文摘
的目标。单核细胞在急性胰腺炎(AP)起着重要的作用。Hypertriglyceridemic胰腺炎(HTGP)总是比普通lipid-AP更严重,恶化的机制是否包括单核细胞子集是未知的。本研究旨在分析变化HTGP M1和M2外周血单核细胞的患者。方法。共有90名受试者,其中16个诊断为HTGP, 34个急性胆道胰腺炎(ABP), 20与高甘油三酯血症(高温凝胶)和20个健康对照组(HC)。外周血CD14 + CD86 + M1和CD14 + CD206 + M2单核细胞进行流式细胞术在天1,在入院3和7。结果。我们发现明显和M1单核细胞总数增加AP患者( )。HTGP M1单核细胞的百分比,白细胞明显高于1天,3和7,而M2单核细胞比例下降了3天,相比之下,ABP ( )。在轻度HTGP M1单核细胞计数和百分比逐渐下降,而M2单核细胞百分比逐渐从第一天增加到7。严重HTGP M1单核细胞计数和百分比上升到最高点,而M2是最低的3天。此外,M1单核细胞的水平显示正相关与血浆甘油三酯和Ranson HTGP分的患者。结论。M1和M2外周血单核细胞显示轻微和严重HTGP不同的动态变化。更主要的作用CD14 + CD86 + M1单核细胞可能参与HTGP的发病机理。
1。介绍
高甘油三酯血症(高温凝胶)是第三个最常见病因的急性胰腺炎(AP),二级胆结石和酗酒(1]。AP患者通常归类为有hypertriglyceridemic胰腺炎(HTGP)当甘油三酯(TG)水平超过1000毫克/毫升或500至1000毫克/毫升,而是脂血症的血清(2]。临床和实验研究已经证明,与急性胆道胰腺炎(ABP)相比,HTGP更为严重和显示加重炎症(3,4]。然而,的确切机制仍然未知。
近年来,大部分的关注都放在角色的免疫活性的细胞尤其是单核细胞和巨噬细胞,在美联社的进展5,6]。单核细胞是白细胞(白细胞)的一个重要类型,离开时分化成组织巨噬细胞循环系统。人外周血单核细胞可以激活为M1和M2的子集。M1单核细胞被认为是促炎等特点是表达促炎细胞因子白介素(IL) 6、IL - 1β和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子α),而M2单核细胞产生抗炎细胞因子(例如,il - 10)和其他监管转化生长因子等细胞因子β(TGFβ)。M1和M2表达不同子集激活标记,其中CD68 CD206通常用来识别M1和M2的表现型,分别为(7,8]。不同极化单核细胞的变化与疾病相关联。Zhang et al。9]报道数量的增加单核细胞CD14 + CD163, CD14 + CD163-MAC387 + M1单核细胞,和CD14 + CD163 + CD115 + M2最近诊断为轻微的AP患者单核细胞,后者还建议是重要的因素在确定的严重程度和预后严重美联社(10]。Bonjoch et al。11)在急性胰腺炎大鼠已经证明,从内脏脂肪组织脂质干扰M2巨噬细胞的极化和促进了切换到一个更强烈的促炎M1响应,表明脂质和巨噬细胞极化之间的联系。然而,到目前为止,对M1和M2外周血单核细胞的变化在HTGP。
因此,我们的研究旨在分析M1和M2的动态变化HTGP患者的外周血单核细胞,探讨单核细胞参与HTGP的发病机理。
2。材料和方法
2.1。病人
的AP患者承认在中国上海综合医院从2017年1月到2017年5月,50是包含在我们的前瞻性研究。年龄和性别匹配non-AP受试者被选为控制,包括20名健康对照组与高温凝胶(HC)和20。只有那些至少有温和高温凝胶,即≥2.3的TG水平更易/ L (200 mg / mL) (12),包括高温凝胶组。
所有患者遇到了美联社的亚特兰大标准(13]。结论:超声或计算机断层扫描(CT)进行诊断ABP。一个丙氨酸转氨酶(ALT)水平> 150 U / L后48小时内出现症状是用来证实ABP [14]。AP患者TG水平≥11.30更易/ L (1000 mg / mL)或在5.65和11.30之间更易/ L(500和1000毫克/毫升)但与血清脂血症的诊断出患有HTGP (2]。美联社分为三个程度的分类:根据修改后的亚特兰大温和的美联社(MAP),中度严重美联社(MSAP)和严重美联社(SAP) [13]。然而,为了更清楚地阐明单核细胞在美联社的角色,只包含地图和SAP在我们的研究中,与MSAP排除在外。患者被排除在外,如果他/她有自身免疫性疾病,过敏,恶性肿瘤、慢性炎性疾病。
研究协议是由上海综合医院伦理委员会批准,按照道德标准执行。知情同意是获得所有科目。
2.2。临床数据
每个学科的临床数据收集从医院记录。这些数据包括年龄、性别、和实验室测试。每个人受到常规实验室检测全血细胞计数,TG的水平,和总胆固醇(TC)、ALT。Ranson得分,APACHE II(急性生理和慢性健康评估)得分,和一种大型酒杯分数6)进行评估。
2.3。流仪结果
外围新鲜血液样本与EDTA是一日收集的,实际上在入院3日,第七天。样本non-AP受试者只有一次。在30分钟。每个血样处理红细胞是按照制造商的指示细胞溶解(红细胞溶解缓冲区,Beyotime生物技术,中国)。白细胞是immunophenotyped CD14、CD68 CD206。异硫氰酸荧光素(FITC) cd14、藻红蛋白(PE) -CD86和allophycocyanin (APC) -CD206单克隆抗体都从eBioscience购买,美国。孵化后5μL相应抗体的解决方案在4°C在黑暗中30分钟,PBS的细胞被洗两次。然后,分析了荧光标记单核细胞流式细胞分析仪。为单核细胞CD14是典型的标志。M1细胞典型CD86-positive CD206-positive和M2细胞。
2.4。统计分析
数据了 。单向方差分析(方差分析),非参数Mann-WhitneyU测试和枪兵的测试进行。所有由SPSS 19.0软件进行统计分析。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。研究对象的一般信息
研究对象的特点如表所示1。34 ABP患者和16 HTGP符合入选标准的研究。年龄和性别分布在统计学上一致的HC、高温凝胶,ABP和HTGP组。ABP的总体严重性和HTGP显示无显著差异。我们也分析了温和的ABP患者(MABP),轻度HTGP (MHTGP),严重的ABP (SABP)和严重HTGP (SHTGP),分别如表所示2。
3.2。增加水平的CD14 + CD86 + M1 HTGP患者单核细胞
如图1(一)单核细胞总数明显增加1天,3和7 ABP和HTGP组,分别相比,在HC和高温凝胶组( )。HTGP小组展示了高水平的单核细胞总数比ABP组但没有统计学差异。SAP患者总单核细胞的数量明显高于地图患者( )(图1 (b))。
(一)
(b)
然后,我们分析了CD14 + CD86 + M1单核细胞。高温凝胶组表现出更高层次的M1单核细胞计数比HC组( )。ABP和HTGP组显示显著增加水平的M1单核细胞计数1天,3和7,分别与HC和高温凝胶组相比,( )。HTGP集团有一个高水平的M1单核细胞计数比ABP组但没有统计学差异(图2(一个))。M1单核细胞计数和百分比显著增加在SAP患者比地图( )(数据2 (b)和2 (c))。最重要的是,在白细胞M1单核细胞的百分比显著增加SHTGP组的价格相比天SABP小组1、3和7 ( )(图2 (c))。
(一)
(b)
(c)
接下来,我们检查了M1单核细胞的动态变化趋势图和SAP,分别。MABP和MHTGP组,M1单核细胞计数和百分比是最高的1天,然后逐渐下降,直到第七天。相比之下,在SABP和SHTGP组,M1单核细胞计数和百分比达到了峰值天3和7天略有下降。
3.3。水平的降低CD14 + CD206 + M2 HTGP患者单核细胞
如图3(一个)ABP和HTGP组织显示,没有明显的差异CD14 + CD206 + M2单核细胞计数与HC和高温凝胶组相比,分别。严重的AP患者的M2单核细胞数量低于温和的AP患者,统计差异在3天( )。与MHTGP组相比,M2单核细胞计数明显降低SHTGP组7天( )(图3 (b))。与SABP组相比,M2单核细胞的百分比在白细胞显著减少SHTGP小组(3天至7天 )(图3 (c))。
(一)
(b)
(c)
MABP和MHTGP组,M2单核细胞比例呈现逐渐增加趋势从1到7天。SABP和SHTGP组,M2单核细胞计数和百分比3天减少到最低水平,然后在7天恢复到与第一天相同的水平。
3.4。M1单核细胞水平呈正相关,等离子体TG和HTGP Ranson得分
理解单核子集之间的联系(第一天)和HTGP发病机理,我们测量他们的潜力与等离子体的TG水平。见图4(一)高温凝胶组,M1单核细胞计数和TG没什么联系,但M1单核细胞百分比显示与TG水平正相关( , ),然而,HTGP组,M1单核细胞计数与TG水平呈正相关( , )(图4 (b))。M1单核细胞计数和百分比与Ranson得分呈正相关( , ; , ,)(图4 (c))。此外,我们没有发现任何关联M2单核细胞水平和血浆TG或Ranson HTGP组的得分(数字4 (b)和4 (c))。总之,我们的数据表明,CD14 + CD86 + M1子集可能主要参与HTGP的发病机制。
(一)
(b)
(c)
4所示。讨论
美联社是一种炎症性疾病的一个复杂的级联免疫活动。免疫细胞AP的作用一直是研究人员关注的焦点。单核细胞发挥AP发病机制的重要组成部分,和他们的激活与AP严重程度(15]。他们通常分为两种极化或功能状态。M1极化是典型的促炎亚型特点是释放促炎介质导致严重的炎症,而M2单核细胞主要生产抗炎分子控制炎症,促进组织修复。转换不同表型的单核细胞调节启动,发展,和停止各种疾病,尤其是炎症条件。先前的报道报道增加M1-polarized单核细胞在美联社的早期阶段(6,9]。在我们的研究中,我们一直观察到总单核细胞数量的急剧增加和M1 AP患者单核细胞,而non-AP控制。第一次,我们发现M1单核细胞的百分比在白细胞明显高于天1、3和7,而M2单核细胞百分比在HTGP减少3天,相比之下,ABP。此外,M1单核细胞水平呈正相关,HTGP患者的血浆TG和Ranson得分。
据报道,脂质与单核细胞分化和激活(16,17]。高温凝胶可能诱导单核细胞内稳态的干扰18]。Bonjoch et al。11)报道,据美联社大鼠内脏脂肪组织的脂质影响的M2巨噬细胞极化,促进M1极化,导致更强烈的促炎反应。因此,在目前的研究中,我们发现了一个统计上的更高层次的M1单核细胞计数和稍微降低水平的M2单核细胞计数在高温凝胶组,而HC组。M1单核细胞百分比甚至与高温凝胶组TG水平呈正相关。也许这部分解释了为什么高温凝胶,即使是轻度到中度水平,与高风险的美联社(19]。TG-mediated lipotoxicity被公认为HTGP的恶化。升高血清TG在AP患者独立和比例与持久的器官衰竭不管病因(20.]。高TG水平HTGP患者可能与不良预后相关包括更高的死亡率(21]。我们建议高温凝胶可能加剧美联社通过TG-mediated lipotoxicity单核细胞极化。高温凝胶作为第一个冲击和促进促炎M1单核细胞极化,导致HTGP促炎反应的放大。
另一方面,通过动态检测,我们观察到的不同动态变化的M1和M2在轻微和严重HTGP单核细胞。MHTGP, M1单核细胞的数量和比例逐渐减少从1到7天,M2单核细胞比例逐渐增加从1到7天,而在SHTGP,单核细胞子集显示完全相反的变化。M1单核细胞计数和百分比上升到最高点在3天,M2达到最低的3天。
M1极化增加,同时减少M2极化发表在各种条件如败血症、动脉粥样硬化、心血管疾病、肾脏损伤(22,23]。在不同条件下不同单核细胞子集总是主导或同一疾病的不同阶段。举个例子,在细菌感染的早期阶段,巨噬细胞在受影响的组织审议是极化对M1表型,产生大量的促炎介质引起细胞因子风暴,从而导致疾病的加重。为了抵消过度炎症反应,巨噬细胞极化的M2表型保护过度损伤和促进经济复苏22]。因此,M2子集通常优势种疾病的后期阶段。我们假设理论也适用于外周血单核细胞在HTGP极化。当促炎M1水平上升,抗炎M2水平相应下降,表明免疫失调严重。
5。结论
总之,我们的研究表明HTGP外周血单核细胞极化的干扰。外周血单核细胞总数和M1水平显著增加,而M2水平是比ABP HTGP显著下降。轻微和严重HTGP有不同的动态变化的单核细胞的子集。在轻度HTGP M1水平逐渐下降,M2水平逐渐增加从1到7天。严重HTGP M1水平最高的3天,同时M2是最低的。此外,M1单核细胞表现出正相关与等离子TG和Ranson得分HTGP病人。似乎更主导作用CD14 + CD86 + M1单核细胞可能参与HTGP的发病机理。我们所知,这是第一个研究的数字和百分比M1和M2外周血单核细胞HTGP患者。我们的研究结果可能会提供新的见解HTGP的发病机理和免疫调节。我们还认识到,我们的研究有局限性,如缺乏对单核细胞的功能分析和一个相对比较小的样本大小。进一步调查的值不同的单核细胞在一个更大的人口是必要的子集HTGP发病机制的理解他们的角色。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
Junyuan郑和俊杰球迷贡献了同样的工作。
确认
这项工作是由中国国家自然科学基金对于年轻学者(81600500)、上海医院的临床研究培养项目发展中心(SHDC12017X09)和上海综合医院临床研究创新团队项目(ctccr - 2016 b03)。