文摘

Dracontomelon刀(D。刀)的叶子Dracontomelon duperreanum皮埃尔(D。刀辅助变流器。非稳定(布兰科)。和罗尔夫;d . sinenseStopf)。从Anacardiaceae有价值的中药,d .刀历史悠久的治疗褥疮、皮肤溃疡、感染和其他疾病。此外,挥发油d .刀叶子展品抗肿瘤效果。然而,这些报道的研究只集中在评估模式菌株的抗菌功效在体外,没有关注抗菌活性和抗炎作用在活的有机体内。本研究旨在提供证据的抗菌活性和抗炎和proangiogenesis活动Dracontomelon刀(d .刀)在大鼠模拟空间环境下的皮肤。失重模型大鼠的空间环境。然后,老鼠d .刀为15天。伤口愈合的影响d .刀组织病理学和炎性细胞因子大肠杆菌全身的伤口感染在失重的老鼠进行了分析。此外,分子生物学技术进行评估伤口愈合的影响d .刀相对蛋白质含量的NF -κB以及PI3K / Akt信号通路。免疫组织化学是用于VEGFA的蛋白表达。伤口愈合的影响d .刀在细菌感染伤口的老鼠表现出降低伤口的大小并显著增加伤口的收缩率。d .刀影响减轻组织损伤的皮肤组织炎性细胞因子差别,对这些基因的水平。此外,结果表明,d .刀监管影响炎症和血管生成,可以调节的相对蛋白质含量MAPK / NF -κB以及PI3K / AKT信号通路。当前的研究强调了至关重要的作用d .刀缓解皮肤组织损伤大肠杆菌全身的伤口感染的老鼠通过调节MAPK / NF -失重κB以及PI3K / AKT信号通路。本研究可以提供一个新的代理治疗细菌性感染的伤口在模拟空间环境。

1。介绍

载人航天的人已经形成了一种强烈的兴趣由于私人和政府机构的努力1]。生活在这样一个极端的环境将导致减少免疫状态而深刻的变化在人类细菌社区。在微重力条件下,抗生素的疗效降低微生物的突变速率增加显著(2,3]。假设没有明显在航天器的结构或其微生物污染空气,食物和水供应,任何船员将引起内源性感染人类和动物植物在离开的时候,这可能会限制类型的感染中遇到一个可预测的方式(4,5]。据报道,发现细菌的微生物区系经过短暂的飞行,可能与饮食有关,主要是肠道微生物区系,等大肠杆菌(大肠杆菌)[6,7]。微重力环境使其突变耐药(8]。太空旅行的负面影响免疫功能,尤其是细胞免疫,会导致细菌的几率的增加建筑感染病变(9]。这些因素将会影响和感染疾病的有效治疗。创伤,如撕裂和开放性骨折,可能会发生在长期在国际空间站的任务(10]。一旦伤口感染发生,它将构成直接威胁宇航员的生活,甚至导致太空任务的失败。因此,需要有效的抗生素来避免严重的伤口感染。许多研究表明,植物产品潜在的伤口愈合和有效的抗菌药物,主要是更受欢迎,因为他们的广泛可用性和不必要的副作用(11- - - - - -13]。

Dracontomelon刀(d .刀)的叶子Dracontomelon duperreanum皮埃尔(d . dao辅助变流器。非(布兰科)稳定。和罗尔夫;d . sinenseStopf)。从Anacardiaceae有价值的中药,d .刀历史悠久的治疗褥疮、皮肤溃疡、感染和其他疾病(14,15]。此外,挥发油d .刀叶子展品抗肿瘤作用[16]。我们先前的研究[17- - - - - -19显示不同的提取d .刀叶子显示不同的抗菌活动,尤其是乙酸乙酯(层)提取含有黄酮和酚酸的含量,并表现出有效的抗菌活性大肠杆菌(大肠杆菌),铜绿假单胞菌(铜绿假单胞菌),金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)。然而,这些报道的研究只集中在评估模式菌株的抗菌功效在体外,没有关注抗菌活性和抗炎作用在活的有机体内。为了充分模仿的地位和生活条件宇航员在太空舱,tail-suspended hindlimb-unloaded老鼠胶囊在模拟已经广泛进行模拟微重力的影响。此外,这种模式可能会导致体液转移到脖子和头部区域和诱发姿势肌肉在微重力条件下卸。

在这项研究中,我们研究了感染伤口的愈合tail-suspended hindlimb-unloaded老鼠的局部应用d .刀模拟失重环境下的空间,并试图探讨其分子机制。结果表明,局部应用d .刀不仅可以提高感染伤口的愈合,减少促炎因子的表达水平,包括白细胞介素- 6 (il - 6)、interleukin-1吗β(il - 1β)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),但是也会增加血管生成增加生长因子的表达水平,如血管内皮生长因子(VEGFA)和转化生长因子-β(TGF -β1),从而缩短恢复时间。为了确定目标的途径d .刀对信号通路的影响核因子kappa-B (NF -κB),磷酸肌醇3-kinase (PI3K)和增殖蛋白激酶(MAPK)随后研究阐明其相关的分子机制。

2。材料和方法

2.1。道德的声明

本研究进行了符合指南的推荐的实验室动物保健和使用中国的科学技术部。所有饲养和实验进行了审查和批准的动物实验委员会伦理和中国人民解放军总医院。批准ID是iacuc - 2020 - 0027。

2.2。的准备d .刀提取

的叶子d .刀(批号:20141013)是经广东省中药市场,中国。树叶在阴凉的地方干和储存在室温下。d .刀叶子大概磨粉化的机器,筛选(60目),储存在密封容器中。540克的d .刀树叶粉准确称重和回流12倍80%乙醇2 h,重复三次。然后,提取后,过滤,蒸发。此外,他们可以溶解在适当数量的超纯水。最后,层提取是通过重复提取比例的层1:1.5 (H₂O:层= 1:5 * 1.5)。最后的重量比d .刀叶子是12.65%。提取低温干燥和储存在4°C深造。

2.3。动物的处理

共有84名健康同系交配的雄性sd大鼠中(190 - 210 g)的男女从SPF获得生物技术有限公司,有限公司,北京,中国。他们单独住,每周定期称重。所有的动物都在密切观察任何感染。老鼠感染的迹象将孤立和排斥学习。他们保持在一个温度控制的房间(23±2°C)并保持在12 h / 12 h照明光/暗周期(灯在06:00点)和湿度45 - 50%在有空调的房间里。老鼠可以免费获得食物和水。老鼠处理后适应实验室环境和观察7天。

2.4。失重模型在模拟空间环境

老鼠的尾巴被连接到一个旋转悬挂装置安装在一个专门设计的有机玻璃笼子里(长度= 45厘米,宽度= 45厘米,高度= 45厘米)。用75%的乙醇清洗后,尾的尾巴固定带,提高了老鼠笼子里地板上的突起物30°角头突起物是卸载(20.- - - - - -22]。他们被单独关在笼子里,美联储在自来水和食物随意(数据1(一)和1 (b))。包含老鼠的笼子放在一个平台配备一个振荡器来模拟胶囊的提升。列出的振动条件如下:91.5赫兹的频率,振动时间58 s, 1 G的振幅。随后,所有的动物喂养一个标准实验室食品和在模拟胶囊中国航天员科研训练中心的平台(中国,北京)。这个平台的条件图所示1 (c)。模拟空间站环境保持在年龄在18岁至25岁之间在45°C和90±1 Kpa: 90分钟光/暗周期。失重老鼠观察14天前的伤口。系统是稳定的和可靠的失重在创建一个模型在模拟空间环境。

2.5。创建失重伤口感染的老鼠

背面的轻便老鼠脱毛与氨基甲酸乙酯麻醉后(100年30%,0.7 ml / g)。两个切除伤口是由切割全层皮肤直径1.5厘米从预定的区域两边的背中线区皮下组织松散的深度(23]。的大肠杆菌暂停(写明ATCC 25922, 10⁸cfu /毫升)下降通过吸管诱导皮肤感染(24,25]。1毫升的悬架是用于每个伤口除未感染组。伤口覆盖医疗透明薄膜包装,并与无菌antilicking纱布固定。

2.6。组织和管理

老鼠被随机分配到四组,每一个都包含21个动物。药物的剂量与前面的实验研究的结果是一致的(26]:(1)感染组(IG):感染伤口管理车辆(30%甘油)(2)低剂量组(爬):感染伤口处理0.08 g / mld .刀(30%的甘油车辆)(3)高剂量组(HDG):感染伤口处理0.8 g / mld .刀(30%的甘油车辆)(4)Uninfection集团(UIG):未受感染的伤口管理车辆

皮肤感染模型的成功建立后,老鼠给生理盐水清创术治疗。每个伤口都抹管理100μL相应药物液体每天一次15天。老鼠可以免费获得食物和水在整个实验。的剂量d .刀本研究中使用被证明在老鼠身上没有不良反应。随后,伤口就脱光了,放置在一个开放的环境。

2.7。伤口收缩评价

在0、3、5、10和15天之后造成的伤口,伤口面积被跟踪计量与透明纸的轮廓。如果潮湿肉芽组织不再是可见的,伤口是由新的上皮组织,伤口是封闭的(完全愈合)。在每个跟踪区域边界是由扫描仪扫描及图像分析软件的分析Image-Pro + 6.0(媒体控制论,Inc .,马里兰州贝塞斯达,美国),表示为伤口收缩的百分比。这些值被表示为一个百分比的0-day测量值和被威尔逊的评估公式(27]。公式如下:

2.8。组织和血液采集

七大鼠在每个子群选择随机收集组织和血液样本在天5,10,15。麻醉后,老鼠刺破腹主动脉收集血液样本,离心得到血清。然后,血清被分发到小管和存储在冰箱−80°C。接下来,肉芽组织和/或愈合组织收集。一分的组织在10%中性缓冲福尔马林保存组织组织病理学和免疫组织化学分析。另一部分是储存在−80°C为进一步使用。

2.9。组织病理评价

Hematoxylin-eosin染色(他)是用于检测在老鼠身上切除伤口的组织病理学变化。不同浓度的乙醇被用于水合物伤口组织。切除伤口组织固定和分段,二甲苯溶液deparaffinized和透明。随后,嵌入式肉芽组织切成薄片,five-micron-thick片表皮,真皮,皮下血管翳在载玻片上。脱蜡后,样品被水化蒸馏水和苏木精和伊红染色。样本被放置在显微镜下微观检查,和图像采集和分析。

2.10。炎性细胞因子的检测

大鼠的血清样本取出并在4°C rethawed在冰箱里。血清生化指标分别测量的协同H1混合读者(美国生物技术)。相应的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒用于检测血清炎症细胞因子的内容,包括TNF -α,il - 1β,il - 6。的ELISA试剂盒购自上海MLBIO生物技术有限公司,有限公司(上海,中国)。操作过程是严格按照酶联免疫试剂盒的需求说明。结果平均和表达为pg / mL的蛋白质。

2.11。免疫印迹蛋白质表达

免疫印迹方法进行调查的影响d .刀相关蛋白表达的NF -κB、MAPK和PI3K / Akt信号通路和生长因子。老鼠的肉芽组织均质,随后分析了组织溶解(上海市景心实业发展有限公司,上海,中国)补充了无线电免疫沉淀反应试验(里帕)缓冲区包含phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF)。bicinchoninic酸测定蛋白质浓度计算的(BCA)蛋白质分析工具包(Beyotime生物科技、上海、中国)。样品分离electrophoretically 10% sds - page凝胶在80 V首次分离,然后在120 V。分离后,蛋白质被转移到一家聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)(美国微孔,贝德福德,MA)为2 h 200 MA。这些膜被封锁在TBS 5%脱脂奶粉含有0.1%渐变室温20 (TBST) 1 h,然后一夜之间在4°C的环境中与不同的主要抗体。主要的抗体anti-p65 (^#8242、1:1000、细胞信号技术(CST), Inc .,丹弗斯,妈,美国),p-P65 (^#3033年,1:1000年,春秋国旅),导出κBα(^#9246年,1:1000年,春秋国旅),p-IKKα/β(^#2697年,1:1000年,春秋国旅),p-MEK (^#9154年,1:1000年,春秋国旅),MEK (Abcam ab178876, 1: 20000年,美国),p-ERK (^#3958年,1:1000年,春秋国旅)、ERK (^#4695年,1:1000年,春秋国旅),p-JNK (^#9255年,1:1000年,春秋国旅)、物(^#9252年,1:1000年,春秋国旅),p38MAPK (Beyotime AM065-1, 1: 1000年,上海,中国),p-AKT (^#4060年,1:2000年,春秋国旅),一种蛋白激酶(^#4691年,1:1000年,春秋国旅),VEGFA (ab1316, 1: 100年,Abcam), TGF -β₁(21898 - 1 - ap, 1: 600年,Proteintech),和GAPDH (10494 - 1 - ap 1: 10000年,Proteintech)。与TBST洗3次后,膜与辣根孵化peroxidase-conjugated二级抗体(山羊anti-rabbit免疫球蛋白或山羊anti-mouse免疫球蛋白)在室温下1 h。最后,免疫反应性乐队被增强化学发光检测(发射极耦合逻辑;Amersham生物科学,小都,英国)代理。乐队使用图像J软件强度进行了分析。的蛋白表达GAPDH是作为内部控制规范化数据。

2.12。免疫组织化学分析VEGFA表达式

进行免疫组织化学检测的蛋白表达水平VEGFA确定新血管的形成在不同天受伤。操作过程如下:伤口组织切片是保持在60°C 2 h,然后deparaffinized和脱水。此后,3% H₂O₂甲醇是用来防止内源性过氧化物酶活性。添加部分是为了anti-mouse VEGFA单克隆抗体(ab1316, 1: 200年,Abcam)和孵化一夜之间在4°C。与磷酸缓冲盐水洗部分后,他们对待辣根peroxidase-conjugated二级抗体(武汉Servicebio科技有限公司有限公司,中国)在室温下50分钟。部分是在显微镜下检查(放大100倍)来确定的积极表达VEGFA伤口。然后,最高的表达领域在显微镜下观察(放大400倍)。

用磷酸盐缓冲盐水洗净后,部分治疗与二次抗体结合辣根过氧化物酶(武汉Servicebio科技有限公司有限公司,中国)在室温下50分钟。染色后3 3′-diaminobenzidine (DAB) / H₂O₂苏木精,部分脱水,清理,安装查看。VEGFA分析,部分在显微镜下检查(100 x放大)来识别积极表达最高的伤口。然后,最高的表达领域在显微镜下观察(放大400倍)。

2.13。统计分析

结果表示为平均值±标准偏差(SD)。检测的统计显著性差异是由单向方差分析计算(方差分析)其次是Dunnett多重比较检验。数据分析是由使用SPSS 20.0(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)统计一揽子计划。 被认为是具有统计学意义,然后呢 被认为是非常重要的。

3所示。结果

3.1。的影响d .刀在关闭伤口和伤口收缩百分比

早期痂的形成和脱落,以及伤口闭合,d .刀治疗组相比,特点是搞笑(模型)。第五天,当地血管收缩创造了伤口,其中大部分充满了血。细粒度的肉芽组织没有观察到的宏观上。正常的伤口组滋润和清洁,新鲜的颗粒。第十天,大多数的伤口在模型组覆盖着灰色的肉芽组织,地壳是困难的,抑郁症在伤口的中心,经济复苏仍不理想。肉芽组织完全填充伤口,底部和上皮组织外缘的伤口变得积极。15天,伤口中药高剂量组的组和normal-wound组中药组的整体治疗,和老鼠表现出良好的状态。的伤口infection-wound组和低剂量组中药被瘢痕组织覆盖。总评价表明,局部的伤口d .刀应用程序表达下调伤口大小(图2(一个)伤口收缩)的比例显著增加(图2 (b)),相比之下,搞笑。

3.2。的影响d .刀皮肤组织的组织病理学

第五天,大量炎症因素渗透在每一组中,坏死,组织结构和皮肤附件不见了。第十天,normal-wound组和中药组显示表皮增生,棘皮症是增厚,伤口炎症细胞。小,数量和infective-wound小组仍然显示明显的炎性细胞浸润。15天,大部分的上皮组织正常组和中药组形成,表皮分化很大程度上,接近正常的上皮细胞。infective-wound组表现出更厚比正常的表皮,表皮,还伴有炎性细胞浸润。低放大倍数(x10)伤口的图片如图所示3(一个)和高放大图像如图(x40)3 (b)。

3.3。的影响d .刀在促炎介质(pg / ml蛋白质)

血清肿瘤坏死因子水平α,il - 1β测量,il - 6在这项研究中。如图4血清TNF -α(图4(一)),il - 1β(图4 (b)),il - 6(图4 (c))在IG组相比显著增加UIG集团( )。相反,与IG组相比,d .刀高剂量组和低剂量组能显著降低血清TNF -α,il - 1β和il - 6 ( 或 )5天,10天,15天。

3.4。的影响d .刀在生长因子

代表免疫印迹GAPDH乐队,VEGFA, TGF -β₁给出了图5(一个)。蛋白质含量的HDG集团VEGFA(图5 (b))和TGF -β₁(图5 (c)5天)显著增加(1.00±0.12倍VEGFA, 1.49±0.33倍TGF -β₁),第十天(1.00±0.12倍VEGFA, 0.62±0.13倍TGF -β₁),一天15(1.00±0.12倍VEGFA, 0.56±0.08倍TGF -β₁);这些水平增加爬下组5天(0.77±0.13倍VEGFA, 1.07±0.24倍TGF -β₁),第十天(0.94±0.08倍VEGFA, 0.53±0.16倍TGF -β₁),一天15(0.51±0.02倍VEGFA, 0.46±0.06倍TGF -β₁受伤后)比较与搞笑。

此外,免疫组织化学显微镜进行验证是否治疗d .刀可以移植VEGFA表达式。低放大率(x10)伤口的图片如图所示6(一)和高倍率(x40)图像如图6 (b)。5天,观察VEGFA-related表达式在炎症细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、内皮细胞和成纤维细胞;VEGFA表达IG集团被发现显著低于其他组。在10到15天,观察到VEGFA表达内皮细胞和成纤维细胞明显减少了。

3.5。的影响d .刀NF -κB信号

是否d .刀影响NF -κB信号检测。d .刀有效地抑制降解的抑制蛋白κBα和导出κBα剂量依赖性的方式(图7(一))。同样,磷酸化的p-NF -κp65和NF - BκB p65被抑制d .刀剂量依赖性的方式(图7 (b))。IKK的磷酸化状态α/β蛋白质也检查,即上游》κBα/ NF -κB复杂。IKKα/β蛋白质磷酸化是由感染显著调节刺激,这明显抑制磷酸化通过rhododendrin治疗(28)(图7 (c)和7 (d))。这些结果暗示了NF -κB信号通路的影响d .刀,使其有用的抗炎治疗。

3.6。的影响d .刀MAPK和PI3K / Akt信号

是否d .刀可以抑制MAPK(数据吗8(一个)和8 (b))和PI3K / Akt(数字9(一个)和9 (b))信号通路,它也被感染刺激激活,决心。MAPK信号而言,d .刀有效抑制磷酸化ERK1/2, MEK, p38物,Akt在HDG组。这些结果暗示d .刀可以抑制MAPK和PI3K / Akt信号,以及NF -κB信号。

4所示。讨论

本研究旨在调查的抗菌活性和抗炎作用d .刀在大肠杆菌治疗伤口皮肤下模拟空间环境。结果表明,d .刀可以显著增加感染伤口的愈合率在老鼠身上,从而缩短恢复时间,促进肉芽组织的生长,减少炎症因子渗透,促进表皮部门,发挥抗菌作用。本研究建立了感染性伤口模型大鼠模拟空间环境药物筛选平台,它提供了一个参考准备病动物模型更配备航空航天环境。实验研究的结果揭示了抗菌活性和抗炎作用,以及可能的机制d .刀在模拟空间环境下大鼠细菌性感染的伤口。本研究的发展提供了实验依据d .刀作为一个细菌传染病药物在模拟空间环境的状态。

创伤可能发生在空间站长期任务,如撕裂和开放性骨折。伤口愈合是一个同步的过程相互作用的各种细胞因子和生长因子,障碍和变化将导致破坏伤口愈合(29日]。正常伤口愈合包括四个阶段:止血,炎症扩散和重构。细菌感染的一个主要复杂影响伤口愈合的因素通过影响一些炎症和生长因子(30.,31日]。

d .刀是一个有着悠久历史的中国传统医学治疗褥疮、溃疡、皮肤溃疡、感染和其他疾病,主要活性成分是黄酮和酚酸的含量,具有显著的抗菌,抗炎,抗感染的活动(18]。在这项研究中,我们表明,局部应用d .刀模拟空间环境下可以纠正无序感染伤口愈合,平衡各种炎症介质的表达和生长因子在愈合。图2 (b)表明,与IG组相比,伤口愈合率HDG组显著增加从5天到15天。结果表明,伤口愈合速度明显加快d .刀应用程序。15天,伤口完全愈合。与IG组相比,的表达angiogenesis-related VEGFA和TGF -等因素β1调节HDG组,而炎症因子(TNF -的表达α、il - 6和il - 1β表达下调。

肉芽组织是形成适当的愈合的基础矩阵,这是一个不成熟的类型由炎症细胞、发病机制、成纤维细胞、胶原纤维,和新血管的早期阶段(32,33]。这种不成熟的肉芽组织变得更成熟后期,经久耐用,这是适当的伤口修复的基本特征34]。除了ECM的形成在治疗期间,其进步的退化和改造必须形成成熟的伤口愈合组织监管的方式。不同细胞的形成和编程退化和组件在肉芽组织由不同的细胞因子的影响(如肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β)和生长因子(如TGF -β₁和VEGFA) (35]。因此,应该有一个足够的合成器和降解之间的平衡。肉芽组织的胶原蛋白是主要的组成部分。成纤维细胞的胶原蛋白合成取决于TGF -β1,对伤口愈合非常重要(36]。据报道,TNF -的应用α减少胶原蛋白的表达和伤口的抗拉强度37]。因此,肿瘤坏死因子的增加α在后期对肉芽组织有害。然而,TGF -β₁是一个重要因素在高质量的肉芽组织的形成。如果伤口充斥着高质量的肉芽组织,上皮细胞开始形成,因为肉芽组织提供了一个床上皮。Reepithelialization有助于伤口关闭由静止的表型改变角化细胞迁移和增殖表型,受损的细菌感染。这可能是由于劣质肉芽组织和/或角化细胞转型的失败。的应用d .刀在感染伤口TGF -的表达增加β₁(图5(一个))和降低TNF的表达-α(图4 (b)),这是有利于增加胶原纤维形成肉芽组织,加速伤口愈合过程中上皮再生。

血管生成是一个增殖阶段伤口愈合的一部分,其中包括内皮细胞的迁移和增殖和血管生成。这个过程开始早在第三天受伤后(37]。VEGFA是许多伤口愈合的关键调节器事件,包括血管增生、上皮形成,胶原沉积(38]。此外,它导致血管舒张,内皮细胞迁移,和内皮细胞增殖39]。在这里,我们报告,之后d .刀治疗,在伤口VEGFA强烈的表达诱导5日由于细菌的增殖。然而,的表达VEGFA©n IG组显著低于其他组。相比^{5 t}h天,炎症细胞在爬和HDG组织主要是由伤口组织,吸收和VEGFA表达也显著减少内皮细胞和成纤维细胞中观察到1^{0 t}h和1^{5 t}h天(数据5(一个)和5 (c))。世行的蛋白质条带表达式的结果是一致的与免疫组织化学。

一些细胞因子(il - 1β肿瘤坏死因子-α和il - 6)一直被认为是代表促炎细胞因子在伤口愈合。肿瘤坏死因子-α在伤口愈合的炎症阶段可以刺激炎症诱导的连锁反应,激活炎性细胞因子的表达和生产如il - 1和il - 6 (40]。它参与早期伤口愈合反应的起始。在伤口愈合,它可以改善组织修复通过促进炎症细胞的激活和调节免疫功能,以及加速角质细胞的迁移和增殖。然而,过度和不平衡的关系与其他细胞因子会引起一系列的炎症损伤。il - 1β也是一个巨噬细胞产生的促炎因子的激活,可以刺激热产生的影响和促进伤口的生长和愈合,在炎症反应中起着关键作用40]。最早的和最重要的细胞因子在炎症,肿瘤坏死因子-α可以促进形成的il - 1和il - 1还可以诱导释放肿瘤坏死因子-α。细胞因子il - 6是一种多细胞广泛的生物活性,参与免疫反应,炎症反应和抗感染防御。il - 6基因表达促进炎症细胞的细胞核,以及中性粒细胞的激活和聚集,并诱发急性反应蛋白在肝组织的生产通过与受体结合激活MAPK信号转导途径,这是一个重要指标反映炎症和组织损伤的严重程度,及其表达与创伤的程度呈正相关41]。严重多发伤患者的il - 6水平显著增加,特别是在患者合并感染,所以它可以作为一个指标来判断炎症的程度(31日]。这项研究的结果表明,促炎因子显示动态变化在伤口愈合的过程。纵向比较显示在三个时间点呈下降趋势,表明炎症状态是本质上与伤口愈合有关。在疾病过程中,促炎的因素,如肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β显示,协同作用,这可能与上述炎症连锁反应。TNF的表达α、il - 6和il - 1β在IG组明显高于正常组在每个时间点,伤口愈合时间呈负相关,表明病理炎症引起的促炎因子的高表达是感染伤口延迟愈合的原因。TNF的表达α、il - 6和il - 1β两组干预d .刀比IG组显著降低,同时,愈合率显著增加,表明促炎因子的调节会影响伤口愈合率。此外,伤口治疗d .刀在短时间内再生上皮细胞层由于低水平的炎症和增加的成纤维细胞(圆)染色,图3(一个)),最终导致更快的伤口缝合。

澄清的目标路径d .刀治疗,我们首先研究了NF -κB信号通路,即主要治疗目标途径激活常见的炎症性疾病。肿瘤坏死因子-的绑定α肿瘤坏死因子受体(TNFR)激活NF -κB通路和诱发慢性炎性疾病,如风湿性关节炎、炎症性肠病、多发性硬化症、和动脉粥样硬化(42,43]。d .刀治疗减少了我的退化和磷酸化κBα和NF -κB p65蛋白IKK和抑制磷酸化的上游信号α/β,这表明d .刀影响IKK的形成复杂的NF -κB信号通路(图7)。因为炎症是一个复杂的网络参与多个信号级联,我们也研究的影响d .刀其他信号通路。它有效地抑制MAPK信号转导通路和PI3K / Akt(数字8和9)。信号通路进行了综述和呈现在图10。我们的研究结果表明,d .刀抑制炎性介质、有关生长因子表达的增强,抑制nf -κB, MAPK和PI3K / Akt信号通路。总之,这些结果支持的潜在用途d .刀作为一种新颖的局部抗炎剂伤口感染(图S1:初步的植物化学的研究d .刀。的质谱L-epicatechin (a), syringic酸(b)、儿茶酸水合物(c)、槲皮素(d)、没食子酸(e)、没食子酸甲基酯(f)、没食子酸乙酯(g),芹黄素(h)和柚苷配基(我))。

5。结论

研究结果表明,d .刀应用加速感染性伤口愈合的进展及时调节许多细胞因子和生长因子的表达,包括TNF -α、il - 6、il - 1β、VEGFA TGF -β₁。它能减少炎症和血管生成,提高感染性伤口的成熟。机械的研究证明d .刀抑制NF -κB信号以及MAPK和PI3K / Akt信号通路。总之,d .刀展示了潜在的治疗皮肤伤口感染伤口和它可以设想为一个新的代理加速感染性伤口愈合的空间站。

缩写

d .刀:	Dracontomelon刀
层:	乙酸乙酯
大肠杆菌:	大肠杆菌
铜绿假单胞菌:	铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌:	金黄色葡萄球菌
il - 6:	白细胞介素- 6
il - 1β:	Interleukin-1β
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α
VEGFA:	血管内皮生长因子A
TGF -β1:	转化生长因子-β
NF -κB:	核因子kappa-B
PI3K:	磷酸肌醇3-kinase
MAPK:	增殖蛋白激酶
搞笑:	感染组
爬下:	低剂量组
HDG:	高剂量组
UIG:	Uninfection集团
他:	Hematoxylin-eosin
ELISA:	酶联免疫吸附试验
PMSF:	Phenylmethylsulfonyl氟化
BCA:	Bicinchoninic酸测定
PVDF:	聚乙二烯二氟化物
SD:	标准偏差
方差分析:	单向方差分析。

数据可用性

和/或分析在这项研究中使用的数据集可以从相应的作者在获得合理的请求。

伦理批准

中国人民解放军总医院的批准这个项目。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

J.-x。温家宝研究构思和写的手稿。z徐准备样品。马x检查数据。杨绍明。关铭赵设计研究和修正。所有数据生成的内部,没有造纸厂使用。所有作者同意负责所有方面确保完整性和准确性的工作。

确认

这项工作是财政支持的国家主要药物发现项目(批准号2015 zx09j15102 - 004),四川教育部门的科学基金会(18 za0186),和西华大学人才引进项目(Z211060)。

补充材料

补充文件1:初步的植物化学的研究d . dao。(补充材料)