文摘

背景。非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是最常见的肝脏疾病,影响22 - 28%的成年人和50%以上的肥胖的人遍布世界各地。调制的脂肪酸饮食作为一种预防的手段对非酒精性脂肪肝动物模型(NAFLD)仍不清楚。非酒精性脂肪肝的治疗还没有特定的指南中描述到目前为止。因此,研究检查修改的理由营养素成分,脂肪酸,特别是,扮演了一个重要的角色在治疗非酒精性脂肪肝无论减肥。目的。调查不同植物油在预防和发展非酒精性脂肪肝动物模型。方法。实验使用50 C57BL / 6 j小鼠雄性美联储脂肪和高果糖饮食(HFD)诱导非酒精性脂肪肝的状态和他们收到不同的商业植物油16周,防止脂肪变性。肝脂肪变性和氧化压力参数使用生化和组织学方法进行了分析。脂肪酸在肝脏中的油和样品。结果。果糖和高脂肪饮食会导致肥胖和植物油提供有效地维持体重与对照组相似。实验结束时(16周),HFHFr组相比有更大的体重控制和治疗组(HFHFr: 44.20±2.34 g /动物与控制:34.80±3.45 g /动物; ;HFHFr / OL: 35.40±4.19 g /动物;HFHFr / C: 36.10±3.92 g /动物;HFHFr / S: 36.25±5.70 g /动物; )。此外,HFD饮食造成的增加总肝脂肪相比,控制( )。在治疗组中,动物接收菜籽油显示减少肝和腹膜后脂肪( )。这些生化水平与肝组织学结果呈正相关。肝的omega - 3水平下降橄榄油和高脂肪饮食组与对照组相比,而这些水平增加团体接受菜籽油和大豆油相比,控制和高脂肪组。结论。总之,商业植物油有助于预防或减少高脂肪和果糖诱导非酒精性脂肪肝的饮食,尤其是菜籽油。

1。介绍

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是最常见的肝脏疾病,影响22 - 28%的成年人和50%以上的肥胖的人在世界各地(1,2]。非酒精性脂肪肝的特点是异常的脂肪堆积在肝脏(简单的脂肪变性),可逆转的变化的生活方式。非酒精性脂肪肝炎的发展非酒精性脂肪肝(NASH)涵盖广泛,从非酒精性脂肪肝与炎症的发展可能的肝硬化和肝癌细胞的变化。NAFLD /纳什与代谢异常如肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常(3- - - - - -7]。导致疾病进展和治疗的机制尚未完全阐明。

最近的研究集中在非酒精性脂肪肝的主要生理病理学机制导致了纳什,纤维化,肝细胞损伤尚未完全澄清虽然它可能表示,这些条件是多基因、多因素的原因。有一个基因参与的环境之间的联系,除了饮食和sedentarism,其重要性已经证明(8,9]。

当前大多数接受机制是经典的两面夹攻理论。第一个打击的特点是脂肪变性造成的不平衡形成和triacylglycerides周转率,它被认为是受胰岛素抵抗的影响。第二个打击涉及氧化应激和炎症细胞因子的生产导致肝脏损伤(5,10]。饮食的作用在生理病理学和非酒精性脂肪肝的发展还不是很清楚。高热量饮食,过量的脂肪酸(尤其是饱和),简单和高糖摄入,更重视果糖和蔗糖,似乎与疾病的发展。果糖作为食品防腐剂,主要出现在含糖饮料,它刺激而闻名新创脂肪生成和增加肝脏氧化/炎症[11- - - - - -13]。除了果糖或蔗糖,饱和脂肪酸的消费与非酒精性脂肪肝的发病机制13,14]。尽管获得相互矛盾的结果,提出了特定的脂肪酸在肝脂肪生成,可能作用于感应或逆转非酒精性脂肪肝的症状和体征15- - - - - -18]。

非酒精性脂肪肝的治疗还没有特定的指南中描述到目前为止。生活方式的改变是主要的疾病治疗选择和减肥,强烈建议非酒精性脂肪肝患者。然而,最近的研究已经证明,修改常量营养元素组成和脂肪酸,特别是发挥重要作用的治疗非酒精性脂肪肝无论减肥(15- - - - - -18]。饱和脂肪摄入量的增加通常是与增加胰岛素抵抗有关,这可能会引起非酒精性脂肪肝的发展,而单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)可能阻止它通过抑制基因参与的机制新创脂肪生成(13]。使用不同的n - 3、n-7 n-6, n-9-rich脂质配方,西迪基et al。13减少]证明了非酒精性脂肪肝。

本研究的目的是为了研究解决的影响不同的植物油非酒精性脂肪肝的预防。

2。材料和方法

2.1。动物和饮食

男性C57 / B6J老鼠重20克的实验得到从中央的医学院动物屋小溪Preto (FMRP),圣保罗大学和维护受控条件下的温度(22±2°C)和湿度和光线(am-7:00点7点)/黑(pm-7:00 7点)循环。水和食物供应随意。动物被处理根据巴西大学动物实验伦理委员会批准的建议和程序都是FMRP的(协议号017/2015,2015年3月30日)。动物被随机分配到五个实验小组。对照组(续)收到了ain - 93增长的饮食含有20%的蛋白质(酪蛋白),63%的碳水化合物(53%玉米淀粉和蔗糖10%),7%的脂肪(大豆油),5%纤维,3.5%是- 93 g矿物组合,维生素混合1%,0.3%半胱氨酸,胆碱0.25%,0.002% di-terc-butyl甲基苯酚(19]。治疗组收到了修改还增长- 95饮食中脂质来源升高,所有的碳水化合物来源被果糖取代。高血脂+果糖组接受西方类型的饮食含有50%的脂肪(猪油)+ 20%果糖,蛋白质(酪蛋白)20%,5%纤维,3.5%是- 93 g矿物组合,维生素混合1%,0.3%半胱氨酸,胆碱0.25%,0.002% di-terc-butyl甲基苯酚(HFHFr)。其余治疗组接受相同成分的饮食除了调制的脂质,与25%猪油和25%的各自的植物油(橄榄油、菜籽油和大豆油),即HFHFr / OL HFHFr / CN和HFHFr / S(表1)。

植物油,extravirgin橄榄油(®Gallo),大豆油,菜籽油(®莉莎)在当地市场购买。各自的油的脂肪酸的猪油和表中列出1,以及peroxidability指数(20.]。维生素、矿物组合、胆碱和l -胱氨酸买来Rhoster (Aracoiaba da塞拉、巴西)。

食物摄入量和体重测定每笼(2动物/笼)在16周,和报告意味着食物摄入量和体重克/天。在实验结束时,动物们渴望12小时,然后麻醉与氯胺酮和甲苯噻嗪在生理盐水稀释的比例1:1:2毫升。这是10的剂量管理应用µl / g重量。收集的血液立即被心脏穿刺,在室温下休息30分钟,在4°C和离心机在3500 rpm血清分离之后。血清是储存在−80°C为以后分析。肝、附睾的脂肪组织,和腹膜后脂肪组织称重和冻结在铝零件进行进一步分析。

2.2。肝组织学

肝脏碎片在10%的缓冲福尔马林固定24小时,嵌在石蜡中。组织准备包含5µ米厚的部分被苏木精和伊红染色())的半定量的评估脂肪变性和/或肝病代表显微镜领域40×10日放大病理学家,谁是盲目的样品。所有不同的结果进行了分析和讨论使用系统co-observer显微分析(21]。

2.3。生化和肝分析

血清甘油三酯(标签)、总胆固醇(TC)和胆固醇在高密度脂蛋白(HDL)测定使用商业套装(Labtest Diagnostica S.A.巴西,Vista Alegre)和极低密度脂蛋白(VLDL)胆固醇被计算。相同的包被用于肝决定。总肝脂肪被改编布莱和戴尔方法提取(22),和总标签和肝脏总胆固醇水平测定使用商业套装。

直接应用于确定肝脂肪酸酯交换方法概要文件(23]。脂肪酸甲基酯是由气相色谱分离(日本岛津公司欧洲,杜伊斯堡,德国)使用一种仪器配备AOC-20i self-injector(日本岛津公司欧洲,杜伊斯堡,德国)和sp - 2560石英列(100米,0.25毫米。0.20 D,膜厚度μ米)。氦用作载气。合成空气作为火焰离子化检测器在250°C。注射执行分割模式和脂肪酸保留的时间是由比较与外部标准(Supelco 37组件名声混合)。

2.4。分析血糖和胰岛素抵抗

动物血糖测定的实验使用样本获得动物的尾巴和自由式lite方丈®一个。甘油三酸酯/脂蛋白胆固醇比率计算胰岛素抵抗的预测(24]。

2.5。脂质过氧化和抗氧化参数分析

肝丙二醛MDA是由Gerard-Monnier等人的方法25)与一些修改,因为它是彻底S1中描述的文本部分。

减少肝脏谷胱甘肽(GSH)决心从肝组织Sedlak和林赛方法(26与适应性),维生素A (α生育酚)是由适应Arnaud等人的方法(27]。完整的方法描述的详细和S1文本部分。

2.6。统计分析

单向方差分析(方差分析)应用于不同的数据组,其次是图基检测后,使用GraphPad棱镜软件5.00版本Windows (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国),设置的意义 。数据报告为平均值±标准偏差。

3所示。结果

3.1。MUFAs和欧米伽对身体的影响体重增加,食物摄入量和能量摄入

HFHFr动物的体重开始大大增加控制从第五周( )。从9日一周,HFHFr动物的体重显著增加而控制(35.00±4.30 g /动物和29.80±2.48 g /动物, )和治疗组(HFHFr / OL: 30.00±1.89 g /动物;HFHFr / CN: 31.20±2.34 g /动物;HFHFr / S: 30.63±2.66 g /动物; )。实验结束时(16周),HFHFr组相比有更大的体重控制和治疗组(HFHFr: 44.20±2.34 g /动物与控制:34.80±3.45 g /动物; ;HFHFr / OL: 35.40±4.19 g /动物;HFHFr / C: 36.10±3.92 g /动物;HFHFr / S: 36.25±5.70 g /动物; ),表明油有效维持体重。有一些变化意味着整个实验周期由于控制食物摄入动物摄取更多的食物和HFHFr动物摄入更少的食物。在治疗组,HFHFr / OL组摄取更多的食物比他们。能量摄入数据与食物摄入量呈正相关数据,而控制和HFHFr组显示较低的能量摄入量在整个实验过程中,实验小组,特别是HFHFr / OL组,显示出更大的能量摄入。然而,这些变化没有表达的饮食有利于体重的功效取决于饲料效率(带),它只控制和HFHFr动物之间的不同。结果如表所示2。

3.2。肝脏重量和附睾的和腹膜后脂肪组织重量和体重的关系

HFHFr组的肝组织重量增加而控制。PUFA-rich集团在治疗组(大豆油)显著降低肝组织相比HFHFr组( ),即使没有观察到显著减少体重在整个实验过程。HFHFr / CN组显示减少腹膜后脂肪组织相比HFHFr组( ),虽然没有区别在与体重的关系。附睾的+腹膜后重量的总和是HFHFr组相比,高控制( ),但治疗组的没有什么区别。没有区别在附睾的脂肪组织或其关系观察体重超过16周的实验。结果如表所示3。

3.3。植物油对三酰甘油、胆固醇、VLDL、高密度脂蛋白胆固醇、血糖、三酰甘油/脂蛋白胆固醇比率

血清三酰甘油水平HFHFr / OL组明显高于HFHFr组(0.291±0.049 vs.0.126±0.027),而那些HFHFr / S组低于控制(0.168±0.037和0.258±0.060)(图1(一))。相同的结果观察VLDL值(图1 (b))。HFHFr / S集团总胆固醇水平高于控制(4.208±1.102和2.818±0.599)(图1 (c))。高密度脂蛋白胆固醇水平高HFHFr / OL和HFHFr组相比,控制(2175±0.624和2.175±0.420和1.457±0.321),当他们降低豆油组相比HFHFr组(图1 (d))。血糖和胰岛素抵抗的标志(三酰甘油/高密度脂蛋白胆固醇比率)没有组间差异(数字1 (e)和1 (f))。对治疗组,HFHFr / CN组是唯一一个没有显示血清参数的变化。

3.4。MUFAs和欧米伽植物油降低肝脂肪的积累

正如预期的那样,西方饮食(HFHFr)增加总肝脂肪的积累与控制( )。在治疗组中,集团接收菜籽油,主要富含MUFAs和欧米伽,显示减少总肝脂肪堆积而HFHFr集团( )(图2(一个))。因此,这些数据与肝组织学结果呈正相关。HFHFr组表现出中度和重度弥漫性microvesicular肝脂肪变性(图2 (b))。组织收到的饮食富含MUFAs和欧米伽显示HFHFr组相比减少了脂肪变性。而HFHFr / OL组表现出轻度至中度宏观和microvesicular脂肪变性,HFHFr / CN和HFHFr / S组表现出轻度脂肪变性。没有集团纤维化或炎症(图2 (b)),可以看到在图3 (c)基于非酒精性脂肪肝的分数。肝三酰甘油水平较高组相比,接受西方饮食控制(38.48±16.86和17.28±5.4, )。虽然组织接受饮食富含MUFAs和欧米伽显示降低甘油三酯,是不重要的(图的区别2 (d))。肝脏胆固醇没有显示组间变化。

3.5。植物油对氧化应激的影响参数

氧化应激,最终导致脂质过氧化的产物,是评估基于MDA的水平。肝脏MDA增加相比,所有治疗组的血压控制(控制:0.772±0.377 vs HFHFr: 2.212±0.962 vs HFHFr / OL: 2805±0.364 vs HFHFr / CN: 3.613±1.794 vs HFHFr / S: 3.122±1.188)。与HFHFr组相比,只有一个接受饮食中富含菜籽油显示肝脏MDA含量增加( )(图3(一个))。抗氧化保护的基础上评估肝脏谷胱甘肽水平,哪些是高组HFHFr / CN和HFHFr / S,防止氧化应激与控制和接受西方饮食组(控制:0.856±0.340 vs HFHFr: 1.121±0.275;与HFHFr / CN: 3.808±1.984 vs HFHFr / S: 4.254±1.623)(图3 (b))。维生素E含量显著降低相比,所有治疗组的血压控制 )(图3)。

3.6。饮食的影响肝脂肪酸的组成

橄榄油的饮食富含欧米茄9(集团)和饮食富含ω- 6(大豆油组)增加了棕榈酸的水平(C16: 0)相比,集团接受西方饮食(HFHFr) ( ),没有变化,使用C18: 0水平或总SFA和。C16: 1对照组的水平高于其他组( ),虽然没有差别关于C18: 1或油酸(欧米茄9)水平或脂肪酸在所有组织的总金额。而一个橄榄盛产石油的饮食减少肝的ω- 6水平(C18: 1 n-6)相比,控制(14.41±1.43和21.90±3.92),大豆盛产石油的饮食导致增加肝水平的C18: 1 n-6相比控制和HFHFr集团(HFHFr / S: 29.63±1.44 vs HFHFr: 18.19±1.55与控制:21.90±3.92, )。欧米伽- 3肝合并减少HFHFr / OL和HFHFr组相比,控制( ),而在组织增加接收菜籽油(HFHFr / CN)和大豆油(HFHFr / S)相比,控制和HFHFr集团( )。花生四烯酸含量低于治疗组在控制( )。尽管EPA(甜:5 n - 3)显著增加在菜籽油和大豆油组接受饮食控制(相比 ),只有提高菜籽油组相比HFHFr组( )。虽然DHA (C22: 6 n - 3)水平更高的菜籽油组,他们没有显著差异。接受大豆油有大量的欧米伽与控制( )。结果如表所示4。

4所示。讨论

尽管众所周知,MUFAS和欧米伽,在特殊的长链n3欧(EPA和DHA),会影响肝脏代谢过程,精确的影响在不同的生理情况并不完全理解。因此,不仅是摄取脂肪的数量还脂肪酸成分对人类健康是关键的重要的。这里都有助于确定脂质调制的影响在不同的商业植物油(28- - - - - -32]。

饱和脂肪是用来调节集饮食在这项研究中,更具体地说lard-rich在油酸(C18: 1 n - 9, 36岁,92%),这是单不饱和脂肪酸的特色代表,其次是美国,尤其是棕榈酸(C16: 0.23, 86%)。正如所料,extravirgin橄榄油MUFAs的最终金额较高,中最丰富的一个是油酸(C18: 1 n - 9, 69.82%),其次是饱和脂肪酸(13%)、(C18: 3 n - 3;1.14%),因为它已经被其他人也证明(33]。豆油富含C18: 2 n-6 (57.52%)、MUFAs (C18: 1 n - 9, 23.25%),和ω- 6(22%),也已经发表在文献[13]。最后,菜籽油富含C18: 1 n - 9(60.01%),其次是欧米伽(19.7% C18: 2 n-6和8.02% C18: 3 n - 3,特别是在环境保护署eDHA)以及MUFAS n - 9,同意报告数据到目前为止(34]。

与此同时,本研究中使用的三种植物油关于代谢syndrome-related参数取得了积极成果。HFHFr组显示增加的体重比控制,其余组。动物对待各自的油保持一个渐进和齐次控制体重相似。食物摄入量不同在整个实验过程中,与能量摄入呈正相关。然而,饮食摄入对体重增加的影响只在接受西方的饮食,而这并没有发生在组织接受欧MUFAs,由饮食效率(35]。

不同类型的脂肪酸有不同的氧化和沉积率可能导致脂肪堆积,体重增加。报告建议积极作用的单不饱和脂肪酸(MUFAs)控制体重增加餐后脂肪氧化,提高食源性生热作用相比,美国或n - 3多不饱和脂肪酸(欧米伽;亚麻籽资源丰富的亚麻酸)(36]。脂肪酸通过各种转录因子调节脂肪生成和核受体,包括PPARs、肝细胞的核因子(HNF) 4、肝脏X受体(LXR)和甾醇反应元件结合蛋白(如)37]。

此外,一项研究表明,石油高P / S比值有关降低体内脂肪积累,和high-MUFA石油高P / S比值(HMHR;MUFAs组成的60%的总脂肪酸的比例5)可以防止HFD-induced增加体重和脂肪。因此,摄入脂肪量,以及脂肪酸组成、功能的一个关键的角色在人类健康36]。

欧米伽影响必需脂肪酸摄入和脂肪组织脂解作用。目前发现不同油组接收证明没有变化在附睾脂肪组织。虽然腹膜后脂肪组织是低接受菜籽油饮食、动物接受西方饮食发达更大体积的腹膜后脂肪组织和脂肪组织。根据色谱发现在这项研究中,菜籽油富含n - 3,特别是关于EPA和DHA的主要公司。这种脂肪酸通过各种转录因子调节脂肪生成和核受体,包括PPARs。众所周知,PPAR是白色脂肪组织中高度表达,其激活在脂肪细胞的发育和分化中发挥着关键作用导致脂类分解结果(36]。

几项研究已经表明,ω- 6和ω- 3脂肪酸抑制脂肪生成和非酒精性脂肪肝发展通过抑制SREBP1c和转录基因在脂肪生成13,38- - - - - -42]。在目前的研究中,这是HFHFr组显示更大的肝脏重量以及更大的积累总肝脂肪和肝甘油三酯。HFHFr / S组,否则以较低的总肝脂肪的积累和较低的脂肪变性的分数。尽管如此,这些数据呈正相关,与组织学分析,按照宏观和微观水泡脂肪变性本脂肪变性分为温和HFHFr / S和HFHFr / CN组和中度HFHFr / OL集团。低膳食ω6:3的疗效比已经在动物模型和临床试验中观察到的非酒精性脂肪肝(NASH患者。平衡的重要性ω6:3比率在最近的试验中更明显的治疗非酒精性脂肪肝患者的ω- 3脂肪酸,如二十碳五烯酸(EPA)或DHA,减少脂肪变性(37]。

根据Hijona et al。43),肝脂肪的生化定量显示了良好的相关性与组织学分类提出的肝脂肪变性Kleiner和冲击44]。HFHFr / OL组显示更高的血清甘油三酯水平和VLDL HFHFr组相比,而大豆油组表现出较低的水平。啮齿动物进行的研究表明饮食富含extravirgin橄榄油增加脂肪酸合酶和乙酰辅酶a羧化酶的活性也降低碱palmitoyltransferase的活动,从而增加脂肪生成和减少β氧化(45]。此外,减少豆油价值观的作用可能与欧米伽(n-6),存在于大量的植物油,在抑制脂肪生成和PPR的监管ɑ表达,随之退化的脂肪酸(13]。相反,该集团接收橄榄油显示大量的高密度脂蛋白胆固醇。在对200名志愿者进行的一项研究中,cova et al。45]表明extravirgin橄榄油的消费增加血浆高密度脂蛋白胆固醇的水平。空腹血糖和胰岛素的预测因素组研究中没有差别。燕et al。46]还发现组中无显著差异的研究,比较不同比例的n -6 /n -3所示。在目前的研究中,菜籽油生化参数的变化不显著的治疗组。

目前的数据显示出更大数量的棕榈酸HFHFr / OL和HFHFr / S组。它可能是一个事实有关上述描述发现,更大的橄榄油组脂肪变性和豆油组血清胆固醇的增加。棕榈酸促进肝细胞炎症增加[闻名47]。虽然差异没有统计学意义,油酸含量高集团接收橄榄油。橄榄油提出降低血清胆固醇。这些结果表明,分子机制,通过EVOO提取物,促进hypocholesterolemic效应通过HMGCoAR活动调制,胆固醇生物合成的关键酶,也是著名的他汀类药物的目标(48]。

菜籽油和大豆油诱导更高的EPA控制相比,即使这些只有在菜籽油组水平高于HFHFr组,而DHA显示没有变化。莫里森等人表明,EPA是更有效的比DHA对于脂肪变性的参数(47]。汉克等。49]证明了非酒精性脂肪肝的衰减通过使用不同数量的菜籽油和更大的肝数量的EPA和DHA,同时减少炎症参数。目前的研究表明,所有油用于各种团体的治疗脂质过氧化增加,证明了分析肝脏MDA。然而,相对于基于谷胱甘肽测定抗氧化保护,增加肝脏谷胱甘肽水平只是观察到治疗组菜籽油和大豆油,而维生素E治疗组水平低。

5。结论

总之,脂质调制在植物油中含有的饮食能够储备一些不利的代谢影响的高脂肪的饮食和高果糖饮食,在特殊的使用大豆油和菜籽油。因此,菜籽油建议是有用的治疗代谢综合征并发症和非酒精性脂肪肝。这似乎是一个有趣的低成本和容易适用替代脂肪变性的预防/治疗引起丰富的西式饮食或非酒精性脂肪肝与代谢综合症患者。

数据可用性

使用的数据来支持本研究可从相应的作者。

附加分

核心提示:这是一个事实,没有指导或更有针对性的治疗。由于超加工食品的消费,增加富含饱和脂肪和水果,疾病的患病率增加。因此,研究饮食方法通过饮食调制非酒精性肝病的预防在各种场景中增加nontransmissible慢性病的患病率。

伦理批准

所有动物实验符合国际公认原则的护理和使用实验动物(动物使用伦理委员会、巴西;协议没有。017/2015号的制度动物保健和使用委员会Faculdade药物de小溪Preto, SP、巴西)。到达方针声明:作者已阅读指南,到达和手稿准备到来和修订的指导方针。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

M.C.S.进行了研究,写了这篇文章,进行统计分析,为研究设计和数据解释。A.L.M.C.年代和开口保险单P为技术支持。R.L.Z有助于解释组织数据分析。A.A.J.导致了技术支持和数据解释。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

本研究由拨款支持FAPESP (Fundacao必须占州政府德帕罗尽管Estado de Sao Paulo), 2015/01348-6。