文摘

结直肠癌通常被认为是老年人的疾病。但是,一小部分患者结直肠癌早期发展。我们研究的目的是为了定义的频率已知遗传性大肠癌综合症和描述nonhereditary早期肿瘤的遗传和表观遗传特征。33患者≤40年的诊断结肠直肠癌患者和41疾病> 60岁被追究MSI,错配修复蛋白表达,喀斯特和BRAF突变、甲基化和1号线hypomethylation。检测的遗传突变,错配修复APC和MUTYH基因。早发性结直肠癌显示遗传形式的发生率高(18%)。喀斯特突变检测在早期nonhereditary肿瘤的36%。早发性结直肠癌披露平均数量的甲基化基因控制相比显著降低()。最后的两组都是高度甲基化ESR1,GATA5,WT1基因和类似于1号线hypomethylation。癌基因组成的不同从年轻到老年病人。早发性肿瘤显示更频繁地宪法错配修复系统缺陷和小数量的甲基化的基因。甲基化的ESR1,GATA5,WT1显示可能的标记基因在结直肠肿瘤发生的早期诊断。

1。介绍

结直肠癌(CRC)是第二个最常见的癌症,男性和女性在西欧,北美,澳大利亚/新西兰和日本,而它仍然是那么频繁发生在非洲和亚洲(1]。结直肠癌通常被认为是疾病的老年人在两性;癌症登记处的数据表明,年龄在50 - 55岁癌症发病率急剧上升,影响个体的平均年龄约为70年2]。然而,在一小部分患者(2 - 3%的所有受影响的个人),结直肠恶性肿瘤可能会早些时候(3]。

监测流行病学和最终结果的审查(SEER)项目数据从2005年到2009年提供更详细的信息关于结直肠癌在年轻患者表明年轻患者的发病率是随时间增加(< 20 - 54岁)4),而其他数据将显示一个相对稳定的利率(5]。的一部分,这些差异可以归因于不同的年龄限制的定义提出了早发性(或“少年”)肿瘤,已被设定在40岁,45岁或者50取决于作者和目的的研究(6,7]。虽然没有明确定义年龄截止,大多数的研究分类诊断为癌症患者年龄< 40年“早发性”(或“年轻”)(8]。的原因,有些人结直肠癌发展在一个不寻常的年龄却鲜为人知。因此,大多数的病原学和生物性质早发性结直肠肿瘤仍缺乏定义。

从分子的角度来看,早发性肿瘤代表一个异质群体的疾病,包括已知的遗传综合征,家庭情况,显然零星的结肠直肠癌。遗传性疾病的解释只有一部分的早发性结直肠癌(9),主要包括林奇综合症(7,10- - - - - -12),家族性腺瘤息肉病(FAP) [13],Peutz-Jeghers综合症[14),Cowden综合征/ Bannayan [15),而MUTYH相关的息肉病(地图)13,16]。

最近的研究表明,clinic-pathologic特性与早发性结直肠癌(7)更有可能出现在高级阶段,是低分化,并位于远端结肠和直肠,虽然一直没有显著差异报告。形态、早期发病crc更频繁地显示不良组织学特性,如印戒细胞分化和神经周的入侵和静脉(9]。体细胞的调查资料显示,越来越多的肿瘤喀斯特,BRAF,PIK3CA致癌基因突变与先进的年龄有关。肿瘤抑制基因的突变TP53和PTEN更频繁的在发病早期组(17]。其他调查结果显示,年轻患者的染色体畸变的肿瘤明显多于> 70岁的病人和微卫星稳定(MSS)结直肠癌(7,17,18]。最近,1号线hypomethylation已经报道的不同特性MSS年轻直肠癌(≤45年),这表明基因hypomethylation可能代表早发性结直肠致癌作用的可能途径(19]。相比之下,很少有数据可用的频率CpG岛methylator表型(CIMP)在早期发病crc (19]。

了解这个结肠直肠癌的临床和基因异质群体仍然有限和进一步的研究是必不可少的。为了解决这个问题,我们进行了一项基于人群的病例对照研究CRC诊断40岁之前为了定义的频率已知遗传性CRC综合症的病人在这个子集和更好地描述nonhereditary早期肿瘤的遗传和表观遗传特征与零星的晚发型CRC。

2。材料和方法

2.1。病人

本研究中描述的患者招募通过专门的结肠直肠癌症登记处摩德纳在1984 - 2008年期间。在25年的登记,我们招募了38例腺癌影响的研究诊断≤40年,约占1%的整个腺癌诊断(4692例)。我们收集的生物材料(血液样本、正常结直肠粘膜和tumoral组织)33例38和调查家族历史相对情况下,包括至少一级或二级亲属。

为了比较一些分子特色服务的dna的甲基化与成熟早发性结直肠癌发病的疾病,我们选择一个特定的组成的对照组41晚期结直肠癌患者(年龄范围:61 - 85年)匹配的研究小组为以下特征:性别、肿瘤位置和阶段。一家癌症历史并不存在于晚发型组。肿瘤分为低档、高档腺癌(20.),上演了公爵的分类。

这项研究是由当地伦理委员会批准。所有个人、或直系亲属在索引的情况下死亡的情况下,给他们的书面同意血样和组织标本的分析。

2.2。DNA提取

从每个病人被formalin-fixed提取基因组DNA,正常细胞和肿瘤组织石蜡包埋。串行部分从石蜡包埋与正常和肿瘤主要组织沾Hematoxylin-eosin;代表正常和肿瘤区域被显微镜检查确认。地区超过80%的恶性肿瘤细胞的肿瘤组织选择在所有情况下,正如前面详细描述(21]。宪法从外周血DNA是获得使用QIAamp DNA迷你包(试剂盒),根据制造商的指示。

2.3。MSI分析

MSI状态的肿瘤是评估使用四个使单核苷酸标记:BAT25, BAT26 NR24, CAT25。这些quasimonomorphic标记选择深入审查后的文学非常高的敏感性和特异性识别不匹配Repair-deficient肿瘤(22- - - - - -24]。由此产生的面板组成的四个标记减少MSI检测所涉及的时间和成本。其他作者Xicola和Deschoolmeester建议MSI分析快捷方式(23,24]。使用此单核苷酸标记面板中,肿瘤被定义为MSI(+)时显示不稳定至少有三个标志。MSI分析如前所述[21]。

2.4。免疫组织化学分析MMR蛋白质

免疫组织化学(包含IHC)评价MMR蛋白表达进行石蜡包埋组织切片的肿瘤。使用下面的鼠单克隆抗体:anti-MLH1 anti-MSH2 (PharMingen,圣地亚哥,CA),和anti-MSH6转导实验室,BD生物科学、巴西。PMS2蛋白质,用兔单克隆抗体(Ventana罗氏诊断、意大利)。疣是由avidin-biotin执行过氧化物酶技术;diaminobenzidine作为发色体。染色在NEX-ES进行自动染色系统,与苏木精复染色后。正常组织和基质细胞或淋巴细胞靠近各自的肿瘤被用作内部积极控制。MMR蛋白质表达的损失被定义为完全没有核染色的肿瘤细胞(但保持在正常上皮细胞和基质细胞)。

2.5。在种系突变分析MMR,APC,MUTYH基因

例显示MSI和缺乏MMR蛋白质的表达在肿瘤研究检测在种系突变MMR基因。家族性腺瘤息肉病的患者临床特征进行评估APC基因和所有的年轻患者的筛查MUTYH基因突变。分析遗传突变是由PCR直接测序获得的产品使用染料终结者循环测序工具包(CEQ转轨国家的装备,贝克曼库尔特)和反应是运行在一个测查8000毛细管测序仪(贝克曼库尔特)。排除大基因组重组的可能性MMR基因,我们使用多路复用Ligation-Dependent探测器放大(MLPA)过程莎莎P003-B2工具包(MRC-Holland,阿姆斯特丹,荷兰)和确认结果莎莎P248-A2工具包(MRC-Holland)。整个的开放阅读框APC基因也存在缺失或重组的分析使用莎莎P043工具包(MRC-Holland)。致病性突变被发现两次,确认在第二个病人的血液样本。

2.6。体细胞BRAF和喀斯特突变分析

所有74个肿瘤进行分析喀斯特和BRAF激活突变。在喀斯特更频繁地变异基码12 13和61进行分析(25]。在BRAF基因,我们放大外显子15包括热点突变密码子600 (V600E)。突变分析是由直接测序使用标准协议和运行在贝克曼库尔特测查8000乐器。

2.7。Methylation-Specific多元Ligation-Dependent探测器放大(MS-MLPA)分析

MS-MLPA分析在74年所有的肿瘤(33早发性CRC和41控制情况下)使用ME001 MS-MLPA肿瘤Suppressor-1工具包,该ME002 MS-MLPA肿瘤Suppressor-2装备,和ME011 MS-MLPA错配修复基因Probemix工具包(MRC-Holland,阿姆斯特丹,荷兰)。使用这三个包,共38个肿瘤抑制基因异常的启动子甲基化进行了分析。所有这些基因在肿瘤常常被甲基化不同的网站,他们经常港口基因在肿瘤发生改变。Methylation-specific MLPA (MS-MLPA)是一种半定量的方法对甲基化分析。MS-MLPA MLPA技术的一种变体,拷贝数检测结合使用methylation-sensitive限制性内切酶(26]。探针序列、基因位点和染色体位置可以找到http://www.mlpa.com/。实验过程是根据制造商的指示。反应产物分离自动测序仪(ABI 310毛细管)和视觉效果与Genemapper分析v.4.0(应用生物系统公司)。值对应于峰值大小(碱基对)和峰高被用于进一步的数据处理软件(MRC-Holland) Coffalyser V7。所有MS-MLPA反应进行至少两次。每个样本的甲基化形象评估根据MRC-Holland指令。

异常甲基化得分是类别变量使用特定的甲基化率(MR)为每一个基因对应的最高水平的准确性测试,根据之前报道27]。

2.8。1号线PCR和焦磷酸测序

1号线的甲基化状态被bisulfite-PCR评估,焦磷酸测序(28在所有肿瘤和正常结肠粘膜的25样品。13这些样本来自正常组织的切除13零星的crc患者的利润率。其余正常标本从12个人为缺血性结直肠疾病或手术憩室炎没有结直肠癌的个人历史。重亚硫酸盐处理基因组DNA将所有unmethylated胞核嘧啶转化为胸腺嘧啶甲基胞核嘧啶保持不变。所有的胞嘧啶残基序列中不改变的代表基因组中甲基胞核嘧啶。在这种方法中,1.5毫克的DNA变性在50毫升的0.2 M氢氧化钠为10分钟37°C。然后,30毫升的刚做好的10毫米对苯二酚和520毫升的3 M和混合加入了亚硫酸氢钠在pH值为5.0。样本在50°C的环境16 h。bisulfite-treated DNA纯化使用向导DNA清理系统(Promega)。

1号线1号线试验设计对共识序列(加入基因库X58075)和允许量化5-methylated胞核嘧啶的百分比(% 5 mc)在连续5 CpG网站。PCR进行50μL反应体积,其中包括2 pmol正向引物的5′-GAGTTAGGTGTGGGATATAGT-3′, 2 pmol反向生物素化的引物5′-CAAAAAATCAAAAAATTCCCTTCCC-3′, 5L bisulfite-treated基因组DNA的1.25单位GoTaq DNA聚合酶,1 x GoTaq福莱希缓冲区(WI Promega,麦迪逊,美国),和200年μM核苷酸。热循环条件3分钟在95°C, 45周期在95°C / s, 50°C / 25岁和72°C / s,紧随其后的是最后一个在72°C扩展为5分钟。焦磷酸测序进行PCR产品绑定1号线测序引物5′-GGTGTGGGATATAGTT-3′,根据上述协议的报道。完全甲基化DNA (Billerica CpGenome普遍甲基化DNA,微孔,妈,美国)和unmethylated DNA (Billerica CpGenome普遍unmethylated DNA,微孔,妈,美国)被用作积极和消极控制优化分析。

2.9。统计分析

单变量连续数据的比较进行了使用学生的以及和离散变量进行比较测试或确切概率法。离散和连续预测结果之间的联系是评估一个逻辑回归模型。所有的比较都是双面的,价值被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。病人的特性

我们一共招募了研究38腺癌患者的诊断在40岁之前,但可用的生物材料是33个病人。33结直肠腺癌的临床病理特征和患者如表所示1。疾病发病的平均年龄是35年。我们发现男性比女性更频繁的大约3倍(76%和24%),肿瘤位置优先左侧结肠(52%),和C和D阶段的公爵(37%和27%,分别地。)更频繁。百分之五十八的早发性肿瘤或中度分化。有结直肠癌家族史的8例(24%)患者:2与贝塞斯达标准(患者一级亲属的影响结直肠癌),5人完成了阿姆斯特丹II标准,与家族性腺瘤息肉病和1。临床特征的Cowden / Bannayan [29日和Peutz-Jeghers综合症30.没有发现任何病人。

3.2。MMR不足和体细胞突变喀斯特和BRAF基因

MMR不足被免疫组织化学和MSI分析评估在所有74结肠直肠癌。MMR缺陷定义为损失的蛋白质表达的MMR蛋白质和/或拥有一个MSI肿瘤。七33(21%)早发性肿瘤显示MSI和损失的MMR蛋白质的表达(4种/ PMS2 MSH2 / MSH6和3)。家族史,5例(≤40年)与MMR缺乏肿瘤满足林奇综合症的临床特征和2贝塞斯达标准。四的41例(10%)肿瘤对照组(4种/ PMS2) MMR不足。这四个肿瘤诊断年龄超过60年的躯体一种甲基化和V600E突变BRAF基因。未发现V600E突变在海量存储系统(MSS)中肿瘤临床发作在高龄或早发性结肠直肠癌。我们发现体细胞MSH2甲基化在一个案件(胚患者EPCAM删除)7年轻患者的MSI和损失MSH2 / MSH6蛋白表达。喀斯特突变被发现在10 4例早发肿瘤和对照组。因此,青少年的肿瘤病例显示更多的躯体喀斯特突变(30%比10%)。分子的结果总结了调查病人表2。

3.3。生殖系MMR,APC,MUTYH突变

我们确定了6例与序列变异一种(3例),MSH2(1例),EPCAM(1例),或APC(表(1例)3)。为一种,我们发现一个插入突变(p.Arg497ProfsX6)和两个错义突变(p。Leu749Pro和p.Glu663Asp)。这两个错义变异分为5类突变致病性的可能性(> 99%)Plon et al。31日]。为MSH2,我们发现一个无义突变(p.Phe294X)。此外,我们发现了一个大的外显子8和9的删除EPCAM基因,没有参与MSH2子,使用P003-B2 MLPA工具包。这一发现证实了P072-B1 MLPA工具包(MRC-Holland)。只有一个病人受到家族性腺瘤息肉病的影响,显示了插入突变APC基因外显子15 (p.Arg924SerfsX16)。生殖系的分析MUTYH基因是在整个群年轻的病人,但是没有monoallelic或biallelic变更被检测到。

3.4。Gene-Specific DNA甲基化

MS-MLPA试验来评估资料相对于肿瘤发病早期病人(甲基化)和对照组()。甲基化基因的平均数量明显高于对照组较年轻组(5.025与3.3,职责。)(,图1(一))。相比之下,没有观察到显著差异之间的年轻和遗传/怀疑遗传病例(图1 (b))。

在对照组中,我们观察到两组主要肿瘤的基础上的甲基化程度。第一组由7 crc(17%的病例)显示高水平的基因甲基化,包括28%的平均比例推动者检查(从24%到37%不等)。第二组包括剩下的34个crc显示缺失或低水平9%的基因的甲基化涉及平均百分比分析(从0%到20%不等)(图2)。

七个crc表现出广泛的基因甲基化包括显示MSI和所有的病例BRAF突变和一种甲基化。

另一方面,早发性组的肿瘤,我们没有发现任何与广泛的基因甲基化。没有甲基化MMR这些肿瘤的基因被发现,例外的情况EPCAM基因突变(A34),甲基化的MSH2基因。评估单个基因的甲基化频率时,没有观察到显著差异比较早期发病的病人和对照组。相比之下,甲基化检测的频率非常高ESR1,GATA5,WT1熟悉(图的基因在两组3)。

3.5。1号线Hypomethylation

我们使用了定量亚硫酸氢焦磷酸测序以确定1号线重复序列的甲基化状态相比,所有的crc正常结肠粘膜的25样品。在正常样本,1号线甲基化水平高(平均60.78%±0.4%),非常类似于一般观察外周血细胞从正常的个体32]。相比之下,1号线crc的甲基化水平显著低于正常样本(意味着55.4%±0.86;)。

的意思是1号线的甲基化水平的三个学习小组直肠癌早期发病,54.3%;晚发型,55.9%;林奇综合症,59.0%(图4)。1号线的差异hypomethylation发病早期结直肠癌发病后期相比,并没有显著的。有趣的是,在林奇综合症肿瘤1号线甲基化水平高于早发性和晚发型组和正常粘膜的相似的平均百分比。然而,这种差异没有达到统计学意义,因为少量的林奇肿瘤。

4所示。讨论

在这项研究中,我们评估的临床病理的分子,和家庭功能的33个早发性直肠癌(≤40年)。我们表明,频率已知遗传性结直肠癌的症状在这个人口18%。这群分子的披露MMR缺乏的特点是在种系突变一种,MSH2,EPCAM基因,从而确认,林奇综合征是最常见的遗传性结直肠癌原因在年轻患者(12,19]。

先前的研究显示,早期诊断结直肠癌中有一个高概率的显示MMR不足之处,从26%到73%不等(11]。这广泛的原因可以解释为不同年龄阈值(24 - 50年)和由不同的蛋白质分析面板包含IHC(通常局限于一种和MSH2)。此外,大多数的研究分析了林奇综合症或零星的结肠直肠癌和众所周知,MSI的速度是后者更低。基于我们的研究中,基于人口的方法开发的结肠直肠癌≤40年招募专业结肠直肠癌症登记处的摩德纳,表明缺MMR的频率为21%。与MMR不足虽然我们鉴定了肿瘤,我们发现只有五个患者发病的遗传突变MMR基因。可能的原因缺乏确定宪法的突变可能是低灵敏度的分析方法或基因事件(33)影响的两个等位基因MMR基因。我们没有确定任何载体MSH6生殖系突变。最近的研究表明,大肠癌发病的平均年龄MSH6突变携带者估计大约50年,一种和MSH2航空公司10年前平均诊断(34]。此外,突变MSH6基因也与降低结直肠癌的风险和子宫内膜癌的风险更高34]。虽然遗传突变MSH6已报告基因在早发性结直肠癌(35),这种差异在发病的年龄和相关的风险或许可以解释为什么MSH6突变构成一个小的情况下。

总之,所显示Jasperson et al。11),家族癌症的研究历史,MSI,包含IHC分析其次是生殖系基因测试代表一个有效的程序诊断林奇综合症的早期发病情况。

一些基于人口的研究表明,biallelic ~ 30%MUTYH突变携带者建立大肠癌在缺乏息肉病表型(13,16,35]。因此,有人建议MUTYH测试应该被认为是在发病早期结直肠癌患者完整的DNA MMR,不管家族史或数量的结肠息肉(13]。吉拉尔德茨等人发现biallelic的2.8%MUTYH140年一群突变患者结直肠癌诊断在50岁之前(36]。在我们的研究中我们进行了系统性whole-gene测序并没有发现biallelic或monoallelicMUTYH突变。这些结果可以解释为有限数量的调查情况。

我们发现只有一个致病的突变APC在34岁的结直肠癌患者和息肉病。家族性腺瘤息肉病的文献描述负责不到1%的直肠癌(37结直肠癌发展),平均年龄在这群人大约是39年(38),这表明APC在早期基因与癌症发生。

同意,报告文学,我们观察到82%的早发性CRC并不与已知的遗传相关CRC综合症(36]。这个子集的肿瘤主要表现为远端位置,高级阶段,男性的优势以及其他调查人员支持(39]。一项研究根据Ahnen等人报道,癌症特异性年轻发病CRC患者的生存期与晚期癌症患者的5,38]。此外,我们看到一个类似的体细胞突变的频率喀斯特致癌基因整体零星的结肠直肠癌,对应于40% (40]。关于BRAF最近的研究表明,基因BRAF突变发生在10 - 20%的零星的结肠直肠癌和紧密相关的一种甲基化。在我们年轻的病人,没有BRAF突变或一种启动子甲基化检测。

我们的工作涉及的第二个重要方面分析异常的不足和hyper-DNA甲基化的早期发病crc较晚发型crc。这些改变都是被广泛接受的早期生物标志物的潜在来源crc的诊断和预后。CIMP表型,几乎占30 - 40% (41),很少在发病早期crc计算。在我们的工作中,没有观察到如此广泛的基因甲基化在早期crc和甲基化基因的平均数量显著低于这些肿瘤(包括遗传性和nonhereditary crc)与对照组相比。

这些结果与之前的工作相一致,低水平的报道基因甲基化在林奇综合症的情况下(42,43)以及nonhereditary早发性crc (19]。

观察在我们的研究中,大量的基因甲基化只有在发病后期crc,占这些病例的17%。在协议与文学,这个子集的crc经常显示MSI和BRAF突变和一种甲基化(41,43]。

第一次,我们证明了三个基因的甲基化,即ESR1,GATA5,WT1是很常见的,早发性(遗传和nonhereditary肿瘤)和晚发型crc。虽然这些结果需要进一步的研究加以验证,我们的数据有重要临床意义暗示异常基因甲基化分析的实用性CRC的早期检测和风险评估,发病年龄不使用差动判据。启动子甲基化分析血清和粪便DNA有潜力作为无创性检查CRC的早期诊断(44]。然而,准确的选择甲基化标记是敏感和CRC的具体检测的关键新创甲基化也与年龄增长有关的(45]。ESR1是一个著名的“a型”(年龄相关的)因为其甲基化基因在正常结直肠粘膜和crc,与组织的年龄成正比。相比之下,GATA5甲基化被报告为一个合适的早期诊断标记的CRC (46)及其甲基化是在结直肠腺瘤但不是在炎症性结直肠组织。

此外,我们的分析凸显了的潜在效用WT1基因作为一种CRC的早期诊断标志物。到目前为止,只有少数的研究调查WT1甲基化,确认我们的数据广泛的甲基化的基因在crc (47,48]。在我们看来,这一发现值得进一步探讨,特别是对损失的异常机制的印记中描述11 p15 crc和可能的联系WT1甲基化和upregulationIGF2转录(49]。

全基因组hypomethylation也报道了CRC的早期事件,它一直伴随着protooncogenes激活(即,见过)[50和染色体不稳定性的存在51]。最近,Antelo et al。39]发现1号线的甲基化含量明显降低早期发病crc相比晚发型crc,表明高度的1号线hypomethylation crc的年轻病人是一个独特的特性。在变化,我们的研究并没有证实这些先前的发现,证明非常相似的第1行甲基化水平在发病早期和晚期crc,与1号线值的正态分布在两个子集的肿瘤。在我们看来,几个因素可以解释这种不调和。首先,因为1号线的程度脱甲基预后是线性与TNM-stage进展和这个标记是一个强大的不良预后的独立因素(52),评估肿瘤的阶段当比较不同子集的crc是至关重要的。第二个重要的一点问候肿瘤位置,因为低水平的1号线甲基化在远端与近端crc(已报告39]。Antelo等人研究了两组独立的crc发达≤50年主要包括先进和远端crc没有迟发型crc的匹配选择。由于这些原因,我们设计了一个病例对照研究中,每早发性CRC与晚发型CRC的匹配性、位置和阶段。最后,技术原因可能不会被排除在外,尽管同样的方法论的方法被用于这两项研究和1号线非常相似的甲基化水平观察考虑正常结直肠粘膜和MSI crc(包括遗传性和零星的肿瘤)。

此外,Antelo等人报告了相似的结果对林奇综合症肿瘤的1号线甲基化水平高于早期发病CRC的组。出于这个原因,这也许不是最佳的使用这个测试检测早期发病的CRC,而林奇综合征是最常见的遗传性CRC的年轻患者。虽然我们一系列的早发性CRC很小,目前的结果都不是结论性的关于这个问题,我们认为,强烈的积极联系1号线hypomethylation和早期发病CRC之前报道需要重新考虑在未来更大的病例对照研究。

5。结论

这项研究的结果可以总结如下。

首先,林奇综合征是最常见的原因在年轻患者遗传性结直肠癌;癌症家族史、MSI和包含IHC分析其次是生殖系基因测试代表最合适的程序林奇综合症发病早期诊断结直肠癌。第二,早发性直肠癌与MMR缺乏临床和病理的肠癌MSS癌。第三,表观遗传事件(过度和hypomethylation)不与早发性大肠癌密切相关。最后,我们的研究强调,遗传基础在大多数早发性大肠癌癌仍然未知。进一步的研究这个基因定义的全外显子组群早发性结直肠肿瘤需要阐明可能发病的机制。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作的金融支持进行了Associazione Italiana Ricerca Cancro(现)和Associazione Ricerca肿瘤Intestinali (ARTI)。作者欣然承认Maurizio Ponz德莱昂在遗传性结直肠癌和卡梅拉迪格雷戈里奥对她帮助收集样本和免疫组织化学分析。