促炎细胞因子IL-17显示了一个重要的联系幽门螺杆菌感染和疾病严重程度

文摘

背景。赞成和抗炎细胞因子在免疫反应中发挥重要作用幽门螺旋杆菌感染。已经提出Th17细胞的促炎细胞因子发挥重要的作用幽门螺旋杆菌感染和导致胃炎症。客观的。本研究的目的是比较选定的炎性细胞因子的表达(il - 10, IL-17, IL-21 IL-23, TNF -α)幽门螺旋杆菌来华的患者和健康对照组和理解他们的联系幽门螺旋杆菌感染和疾病严重程度。结果。IL-17和IL-23的表达水平显著提高幽门螺旋杆菌-被感染的病人。的表达IL-21也更高幽门螺旋杆菌-积极但没有明显与感染的病人。IL-17表达与慢性胃炎的严重程度有显著提高。结论。促炎细胞因子,IL-17,显示了一个重要的联系幽门螺旋杆菌感染和疾病严重程度在斯里兰卡患胃病的患者人群。

1。介绍

幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)感染和征服人类的胃上皮细胞,导致胃疾病的不同程度1]。的免疫发病机理幽门螺杆菌感染仍然是一个谜。主机和细菌因素免疫发病机理中起着重要的作用[2- - - - - -4]。细菌引发先天和适应性免疫反应当地胃环境以及异构系统性免疫球蛋白反应(5]。许多研究的发展进行描述幽门螺旋杆菌全身的胃炎为主导,由于Th1细胞,而Th2细胞有保护作用[6]。然而,Th1反应本身是不足以解释的发病机制幽门螺旋杆菌-诱发胃炎。

的角色Th17细胞胃炎的发病机制提出了几组(7]。Th17细胞是最近描述是重要的免疫细胞外细菌和真菌感染(8]。Th17细胞的细胞因子包括IL-17A IL-17F IL-21, il - 22生成。的扩张Th17细胞由IL-23提拔,IL-21负责维护Th17细胞群(9]。

th17细胞被描述的immunopathogenic作用对自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征,通过促进慢性炎症(10,11]。此外,Th17细胞显示在结肠炎(保护12]。研究使用幽门螺旋杆菌-感染的活检报告的upregulation IL-17 RNA和蛋白质含量比未感染的活组织检查(13]。此外,当地IL-17水平在胃粘膜感染的网站已被证明有高IL-17水平(14]。细胞因子IL-17建议中性粒细胞招聘中发挥决定性的作用幽门螺旋杆菌-胃粘膜感染和刺激成纤维细胞基质金属蛋白酶生产进而导致粘膜损伤。最近,Th17细胞的协会报告幽门螺旋杆菌感染出现但Th17细胞的确切作用幽门螺旋杆菌感染尚不清楚。

2。材料和方法

二十幽门螺旋杆菌艾滋病患者(组织学证实)和30岁sex-matched健康对照组纳入研究。道德伦理审查委员会的批准被授予,斯里兰卡大学Jayewardenepura(14/15)和科伦坡南教学医院,斯里兰卡。对照组由健康个体为阴性幽门螺旋杆菌免疫球蛋白(Bioactiva Diagnostica GmBH),没有消化不良的症状,并不在任何健康状况需要就医。胃炎是根据修改后的悉尼系统苏木精& Eosin-stained活检。5毫升的血液标本收集从每个病人和健康人的ELISA方法。血液标本离心,分离血清,储存在−80°C。

2.1。酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子和幽门螺旋杆菌免疫球蛋白

选择的表达细胞因子(il - 10、IL-17 IL-21, IL-23,和TNF -α)的血清标本测定采用酶联免疫吸附试验(Mabtech、瑞典)。健康对照组的选择使用幽门螺旋杆菌免疫球蛋白试验(Bioactiva Diagnostica GmBH)。健康的病人阳性幽门螺旋杆菌免疫球蛋白被排除在研究之外。

幽门螺旋杆菌免疫球蛋白进行ELISA测定健康志愿者的血清学状态后,制造商的指令(Bioactiva Diagnostica, GmBH)。简单地说,预镀ELISA板与血清标本稀释孵化根据制造商的指示。孵化后37°C 1小时,洗盘子洗了缓冲和共轭的解决方案是添加。板孵化在20 - 25°C洗前30分钟。底物的解决方案是添加到板和孵化20 - 25°C,持续15分钟。

细胞因子的测定,无菌96孔板涂有涂料抗体第一天,一夜之间在4 - 8°C的环境。涂板是用200年μL PBS溶液的pH值(7.4)的两倍。孵化缓冲区(PBS + 0.05%渐变20 + 1% BSA) 200μL是添加到井(空白除外),并允许在室温下孵化。1小时后,盘子洗了洗五次缓冲区。

连续稀释的细胞因子标准准备范围由制造商指示和添加到井(每个标准加入2井提供副本)。血清标本稀释1:1与ELISA稀释剂和添加到井一式两份。空白控制井是空的。孵化的板被允许在室温下2小时。使用洗盘子洗了5次缓冲区(PBS + 0.05%渐变20)。

第二抗体是添加到井和板孵化1小时。盘子洗了5次,100μL streptavidin-HRP(稀释1:1000年孵化缓冲区)被添加到每个。孵化后1小时,板再次洗5次。One hundred.μL(三甲衬底被添加到每个好,板上覆盖着铝箔和孵化在室温下了40分钟。100年,在潜伏期结束μL停止解决方案(1 M H₂所以₄解决方案)被添加到每个吸光度测量之前。

吸光度的ELISA测定在450 nm - 96 a先生使用MPSCREEN ELISA读者。

2.2。数据分析和统计计算

校正吸光度值(AbsC)的计算是通过减去空白样品的平均吸光度值(AbsB)测试样本的平均吸光度值(AbsT)。

校正吸光度值的标准、患者样本和健康控制计算。日志10所有未知样本的值(测试)浓度与GraphPad棱镜使用s形的剂量反应曲线插值version 7 (GraphPad软件公司)。反对数计算值来确定未知样品的浓度。

在患者和健康对照组细胞因子表达式的值中输入一个新的数据表GraphPad棱镜。之间的意义幽门螺旋杆菌患者和健康对照组使用Mann-Whitney计算U试验用95%置信区间。细胞因子表达与疾病严重程度的重要协会利用克鲁斯卡尔-沃利斯检验计算。

3所示。结果

的幽门螺旋杆菌艾滋病患者患胃病的病人包括20国集团18 - 70岁的患者。十三男,7女。对照组(幽门螺旋杆菌消极、健康)由18岁男性和12个女性年龄从20到65岁。的20幽门螺旋杆菌来华的患者,13时轻度慢性胃炎6只温和的胃炎和1病人有严重胃炎。

血清细胞因子的表达(IL-17A, IL-21 IL-23, il - 10, TNF -α)幽门螺旋杆菌来华的患者与健康对照组相比和与疾病严重程度(轻度慢性胃炎、中度慢性胃炎,严重慢性胃炎)。

在比较,之间的关系幽门螺旋杆菌感染和细胞因子表达水平,IL-17A ( )和IL-23 ( )明显升高患者确认幽门螺旋杆菌感染(数据1(一)和1 (b))。此外,观察到IL-21和TNF -α水平升高在本集团虽然不是统计学意义(数字1 (c)和1 (d))。表1描述了均值和细胞因子浓度的范围幽门螺旋杆菌-积极的患者和健康对照组。平均细胞因子浓度观察IL-17A和IL-23幽门螺旋杆菌阳性组12.67 pg / mL和7.06 pg / mL,分别在健康个体,平均浓度分别为8.37 pg / mL和1.68 pg / mL,分别。

血清IL-17A浓度之间统计上显著的健康对照组和轻微的慢性胃炎患者( )和中度到重度的慢性胃炎( )。细胞因子的表达IL-23 IL-21, TNF -α,il - 10不与慢性胃炎的严重程度有显著联系在这个研究(图2、表2)。

4所示。讨论

血清细胞因子的表达幽门螺旋杆菌艾滋病患者患胃病的患者表现出明显的海拔IL-17A IL-23。此外,提高IL-21的水平幽门螺旋杆菌艾滋病患者建议Th17细胞的免疫发病机理中可能的作用幽门螺旋杆菌相关胃炎。

幽门螺旋杆菌感染胃粘膜,因此,它可以引起当地以及系统性免疫反应在宿主体内。粘膜细胞因子表达幽门螺旋杆菌感染为炎性反应由提供了强有力的证据幽门螺旋杆菌在当地的粘膜(13,15]。然而,血清细胞因子反应幽门螺旋杆菌感染需要说明的感染也可以在宿主产生系统性免疫反应(16- - - - - -18]。在研究Serelli-Lee et al .,循环Th17细胞升高患者的活跃幽门螺旋杆菌感染和显著升高患者的过去幽门螺旋杆菌感染与健康组相比。他们的发现表明海拔Th17细胞在胃粘膜血液中表明血清细胞因子水平可以反映Th17反应幽门螺旋杆菌感染(14]。进一步,这是支持的研究报告海拔Th17-associated血清中细胞因子幽门螺旋杆菌-被感染的病人(16]。在目前的研究中,是不可能获得从健康人粘膜活检;因此,Th17-associated血清细胞因子水平的调查。

Th17细胞越来越多地与免疫相关细胞外细菌和真菌感染。最近的研究提供的证据Th17细胞的存在幽门螺旋杆菌来华的胃活检和海拔的促炎细胞因子,包括IL-17健康对照组相比,类似于我们的观察(7,19]。随后,Serelli-Lee等人报道,Th17细胞持续即使幽门螺旋杆菌根除造成持久性的IL-17A反应可能导致胃癌的发病的早期阶段幽门螺旋杆菌感染(14]。Serelli-Lee等人推测慢性IL-17A信号和coexpression il - 22生成可能推动持久抗菌肽的表达和基质金属蛋白酶在胃粘膜促进致癌作用。

IL-17A Th17细胞分泌的调节通过IL-23 STAT3-dependent通路(20.]。IL-23分泌等免疫细胞树突细胞,巨噬细胞和中性粒细胞在胃粘膜。IL-23水平升高幽门螺旋杆菌2008年由Koussoulas来华的胃活检报告(21]。Horvath)等人报道IL-23水平之间的正相关和患者的中性粒细胞和单核细胞的浸润水平幽门螺旋杆菌感染(22]。建议IL-23发挥作用的激活免疫反应和诱导胃炎幽门螺旋杆菌。

肿瘤坏死因子的表达水平α相对高的幽门螺旋杆菌-积极的病人,高表达的肿瘤坏死因子-α观察患者的轻度慢性胃炎和中度到重度的慢性胃炎与控制相比,即使没有显著差异。IL-17可以刺激肿瘤坏死因子-α和其他诱导促炎细胞因子分泌il - 1、il - 6,并从免疫和多发地细胞基质金属蛋白酶(23]。肿瘤坏死因子-的高程α看到在我们的研究中,可以解释为IL-17看到显著升高幽门螺旋杆菌艾滋病患者与健康对照组相比。肿瘤坏死因子-α是一种促炎细胞因子可以作用于刺激内皮细胞粘附分子的表达促进中性粒细胞的溢出的网站在粘膜组织感染。它可以进一步激活T细胞和细胞因子刺激生产由巨噬细胞和单核细胞(23]。肿瘤坏死因子-α已被证明是与增加细胞凋亡有关VacA和CagA地位的独立幽门螺旋杆菌。Siregar et al。18)报道,TNF -α表达显著相关幽门螺旋杆菌感染和慢性炎症的程度(18]。虽然不重要,一个清晰的海拔平均细胞因子表达在中度到重度的胃炎患者相比,轻微的胃炎患者在我们的研究中,进一步支持Siregar等的结果。

在伊朗进行的一项研究中,粘膜IL-21使用实时PCR mRNA水平进行了定量分析。IL-21表达明显高于幽门螺旋杆菌来华的病人和之间的显著相关性观察IL-21 mRNA水平和慢性炎症24]。在我们的研究中,IL-21较高的表达幽门螺旋杆菌来华的患者可以观察到但没有显著相关性。IL-21的高程幽门螺旋杆菌来华的患者中观察到我们的研究和重大海拔IL-17一起表明,Th17通路中的IL-21有助于保持Th17细胞,从而调节Th17效应反应在慢性幽门螺旋杆菌感染。

5。结论

总之,明显的海拔IL-17 IL-23和IL-21和肿瘤坏死因子的高表达α血清的幽门螺旋杆菌-阳性患者进一步支持th17细胞的发病机理中的作用幽门螺旋杆菌感染和胃炎的严重程度。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突,没有财务利益冲突有关的出版。

确认

这项研究是由工作人员协助科伦坡南部的内窥镜检查单位教学医院,病理学和微生物学的部门的工作人员,Sri Jayewardenepura大学医学科学学院。这项研究是由美国国家科学基金会支持的研究奖学金(NSF /原理图/ 2015/04)和Sri Jayewardenepura大学的科研补助金(ASP / 01 / RE /地中海/ 2017/28)。

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