文摘

本研究旨在调查的监管影响Xuanhuang Runtong平板电脑(XHRTs)肠道微生物和炎症信号影响受体5 (TLR5) / interleukin-17A (IL-17A)失学的老鼠。首先,高效液相色谱法(HPLC)是用于验证XHRT的构成和质量控制。然后,STC)小鼠的排便能力是评估通过测量粪便含水量和肠道传输功能。结肠粘膜的病理检查观察阿尔新蓝和高碘酸希夫(AB-PAS)染色。16 s核糖体DNA (16 s rDNA)基因测序检测粪便微生物群。免疫印迹、免疫荧光和实时荧光定量PCR(存在)是用于检测水通道蛋白3 (AQP3)的表达,联接蛋白43 (Cx43), TLR5, IL-17A。优质小鼠的排便功能显著下降。的粘液分泌量和结肠黏液层的厚度减少,和微生物物种的数量在肠壁,如壁厚菌门和拟杆菌门,厌氧细菌Alistipes,也降低了。此外,AQP3的表达和Cx43无序,和炎症factorsTLR5 IL-17A结肠被激活。以上指标的变化被XHRT显著逆转。这项研究表明XHRT提供了一个新的策略治疗慢传输性便秘的通过调节肠道炎症的激活信号TLR5 / IL-17A由肠道微生物。

1。介绍

慢传输型便秘(STC)是一种慢性胃肠疾病,其特征是肠道传输功能障碍。患者的主要临床表现包括长期排便,排便频率降低,腹胀和疼痛1]。优质的全球发病率估计高达14%,尤其是老年人的36%。在严重的情况下,优质可引起急性肠梗阻或肠坏死穿孔,已被确认为某些胃肠道疾病的高危因素,如结肠直肠肿瘤(2]。STC)的发病机制包括炎症、分泌障碍、胃肠innerves变化,以及各种异常在胃肠道微观结构,各种因素之间的相互作用使得药物治疗困难(3]。目前,体积、渗透或分泌泻药通常用来缓解便秘,但这些疗法经常失败或只有短期疗效和诱发副作用(4]。此外,以往的研究表明,STC手术成功率有一个变量(39 - 100%)、高复发率(5]。因此,研究是很重要的一种药物,可以有效地缓解和治疗STC)。

中药(TCM)历史悠久的便秘,这是第一个记录在《《内经》“排便困难”。“优质属于的类别“便秘”,中医是占主导地位的中医治疗的疾病之一。根据中医理论,人体的内部热量和体液不足引发STC)。治疗主要集中在气活血,滋补阴,滋润肠道,缓解便秘6]。各种学术出版物已经报道了中国草药提取物'effects治疗棘手的疾病(7- - - - - -9,治疗便秘的作用也被证实(10]。

Xuanhuang Runtong平板电脑(XHRTs)处方由9中国草药,包括地黄Libosch,Scrophulariae基数,Angelicae sinensis基数,Persicae精液,Cistanches草,大麻果实,Cassiae精液,Aurantii果实immaturus。这些中国的通便作用的草药一直报道文献[11- - - - - -14]。XHRT有积极疗效功能性便秘引起的阴虚、血瘀,老年功能性便秘与合理安全,几乎没有副作用。然而,确切的作用机理尚未确定。

越来越多的研究表明,胃肠功能障碍与疾病密切相关的主机微生物群;改变已经观察到的微生物结构STC患者和临床症状明显改善粪便移植后(16,17]。邓等人还发现,控制肠道微生物疾病的细菌可以改善loperamide-induced慢传输型便秘大鼠(18]。一些免疫活性结构保护胃肠道粘膜表面的抗原和微生物19]。如果肠道微生物群干扰,它可以破坏肠粘膜细胞,破坏力学和免疫障碍,影响肠道免疫(20.]。运动的关键因素之一,可能会导致不正常的肠道菌群之间的信息交换和肠道粘膜免疫系统。肠上皮细胞可以表达多种模式识别受体,包括toll样受体(通常)和核苷酸寡聚化域(点头)。这些刺激肠道上皮Th17细胞产生促炎细胞因子,从而直接影响肠道微生物群(21]。

因此,说明肠道微生物的作用在肠道免疫屏障将提供洞察机制XHRT可能在治疗STC的价值。

2。材料和方法

2.1。材料

Xuanhuang Runtong平板电脑(批号:20200101)是购自湖南时代阳光药业有限公司有限公司(永州,中国)。凭证标本保存在中国医学研究所的存储柜中药学,湖南中医学院。盐酸洛哌丁胺胶囊(批号:KFJ2P0P)购买子公司西安杨森制药有限公司有限公司(西安,中国)。参考物质芦荟素(批号:110787 - 201808年,92.4%),neohesperidin(批号:111857 - 201804年,99.4%),柚皮苷(批号:110722 - 201805年,91.7%),echinacoside(批号:111670 - 201907年,91.8%),和aloe-epine(批号:110795 - 201007年,98%)从中国购买食品和药物研究所控制。

阿尔新蓝和高碘酸希夫污渍从Visher购买公司(长沙,中国)。兔子antimouse AQP3主要抗体购自ABclonal(武汉,中国)。Cx43 TLR5主要抗体,合山羊antimouse免疫球蛋白,合山羊antirabbit免疫球蛋白,和488 -共轭coraLite affiniPure山羊antimouse免疫球蛋白(H + L)从Proteintech购买(美国芝加哥)。从Advansta SuperECL +购买(美国加州)。IL-17A主要抗体购自Abcam(英国剑桥)。TLR5 IL-17A引物和从上海购买Shenggong生物工程有限公司有限公司(上海,中国)。

2.2。动物

四十岁男性癌症研究所(ICR)小鼠(体重18∼22 g,年龄5∼6周)从湖南SJA购买实验动物有限公司有限公司(许可证号码:SYXK(湘)2019 - 0004,动物证书号码:430727211101222672)。水和食物是免费提供给老鼠在恒定的温度,湿度和光照周期(22±2°C;55±10%;07:00-19:00光周期)。正如上面提到的(22洛派丁胺盐酸盐),鼠标STC模型建立与轻微的修改。我们ICR小鼠随机分为对照组(控制),慢传输型便秘(STC)模型组和XHRT高,中期,和低剂量(XHRT-H、XHRT-M XHRT-L)组。14天,小鼠组填喂法与洛派丁胺盐酸溶液(10.0毫克/公斤)一天两次,除了对照组。不同剂量的XHRT解决方案(4.056,2.028,和1.014克/公斤,分别)接种后7天每个管理洛派丁胺盐酸盐XHRT-H 1 h, XHRT-M, XHRT-L组。

2.3。XHRT的主要活性成分的定量分析

XHRT提取甲醇和0.45过滤μ米微孔膜。芦荟素(0.9235毫克/毫升)溶解在流动相甲醇- 0.1%冰醋酸溶液(39:61)。柚皮苷、neohesperidin echinacoside,芦荟大黄溶解在甲醇和参考解决方案,制定质量浓度为0.7561,0.7510,0.5196,和0.5488毫克/毫升。

质量控制进行了XHRT使用Dionex终极3000系列高性能液相色谱仪器(热费希尔公司,美国)InertSustain C18柱(5μ米,4.6×250毫米)。列温度是25°C,流速为1.0毫升/分钟、注入体积是10μL,波长为300 nm。包含的流动相洗脱液(乙腈)和洗脱液B(0.1%甲酸水)。梯度流如下:0∼10分钟:20%∼40%;10∼20分钟:40%;20∼30分钟:40%∼42%;30∼50分钟:42%∼47%;50∼80分钟:47%∼60%;80∼90分钟:60%∼90%;90∼100分钟:90%。

2.4。肠道传输功能分析

0到7天的实验中,小鼠的粪便收集和粪便干重的测定,以确定该模型成功地复制。小鼠的肠道传输功能由排便实验评价和小肠运动实验如前所述22]。第14天,我们记录的第一位黑人粪便质量,粪便微粒的数量,水含量在6 h的老鼠(粪便含水量=(湿粪便weight-dry粪便重量)/湿粪便重量×100%)。15天,小肠从幽门胃的收集回盲肠的区域。小肠的长度和墨水的进步测量量化肠的运输能力。

2.5。阿尔新蓝和高碘酸希夫(AB-PAS)染色

近端结肠组织在4%多聚甲醛溶液固定,由梯度乙醇脱水,切成5μ米厚的石蜡部分。这是沾AB-PAS和中性树脂密封。其中,糖原和polysaccharide-positive细胞紫红色和原子核是蓝色的。在光学显微镜下观察(奥林巴斯、东京、日本),我们观察到正面彩色结肠粘膜上皮细胞和分析粘液厚度和分泌。

2.6。16 s rDNA基因测试

一个16 s rDNA基因测序技术用于分析小鼠肠道微生物群的群落结构,如前所述,一些修改(23]。微生物群落基因组DNA提取使用e . z n .粪便样本。®土壤DNA工具包(ωBio-Tek,共同协助,乔治亚州,美国)根据制造商的指示。DNA浓度和纯度测定NanoDrop 2000紫外可见分光光度计(美国威明顿热科学)。的高变区V3-V4细菌16 s rDNA基因的扩增引物对338 f (5“-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3”)和806 r (5“-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3”)由TransStart FastPfu DNA聚合酶(ABI、钙、美国)。PCR产物提取2%的琼脂糖凝胶纯化使用AxyPrep DNA凝胶萃取工具包(美国联盟城市Axygen生物科学,CA)根据制造商的指示,和量化使用Quantus™荧光计(美国Promega)。

2.7。微生物生态学信息分析

纯化扩增子集中在克分子数相等的金额和paired-end测序Illumina公司NovaSeq PE250平台(美国圣地亚哥Illumina公司)根据标准协议由Majorbio Bio-Pharm科技有限公司(上海,中国)。

筛选后原始序列和删除短序列(< 200个基点),打开参考OTU(操作分类单位)选择方法用于集群序列相似度> 97%到相同操作分类单位(OTU),然后,物种分类的辣子鸡是由同源性。每个OTU代表序列的分类进行了分析通过RDP分类器(https://rdp.cme.msu.edu/)对席尔瓦数据库(SSU123)。

测序深度与稀释曲线评估由OTU集群。OTU-levelα多样性指数,如Chao1,观察到的物种,和香农指数,计算和分析比较样本之间的丰度和多样性。β多样性分析被用来检查样品微生物群落的结构变化。基于物种相对多度> 1%,相对不同组的小鼠的肠道粘膜的细菌丰度是在门相比,家庭,和属的水平。

2.8。免疫印迹分析

蛋白质AQP3的表达和Cx43使用免疫印迹检测。总蛋白提取使用里帕从结肠组织裂解缓冲按照制造商的指示。蛋白质浓度测定采用BCA蛋白质量化工具。50μ克蛋白质在100°C煮5分钟,通过sds - page分离,转移到PVDF膜(微孔)。然后,5% lipid-free牛奶被用来阻止膜,和主要的抗体稀释TBST孵化一夜之间在4°C。针对AQP3主要抗体(A2838;ABclonal)、Cx43 (26980 - 1 - ap;Proteintech)和肌动蛋白(66009 - 1 - ig;Proteintech)应用。膜是用TBST洗净,二级抗体孵化1 h。混合膜盒与限制级电影,暴露外墙面分钟。然后,分析了蛋白质乐队使用数量一个凝胶分析软件。

2.9。免疫荧光分析

冒号在4%多聚甲醛固定48 h,嵌入在石蜡,切成5毫米部分。部分被烤在60°C 12 h, 10%正常血清/ 5% BSA挡着,其次是孵化一夜之间在4°C的解决方案与TLR5 (19810 - 1 - ap;Proteintech)和IL-17A (ab79056;Abcam)多克隆抗体兔子antimouse (Proteintech,武汉,中国),分别。洗后,部分被孵化的山羊antirabbit IgG抗体。部分然后再洗,孵化sDAPI工作解决方案在37°C 10分钟,并被密封和激光共焦显微镜下观察(美国纽约ThermoFisher)。选择三个字段(×400)从每个部分阳性细胞计数。

2.10。实时定量聚合酶链反应分析

在结肠组织总RNA提取试剂盒,OD260/280值测量,浓度和纯度的RNA进行了计算。根据豆类SYBR PrimeScript rt - pcr设备指令,RNA是reverse-transcribed互补。反应体系如下:2×SYBR绿色PCR大师混合10.0μL, ddH2O 8.5μL,上游和下游引物(10μ每个0.5 mol / L)μ0.5 L,互补μl .放大条件95°C的合酶激活10分钟,15秒95°C, 60°C 30 s 40周期。反应后,TLR5的相对表达水平和IL-17A 2 -信使rna进行了计算和分析δδCt方法。引物序列如下:TLR5向前5”-GCCCGTGTTGGTAATATCTC-3”,反向5”-ATCTGGGTGAGGTTACAGCCT-3;“IL-17转发5”-TCCACCGCAATGAAGACCCTGA-3”,反向5“-TCCAGCTTTCCCTCCGCATTGA-3;”和GAPDH向前5”-ATCATCTCCGCCCCTTCTG-3”,反向5”-GTGATGGCATGGACT GTGG-3”。

2.11。统计分析

使用SPSS 22.0软件进行统计分析(美国芝加哥,IL)。结果表示为平均值±标准偏差(SD)。单向方差分析被用来比较结果(美国GraphPad软件GraphPad Prism 5.0); 表示有显著差异。

3所示。结果

3.1。质量控制和XHRT的识别

XHRT样品的化学成分是由高效液相色谱指纹和常见的山峰用中药色谱指纹图谱的相似度评价体系。五个组件,包括峰2 echinacoside,柚皮苷峰4,峰值neohesperidin 5,峰9芦荟素,芦荟大黄素和峰值15,进行了分析(图1)。neohesperidin echinacoside的内容,柚皮苷,芦荟素分别为0.44%,1.66%,1.77%,和1.76%,分别。结果表明,我们的研究建立一个合适的和可再生的色谱指纹XHRT的质量控制。

3.2。XHRT对肠道传输功能的影响STC老鼠

我们比较了对照组的粪便干重和优质模型组0到7天,发现运动的粪便老鼠dry-knotted和分离团的形式或大量的粪便。粪便干重的24小时显著减少(图2(一个)),这表明该模型成功地复制。后小鼠给予不同剂量的XHRT解决方案(4.056,2.028,和1.014 g / kg),体重没有显著差异(图2 (b))。这表明XHRT对老鼠的基础代谢没有影响。与优质模型组相比,第一位黑人大便的时间明显减少,黑色大便的总量和粪便的含水量增加在6 h XHRT组(数字2 (c)- - - - - -2 (e))。小肠推进率的优质模型组明显低于对照组,表明XHRT显著提高小肠传输(数字2 (f)- - - - - -2 (h))。这些结果表明,XHRT可能呈现梯度剂量依赖性的方式加强肠道运输,促进排便在STC老鼠。

3.3。XHRT对结肠黏膜的形态结构在STC老鼠

通过染色与AB-PAS结肠上皮细胞(图3(一个)),我们发现丰富的硫酸性黏蛋白黏液和人口分布的杯状细胞两岸的地下室,一个完整的和圆的形态和大量的分泌粘液的对照组。STC)模型组结肠的粘膜上皮细胞组织的老鼠表现出不同程度的萎缩。有一个杯状细胞的数量减少,粘膜表面和酸性黏液层变得更薄。XHRT-H组thecolonic黏膜黏液层的厚度显著增加(图3 (b)),杯状细胞和粘液分泌的数量显著增加(图3 (c))。

3.4。XHRT对STC)小鼠的肠道微生物的影响

3.4.1。微生物数量变化分析

探索潜在的肠道微生物群参与治疗STC的影响与XHRT老鼠,我们分析了社区的肠道菌群结构使用16 s rDNA老鼠粪便微生物群分析。分析操作的数量分类单元(辣子鸡)在菌落和他们之间的交叉使用维恩图组进行,在对照组有1226个辣子鸡,1151年优质模型组辣子鸡,1228辣子鸡XHRT-H集团1241辣子鸡XHRT-M组和1215辣子鸡XHRT-L组(图4(一))。稀疏曲线平坦Chao1指数增加,指示首选的测序深度和高物种报道(图4 (b))。有一个显著的差异之间的大量的粪便和肠道菌群优质模型组和对照组。不同剂量XHRT治疗后,小鼠肠道菌群的丰度明显增加。PLS-DA分析估计样本之间的细菌丰度的差异百分比,每组和结果显示明显的差异(图4 (c))。

3.4.2。微生物群落多样性分析

α多样性指数被用来分析物种多样性在粪便,考虑两个因素:物种组成的丰富性和均匀性。观察到的物种优质指数模型组明显低于对照组。XHRT指数大大增加了观察到的物种,香农指数和Chao1指数STC)小鼠的肠道微生物(数字5(一个)- - - - - -5 (c)),这表明XHRT能有效地恢复STC)小鼠的肠道微生物α多样性。

β多样性评价微生物群落之间的差异,通过比较微生物群落的组成。样本之间的差异进行了分析使用未加权的两组与算术平均法(UPGMA)。观察样本之间的相似性在远处树枝,集群的距离。这导致细菌社区之间的显著差异的对照组和优质模型组(图5 (d))。XHRT集团偏离优质模型组接近对照组。这些结果表明,XHRT可以改善肠道菌群的组成和多样性在STC老鼠。

3.4.3。微生物群物种注释和差异分析

在门层面,本研究确定了壁厚菌门,拟杆菌属,放线菌,弯曲杆菌,从40 Desulfobacterota样本。厚壁菌门和拟杆菌的相对丰度相对较高,而厚壁菌门和拟杆菌门的比值(F / B)反映了身体的健康状况。与对照组相比,其相对丰度显著降低优质模型组但是XHRT治疗(数据恢复6(一)和6 (d))。在订单级别,乳酸菌丰富的优质模型组明显低于对照组。相比之下,乳酸菌丰富XHRT组高于优质组(图6 (b))。在属级,我们发现的相对丰度乳酸菌和norank_f_MuribaculaceaeSTC)模型组降低和增加XHRT干预后与对照组相比的数字6 (c),6 (e),6 (f))。我们一共获得了135个细菌属的样品,主要是乳酸菌,norank_f_Muribaculaceae,拟杆菌,Faecalibaculum,葡萄球菌(图6 (g)),覆盖70%以上的微生物物种。这些结果表明,肠道微生物群落结构的变化在STC)的发病机制可能会逆转XHRT治疗。

3.5。XHRT对蛋白质AQP3的表达的影响及Cx43 STC老鼠

免疫印迹分析表明,Cx43蛋白质的相对灰度值显著降低结肠组织的优质模型组,而AQP3蛋白质与对照组相比显著增加。XHRT治疗后,AQP3和Cx43蛋白质的相对灰度值互换(数字7(一)和7 (b))。由于XHRT、结肠癌粪便在STC含有更多的水和促进排便,这是密切相关的水分泌蛋白质AQP3的表达和grassroot-related Cx43的蛋白质。

3.6。XHRT对肠道粘膜免疫屏障规章制度的表达蛋白质和基因在STC老鼠

使用免疫荧光(如果),我们确定小鼠结肠组织TLR5蛋白的表达和Th17闲暇的因素IL-17A分子机制的进一步研究XHRT排便和肠道粘膜免疫功能在STC老鼠。利用激光共焦显微镜,我们观察到的每个蛋白质的定位和荧光强度(图8(一个))。与对照组相比,TLR5和IL-17A蛋白质的荧光强度在结肠组织优质模型组的增加。TLR5和IL-17A蛋白质的相对荧光强度后结肠组织中显著减少XHRT管理局(图8 (b))。

与此同时,我们发现TLR5和IL-17A mRNA的表达在结肠癌组织中存在(图8 (c)),发现TLR5和IL-17AmRNA STC的相对表达模型组与对照组相比显著增加。基于上述蛋白质检测趋势,TLR5和IL-17A mRNA的相对表达的小鼠结肠组织XHRT-H明显减少。这些结果表明,XHRT能有效地调节肠道粘膜的免疫功能调节肠道TLR5 / IL-17A信号通路的表达。

4所示。讨论

慢传输性便秘是最常见的一种类型的耐火材料功能性便秘被学者研究。的发病机制涉及多个因素,但对其病理生理学和病因。其中,结肠感觉运动功能障碍和敏感性下降是最广泛认可的原因。由于这些异常改变,肠道粘膜屏障不能维持其正常的结构和功能长期(24]。肠粘膜屏障包括机械、生物和免疫屏障,互动发挥协同作用。在当前的研究中,人们已经发现,功能性便秘患者体验肠道黏膜通透性的变化。这些变化参与便秘的发病机制通过影响肠道蠕动,肠道敏感性,和肠道免疫状态(25]。然而,潜在的分子机制尚不清楚。

肠黏膜防御的第一屏障,机械屏障由肠上皮细胞、黏蛋白、电解质和水的表面的肠道流明,润滑肠道,肠道共生的细菌提供了栖息地。便秘患者,杯状细胞分泌显著减少(主要是分泌黏蛋白)在结肠粘膜和黏液层的厚度减少,这也证实了在我们的研究中。

机械屏障的结构基础主要由肠上皮细胞之间的联接的复合物。claudin的作用在维护肠粘膜机械屏障的结构对便秘患者已经在一些研究报告(26,27]。一类连接素在结肠上皮细胞密切相关胃肠慢波和胃肠蠕动障碍。其中,Cx43表达异常可能导致胃肠道疾病,如胃肠道肿瘤、巨结肠病,功能性消化不良(28,29日]。一项由Bhave et al。30.)透露,Cx43表达的蛋白质在功能性便秘患者的肠黏膜明显减少了。这发生,因为它的异常表达可能导致肠道粘膜的变化和炎症。调节肠道水流体机械屏障功能的重要体现。结肠粘膜绒毛的上皮细胞水通道蛋白aqp位于顶部和底部的等离子体膜,参与水的跨膜运输。这种肠道吸收的调节中起着举足轻重的作用,分泌,和水代谢(31日]。当关键异构体AQP3的表达水平增加,肠内容吸收过多水分,导致结肠内容的积累,从而导致排便困难(32]。我们的研究表明,XHRT可以显著改善结构和分子改变结肠粘膜机械屏障STC老鼠。进行了进一步的研究来确定这些都是相关的协同调控生物屏障、免疫屏障。

根据文献调查,肠道细菌亚种和Faecalibacterium prausnitzii促进杯状细胞分化和诱导粘蛋白glycosylation-related基因在生物屏障(33]。用番泻叶甙的活性物质被肠道菌群代谢,今敏et al。34)表明,巨噬细胞分泌PGE2。这降低了AQP3表达结肠上皮细胞的老鼠,防止结肠吸收水,促进排便。基于现有的证据,我们可以推测,XHRT调节机械屏障的结构和功能而改变肠道微生物共生的组成和代谢黏液层,从而影响排便。

肠道微生物对病原体构成生物屏障。近年来,肠道微生物学领域的突破提供了新策略的诊断和治疗慢传输性便秘。由于现代生活方式和饮食结构的变化,肠道菌群的组成和多样性已经改变,引起便秘等症状。另外,便秘会加重肠道微生物的不平衡,甚至引起结肠癌,加速衰老,促进各种肠道疾病(2,3,35]。研究发现,与健康对照组相比,有益菌的数量和质量(如乳酸菌,双歧杆菌属,拟杆菌)STC患者结肠粘膜微生物群的显著降低。潜在的病原体的数量(如铜绿假单胞菌,空肠弯曲杆菌,腐败梭状芽胞杆菌)显著增加25,36]。值得注意的是,这些变化在肠道微生物的组成可能影响肠蠕动和改变当地的环境内稳态37]。

我们的研究分析了组成、结构和肠道微生物群落的多样性使用16 s rDNA高通量测序在STC)模型小鼠。厚壁菌门和拟杆菌门的比例与便秘是显著降低密切相关。此外,Alistipes厌氧细菌,细菌与肠道炎症密切相关,被发现不太丰富。除了增加肠道微生物的丰富,XHRT也增加了大量的乳酸菌和Alistipes。一些研究报道,病人服用益生菌用于抗炎有较高Alistipes水平(38]。的影响Alistipes对肠道免疫被史等研究。392020年),但它很少被报道在STC患者。到目前为止,还没达成共识关于STC患者的肠道微生物群的特点。

我们的研究结果表明,不受监管的肠道微生物的迁移到固有层可能是由于破坏肠粘膜机械屏障和增加了患者STC的渗透率。病原微生物(如致病性大肠杆菌)释放被肠道抗原受体的表面抗原,它放大炎症。

目前,有限研究肠道粘膜免疫屏障STC患者。我们发现肠道免疫细胞可以调节肠道损伤和炎症等识别难消化的膳食成分纤维由微生物来分解和生产代谢产物(40]。革兰氏阳性细菌的细胞壁成分(双歧杆菌属或乳酸菌)可以诱导增加重要的吞噬作用受体(比如FcγRIII TLR),然后,主要在适应性免疫T细胞对细胞因子产生区分特定的CD4 + T辅助细胞亚型(Th1、Th2或Th17) (41]。一些肠道微生物对免疫反应起到了保护作用,促进组织修复和生存通过toll样受体(TLR)激活42]。机械屏障粘液的杯状细胞层防止肠道微生物之间的直接接触和模式识别受体在上皮细胞,这可能引发免疫反应。XHRT可显著提高酸性黏液层的厚度在结肠粘膜的表面,它提供了一个稳定的共生细菌繁殖的地方,从而减少炎症反应的发生。

TLR家族中的一员,TLR5肠道粘膜的免疫反应密切相关。高表达CD11c-positive肠道固有层的细胞,激活炎症反应等条件致病菌大肠杆菌和肠球菌(43]。此外,粪便微生物移植(FMT)刺激肠道适应性免疫应答通过TLR通路,从而促进免疫球蛋白的合成(IgA、免疫球蛋白等,IgM)和保护肠道黏膜44]。Alistipes在肠道与生产密切相关的炎症因素引起的toll样受体(45]。同时,肠道粘膜是自然网站辅助T细胞的分化和成熟17。Th17细胞可以分泌白介素17,TLR5信号可以激活的高表达IL-17A粘膜,从而引发肠道免疫(17]。双歧杆菌adolescentis和节段丝状细菌已被确认为有效的诱导物IL-17-producing Th17细胞(46,47]。的扩张Th17细胞通常是与肠道微生物组内稳态的破坏和损伤T监管细胞。强大的感应Th17细胞会加重肠道微生物群的结肠炎症小鼠(48]。

基于肠道微生物之间的相互作用和TLR5 / IL-17A在肠道粘膜免疫信号通路,我们定位和定量分析TLR5 / IL-17A蛋白质失学小鼠结肠组织的使用免疫荧光。我们发现XHRT显著监管TLR5 / IL-17A信号通路在STC)小鼠结肠粘膜炎症。此外,存在方法用于执行双重验证在基因水平揭示肠道微生物多样性变化背后的分子机制和肠道粘膜免疫紊乱在STC)。我们的研究结果证明XHRT有助于肠道的营养和排便。他们还提供新的实验洞察不同调节肠道微生物的临床医学,肠道粘膜免疫和信号转导途径。在整个研究、multipathway和多目标调控在中草药被观察到。我们的研究将继续澄清的宿主代谢之间的直接关系肠道共生的细菌和肠道粘膜免疫功能。

5。结论

本研究表明,调节肠道炎症的激活信号TLR5 / IL-17A由肠道微生物可以改善慢传输性便秘,XHRT提供了一个新的策略治疗慢传输性便秘。

缩写

STC):	慢传输性便秘
XHRT:	Xuanhuang Runtong平板电脑
TLR5:	人数受体5
IL-17A:	Interleukin-17A
16 s rDNA:	16 s rrna
AQP3:	Aquaporin3
Cx43:	联接蛋白43
存在:	实时荧光定量聚合酶链反应
中医:	中国传统医学
辣子鸡:	操作的分类单位
拥有:	癌症研究所
发射极耦合逻辑:	化学发光。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

伦理批准

本研究动物伦理委员会批准的湖南中医学院(批准号:202100067)。所有程序依法进行指导建议的护理和使用实验动物,由科技部制定的中国。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

SHZ和JX设计实验、监督和参与整个工作。XJL QD维护和执行动物研究和撰写并修改了手稿。DW和王寅是主要负责XHRT质量检测和分析。RRZ监督统计分析。XLW HRZ进行显微观察和免疫印迹和荧光分析的支持。YGC参与了研究设计和数据收集。所有作者修订和批准最后的手稿。

确认

这项工作得到了国家科技重大专项“重大新药创造”(2018 zx09731015),湖南省自然科学基金的科学和医学联合基金项目(2020 jj9046),中国国家自然科学基金(81903746)和湖南省自然科学基金(2020 jj5326)。