建立标准化的肝纤维化模型大鼠不同病理阶段

文摘

客观的。建立一个标准化的肝纤维化动物模型,用同样的评估标准对肝纤维化的研究是建立在一个统一的平台。方法。建立了标准化的肝纤维化模型使用Sprague-Dawley (SD)老鼠收到一封CCl四氯化碳腹腔注射(₄)在小剂量或摄入乙醇溶液。结果。定相应的规则建模中不同周和相应的血清学指标以及可以观察到不同病理分期建模与小剂量和缓慢的,个性化的,联合政府。结论。该方法可用于标准化的建立在大鼠肝纤维化模型在5病理阶段,S0 ~ S4,高成功率(89.33%)和低死亡率(17.3%),因为应用程序的多个hypotoxic化学品的建模。我们参考的标准组织的慢性肝炎纤维化分级和分期建立了第十届世界消化疾病学术会议1994年9月在洛杉矶(修订后的2000年11月)。

1。介绍

目前,肝纤维化患者有几亿整个世界,和大多数情况下是由肝炎病毒感染引起的1- - - - - -7]。在亚洲国家,乙肝病毒的感染率已达到总人口的10% (8- - - - - -10),而丙型肝炎病毒(HCV)感染率在西方国家依然居高不下。汉斯·波普尔博士在美国肝脏疾病的权威在20世纪期间,指出,“谁能阻止或延缓肝纤维化可以治愈大多数慢性肝脏疾病。“病毒性肝炎、肝炎后肝硬化和肝癌被认为是肝脏疾病的三个步骤。肝脏疾病在世界各地的大多数研究主要集中在阻断疾病的病理过程,防止或延缓肝硬化和肝癌的起源。

肝硬化肝纤维化是一个逐步的后果。肝纤维化是指细胞外基质(ECM)的积累蛋白质,这发生在大多数类型的慢性疾病。这些蛋白质,胶原蛋白是人体的自我修复蛋白质引起的炎症,最常见的积累。肝纤维化的形成和发展是一个极其复杂,循序渐进的过程,它主要反映可持续在肝脏炎症诱导细胞和胞内物质的生态失衡。因此,antiliver纤维化疗法结合治疗针对肝纤维化的原因,延迟和打断病理进展。只有用这种方法我们才能控制慢性乙型肝炎感染的发展成肝纤维化和肝硬化。

目前,越来越多的研究集中在肝纤维化动物模型的使用。然而,这些研究的统一的评估结果是困难的因为多种建模方法和建模的不同特质。因此,很难概括一些成就似乎是有意义的,因为缺乏一个有效的评估的标准化动物模型。建立一个标准化的肝纤维化动物模型显示关键意义新的临床治疗的研究,最佳治疗机会,评估疗效,学术交流,等等。

最近,在病理学社区更密集的研究一直在进行肝纤维化和肝纤维化的确切的诊断标准阶段0 - 4已定义(11),为肝纤维化的动物研究提供了重要的参考和更高的尊重研究者12- - - - - -14]。毫无疑问,标准中扮演至关重要的角色的选择最佳治疗机会,评估治疗逆转肝纤维化,在基础研究。然而,很少有报告标准化建模肝纤维化不同病理阶段的整个世界。因此,我们模拟了自然的肝纤维化病理过程男性Sprague-Dawley (SD)老鼠尽可能准确地使用hypotoxic药物结合,低剂量、个性化和长期管理模拟损伤的病理变化。与此同时,我们发现一个明确的方法建立肝纤维化的病理分级模型,铺平了道路,在某些病理阶段评估治疗效果。

2。材料和方法

2.1。实验动物

共有95名男性Sprague-Dawley (SD)大鼠体重280克到300克动物部门提供昆明医学院。老鼠被安置在单独的笼子里下一个12小时的光/暗周期提供食物和水随意。室温保持在25°C,湿度是60 - 70%。老鼠麻醉乙醚和牺牲后病理检查安乐死。

本研究动物的福利是基于的规定良好实验室规范发布了1978年由美国食品和药物管理局(FDA)和药物良好实验室规范(过渡)颁发的国家食品药品监督管理局(SFDA)在中国。

2.1.1。试剂

以下试剂被用于这项研究:5%的乙醇溶液,分析试剂四氯化碳(三地₄),食用橄榄油、分析试剂乙醚,10%中性甲醛缓冲(4 g KH₂阿宝₄和6.5 g Na₂HPO₄在900毫升蒸馏水溶解,甲醛加入1000毫升)的总量。

2.1.2。方法

CCl的10%₄CCl鱼肝油的解决方案是用分析纯试剂₄的体积比和橄榄油1:9。5%乙醇与脱水制备乙醇溶液和蒸馏水的稀释1:20。老鼠1周没有不良反应。大鼠与正常水、食物、和活动研究中收集。总共95只老鼠被随机分为2组与对照组的20名成员接受腹腔内注射生理盐水和75个成员在动物模型组使用CCl腹腔和皮下注射10%₄肝油溶液1毫升/公斤的剂量管理每周两次15周。5%可食用乙醇溶液作为唯一的实验老鼠喝。五大鼠对照组牺牲每周从2日到15日一周,和有与血液相关指标检测肝脏病理分析。

2.1.3。结果

下面的大鼠的一般状况(包括死亡、活动、食欲、体重、外观、和粪便)被观察到。

2.1.4。血清学指标

血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、第三precollagen氨基端(PIIINP)和IV型胶原蛋白(文明)水平检测到使用等。结缔组织生长因子(CTGFs)被酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,根据制造商的指示。

2.1.5节讨论。老鼠的肝脏病理

大小、形状、质地和颜色病变的肝脏活组织获得在同一位置,neutral-balanced福尔马林溶液固定的10%,和4μ得到了m序列部分,其次是石蜡嵌入。随后,他(苏木精和伊红)和VG染色(Van-Gieson)被用来观察肝组织的结构变化和增生的胶原纤维,可以观察到病态的部分。病理组织学的分级是基于标准的慢性肝炎纤维化分级和分期建立了第十届世界消化疾病学术会议1994年9月在洛杉矶。(修改后的2000年11月)11,15]:S0阶段,没有纤维化;S1阶段,汇管区纤维化的扩张,局部perisinusoidal intralobular纤维化;S2阶段,在门户地区周围纤维化,形成纤维隔,保留intralobular架构;S3阶段,纤维隔伴随着intralobular结构性障碍,肝硬化;S4阶段,早期肝硬化。肝脏组织准备与常规切片染色,和光学显微镜下观察纤维化16- - - - - -18]。

2.2。统计分析

所有的数据表示为均值±SD。SPSS 16.0软件(SPSS Inc .,芝加哥,IL)是用于统计分析。学生的t以及用于比较两个样本的方法。方差分析是申请多个样本的方法之间的比较。

3所示。结果

3.1。肝纤维化模型的成功率

肝脏fibroses的建模是75年在67例成功的老鼠,和13例死亡。建模成功率为89.33%,死亡率为17.3%(包含1死在第六周,2死亡病例8周,1死在第九周,1死在第11周,2死的情况下在12周,1死在13周,1死在14周,1死在15周,和2个死亡病例在16周)。形成纤维化大鼠模型组逐渐显示特征表现的不同病理阶段从S0 S4几周过去了。弥漫性化脓性炎症观察腹腔的死老鼠在建模尸检和坏死广泛大面积的肝组织观察伴有中性粒细胞浸润在肝组织的组织学观察。

3.2。大鼠的一般状况

在对照组大鼠的一般状况非常好,和老鼠的体重迅速增加。老鼠在建模组显示弱光泽度的毛发,精神抑郁,抑郁的食欲,和总死亡率的10.67%。两组的体重变化,建模时间的函数,如图所示1。

3.3。血清学的检测

的水平血清HA、LN、PIIINP文明,CTGFs建模组1周逐渐增强。这些指标建模组的比较在不同周,模型组和对照组之间比较同一周显示出显著性差异,而血清HA、LN、PIIINP和文明水平在对照组显示在任何一周(图无显著差异1)。模型组的血清CTGF水平明显高于对照组(表1)。

3.4。肝脏病理的老鼠

肝脏病理模型组大鼠的反映特征如图2- - - - - -5。

4所示。讨论

4.1。建立标准化的质量控制肝纤维化模型

肝纤维化的建模方法包括hepatotoxicant的感应,感应的高脂肪饮食、免疫、胆管阻塞、寄生虫的方法,营养不良的方法,结合上述方法的应用程序(19,20.]。创新领导力₄肝脏损伤作为实验材料,根据原则的慢性低剂量引起的肝和肾损伤和多个政府创新领导力₄自1930年代以来。直到最近,同₄仍是使用最广泛的hepatic-toxic物质诱导的肝纤维化大鼠(21,22]。具体机制可能采取了以下课程:创新领导力₄进入动物肝组织,生产三氯甲基氧化和过氧化三氯甲基的肝细胞的内质网通过细胞色素P450-dependent混合功能氧化酶。这些自由基打开了不饱和脂质膜过氧化反应,诱发严重的破坏肝细胞膜和细胞器的结构,导致肝细胞损伤,引起的变性、坏死,肝纤维化形成一个长期的反复刺激(23- - - - - -25]。

肝细胞损伤可诱导CCl后15分钟₄进入人体,在48小时达到峰值。随后,肝脏进入装修阶段,政府执行的间隔3 - 4 d。因此,readministration在装修阶段后进行肝脏损伤是由一个有毒的感染,改造反复受伤,诱导肝纤维化。CCl引起的肝纤维化动物模型₄显示形态学和类似于人类肝纤维化病理生理的方面。此外,老鼠的繁殖是简单,建模的老鼠很容易,时间成本很低,病理特征是稳定的和可靠的26,27]。CCl肝纤维化动物模型的使用₄包括胃内的政府通过口腔、腹腔内注射,皮下注射28- - - - - -30.]。以下是腹腔和皮下注射的特点。(1)肝纤维化的程度是比较理想的,可以模拟和乙型肝炎后肝纤维化感染的病理。(2)肝纤维化的进展是直接与注入过去了多长时间,这是容易控制的纤维化程度,有利于进一步的研究。(3)一旦掌握手术技巧,建模是容易执行,大鼠的死亡率相对较低。因为它很容易实现一个相对较低的死亡率的建模技术,上述方法正在成为最常见的管理方法。

在初步实验中,我们观察到,CCl注射后大鼠表现出显著差异₄由于不同动物体重、年龄、剂量、两届政府之间的时间间隔;例如,小的体重,年龄,高剂量,和低潮期间隔政府可能诱发急性中毒和死亡。我们认为以下的差异。(1)模型大鼠的体重应该是250 g - 300 g,和大鼠体重较低更容易死去,而有更高的老鼠体重标准化建模中的挑战,因为肝解毒作用的差异。(2)重点应该放在注射的方法,应该积累和足够的经验。如果药物溶液进入肠道,老鼠必须死于急性胃(肠)有毒的扩张。如果药物溶液进入血管,老鼠必须死于急性中毒。减弱的影响斗争在操作,避免咬老鼠的,我们使用塑料瓶的底部移除。头部和身体的脐老鼠被固定在瓶子,和一个老鼠的后腿是固定的。随后,准备药物溶液注入到腹腔的下腹的区域; therefore, the rat cannot hurt the human, and it is easy to fix the position of injection. (3) The sensations of “breakthrough” and “liberation” from needle tip needed to be identified after the injection of the solution into the abdominal cavity. The administration was complete when the solution was injected into the abdominal cavity. (4) The environmental temperature, humidity, noise, and light should be controlled during the procedures of animal modeling, and these factors might affect the amount of fluid intake, which is not beneficial for the standardization of the animal model.

根据肝纤维化模型,多种机制参与肝纤维化的病理过程。我们试图控制潜在的因素,包括体重、年龄(周),CCl和环境,我们使用₄与乙醇的解决方案建模,我们探讨了这些模型的可行性和有效性进行标准化(12,31日,32]。同时,我们观察到肝纤维化血清学指标之间的相关性,包括HA、LN, PIIINP,文明,CTGFs和病理分期。我们也证实了建立标准化的可行性为肝纤维化动物模型(33,34]。此外,我们开发了一个实质性的基础建立serology-based, nontrauma肝纤维化模型和标准化的研究在临床设置。

4.2。建立标准化的关键意义在大鼠肝纤维化模型在不同病理阶段

确认我们已经发现大量的治疗肝纤维化的方法。然而,我们没有统一的标准来评估其有效性。建立一个标准化的动物模型在不同病理阶段可能铺平道路的机会在生物治疗肝纤维化的治疗效果的评估,并提供一个标准。

利益冲突

没有潜在的利益冲突与本文相关的报道。

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