的影响疟原虫感染胎盘组织形态学:Stereological初步研究

文摘

背景。孕期疟疾可能危及母亲的健康和造成严重的结构性破坏胎盘的内部架构,后来影响妊娠结局。更好地了解胎盘形态学上的疟疾寄生虫的影响是至关重要的孕妇和婴儿的更好的管理。目的。评估组织形态学的体视学选择胎盘结构在胎盘疟疾与正常胎盘。方法。共有10个胎盘由5控制和5例选择来自50个胎盘,收集术语(38周±2周)孕产妇分娩套Korle-Bu教学医院在阿克拉,加纳。血液从胎盘收集快速诊断测试和微观检查。样品收集检查疟原虫寄生虫,之后他们被归类为研究集团(疟原虫积极的)或控制(疟原虫负面的)。Stereological量化使用系统的统一的随机抽样技术与测试点和交点计数的显微照片被用来估计的平均体积密度合胞体结,合胞体坏死,胎盘的胎儿毛细血管和intervillous空间共有1600显微照片。结果。从五十从母体胎盘样品检测疟原虫,6个代表12%被发现感染了寄生虫快速诊断测试和显微镜。stereological评估,合胞体结的平均体积密度明显高于胎盘疟疾组与控制胎盘(P = 0.0080),但胎儿毛细血管(P = 0.7813), intervillous空间(P = 0.8078),合胞体坏死(P = 0.8249)没有显著不同。结论。这个初步结果表明,胎盘疟疾可能会导致显著增加合胞体结但不是胎儿毛细血管,intervillous空间,或合胞体坏死。这一发现意味着早熟的胎盘和了解围产期结果可能是至关重要的。

1。介绍

疟疾仍然是一个复杂和压倒性的卫生问题做出显著贡献的孕产妇和婴儿死亡率。尤其是孕妇,比一般人更容易受到疟疾(1]。研究属性增加易感性缺乏怀孕特有的免疫隔离,隔离在胎盘2,3]。尽管胎盘梭梭的机制尚未完全了解,某些寄生虫孕妇压力一直在增加,导致这些菌株的建议有能力坚持硫酸软骨素(CS-A)受体合胞体滋养层;因此他们能够选择性地感染胎盘(4,5]。

胎盘疟疾的积累疟原虫来华的红细胞intervillous空间的胎盘,怀孕期间是疟疾的一个主要特征。孕产妇外围怀孕期间的疟疾寄生虫血症是一种迹象。然而,它已被观察到,虽然外围寄生虫血症可能有时仍低于微观检测水平,这些寄生虫可以通过胎盘(5,6]。积累的疟原虫intervillous空间可以改变敏感的胎盘的形态7,8]。

胎盘疟疾与不同的不良妊娠结局有关。一些研究报告疟疾和死产的风险之间的联系(9,10]。相关的其他研究胎盘疟疾与出生体重降低11,12]。另一项研究表明胎盘疟疾可能会导致胎儿生长的限制。(13]。尽管许多研究已经报道不同的产前并发症胎盘疟疾,有少报告有关的机制和因素导致不良的结果。

获取三维数据体视学是第一选择从二维资料14]。它提供了一个工具包的透明抽样评估规则和简单的工具,允许3 d量(和平均总量,表面,长度,数量,等)计算从2 d图像出现在切平面(14]。现代体视学方法允许设计形态的定量描述14]。当应用于胎盘在正常和不正常的怀孕,这已经被证明是很有价值的挑战性的误解解释增长的早些时候,形态发生、适应、和功能在器官水平(15]。

尽管公共健康胎盘疟疾的重要性,它对胎盘组织形态学的影响还没有被完全理解。更好的理解是至关重要的发展中一个有效的干预控制胎盘病理学与胎盘疟疾。本研究的目的是评估组织形态学的体视学选择胎盘结构在胎盘疟疾而正常的胎盘。

2。材料和方法

这是一个病例对照研究,包括立意抽样的产后胎盘50个病人。2和3毫升的血液从孕产妇和胎儿胎盘的收集和保存在K₂EDTA管(BD真空采血管®,正欲,迪金森& Company (BD),英国)两种疟原虫快速诊断测试(RDT)和染色染色涂片显微镜检查,后被分类为例(研究组)或控制。研究小组由胎盘样品被发现被感染了疟原虫组成的,而对照组疟原虫-胎盘样品。

2.1。染色彩色厚,薄膜制备

油脂自由与磨砂玻璃幻灯片结束(美国圣路易斯Sigma-Aldrich集团®)是用于厚,薄膜。薄膜,2μl彻底混合全血样品(其中一些早期被用于RDT)是用移液器吸取,把中间的幻灯片。使用细边载玻片撒布机,血液迅速蔓延在一个近似45°角薄单层(16]。

厚膜,5μl的血用移液器吸取并放置相同的磨砂一端滑动关闭薄膜。5μl血液循环降幅传播获得一个直径1 - 2厘米涂片。电影被风干了三个小时在室温下,之后,薄膜固定在无水甲醇。厚,薄膜都充斥着染色30分钟3%,紧随其后的是洗下运行的自来水,用电吹风。然后染色涂片检查在光学显微镜(英国奥林巴斯光学有限公司®)和油浸物镜与疟原虫积极或消极的涂片导致分类为例(研究组)或控制,分别。

2.2。快速诊断测试(RDT)

一个免疫印迹检测组件(Immunetics Inc .)是用于快速诊断测试(RDT)。根据制造商的指示,一滴血液从胎盘被收集的样品列测试装备,之后添加了四滴赖氨酸缓冲区,结果解释为RDT正或RDT负。

2.3。组织切片和处理

总共十个胎盘由5控制和5研究小组被选作进一步的检验。称重后胎盘和记录由液体体积位移,每个胎盘然后切成相等的四象限,通过选择一个随机的起点,一个组织采样大吃刀(从绒毛膜板基板)从每个象限同心地从边缘到中心。

胎盘样品约1厘米x 1厘米x 1厘米立方体缓冲福尔马林固定在10%,pH值7.29,之后组织通过分级系列乙醇脱水(从70%到95%)。胎盘组织样本绝对酒精进一步脱水步骤,之后他们清除二甲苯的两个步骤。组织样本与熔化的蜡和嵌入式渗透形成块切片机切片。胎盘组织样本每个象限是嵌入在一个蜡块。

2.4。胎盘组织的切片样品

wax-blocked胎盘组织最初削减10微米的厚度(μ米)揭露整个配置文件使用徕卡的组织切片机(德国徕卡RM 2125)。组织被切割的厚度5μm和四个部分系统地选择和苏木精和伊红染色())。的 ,的 ,的 ,和组织部分是从每个块(图选出来的1)。总共16个部分收集胎盘组织。胎盘组织的部分是选择到载玻片(76毫米x 26毫米×1毫米)。总共160胎盘部分汇集histomorphometrical 10胎盘组织的研究。

2.5。Stereological研究

2.5.1。抽样胎盘部分的显微照片

部分被带到与x40可见光显微镜下物镜焦点(徕卡盖伦三世,目录。317506年,序列号。ZG6JA4)。显微镜领域是指向幻灯片的一端(从基板的一个角落)。显微镜的目镜被替换为一个数字显微镜目镜(联想Q350 USB电脑摄像头),这是连接到一个台式电脑(惠普康柏dx2300 Microtower)。舞台感动两个镜台单位x设在单位的显微镜和两个阶段y设在然后显微照片。舞台就在相反的方向移动x设在但在同一个方向y设在接下来的显微照片。这些运动是胎盘的重复,直到整个地区部分被覆盖。所有胎盘显微照片的图像资料的过程中遇到这些运动捕获使用x40客观和数码相机。显微图的平均数量是35 /胎盘幻灯片。所有获得的显微图使用16节/胎盘组织汇集在一起,十显微照片选择使用系统随机抽样,在每一个第三显微照片选自第一个stereological研究随机选择的显微照片。160样品显微图选择系统(图/胎盘组织1)。

总共1600显微照片被系统选中点估算的stereological网格(图2)。此外,快照的镜台格被放大。格的显微图是用于校准网格用于stereological研究(图2(一个))。他走时部分被用于计算合胞体结,合胞体坏死,intervillous空间,胎儿毛细血管。

2.5.2。Stereological研究胎盘显微照片

体积密度的合胞体结,胎儿毛细血管,绒毛合胞体坏死,intervillous空间测定用点估算Cavalieri原则(17]。stereological网格组成的均匀间隔点,1厘米×1厘米,在每个显微照片的胎盘部分叠加使用Adobe Photoshop CS6扩展(试用版13.0.1)软件。在网格的交点数量的测试点统计如图2 (b)。体积密度的合胞体结,胎儿毛细血管、绒毛合胞体坏死,和intervillous空间计算使用以下方程: 在哪里Vv表明体积密度,是遇到测试点的总和,(a / p)是stereological网格,每点的区域t是部分的厚度,米是线性放大18]。

3所示。结果

共有50个胎盘的样品检测疟原虫寄生虫,6个(12%)被发现感染了疟原虫寄生虫RDT和显微镜,其余(44岁的88.3%)为阴性疟原虫两种诊断方法。因此,12% (疟原虫积极的胎盘样品)成为了研究小组,而82% (疟原虫消极的胎盘样品)成为了对照组。

关于histomorphological评估,合胞体坏死,合胞体是剃掉(与曲线如图所示3 (b)),而正常合胞体与单头箭头在图(如图所示3(一个)),是胎盘的结构性破坏内部结构观察胎盘组织的显微照片。也,这是观察到的合胞体滋养层细胞核形成合胞体结要显著高数plasmodium-infected胎盘(图3 (d))与对照组相比(图3 (c))。

未配对的t以及分析胎盘的词揭示intervillous空间的体积密度无显著差异,胎儿毛细血管,合胞体坏死,各自记录P值为0.8078,0.7813,和0.8249,感染疟疾的胎盘和对照组之间。然而,合胞体结的平均体积密度显著增加的术语研究人群相比,对照组(图4)。P值0.0080记录对体积密度的合胞体结平均增加0.178±0.02项研究小组(图4)。

4所示。讨论

患病率(12%)在这项研究中观察到低于先前的研究在加纳(19),据报道35.9%的孕妇的胎盘疟疾寄生虫。在加纳一个不同的研究中报告了类似的患病率(36.3%)孕妇(20.]。这些差异可能是由于社区获得性免疫的变化,研究人群的社会人口特征,使用和抗疟疾药物预防,诊断工具用于检测的寄生虫21- - - - - -23]。此外,这些早期的研究的时差(2009年)在加纳19,20.)和当前(2018年),横跨近十年,可能占胎盘疟疾发病率的下降。这是因为在这段时间有差异的实现疟疾治疗,预防和控制策略,如间歇性预防治疗(IPTp-SP)和大量分发经杀虫剂处理过的蚊帐在加纳,有很多关注孕妇。这个原因是观察由Hommerich支持的等。(24)在减少胎盘疟疾在加纳南部(目前的研究进行了)在2000年和2006年之间实施IPTp-SP后怀孕。报告已经由Bouyou-Akotet相似等。(25在加蓬和Kayentao等。(26在马里。

然而,类似低胎盘疟疾发病率的12%已经被记录在坦桑尼亚的一项研究,涉及984胎盘样品27]。其他研究也报道了类似的精力充沛的社区的患病率为11%,阿散蒂地区,加纳,和8% Rufiji区,姆地区,坦桑尼亚24,28]。

然而,12%的孕妇胎盘疟疾患病率表明仍在疟疾的魔爪,尽管目前的控制措施像蚊帐(ITN)和间歇性预防治疗怀孕(期间),其他(24,29日]。

本研究的结果是一致的与其他研究也报道合胞体结在增加恶性疟原虫来华的胎盘(7,30.]。机制占的体积密度的增加合胞体结还不清楚。也许合胞体结数的增加在这个初步研究可能是由于一系列的事件,如螺旋小动脉的阻塞感染红细胞,导致氧化应激,从而导致凋亡事件合胞体。然而,据报道在另一项研究中,显著增加合胞体结形成胎盘绒毛表明荷尔蒙因素的干扰,可能可能导致血流量的改变(31日]。评论文章认为,胎盘病理学的发展和适应胎盘经历来减轻这种病理可能影响后母亲和婴儿的健康32]。

我们初步研究的力量是利用体视学数胎盘内部架构(合胞体结、合胞体坏死、胎儿毛细血管和intervillous空格)在1 600年显微照片受疟疾影响的胎盘与控制。

然而,限制是不能告诉寄生虫在胎盘多久。这可能是有趣的量化这些内部结构体视学的胎盘早期接触晚期感染的寄生虫,在未来的研究。另一个值得一提的限制是低使用的胎盘样品数量在这个初步研究,因为这可能占的百分比疟原虫来华的胎盘低于其他的研究报告,以及不重要的差异中观察到一些内部的结构疟原虫来华的胎盘而感染的。

5。结论

疟原虫怀孕期间感染有不利影响胎盘的内部架构,也可以解释围产期结果。我们的初步结果添加到胎盘疟疾的知识可能会导致显著增加合胞体结,这意味着早熟的胎盘。

数据可用性

困难的副本和电子数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者要求:耐心b . Tetteh-Quarcoo博士的电子邮件:patborket2002@yahoo.compbtetteh-quarcoo@ug.edu.gh。

伦理批准

这项工作是依法进行的赫尔辛基宣言》(1964)。伦理和协议审查委员会批准,健康科学学院,大学加纳,在这项研究中,获得了与协议识别号CHS-Et / M。2 C / 2017 - 2018。

同意

所有参与者提供书面知情同意。

信息披露

这项研究是由作者个人。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关这篇文章的出版。

作者的贡献

约翰Ahenkorah和弗雷德里克·k·Addai构思的想法。约翰Ahenkorah和耐心b Tetteh-Quarcoo设计实验。怜悯a . Nuamah汉森g . Nuamah迈克尔•Ntumy Emmanuel Korankye伯特利Kwansa-Bentum,抹大拉的托特参与收集和处理样品。约翰•Ahenkorah耐心b . Tetteh-Quarcoo怜悯a . Nuamah Emmanuel Korankye,抹大拉的迈克尔•Ntumy托特参与分析的数据。约翰•Ahenkorah耐心b . Tetteh-Quarcoo怜悯a . Nuamah和汉森g . Nuamah起草了手稿。约翰•Ahenkorah耐心b . Tetteh-Quarcoo和俾斯麦Hottor导致数据的解释。约翰•Ahenkorah耐心b . Tetteh-Quarcoo俾斯麦Hottor,弗雷德里克·k . Addai和汉森g . Michael Ntumy Nuamah发达手稿的结构和参数。约翰•Ahenkorah耐心b . Tetteh-Quarcoo俾斯麦Hottor,弗雷德里克·k . Addai Emmanuel Korankye伯特利Kwansa-Bentum,汉森g . Nuamah至关重要的修订和批准了最终版本。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

作者要感谢全体员工的妇产科单位Korle-Bu教学医院生物医学科学家和技术人员/部门的解剖学和医学微生物学,生物医学和盟军的健康科学学院,健康科学学院,大学加纳。特别感谢是由于解剖学系的明亮的加布里埃尔Dzotefe先生为他的贡献计算用体视学。

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