文摘
背景。血管性痴呆(VD)与脑血管损伤有关,特点是严重的认知障碍。Jianpi天津汤(JTD)已广泛用于治疗VD。然而,它的分子靶点和治疗中作用的机制仍不清楚。本研究综合网络药理学和蛋白质组学鉴定JTD治疗VD靶点和作用机制,为临床治疗提供新的见解和目标。方法。系统的网络药理学是用来识别活跃的化学成分,潜在目标,在治疗VD JTD机制。然后,VD的小鼠模型是通过瞬态诱发双边颈总动脉闭塞来验证所确定的目标和机制对使用4 d VD JTD label-free定量蛋白质组学。结果。通过筛选活性化学成分和潜在目标在相关数据库中,187年活跃的化学成分和416年疾病复合目标被确定。在活的有机体内实验表明,JTD改善小鼠的学习和记忆。蛋白质组学还发现了112个差异表达蛋白质模型和虚假的团体和JTD和模型组。整合网络药理学和蛋白质组学结果显示JTD可能调节细胞色素c氧化酶亚基的表达7 c, metabotropic谷氨酸受体2,Slc30a1锌转运体1和载脂蛋白在VD老鼠和iv,他们的机制涉及的生物进程,例如氧化磷酸化调节神经元死亡,谷氨酸分泌,细胞离子体内平衡和脂蛋白代谢。结论。JTD可能抑制VD通过多个组件开发,目标和途径。它可能作为互补VD患者的治疗选择。
1。介绍
血管性痴呆(VD)是一个认知功能障碍与脑血管损伤和严重的认知功能障碍,包括注意、记忆、语言流畅,和执行功能(1]。流行病学研究表明,VD是第二个痴呆的主要原因,除了经济负担,它负面影响病人健康、生产力,和日常活动(2]。当前研究确定VD与多因子的认知功能障碍发病机制,可能与动脉粥样硬化有关,脂质代谢、氧化应激、炎症反应、钙超载、会和/或止血激活(3- - - - - -6]。药物可以改善VD症状包括胆碱酯酶抑制剂(多奈哌齐,加兰他敏,和卡巴拉汀)和n -甲基- d受体拮抗剂(美金刚胺)7]。研究表明,多奈哌齐和加兰他敏治疗适度提高认知但没有影响日常生活活动(8,9]。在随机对照试验中,不良事件的发生率多奈哌齐(10毫克,5毫克)和安慰剂分别为16.3%,10.1%,和8.8%,分别为(10]。另一个临床试验显示,与安慰剂相比,有更多的人死亡多奈哌齐组(11]。测试加兰他敏治疗VD的一次实验中,药物和安慰剂的不良事件的发生率分别为13%和6%,分别为(12]。卡巴拉汀对认知症状有最小的影响(13]。美金刚胺生产小福利轻度至中度血管性痴呆患者,和当前数据不足以支持美金刚胺在血管性痴呆的广泛使用14]。这些药物也有有限的疗效和副作用,包括恶心、呕吐、腹泻、头晕、头痛、和高血压14,15]。因此,迫切需要开发补充和替代VD疗法。
中药配方(瑞士法郎)有多个目标和一些副作用,发挥积极作用在VD处理(16]。瑞士法郎显示更少的负面影响,降低成本,改进适合长期使用而目前处方药(17]。例如,临床试验已经证实Shenmayizhi公式结合银杏提取物片有效地改善认知功能轻度到中度VD没有不利影响,和临床结果Dingzhi Yicong颗粒与吡拉西坦优于VD患者(18,19]。我们的团队开发Jianpi天津汤(JTD)基于多年的临床经验和指导下中国传统医学(中医)理论。JTD由7家中国草药(CHM),包括人参c.a迈耶,天麻,白术macrocephala,Morinda officinalis基数,菖蒲属tatarinowii Schott,黄连,精液cuscutae。以前的研究已经表明天麻改善血管弹性,防止动脉粥样硬化(20.]。人参c.a迈耶提取变弱神经损伤和认知缺陷在VD大鼠模型通过移植细胞凋亡调节器bcl - 2表达下调,凋亡调节器伯灵顿(伯灵顿)蛋白表达21]。黄连改善大鼠急性脑损伤后的神经功能通过增加海马脑源性神经营养因子表达(22]。我们的初步研究证实,JTD显著提高患者的认知功能和生活质量轻度认知功能障碍(23,24]。动物研究也发现JTD治疗VD的潜在机制,包括减少氧化应激损伤,维持海马线粒体膜电位和三磷酸腺苷(ATP)的水平,并改善线粒体功能障碍(25,26]。然而,瑞士法郎成分非常复杂,很难完全澄清其机制通过传统的研究方法。因此,有必要关注潜在的系统级JTD VD治疗机制。
网络药理学是研究化学加工的新方法和瑞士法郎,结合系统的网络分析和药理识别化合物之间的相互作用,基因,蛋白质,和疾病(27]。田等人成功地预测潜在活动Shenzhi 28 Jiannao处方成分和21 VD治疗目标。他们发现这些28的潜在目标中的活性成分主要包括刺激神经组织的相互作用,钙,细胞凋亡,胆碱能突触信号通路(28]。通过网络药理学分析,史等人发现,五个核心成分演变Tongmai汤起到antiVD作用[29日]。蛋白质组学,探索药物靶点和分子机制的一个重要工具,现在还广泛应用于许多生命科学(30.]。它可以用来分析差异表达蛋白质(DEPs)探索CHM作用分子机制。杨等人发现了245富贵Wenyang汤(FGWYD)基因和145 VD基因通过网络药理学,表明Nrf2 / HO-1通路中发挥着重要作用的FGWYD治疗VD [31日]。这个小组还利用蛋白质组学验证的神经保护的机械作用Nrf2 / HO-1 FGWYD治疗VD的途径。一个集成的网络药理学和瑞士法郎的蛋白质组学分析可以提供一个更全面的描述分子机制。因此,本研究综合网络药理学和蛋白质组学分析的分子靶和JTD治疗VD的作用机制。首先,网络药理学进行相关预测目标蛋白质和途径JTD治疗VD。第二,质谱(MS)分析用来确定差异表达蛋白质与JTD VD模型小鼠治疗后。最后,我们发现的目标和机制JTD结合网络药理学和蛋白质组学的结果。
2。材料和方法
2.1。网络药理学分析
2.1.1。数据源
中医系统药理学(TCMSP)数据库(https://www.old.tcmsp-e.com/tcmsp.php(2022年10月7日访问),BATMAN-TCM (http://www.bionet.ncpsb.org/batman-tcm/(2022年10月7日访问),ETCM (http://www.tcmip.cn/ETCM/(2022年10月7日访问))、化学数据库(http://www.organchem.csdb.cn(2022年10月7日访问),最近的研究文献被用来收集的化学成分人参c.a迈耶,天麻,白术macrocephala,Morindae Officinalis基数,菖蒲属tatarinowii Schott,黄连,和精液Cuscutae。接下来,活跃的化学成分筛选使用瑞士ADME数据库(http://www.swissadme.ch/(2022年10月9日访问),选择基于口服生物利用度> 30%,“胃肠吸收水平“高”和“是”至少三利平斯基,Ghose用,Veber,伊根,或者Muegge drug-likeness物品或drug-likeness > 0.18。
2.1.2。疾病相关的目标化合物
从GeneCards VD收集基因(https://www.genecards.org/(2022年10月10日访问)),人类(https://www.omim.org/(于2022年10月10日通过))和Drugbank (https://www.go.drugbank.com/(2022年10月10日通过)数据库。蛋白质活性化学成分的目标是通过TCMSP和瑞士的目标预测数据库(http://www.swisstargetprediction.ch/(2022年10月10日访问))。靶蛋白名称变成了他们的等效官方基因名称使用UniProt数据库(https://www.sparql.uniprot.org/(2022年10月10日访问))。在线数据分析和可视化平台(http://www.bioinformatics.com.cn/(于2022年10月10日通过))被用来情节维恩图和访问疾病复合目标。
2.1.3。网络建设和分析
Cytoscape 3.9.1软件被用来构建“herb-component-target”网络图。疾病复合目标字符串导入到数据库(https://www.string-db.org/(2022年10月11日通过),物种“智人”,和蛋白质相互作用(PPI)网络生成基于置信水平≥0.7。结果导入到Cytoscape 3.9.1可视化和分析,和排名前30名中心基因CytoHubba插件的Cytoscape 3.9.1。最后,基因本体论(去)和《京都议定书》百科全书的基因和基因组(KEGG)通路富集分析潜在目标进行Metascape平台(https://www.metascape.org/(2022年10月11日访问))。
2.2。动物实验
2.2.1。实验动物
四十癌症研究所的老鼠(6 - 8周大男性,20±2 g,特定的无菌)从上海购买计划生育研究所动物研究中心(实验室动物证书:SCXK(上海),2018 - 0006年)。动物实验的动物实验伦理委员会批准浙江中医药大学(授予数量:iacuc - 20210906 - 12)。老鼠一直在浙江中国医科大学实验动物研究中心(许可证号码:SYXK(浙江),2021 - 0012年)。所有的老鼠都可以适应一周之前被用于实验。每笼老鼠组安置(5)在22±2°C,湿度63±2%,噪声水平< 55分贝和交变12 h光/暗周期。小鼠自由获取标准实验室食品和自来水。
2.2.2。试验药物
JTD颗粒组成的人参c.a迈耶9克,天麻9克,白术macrocephala10克,Morindae Officinalis基数6克,菖蒲属tatarinowii Schott6克,黄连3克,精液Cuscutae12 g。JTD颗粒准备按照之前的方法(32,33]。收集到的CHM用水洗去除任何灰尘或外国粒子出现在他们和shade-dried一周在室温下以避免过度挥发组分的损失。干燥后,CHM地面准备粗粉。上面的粗粉受到提取使用hydroalcoholic(30: 70,水:乙醇)溶剂得到CHM颗粒(34]。提供的所有组件都是杭州传统中医医院,隶属于浙江中医药大学(人参c.a迈耶很多没有。21021463,天麻很多没有。21041643,白术macrocephala很多没有。21073513,Morindae Officinalis基数很多没有。2101010,菖蒲属tatarinowii Schott很多没有。2104010,黄连很多没有。21051343,精液Cuscutae很多没有。20111003)。以前的研究已经表明JTD的最佳治疗剂量对小鼠是20.160克/公斤/天(25,26),典型的每日剂量胃内的老鼠是10毫克/公斤(35]。因此,我们解散JTD颗粒在适量的生理盐水来实现最终的溶液浓度的2.016 g / ml。
2.2.3。动物模型,分组和干预
40小鼠随机分为三组:虚假的手术(n= 10),模型(n= 15)和JTD (n= 15)。瞬态双边颈总动脉闭塞(BCCAO)手术如前所述少量修改(36]。每组小鼠腹腔内注射麻醉的0.3%戊巴比妥钠溶液(0.25毫升/ 10 g)。小鼠模型和JTD组颈中线切口。曝光后,左、右颈总动脉孤立于相邻的迷走神经,和丝绸通过下面每个颈动脉关闭。双边颈动脉被丝绸锁定字符串了10分钟,然后放了10分钟,这是重复三次。字符串被移除和切口缝合。虚假的组中,同样的脖子区域手术打开隔离迷走神经,然后缝合没有事务。为了防止伤口感染,每个鼠标的速度收到肌肉注射青霉素5000单位/天三天。JTD组手术后7天,老鼠每天服用胃内的10毫升/公斤/ d JTD 28天的解决方案。虚假的和模型组与生理盐水治疗在同一时间表。
2.2.4。莫里斯水迷宫测试
28天,治疗后学习和记忆被莫里斯水迷宫测试评估。这个测试使用一个圆形池(直径100厘米)和一个圆形逃生平台(直径6厘米、1.0厘米低于水面)和一个图像采集系统。池分为四个象限,与圆形逃避平台在第三象限。奶粉添加水不透明。老鼠释放的四个象限,分别给予90年代(max)找到平台。如果老鼠找不到该平台在90年代,他们被引导到平台,允许保持30年代。发生在连续四天培训。在培训期间结束的时候,老鼠被随机释放到第一,第二,或第四象限,及其时间到达平台,或逃避的延迟(EL),被记录。测试持续了五天。6天,圆形逃避平台被,每个鼠标放置在第一象限。 Duration spent in the third quadrant and number of times crossing the platform (TCP) during 1 min were recorded.
2.3。蛋白质组学方法
2.3.1。样品制备和蛋白质提取
莫里斯水迷宫测试后,所有老鼠都牺牲了,并立即提取的大脑被放置在液氮和存储在−80°C。每组三个样本被随机分配到后续分析。SDT缓冲区(P0015F Beyotime, 4% SDS, 100毫米Tris-HCl, pH = 7.6)被添加到样本中提取蛋白质。BCA的上层清液是量化蛋白质分析工具包(P0012 Beyotime)。蛋白质被消化利用filter-aided样品制备过程(37]。C18柱(IonOpticks,澳大利亚;25厘米×75μ1.6米,μC18珠子)被用来淡化的肽段。
2.3.2。MS分析
样本分析在nanoElute(力量、不来梅、德国)耦合到一个商旅TOF Pro(力量、不来梅、德国)配备CaptiveSpray来源。25厘米×75肽分离μ1.6 m分析柱,μm C18珠子与发射极提示(IonOpticks、澳大利亚)。列平衡使用4列卷在装货前一个示例在缓冲100%甲酸(0.1%)。样本分离300 nl /分钟使用一个线性渐变如下:2 - 22%缓冲B(99.9%的乙腈和0.1%的FA) 75分钟,22 - 37%缓冲B为5分钟,37 - 80%缓冲B为5分钟,并保持在80%的缓冲B 5分钟。蒂姆斯TOF Pro accumulation-serial碎片(PASEF)并行操作的模式。规格如下:质量范围100 - 1700 m / z;1 / K0开始0.75 V·s /厘米2;1.4 V·s /厘米2;斜坡时间100毫秒;锁责任周期的100%;毛细管电压1500 V;干气3 L / min;干燥温度180°C。PASEF设置如下:10 MS / MS扫描(总周期时间1.16秒);收费范围0 - 5,积极排除0.5分钟;调度目标强度10000;强度阈值2500; and CID collision energy 20–59 eV.
2.3.3。部生物信息学分析
使用MaxQuant软件版本1.6.17.0女士的数据进行了分析。一个label-free定量策略38)是用于蛋白质定量。蛋白质折叠变化> 1.2(或< 0.8) 被认为是DEPs。层次聚类分析进行了使用Matplotlib 3.5.1。去使用Blast2GO DEPs进行注释。KEGG数据库(http://www.kegg.jp/)被用来获取信息的生物学通路DEPs。去KEGG通路富集分析是评估使用费舍尔的精确概率检验。DEPs被导入到字符串与物种“MusMusculus”数据库,和结果导入到Cytoscape 3.9.1进行视觉分析。
2.4。统计分析
所有数据分析了使用IBM SPSS统计为Windows版本25.0(纽约阿蒙克:IBM公司)。连续的数据表示为平均值±标准偏差。显著的差异是由 或 。Shapiro-Wilk正常测试的测试。方差齐性检验了列文的测试。单向方差分析(方差分析)时使用方差是均匀的。对于不平等的方差的样本,Mann-Whitney测试使用。
此外,研究协议如图1。
3所示。结果
3.1。疾病相关的目标化合物
总共有187活跃的化学成分JTD和854年潜在目标的草药成分筛选从各种数据库和文献发表。总共有4709 VD从GeneCards获得基因,人类,DrugBank数据库。416年疾病复合目标是获得的维恩图(图2(一个))。在这些疾病复合目标,人参c.a迈耶有322个潜在的目标,天麻有143个潜在的目标,白术macrocephala有84个潜在的目标,Morindae Officinalis基数有88个潜在的目标,菖蒲属tatarinowii Schott有149个潜在的目标,黄连有269个潜在目标,然后呢精液Cuscutae有139个潜在目标(图2 (b))。
(一)
(b)
3.2。JTD-VD PPI网络的建设和重要目标
活跃的化学成分和疾病复合目标导入Cytoscape 3.9.1构造herb-component-target网络图(图3),3671年由边缘和585个节点。度值越高,较大的节点。前五度在所有活跃的化学成分槲皮素,dauricine、山柰酚、deoxyharringtonine, panaxacol。接下来,416年疾病复合目标字符串被导入到数据库构建JTD-VD PPI网络(图4)。前30名中心基因选择和映射使用CytoHubba插件Cytoscape 3.9.1,和顶级基因RAC-alpha丝氨酸/ threonine-protein激酶细胞p53肿瘤抗原,CREB-binding蛋白质,ethylene-responsive转录因子ESR1,和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1(图5)。
3.3。去和KEGG通路富集分析潜在的目标
调查潜在的信号通路或生物过程(BPs),去KEGG潜在JTD目标的途径进行了分析。去富集分析表明,潜在目标参与2766条款:3414年英国石油公司,234年细胞组件(CC)和395年(MF)分子功能。前20名富集分析如图6(一)。GO-BP分析表明,潜在的目标主要集中在消极的磷酸化调节,炎症反应、细胞钙离子体内平衡,调节突触组织脂质分解过程的监管和氮的化合物的细胞反应。GO-CC分析表明,潜在的目标主要是集中在受体复杂,突触后膜,突触前膜。此外,GO-MF分析表明,潜在的目标主要集中在蛋白酶绑定,铜离子结合,脂蛋白粒子绑定。KEGG富集分析表明,潜在目标参与236通路(图6 (b))。因此,JTD治疗VD的作用机制可能与多个通路密切相关,包括脂质和动脉粥样硬化,神经退化在多种疾病,钙信号,流体剪切应力和动脉粥样硬化,PI3K-Akt信号和MAPK信号。
(一)
(b)
3.4。实验动物的一般状况和莫里斯水迷宫的结果
没有观察到虚假的组小鼠死亡,和三个JTD和模型组小鼠的死亡三天之内对象。老鼠的死因可能是意外死亡引起的迷走神经损伤引起的过度牵引在操作期间。两只老鼠在每个JTD和模型组死亡2周。在此期间,小鼠死亡的原因可能是由于应激反应,情绪低落,无法单独吃的和喝的。其余的实验老鼠一直延续到实验的最后。
莫里斯的水迷宫实验结果如图7(一)- - - - - -7 (d)。所有组显示,埃尔在训练逐渐降低,表明每组小鼠可以学习平台的位置。试验2 - 5天,EL大大延长模型组与虚假的组,显著缩短JTD组与模型组相比,( )。当隐藏的平台被6天,与虚假的集团相比,TCP和时间的平台象限(TSPQ)模型和JTD组显著降低( )和显著增加JTD组与模型组相比,( )。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.5。DEPs识别
MS分析鉴定5236蛋白质组和50097独特的肽。有152 DEPs确认根据规定标准(叠化比率≥1.2或≤0.833, )(数据8(一个)- - - - - -8 (e))。与假组相比,有32个调节蛋白质和21个表达下调的蛋白质模型组( )。与模型组相比,有39调节蛋白质和26 JTD组中表达下调的蛋白质( )。维恩图解显示DEP重叠(图8(一个))。聚类分析表明,或表达下调模型组蛋白质显示虚假的监管和JTD组(数字9(一个)和9 (b))。Alpha-1-antitrypsin 1 - 3 (serpina1c),电压门控钾通道亚科2 C成员,组蛋白H2A,模型组和蛋白质FAM234B显示upregulation JTD组的差别,对这些基因。阿达尔月模型组和差别和Ighg显示对这些upregulation JTD组。还有三个重叠的蛋白质在DEPs通过蛋白质组学和选择的潜在目标识别网络药理学:metabotropic谷氨酸受体2 (Grm2)、碳酸酐酶1,乙醇酸氧化酶1。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(一)
(b)
3.6。去条款和KEGG DEPs的路径分析
去富集分析显示163个基点,35 CC条款,和68年MF模型和虚假的团体之间的条款;有169个基点,20 CC条款,53 MF JTD和模型组(图之间的条款10)。
(一)
(b)
去分析模型的DEPs和虚假的组织显示-肽链内切酶的活动,调节负调节补体的激活,凝集素途径,积极调节脂肪酸生物合成的过程,和消极的调节atp酶活动的主要基点。这些DEPs主要在细胞外空间,外质膜和血红蛋白复杂。他们也与受体结合,离子交换和函数(图(11日))。
(一)
(b)
接下来,去富集分析的DEPs JTD(图和模型组11 (b))。GO-BP分析表明,这些DEPs显著参与血浆脂蛋白粒子间隙,负调节神经递质分泌,脂蛋白代谢过程,吞噬作用的积极管理,明确的造血作用,细胞钙离子内稳态,和消极的磷酸化调节。GO-CC分析表明,这些DEPs主要位于细胞器膜受体复杂,外质膜。GO-MF分析显示它们与MFs像胆固醇绑定,脂蛋白绑定,离子绑定和蛋白酶活性。
KEGG通路富集分析表明,五大信号通路补充凝血级联,非洲锥虫病、肺结核、军团病、系统性红斑狼疮的DEPs模型和虚假的组织(图12(一个))。同样,DEPs JTD和模型组主要是参与维生素的消化和吸收,脂肪消化吸收,丙酮酸代谢(图12 (b))。
(一)
(b)
3.7。PPI网络
DEPs模型的和虚假的团体和JTD模型组结合,减少获得112年共同DEPs。接下来,Cytoscape 3.9.1被用来构造一个PPI网络图对这些DEPs(图13)。Metascape分析,这个网络包括脂肪酸生物合成过程的监管、吞噬作用的积极管理,应对无机物质,丙酮酸代谢和有氧电子传递链(数字(14日)和14 (b))。同样,DEPs JTD和模型组导入的字符串构建PPI网络(图15)。CytoHubba插件的基础上Cytoscape 3.9.1 10基因筛查中心,包括actin-like蛋白质6、酪氨酸受体激酶Mer,半胱氨酸和glycine-rich蛋白质,蛋白质龟同族体B,载脂蛋白iv (Apoa4) radixin, disheveled-associated活化剂的形态发生2,Serpina1c和鸟苷酸环化酶溶性单元alpha -。Grm2,细胞色素c氧化酶亚基7 c (Cox7c)和Slc30a1(也称为锌转运体1 (Znt1))也参加了这个PPI网络。
(一)
(b)
4所示。讨论
VD是一群认知障碍综合症引起的脑血管病变。当前VD的风险因素包括高龄、糖尿病、高血压、高脂血症、动脉粥样硬化,和中风(39]。特别是,VD风险中风后几乎翻倍40]。从脑血管疾病脑灌注不足可能是一个潜在的VD机制(41,42]。神经病理学的研究报道,脑灌注不足导致葡萄糖和氧气供应减少,导致细胞能量代谢(43),离子的不平衡(44),会引起(45),氧化应激(46[],神经炎症47]。这些机制驱动下游的结构性变化,包括血脑屏障功能障碍,白质病变,微型心肌梗塞的可能性,和海马萎缩,这可能在VD发挥直接致病的作用[48,49]。VD占痴呆∼15 - 20%的情况下,和它的发病率随年龄的增长有显著的增加(50,51]。VD影响病人的生活质量和增加死亡的风险(52]。因此,寻找有效的治疗仍然是一个研究热点。用于治疗VD [JTD一直有效23,24]。进一步调查JTD VD治疗的分子机制,本研究结合网络药理学和蛋白质组学数据概览全球。
4.1。调节线粒体功能障碍
线粒体功能障碍也被报道在VD[一个重要因素43]。在缺氧条件下,干扰线粒体电子传递链,导致增加活性氧(ROS)的生产(53]。氧化应激,这发生在ROS-antioxidant平衡被破坏,越来越理解参与VD [54]。在正常情况下,大脑取决于持续的能源供应从ATP通过线粒体氧化磷酸化55]。然而,氧化应激可引起线粒体功能障碍,引起脑能量代谢和神经受损死亡(56,57]。环氧合酶(COX)是线粒体电子传递链的主要酶,它使用氧气在ATP的生成通过氧化磷酸化58]。网络药理学和蛋白质组学分析表明,此负调节磷酸化是另一个重要的基点。蛋白质组学鉴定Cox7c参与氧化磷酸化和代谢通路。Cox7c,细胞色素c氧化酶的成员复杂负责线粒体呼吸促进ATP合成,降低线粒体功能障碍(59]。最近的研究揭示了Cox7c发病机制的潜在生物标志物在阿尔茨海默病(60]。然而,在VD Cox7c的影响需要进一步澄清。,Cox7c表达调节与JTD治疗VD大鼠的脑组织,表明这个瑞士法郎可能发挥作用在治疗VD的衰减线粒体功能障碍。
4.2。神经元谷氨酸会引起监管
会引起VD-induced认知功能障碍的主要原因。谷氨酸会一直假设被兴奋性谷氨酸受体过度激活,引起神经功能障碍或死亡(45]。Grm2编码metabotropic谷氨酸受体亚型2,称为mGluR2。过去的研究已经表明,GRM2可能参与调节神经细胞凋亡,或缺氧和缺血引起的细胞死亡61年]。这里,Grm2重叠蛋白质之间潜在JTD目标和DEPs,主要参与神经元死亡的规定,谷氨酸受体的活动,和谷氨酸分泌。因此,JTD可能调节GRM2表达和调节这些过程,减少脑组织损伤和改善认知功能。
4.3。细胞离子体内平衡调节
脑缺血增强突触活动,导致增加锌释放。然而,高细胞内锌水平可能成为有毒的神经元和神经胶质62年),迅速导致细胞死亡(63年]。这可能是VD的另一个原因。在65 DEPs, Slc30a1是唯一蛋白调节细胞锌离子和钙离子稳态过程。Slc30a1 / Znt1众所周知的关键调节器锌吸收和运输64年]。Znt1减少胶质和神经元锌的水平,保护这些细胞从锌毒性和减少他们的死亡65年,66年]。蛋白质组学数据也证实此Znt1水平在VD老鼠JTD处理显著增加,进一步确认JTD的神经保护作用。
4.4。动脉粥样硬化的监管
,KEGG通路富集分析显示,ApoA4参与几个信号通路,包括脂质和动脉粥样硬化,脂肪消化吸收,胆固醇代谢。颈动脉狭窄和动脉粥样硬化的危险因素认知障碍(67年]。能够很好的接受,ApoA4高密度脂蛋白乳糜微粒和是一个主要的组成部分,具有anti-atherosclerotic效应(68年]。外生ApoA4管理减少急性动脉斑块破裂的发生率的载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,证实其有能力稳定斑块(69年]。此外,先前的研究已经证实,ApoA4参与脂质吸收和代谢70年]和anti-atherosclerosis [71年和抑制血栓形成72年]。这是符合我们的研究结果表明,与模型组相比,ApoA4表达调节JTD组,进一步确认其JTD anti-atherosclerotic效果的重要作用。
5。结论
集成网络药理学和蛋白质组学分析显示,Cox7c Grm2, Slc30a1, ApoA4 JTD VD治疗的目标至关重要。在活的有机体内机制可能参与衰减线粒体功能障碍,减少会引起、维持细胞离子体内平衡和antiatherosclerosis。
缩写
| ApoA4: | 载脂蛋白iv |
| ATP: | 三磷酸腺苷 |
| 伯灵顿: | 细胞凋亡调节伯灵顿 |
| 个基点: | 生物过程 |
| 答: | 蜂窝组件 |
| 瑞士法郎: | 中药配方 |
| 化学加工: | 中草药 |
| 考克斯: | 环氧合酶 |
| Cox7c: | 细胞色素c氧化酶亚基7 c |
| DEPs: | 差异表达的蛋白质 |
| 埃尔: | 逃避延迟 |
| FGWYD: | 富贵Wenyang煎煮 |
| 走: | 基因本体论 |
| GRM2: | Metabotropic谷氨酸受体2 |
| JTD: | Jianpi天津汤 |
| KEGG: | 京都基因和基因组的百科全书 |
| MF: | 分子功能 |
| 女士: | 质谱分析 |
| PASEF: | 平行accumulation-serial碎片 |
| PPI: | 蛋白质相互作用 |
| ROS: | 活性氧 |
| Serpina1c: | Alpha-1-antitrypsin 1 - 3 |
| TCP: | 次跨越平台 |
| 中医: | 中国传统医学 |
| TCMSP: | 中药药理学的系统 |
| TSPQ: | 时间在平台象限 |
| Znt1: | 锌转运体1。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
伦理批准
动物被提出和处理中国浙江医科大学实验动物研究中心。参与本研究实验动物的使用遵循相关国家要求医学实验动物和动物实验伦理委员会批准浙江中国医科大学(没有。iacuc - 20210906 - 12)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
杰,你怎么1 -,JX写道,修订后的手稿。杰和詹设计并进行实验。杰,JX、MF、女士,在数据库中搜寻相关的结果。本产品1詹,YW, YH4综述论文的草稿。本产品1帮助协调资金。阅读和批准所有的作者都最后的手稿。
确认
作者感谢小风扇的有价值的反馈。这项研究得到了在杭州科技发展计划项目(20201203 b194)和浙江省中医药科学技术计划项目(2022号za104)。
补充材料
补充表1:活跃JTD化学成分和目标。补充表2:莫里斯水迷宫的结果。补充表3:差异表达蛋白(DEPs)识别结果。(补充材料)