌O157: H7(写明ATCC 43890),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 65384),沙门氏菌沙门氏菌感染(写明ATCC 14028)李斯特菌ivanovii(写明ATCC 19119)被用于实验。这些菌株被维护在大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)含有甘油(20%)−40°C到使用。一个铂环量的细菌被转移到10毫升的TSB和孵化一夜之间在37°C。铂环量的文化然后转移到TSB和文化生长在37°C,直到达到所需的每毫升的菌落数(cfu /毫升)用于抑制化验。

2.4。准备的提取

茎,叶,根,全植物分数受到真空干燥箱中干燥24小时,这是由45°C除了根和茎的情况下,干60°C。干材料粉,通过一系列20筛(WS泰勒)。然后35 g整除的渗样品与乙醇和5%醋酸溶液混合比例(95:5),并通过不断搅拌进行了浸渍72 h在室温下搅拌盘在完全黑暗。1号样品随后真空过滤绘画纸纸,和残渣提取与acid-ethanol疲惫的混合物通过声波降解法对20分钟(布兰森3510)。这个示例是过滤,两溶剂混合,用旋转蒸发器蒸发(Buchi加热浴b - 490, Buchi Rotvapor r - 200)。最后,提取冻干48 h(冻结区4.5,Labconco)和干提取维持在−20°C进行后续分析。所有的拔牙进行了一式三份,配糖生物碱、总酚、类黄酮、叶绿素、抗氧化和抗菌活性测定。

2.5。通过高效液相色谱法测量配糖生物碱化合物

tomatine和番茄碱测量使用适应性从提出的方法11,12),提取盐酸溶解在0.2 N,配糖生物碱沉淀NH为5%₄哦,直到pH = 10。这个解决方案是在10000 g离心10分钟在4°C。重复洗涤。浮在表面的蒸发在45°C和颗粒溶解在甲醇,透过一个0.45μ10 m膜和卷μL是高效液相色谱法(HPLC)注入水2690二极管阵列检测器配备脱气系统。高效液相色谱法的具体设置如下:(a)列,Zorbax SB-C18 ID(4.6毫米×250毫米Zorbax 5列μ米颗粒大小);(b)紫外可见检测器(717 +水);(c)的吸光度被记录在200海里;和(d)流动相、甲醇,利用。至少五分钟是允许运行之间保持平衡。配糖生物碱含量计算使用标准曲线表示为毫克/通用电气。每三次提取进行了分析。

2.6。总酚醛树脂

总酚含量的浓度决定使用Folin-Ciocalteu方法描述Magalhaes et al。13),做了一些调整。提取是溶解在无水甲醇,后来15μL与750年提取的混合μL 1 N Folin-Ciocalteu试剂(1:10)。5分钟后在室温下,60μL (Na₂有限公司₃(7.5%)被添加到提取。30分钟的孵化后在室温下,吸光度是阅读在765 nm使用多模标Fluostarω(美国BMG Labtech,芝加哥,IL)。总酚类化合物的浓度计算利用没食子酸标准曲线的等价物(GAE)和表达为毫克每克提取(mg GAE /通用)。分析每个每提取一式三份。

2.7。总类黄酮

类黄酮含量是决定基于Chen在描述的方法。14),用细微的修改。溶解在无水甲醇提取物。在一个2 mL埃普多夫管,100μL的一个示例是混合了430年μL 5%的纳米₂,其次是孵化为5分钟。孵化后,30μL (AlCl₃(10%)和440年μL的氢氧化钠(1 mol / L)被添加到反应混合物,和吸光度是阅读在496海里多模标Fluostarω分光光度计(美国BMG Labtech,芝加哥,IL),以槲皮素为标准。结果表示为毫克每克提取槲皮素等价物(QE) (mg QE / ge)。

2.8。总叶绿素

0.2 g样本有80%丙酮提取的3倍,直到绿色色素消失了。最后的混合物过滤,浮在表面的结合,然后成交25毫升。吸光度测量在663、652、645和470 nm使用紫外可见分光光度计(创世纪20)。叶绿素含量被表示为毫克/克提取(ge)按照下列方程(15]:

2.9。抗氧化活性

2.9.1。abt化验

这个试验是根据托尔et al。16),做了一些调整。abt自由基阳离子生成的混合物5毫升的7更易与abt和88的解决方案μ0.139 L的更易与K₂年代₂O₈解决方案。绝对的乙醇提取物被稀释。反应混合物被放置在一个微型板块5μL(提取245年的存在μL (abt的解决方案。吸光度是读取初始混合后在734海里(Absi)和每一分钟之后7分钟(Absf)使用一个微型板块读者Fluostarω分光光度计(美国BMG Labtech,芝加哥,IL)。所有的决定都是一式三份。问题值表示为Trolox等价物(每克更易与TE)提取(ge)。

2.9.2。DPPH实验

这个试验是根据钱德拉和Ramalingam [5),做了一些调整。280年一个整除μL (DPPH自由基溶液(0.025毫克/毫升甲醇)和20μL /毫升每个提取物稀释在乙醇和动摇。反应在室温下被允许继续为30分钟,和吸光度测量515海里使用Fluostarω分光光度计(美国BMG Labtech,芝加哥,IL)标仪设备。控制反应混合物是没有任何准备的提取。抗氧化活性是计算使用Trolox校准曲线每克的提取和表达为Trolox等价物(更易与TE / ge)。

2.9.3。氧自由基吸收试验

氧自由基吸收决定根据Lopez-Cobo et al。17]。AAPH试剂作为过氧化氢是激进的发电机,荧光素(FL)作为荧光指标,和Trolox标准。反应混合物含有100μ1.65 L的乙醇溶液提取、μL(磷酸盐缓冲剂(10 nM, pH值7.4),150年μL (AAPH(0.8米),100μL (FL (0.106μ米)。磷酸盐缓冲剂是用作空白。样本在37°C preincubated 15分钟,然后AAPH是补充道。荧光监测,使用标484 - 515 nm Fluostarω分光光度计(美国BMG Labtech,芝加哥,IL)。是最后一个ORAC值被表示为每克Trolox等价物提取(更易与TE / ge)。

2.10。抗菌活性

抗菌活性测定细菌生长抑制区,所述约旦et al。18),做了一些调整。100年Mueller-Hinton琼脂板注射μ刚做好的细菌悬液(10 L⁸CFU /毫升)。每个提取物稀释10%二甲亚砜(DMSO)和通过0.45通过过滤消毒μm膜过滤器。一个40μL每个提取样本装上无菌滤纸光盘(直径6毫米,1号绘画纸),随后被放置在顶部的琼脂板上。板块在室温下了30分钟,然后孵化24 h,在37°C和生长抑制晕测量。这些分析进行了一式三份,平均值计算。负控制治疗由光盘浸渍和DMSO溶液(10%)。阿莫西林(50μg / mL)作为阳性对照。的最低抑制浓度(MIC)决心通过采用根据Taveira et al。8),做了一些调整。测试细菌接种到解决方案的番茄植物提取物在96 - 10浓度的微量滴定板⁷CFU /毫升。孵化后37°C 24 h,麦克风是确定的最低浓度的提取没有观察到测试细菌代谢活动。浊度表示微生物的增长。阿莫西林是积极的控制。

2.11。统计分析

结果表示为平均值±SD,和统计学意义是设定在5%的水平()。Tukey-Kramer多个比较测试应用。之间的关系进行相关分析来确定提取物的抗氧化性能和植物化学的化合物包含基于皮尔逊相关系数和显著性水平()。Statgraphics + v . 5.0软件使用。

3所示。结果与讨论

3.1。生物碱类成分

配糖生物碱的代谢产物,保护植物免受包括昆虫、真菌、细菌和病毒。此外,他们表现出不同的药理和营养属性在动物和人类1,11]。两个品种的番茄植物的树叶评估在这个研究显示tomatine内容和番茄碱值最高的4.940和0.820和2.430和0.225毫克/通用电气Pitenza Floradade,分别(表1)。然而这些值较低,Taveira报道的et al。1在树叶中提取。Tomatine和番茄碱没有检测到在两个品种的根提取物。这一发现恰逢Kozukue等报告的结果。12在番茄植物的根部。根和叶之间的这种差异的原因可能是,同时配糖生物碱的合成,然后退化在植物成熟(12]。

3.2。酚类、黄酮类、叶绿素和类胡萝卜素组成

植物含有多种酚类的衍生品。这些化合物对植物生长和繁殖至关重要。此外,酚类化合物是天然的抗氧化剂,可能发生在植物的所有部分和函数作为抗生素和自然杀虫剂(19]。图1(一)显示的总酚含量的检查部分Pitenza Floradade植物番茄品种。两个品种的叶提取物表现出最高的酚醛GAE内容值为125.5和83.35毫克/通用电气Pitenza Floradade,分别。所有的Pitenza植物部分显示显著()提高酚醛内容相比Floradade部分。相比之下,根提取物显示最低的酚醛Pitenza和Floradade植物中部分内容(24.5和21.98毫克GAE /通用电气、职责),显示根是没有这种类型的化合物的一个重要储层。

研究番茄果实副产品酚醛报道水平的GAE 44.18和20.94毫克/ 100克茄皮和种子,分别。佩舍尔et al。20.)观察到的内容61毫克GAE / g干燥提取茄皮。Rivero et al。21]研究了番茄的酚类水平受到压力和总酚报道值2.66至3.55毫克每g咖啡酸等价物。所有的西红柿之前报道值低于这一研究获得的。因此,我们的研究结果表明,番茄植物提取物含有较高的酚类化合物比水果。这一现象最可能是因为紫外线辐射造成的压力和其他因素导致植物的液泡中酚类化合物的积累真皮组织,因此化合物用作防御这些因素(5]。这种差异的另一个原因可能是,从植物中提取评估在这项研究中获得的,在一个成熟的生理状态。托尔et al。16)报道,高温和曝光刺激生产的酚酸和其他类黄酮和热应力在番茄植物增加与苯丙氨酸解氨酶活性(PAL)以及总酚和o二元酚含量和诱发的积累酚醛树脂通过激活他们的生物合成以及抑制氧化。在这项研究中,叶子提取物Pitenza和Floradade品种显示内容125.501和83.356毫克GAE /通用电气,分别。Rivero et al。21]报道类似行为在西红柿的叶子,可能是因为这些地区的植物暴露于更直接的光和紫外线辐射比其他植物部分,因此表现出大量的酚类化合物。Cervilla et al。22]表明,增加番茄叶和多酚含量的积累可溶性酚类茄植物硼对压力的反应刺激诱导的机制。总酚类提取物的分析从不同的植物部分(图1(一))显示显著差异()中提取。许多植物化学物质的植物可以在不同浓度检测因为次生代谢物的数量和成分不是常数,和他们的浓度取决于植物的组织类型和年龄(23]。最近我们报道了酚醛树脂的特性从番茄植物化合物,确定6个化合物,没食子酸,绿原酸和芦丁主要组件和植物的叶子都显示出这种化合物的高积累(24]。

与类黄酮化合物,托尔et al。16)报道,番茄的酚醛内容包括hydroxycinnamic酸和类黄酮,主要分布在树叶。这里,我们发现,叶提取物表现出最高的值在研究植物部分,值为33.028和61.96毫克QE /通用电气正在获得Pitenza Floradade品种,分别(图1 (b))。我们还发现,类黄酮的浓度是影响番茄品种的植物。这一发现是类似报道Martinez-Valverde et al。25]。这些作者观察到类黄酮浓度是影响番茄果实不同,这种差异可能是由于遗传差异以及不同的环境压力条件和农业实践,影响植物的化学成分。Slimestad和Verheul26发现槲皮素和芦丁的叶子两个番茄品种。我们的研究结果表明,类黄酮的叶和茎提取物有很高的内容表示为槲皮素。未来的研究应该关注植物化学物质如芦丁和槲皮素在番茄残留,这些化合物代表主要黄酮类化合物存在于番茄植物,并强有力的抗氧化剂和有益健康的影响(27]。

番茄植物合成代谢物和色素,叶绿素和类胡萝卜素等,有利于人类的营养和健康,一些研究表明,这些植物化学物质强烈影响植物的成熟,他们防止光致氧化(28]。表2提供了叶绿素的含量,叶绿素b,和总检查提取叶绿素,这之间存在着显著的差异()。根提取物提供最低的内容在这两个品种。相比之下,Pitenza和Floradade叶提取物表现出最高的内容,其次是茎和全植物提取物。这些天线部分植物解剖的部分是最暴露在阳光下。”(29日]的内容报道,叶绿素和类胡萝卜素茄植物强烈影响发病率的光,这些代谢物的浓度增加了光照。叶绿素的含量较高的叶提取物Floradade品种。这些结果与报道费鲁齐et al。30.),发现植物叶绿素的影响较小,表现出更大的抑制abt和DPPH自由基能力相比,叶绿素b。

总类胡萝卜素含量在植物的不同部分被发表在表2。两个品种的叶提取番茄显示浓度最高。然而,Floradade叶提取物的浓度显著()高(5.354毫克/ ge)比Pitenza(1.221毫克/通用)。然而,Pitenza提取显示总酚类的最高水平。植物化学物质与之前的研究结果相一致,根类胡萝卜素含量最低。植物的所有部分的类胡萝卜素含量明显高于相比Floradade Pitenza品种()。这一结果表明,类胡萝卜素成分可以根据材料而异(生)和成熟的植物,这两个结果在类胡萝卜素的降解率的变化31日]。

3.3。抗氧化活性

抗氧化剂是任何物质,在低浓度时,显著延迟或防止氧化细胞组件,如蛋白质、脂质、碳水化合物,和DNA (19]。我们评估DPPH提取物的抗氧化活性,是abt和过氧化氢自由基ORAC化验报告,结果更易与TE /通用电气(图2)。提取物的抗氧化活动Pitenza品种植物的所有部分决定使用这三种方法更高的Floradade品种相比。从树叶中提取的两个品种的番茄TE值最高,其次是茎、全植物提取,显示无显著差异。根提取物的抗氧化活性是包含在所有的样品中最低的。这低抗氧化能力可能与植物化学物质如酚类物质和类黄酮含量低的特点在这些提取物(数字1(一)和1 (b))。另一种解释可能是,一些品种的番茄植物的根不受压力一样的其他部分,显示抗氧化酶反应减少,如过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸盐过氧化物酶(APX型)32,33]。

目前工作的总体结果显示摘录两种西红柿的叶子施加较高的抗氧化活性。叶提取物Pitenza品种显示更高的活动,显示DPPH, abt、和氧自由基吸收值为0.798,1.702,和13.489更易与TE /通用电气(数字2(一个),2 (b),2 (c))。更高的活动中观察到植物的叶子可以代表一种防御机制产生的接触中发生的高温的地理区域样本。之前的研究表明,当季和番茄叶子是热处理,其抗氧化活动增加了10倍,支持本研究的结果(21,34]。

3.4。植物化学的内容和抗氧化能力之间的相关性

据报道,一个植物提取物的抗氧化能力与酚类内容(35]。确定关系的植物化学的内容提取及其抗氧化能力,进行皮尔逊相关分析。很明显,酚醛的内容提取显示令人满意,与DPPH显著相关,abt和氧自由基吸收值(),值0.944,0.787,和0.870,分别(表3)。这些结果表明,酚类化合物在番茄副产品积极贡献他们的抗氧化能力,减少自由基的水平。类似的结果被斯宾塞等报道。35),发现的相关性提取的37个不同的番茄品种。托尔et al。16]报道重要的总酚含量和抗氧化能力之间的相关性亲水亲脂的提取的番茄,有价值被观察到。相比之下,如表所示3类胡萝卜素之间,没有正相关内容和这些提取物的抗氧化能力。然而,总类黄酮含量和DPPH,之间的相关性问题,和氧自由基吸收值适度强劲,呈现值为0.824、0.584和0.895,分别。番茄富含多酚类化合物(类黄酮和hydroxycinnamic酸),如绿原,咖啡,和阿魏酸、芦丁黄酮(16,24),这些化合物有酚醛树脂戒指和羟基,捕获自由基和抑制活性氧的生成。几类黄酮已确定从番茄和最主要的化合物是quercetin-3-rutinoside(芦丁)。一些作者所描述的芦丁可以中和自由基的转移和电子捐赠或抑制酶的活性脂质自由基参与的生产(36]。

另一方面,总叶绿素含量之间的相关系数和化验抗氧化能力高于总酚类化合物。这些结果表明,除了总酚类化合物代谢产物含量,叶绿素和叶绿素b和总叶绿素展览高自由自由基清除活性提取物的番茄植物。这种行为是类似报道Ferruzi et al。30.),他发现叶绿素抑制abt和DPPH自由基的能力。还报道,叶绿素显示抗氧化活性,它已经表明,叶绿素减少自由基作为H⁺捐赠者打破连锁反应导致细胞氧化(37]。

3.5。抗菌活性

番茄植物提取物的抗菌活性如表所示4。Pitenza品种提取物抗菌活性与显示大肠杆菌O157: H7,沙门氏菌沙门氏菌感染,金黄色葡萄球菌,李斯特菌ivanovii。Pitenza提取物表现出更高的抗菌活性比Floradade提取物。Floradade根提取物显示没有活动。在这两个品种,叶提取物显示抗菌活性最高,其次是茎、全植物提取物。这些结果的趋势类似,如图1(一)总酚含量。因此,酚类化合物浓度的增加意味着增加抗菌活性。我们的结果是类似报道Smirnova et al。38),发现高水平的多酚与抗菌活性呈正相关大肠杆菌。巴珊et al。39评估的影响两酚类提取的番茄叶和观察到酚类化合物的增加水平受微生物污染的程度和作为响应机制,当叶子微生物的攻击。后者发现支持工作的结果,这表明多酚负责筛选提取物的抗菌活性观察番茄植物。一些作者所描述的多酚羟基引起微生物的抑制作用,而这些团体可以与细菌的细胞膜,破坏细胞的膜成分和造成损失的组件。此外,据报道,这些哦组可以在酶的活性部位和破坏微生物的代谢过程。此外,一些研究已经发现的位置哦组芳环的多酚以及饱和侧链的长度也可以增加抗菌活性(40,41]。此外,一些酚醛树脂的醛结构化合物与碳碳双键,有很高的电负性,可以干扰蛋白质和核酸的电子转移和增加其抗菌活性42]。

另一方面,我们评估的配糖生物碱提取物(表的存在1),因为他们也可能是抗菌活性的指标。我们的结果表明,tomatine和番茄碱树叶提取物5.4和2.5显示了最高水平μ米/ ge Pitenza和Floradade分别(数据没有显示)。因此,这些配糖生物碱的存在可以增加菌株的敏感性评价。先前的报道表明,tomatine有抑制活性和抑菌活性与番茄碱礼物金黄色葡萄球菌 (43]。虽然在树叶中提取甾体生物碱代表只有0.5%和总酚类占14%,这些发现并不丢弃与酚类化合物协同效应。一些作者报道,番茄碱分离番茄有能力采取行动以合作的形式和加强氨基苷类抗生素的作用,而且它对病原体如扮演着重要的角色金黄色葡萄球菌(44]。米尔纳et al。45)报道,番茄碱的抗菌活性,可与碳水化合物侧链的组成和性质的糖苷配基配糖生物碱的一部分。此外,据报道,番茄碱是重要的分数spiroaminoketal抗菌活性(46]。

中等收入国家的结果表明,番茄植物提取物对不同程度的生长抑制食源性细菌菌株(表4)。总的来说,这是观察到的叶提取物Pitenza品种表现出最高的抗菌活性和麦克风价值(3.125毫克/毫升)。提取造成增长抑制革兰氏染色(+)菌株与麦克风的值12.5至3.125毫克/毫升,而年代。沙门氏菌感染和大肠杆菌证明提取更大的阻力,导致麦克风25至12.5毫克/毫升的价值观。相比之下,阿莫西林的活动不是比得上的提取进行了研究。因此,提取来自两个品种的叶子(Pitenza和Floradade)代表潜在的抗菌防腐剂用于食品或医药行业。同样重要的是要注意,大多数可用的科学报告的重点是番茄果实提取物的抗菌活性8]。

4所示。结论

广泛的抗氧化活性和抗菌性能研究中被证实番茄植物的提取物。摘录Pitenza品种表现出最高的抗氧化和抗菌的活动。此外,叶中的叶绿素和类黄酮提取物被发现扮演重要的角色在他们的抗氧化活性。这些结果表明,提取的番茄植物可以作为天然抗氧化和抗菌化合物的来源。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

财政支持PROMEP(劈开PROMEP / 103.5 / 12/2051)和西班牙著名德索诺拉(PROFAPI 00270年,00500年和00533年PROFAPI)。

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