文摘
类(茄科)是一种传统中药广泛用于治疗感冒发热、湿热黄疸、疱疹、肾炎浮肿。尽管明显的治疗优势,很少有毒理学研究涉及其长期治疗的疗效和安全性。探讨急性和subchronic提取75%的乙醇提取物的毒性类(ESL)在小鼠口服后。在急性毒性实验中,小鼠胃内的政府与ESL剂量的1000,2000,3000,4000,或5000毫克/公斤1天。在subchronic毒性实验中,小鼠intragastrically政府ESL剂量的180,360和720毫克/公斤和0.9%盐水21天。体重增加,血液、生化和重要器官的组织病理学分析评估。马兜铃酸的存在我在使用UPLC-QTOF-MS ESL研究。植物化学的分析表明,马兜铃酸的存在我在ESL是0.0025毫克/克。这种相对低浓度不足以引起毒性。在急性毒性实验中,无论是死亡还是临床变化表明,除了轻微的瞬态腹泻5000毫克/公斤。因此,LD50英语的价值评估是超过5000毫克/公斤。在subchronic毒性实验中,死亡率和治疗相关的临床症状观察。体重有显著增加,血红蛋白(HB)、尿素氮(BUN)后政府与英语在180毫克/公斤。此外,胃的重量增加,血细胞比容(HCT)是减少政府后英语为360毫克/公斤。变化并不被认为是治疗相关的毒性影响,因为毒性和组织病理学分析表明,提取是安全的口服药。
1。介绍
的药用植物类研究。(茄科)是分布在长江在中国的南部地区。它也广泛应用于韩国,日本,和印度支那半岛。整个干类作为中国民间传统医学已经超过2000年(1]。类被列入“神农草本经典”治疗感冒发热、湿热黄疸、疱疹、肾炎浮肿。此外,它是一种利用药物治疗癌症,肿瘤,风湿性关节炎,白带(2]。
一些药理研究表明,他们的植物化学物质有抗血管新生1,抗癌3,抗过敏药4),抗菌5,6,抗炎7),抗氧化剂(7,8),和王亚南效果(9]。在临床上,类是经常与其他药物联合治疗繁杂的癌症,如肺癌、肝癌、胃癌和宫颈癌10,11]。此外,它是应用于消炎12]。近年来,化学成分类包括皂苷、黄酮、有机酸、倍半萜类、甾体生物碱类、香豆素类、多糖有被隔离5,13,14]。据报道,草本植物含有马兜铃酸可能导致毒性(13]。另外,马兜铃酸我指数成分用于确定的内容类。
尽管类被广泛使用,有明显的治疗优势,很少有涉及其疗效和安全性毒理学研究长期治疗(15),特别是考虑到亚急性毒性数据要求来验证这两个目标(16]。因此,本研究旨在调查急性和慢性的毒理学资料管理的提取类(ESL)老鼠通过关注生化和组织病理学指标。结果将提供应用程序的信息类在临床治疗。
2。材料和方法
2.1。植物材料和提取准备
全干类从安溪购买,福建省(安溪,中国)。这是被承扶李,厦门市中医医院的医生(厦门,中国)。券号码SM 7185的标本是存储在化学和制药工程系的植物标本,华侨大学化工学院,100克的类细粉和提取三次25±2°C 3 h和75%乙醇。过滤和溶剂部分蒸发减少压力(600毫米汞柱)在旋转蒸发器60°C。残留溶剂在热风循环烤箱在消除45±1°C。提取被冻干和保存在冰箱4±1°C。提取的收益率为16.55%。英语是由超声波加热溶解在盐水(0.9%)获得所需的浓度时使用。
2.2。UHPLC-QTOF-MS分析
英语是溶解在甲醇和小孢子过滤器(0.22μ米),然后10μ滤液和不同浓度L(1、3、5、10、20和30μ克/毫升)的马兜铃酸I(纯度> 98%,Sigma-Aldrich,圣路易斯,美国)被UHPLC-QTOF-MS分析。它是使用一个轻微的修改的方法17]。进行了分析使用一个安捷伦1290 - 6545 UHPLC-QTOF-MS配备一个Eclipse + C 18列(2.1×50毫米,1.8μ美国安捷伦科技m)。水的流动相包括(A)和乙腈(B)(含0.1%甲酸)。的梯度条件两个移动阶段如下:清廉,B分别为25%和75%;10 - 20分钟,60% B和40%的流量是0.5 ml / min,质谱仪是配备一个应急服务国际公司的来源,和措施正在积极模式。马兜铃酸的浓度计算我在ESL校准曲线的参考标准。
2.3。实验动物
雄性ICR小鼠(重27 g;5周大;生产批号2007000577215)从福建乌石购买动物中心(福州、中国)。老鼠每笼住六(320×180×160厘米),22±2°C的温度与相对湿度55±5%。动物有一个标准的啮齿动物干燥饲料饮食和水随意。在实验之前,老鼠自适应一周在动物的房子。批准的所有程序都是华侨大学动物保健机构(厦门、中国;批准号码HQU 2015016毒性研究)和执行符合公布的中国动物保健委员会的指导方针。
2.4。急性毒性研究
在这项研究中评估急性毒性的迹象,老鼠被分成6组(n= 6 /组)随机禁食8 h在测试前。小鼠体重和填喂法ESL剂量的1000,2000,3000,4000,和5000毫克/公斤体重。与此同时,第六组的小鼠0.9%生理盐水。观察小鼠分别在5、10、15、30、60、120和240分钟后的管理。幸存的小鼠观察持续一段14天。任何临床毒性的迹象或死亡率监测,根据已建立的标准。
2.5。Subchronic毒性研究
此外,在21天的subchronic重复剂量毒性研究中,高,中,低剂量被确定为720,360和180毫克/公斤体重。老鼠被分为4组包括3测试组和对照组1 (n= 6 /组)。ESL管理是基于个体的每7天的体重。在实验期间,每天观察临床症状和死亡。行为改变的症状和体征记录日报,包括皮肤、眼睛、胃肠道和外围的改变。21天,老鼠通宵禁食和体重。血液从眼睛和采样收集血液分析和血清生化分析。然后,老鼠被颈椎脱位(安乐死18]。大脑、肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、和胃被移除,0.9%生理盐水冲洗,称重。每周动物体重测量。相对器官重量计算基于organ-to-body重量乘以100 (19]。此外,组织碎片的肝脏,肾脏,和心脏保存在10%福尔马林溶液进行组织病理学分析。
2.6。血液分析
1毫升的红细胞(红血球)收集到EDTA管。血液分析使用一个自动化的血液学分析仪进行了测试。血液学的评估包括白细胞(WBC)计数,红细胞(RBC)计数、血小板(PLT)计数,血红蛋白(HB)、红细胞比容(HCT),意思是血细胞比容(MCV),意思是微粒血红蛋白(妇幼保健),意思是微粒血红蛋白浓度(MCHC),中性粒细胞和淋巴细胞。
2.7。血清和生化分析
生化分析,血液在3000×g离心10分钟在室温下。血清样本吸气,存储在管−20°C到各种分析(美国自动生化分析仪)。以下临床生物化学参数测定:总蛋白(TP)、白蛋白(铝青铜),球蛋白(GLB)、总胆红素(治疗组)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(T-CHO)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)测定,肌酐(克雷亚)。
2.8。组织病理学分析
器官和组织都是宏观上总病理学检查。判断是否组织病理学变化与治疗与不同浓度的ESL的老鼠,重要器官如肝脏、心脏和肾脏组织病理学进一步治疗。器官是脱水,paraffinized,根据标准程序和嵌入。部分4μm是苏木精和伊红染色(圆))在一个自动化的方法。组织在显微镜下检查一个随机的顺序和蒙蔽原组。
2.9。统计分析
参数测试的结果被表示为均值±S.E.M.器官重量体重的比率的差异在21天治疗,体重变化,以及生化分析单向方差分析Dunnett紧随其后的事后测试之间的控制和测试组(美国芝加哥SPSS Inc .) 20.0。在适用的情况下)。对于所有的测试,是统计学意义的水平 。
3所示。结果
3.1。UHPLC-QTOF-MS分析
UHPLC-QTOF-MS分析显示我在马兜铃酸的存在类根据保留时间,碎片离子和MS / MS谱模式的参考标准(17]。马兜铃酸的峰在4.247分钟的可视化类(图1)。马兜铃酸的质谱我给离子(图324.0503 m / z2),对应(C17H11没有7-哦)+。(M-OH-CO和生成的碎片离子2]+在女士2(图3)。校准曲线是由绘制峰面积和浓度,显示良好的线性R2= 0.998。线性方程是Y= 8.2012×104X+ 1.031×104(μg / ml)。校准曲线的结果,1 g的提取类含有0.0025毫克的马兜铃酸I。
3.2。急性毒性
在目前的研究中,没有观察到所有死亡组管理时期。提出的测试组与对照组相比,无治疗相关的临床症状,如外观变化(皮肤的变化,皮毛,和眼睛),行为,心理状态和日常活动。老鼠只观察到轻微的瞬态腹泻5000毫克/公斤。显微镜检查的重要器官,包括肝脏,肾脏,心脏,脾脏没有任何变化。无论是死亡还是临床发生改变,所以LD50英语的价值评估是超过5000毫克/公斤。
3.3。死亡率Subchronic毒性实验和临床观察
没有ESL治疗相关死亡率在小鼠口服后21天。没有动物显示明显的发病率或临床异常毒性,如外观(皮肤的变化,皮毛,和眼睛),行为,心理状态和日常活动。
3.4。身体重量和身体重量增加Subchronic毒性实验
英语对身体的影响权重和身体重量增加呈现在图4。所有的老鼠表现出倾向增加身体的重量没有显著不同于对照组。我们只能发现小鼠给予180毫克/公斤的ESL诱导增加身体重量与对照组相比在星期1 ( )。
3.5。相对器官重量Subchronic毒性实验
如表所示1,ESL管理局21天没有产生任何异常相对器官重量的变化,除了胃相对重量( )的剂量360毫克/公斤。
3.6。血液分析Subchronic毒性实验
如表所示2揭示了血液学参数,显著降低HCT值( )的剂量360毫克/公斤与对照组相比。与此同时,与对照组相比,有显著增加HB ( )的剂量180毫克/公斤。
3.7。生化分析Subchronic毒性实验
如表所示3,21天治疗ESL没有导致血清水平的异常TP,铝青铜,GLB,治疗组,ALT,高山,T-CHO,克雷亚。与对照组相比,有显著增加面包( )的剂量180毫克/公斤。
3.8。组织病理学检查在Subchronic毒性实验
图中所描绘的一样5- - - - - -7显微分析表明,21日连续天的政府以180、360和720毫克/公斤ESL没有异常变化,体系结构和细胞的表象重要器官(肝脏、心脏和肾脏),与对照组相比。
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
近年来,中国传统草药已在国内外广泛应用。人们倾向于相信天然草药更安全,副作用少。然而,有必要评估自然草本植物的毒性。研究证明,老鼠是适合早期临床前安全评价的模型。临床前的早期识别异常症状可以预测人类的毒性和节省时间,金钱和精力花(20.]。与其他许多药用植物物种相比,很少有毒理学研究的安全类。ESL的慢性毒性,对更好地理解至关重要的安全后21天重复的政府。
研究报道,马兜铃酸可以导致肾毒性和癌症。此外,马兜铃酸的存在是一个重要的标志来识别草药产品包含他们(13]。在最近的研究中,我在马兜铃酸的存在类是0.0025%。这种相对低浓度不足以引起毒性。但同时,类是一种传统的中草药在亚洲社区医院用于治疗各种癌症。
虽然LD50无法预测人类致死剂量,剂量使用subchronic研究提供指导。本研究首先调查了亚急性口服毒性ESL的老鼠。数据显示,英语在老鼠身上没有明显的毒性作用。在急性毒性研究中,无论是死亡还是临床变化表明,除了轻微的瞬态腹泻5000毫克/公斤。因此,LD50英语的价值评估是超过5000毫克/公斤(21]和几倍2毫克/公斤/天的临床推荐剂量(22]。因此,英语被认为是无毒的。
在subchronic毒性研究中,治疗相关的临床症状和死亡记录在实验。在21天subchronic毒性治疗,轻微的减肥中观察小鼠接受英语在180毫克/公斤,和它出现后7天的口服。与对照组相比,在180毫克/公斤体重减少组只有6.3%。小鼠体重的量可能与减少食物的摄入量。此外,它是可逆的21天内重复管理(23,24]。显然,老鼠的体重在180毫克/公斤集团从第15天增加,逐步回到了正常水平。
器官重量是一个重要和敏感药物指标来评估测试物质的毒性毒理学实验。通常,器官的变化系数是形态学改变之前25]。在我们的研究中,英语没有产生任何异常变化相对器官重量,除了相对胃在360毫克/公斤体重组。这增加被认为是偶然的,不是治疗相关的,因为它没有发生在治疗组720毫克/公斤。器官系数的增加可能是由于内部器官的大小变化和/或身体重量的老鼠26,27]。此外,通过胃肠粘膜,在宏观和微观检查,胃系数的最小的增加没有产生异常变化。
白细胞,红细胞,HB, PLT最敏感的指标在血液分析,有敏感响应许多病理变化(28]。此外,血液检查是一种常见的指数观察治疗效果和持续治疗或停止治疗。在这项研究中,HCT和HB显示,血液参数显著变化,但没有明显的剂量反应和血液参数的水平控制在正常范围内的值(29日]。
肝脏在消化中起着至关重要的作用,身体的代谢和解毒。受伤当肝细胞肝毒素的药物,血清酶的浓度如AST、ALT和高山可能增加(30.]。变更在AST的价值观,与对照组相比,360毫克/公斤的酶活性治疗组增加了不到16.7%,和大小被认为是温和的(表3)。综合评价的肝酶异常现象考虑2.5%的正常人有边缘型酶异常值(31日]。此外,AST水平的提高,也可能源于extra-hepatic损伤,特别是骨骼肌(32]。组织病理学评价并没有显示任何治疗相关的损害肝脏。总的来说,结果表明,AST酶的增加并不是有关毒理学效应引起的治疗。
肾脏是一个传统的药物毒性靶器官放电,可清洁代谢产品和毒药。更重要的是,它非常敏感药物的毒性作用,和肾损伤可能导致增加面包和克雷亚。的高浓度血清酶如面包和克雷亚通常被认为是一个敏感的肾损害(33]。改变在包的价值。值大于对照组(表在180毫克/公斤3)。然而,组织病理学评价并没有显示任何治疗动物的肾脏相关变化。克雷亚的价值仍处于正常水平。包的变化值被认为只有在一个剂量和/或没有剂量依赖,因为它没有出现在360和720毫克/公斤治疗组。总的来说,结果表明,包酶的增加不是治疗相关的毒性效应。
心脏的组织病理学检查显示没有区别,无明显异常。重要器官切片的显微分析表明,其建筑和细胞出现是正常的和生化参数没有显著差异。
5。结论
总之,目前的研究清楚地表明,类有一个广泛的临床治疗使用的安全裕度。英语被认为是相对安全的治疗剂量720毫克/公斤。此外,我们没有发现任何有害影响肝脏或肾脏功能。希望这个实验的结果将作为一个重要参考的英语用法作为草药。
缩写
| 英语: | 提取的类 |
| 铝青铜: | 白蛋白 |
| 高效液相色谱法: | 高效液相色谱 |
| GLB: | 球蛋白 |
| 白细胞: | 白血细胞 |
| 治疗组: | 总胆红素 |
| 加拿大皇家银行: | 红细胞 |
| ALT: | 丙氨酸氨基转移酶 |
| PLT: | 血小板 |
| AST: | 谷草转氨酶 |
| HB: | 血红蛋白 |
| 高山: | 碱性磷酸酶 |
| HCT: | 血细胞比容 |
| T-CHO: | 总胆固醇 |
| 公司: | 意思是微粒的体积 |
| GLU: | 葡萄糖 |
| 妇幼保健: | 意思是微粒血红蛋白 |
| 包子: | 尿素氮 |
| MCHC: | 平均血红蛋白浓度 |
| 克雷亚: | 肌酸酐 |
| TP: | 总蛋白。 |
数据可用性
与本研究的所有数据都包括在手稿。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
小华郭的概念、设计、研究和写作。Lianjin翁为研究材料的收集和审查和编辑的手稿。耿Di负责方法和行政支持。Litao易导致了正式的分析,调查,和体内实验。
确认
支持的工作是自然科学基金(21702066)。