文摘

类黄酮的杨梅酮丰富蔬菜和各种生物活性属性,包括抗炎和抗氧化活动。在目前的研究中,我们探讨了杨梅酮对酒精诱发胃溃疡大鼠模型。诱发胃溃疡,绝对乙醇(5毫升/公斤体重)口头管理每个老鼠。积极的控制和myricetin-treated组给予口服剂量奥美拉唑(20毫克/公斤)或杨梅酮(12毫克/公斤),分别1小时前政府绝对的酒精。我们发现,预处理与杨梅酮显著下降,饮酒导致的胃溃疡出血、充血、胃粘膜上皮细胞的损失。杨梅酮预处理降低丙二醛(MDA)水平和增加的总谷胱甘肽(GSSG /谷胱甘肽)和超氧化物歧化酶(SOD)在胃组织。此外,它的表达水平升高cyclooxygenase-1 (COX-1)和前列腺素E2(铂族元素2)和减少核因子的磷酸化(NF -κBκB)。在一起,这些结果表明,杨梅酮有效地阻止了氧化损伤,抑制ethanol-induced急性胃损伤刺激铂族元素2生产和抑制NF -κB激活。我们建议杨梅酮可能是另一种治疗胃损伤由饮酒引起的。

1。介绍

胃溃疡(也称为消化性溃疡)是一个主要的肠胃失调的全球发病率和患病率也在增多。胃溃疡的流行在西方国家估计为0.2 -0.5%,2 - 3%在亚洲国家,和复发率高达60% (1]。与扰动相关的病变有多个病因之间的平衡因素,寻求保护或破坏粘膜上皮细胞(2]。的破坏性因素包括过度使用非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药),吸烟,幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)感染、饮酒、心理和生理应激(3]。其中,过度饮酒被认为是胃粘膜损伤的主要原因(4]。

目前用于治疗胃溃疡的策略基于溃疡的原因;它们包括服用ppi抑制剂的使用,旨在消除抗生素幽门螺旋杆菌感染(如果存在),应用程序的组胺2型受体阻滞剂减少酸生产(5]。胃acid-neutralizing抗酸药和cytoprotective代理,如硫糖铝、米索前列醇,也可以使用。然而,许多这些药物可以有不受欢迎的副作用和成本负担强加于胃溃疡患者(6,7]。因此,研究人员继续寻找新的代理,可以用于治疗胃溃疡更安全、更少的副作用,更高的效率和更低的成本。

杨梅酮(3、5、7-trihydroxy-2 - (3、4、5-trihydroxyphenyl) chromen-4-one)是一种天然类黄酮,属于黄酮醇子类,通常存在于蔬菜、水果、浆果、草药,和茶8]。尤其明显的在某些天然产物,包括新鲜蚕豆(菜豆)、红茶、西兰花(芸苔属植物oleracea)、甜椒(甜椒),大蒜(大蒜)[9]。杨梅酮有多个生物学性质,包括抗氧化剂(10),抗菌11],抗病毒[12,抗炎13,抗肿瘤14],止痛剂[15],王亚南[16),低血糖(17,降血脂药18],护心[19],和神经damage-inhibiting [20.)的行动。杨梅酮抑制胃H+K+腺苷三磷酸酶在胃肠道,因此可能是一个有用的起始化合物开发新代理商缓解胃酸分泌(21]。此外,杨梅酮已被证明,以防止溃疡性结肠炎和结直肠肿瘤在葡聚糖硫酸酯钠(DSS)诱导小鼠模型(22,23]。根据之前的报道,我们推测,杨梅酮可能antiulcerogenic潜在的腹部。在这里,我们研究了杨梅酮的保护作用ethanol-induced胃损伤大鼠模型。

2。材料和方法

2.1。化学

我们获得了杨梅酮(化学文摘登记号529-44-2;纯度97.8%)从东京化工有限公司有限公司(日本东京)。

2.2。动物

在6至7-week-old的雄性SD (SD)中提供的老鼠体重150 - 250克东方生物(韩国)。动物生长在一个恒定的温度( )与常规12:12 h:黑暗周期和驯化实验前1周,如前所述[2,24,25]。动物实验的动物实验伦理委员会批准忠南国立大学(学校批准文号:制度- 00444),进行符合美国国立卫生研究院的指导实验室动物保健和使用的。

2.3。实验设计

口服引起的胃损伤是绝对的乙醇,如前所述[2,24,25]。老鼠被随机分为以下四组(表1;n=每组6 - 7):正常控制(NC)、乙醇(EtOH),奥美拉唑+ EtOH性+ EtOH),杨梅酮+ EtOH(最高产量研究+ EtOH)。诱导前动物禁食24 h。数控组的老鼠被给予5毫升/公斤体重(合著)磷酸盐(PBS;车辆),而那些EtOH,渗出性中耳炎+ EtOH,最高产量研究+ EtOH组被给予相同体积(5毫升/公斤合著)绝对乙醇的口腔填喂法。1 h酒精政府之前,当地+ EtOH组给予口服剂量奥美拉唑(20毫克/公斤合著)和最高产量研究+ EtOH组给予杨梅酮(12毫克/公斤合著)。杨梅酮剂量的确定根据前一剂量ethanol-induced实验大鼠溃疡。1 h乙醇治疗后,所有的动物都被过量的牺牲50毫克/公斤戊巴比妥,和胃被收集。

表1
动物研究小组设计。
2.4。宏观测定胃溃疡面积

胃大弯收集和分析,和胃粘膜与生理盐水冲洗。胃组织被夷为平地,拍照。图像分析软件(ImageJ 46;美国国家卫生研究院)是用于分析溃烂面积(UA;毫米2),UA比胃区和抑制比例进行了分析。抑制百分比计算如下:((UA控制−治疗UA) / UA控制))×100%。

2.5。组织病理学检查

胃组织中中性缓冲福尔马林固定在10% (NBF),常规石蜡包埋的组织病理学方法,分段在4µm,苏木精和伊红染色())。

2.6。测定丙二醛(MDA)、总谷胱甘肽(GSSG /谷胱甘肽),超氧化物歧化酶(SOD)

分析MDA、胃癌样本准备在PBS丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)来防止进一步氧化。组织匀浆在10000 g离心5分钟,收集上清液,MDA水平测定使用商用设备(细胞生物学实验室,美国)。是规范化水平基于每个溶菌产物的总蛋白浓度。总谷胱甘肽的评估,组织溶解产物在5%偏磷酸(MPA)和离心机在12000 rpm为15分钟 ,和总谷胱甘肽是由商用设备(细胞生物学实验室)和归一化的蛋白质浓度。活动评估抗氧化的酶、SOD胃组织均质在PBS和离心,收集上层的SOD活性的评估使用商用设备(开曼群岛、美国)。结果归一化的蛋白质浓度和表示为U /毫克的蛋白质。用于规范化的蛋白质浓度测定布拉德福德的方法。

2.7。前列腺素E测定2(铂族元素2)

胃组织样本均质和离心机,上层的铂族元素的评估2美国使用商用设备(开曼)。吸光度测量在450 nm ELISA标(Bio-Rad实验室、美国)。

2.8。免疫印迹分析

胃组织被切割和地面radioimmunoprecipitation化验(里帕)缓冲区(细胞信号技术,美国)含有磷酸酯酶和蛋白酶抑制剂(罗氏公司、德国)。样本离心,收集上清液。布拉德福德的蛋白质含量进行了分析方法。组织蛋白质分离8%钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page),转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(美国微孔)的350毫安2 h,被孵化5%牛血清白蛋白(BSA)在PBS含有0.1%渐变20 (PBS-T) 1 h,然后一夜之间孵化主要抗体 。利用抗体识别κB (p-NF - phospho-nuclear因素κB), NF -κB(细胞信号技术),β肌动蛋白(美国Sigma-Aldrich)。PBS-T,清洗后膜暴露在兔子或鼠标二级抗体,为2 h和发展合适,用免疫印迹化学发光底物(美国热科学)。

2.9。RNA分离和定量实时PCR分析

RNA分离试剂盒试剂(美国英杰公司)按照制造商的协议。RNA水平评估的强度在260 nm,及其纯度决定基于强度比260 nm - 280 nm。RNA是反向转录(ReverTra Ace工具包、Toyobo、日本),和感兴趣的mrna的表达水平测量使用StepOnePlus实时PCR系统(美国应用生物系统公司)。记录的水平计算重复样品结果归一化后的mRNA的表达glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)。利用引物配对和PCR条件表中列出2。PCR制品数据表示为目标基因的褶皱变化相对于GAPDH水平,计算使用2-ΔΔCt方法。

表2
引物对用于存在。
2.10。统计分析

数据表示为意味着±标准差(SD)。统计学意义决定使用单向方差分析(方差分析),和团体之间的意义是由图基的多重比较分析测试。P值< 0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。杨梅酮对Ethanol-Induced急性胃损伤的影响

没有发现损伤在正常对照组(图1(一))。严重的溃疡伴有elongated-band出血胃的腺体层中被发现的老鼠注射组(图1 (b)),但这ethanol-induced胃损伤减毒的奥美拉唑和myricetin-pretreated团体(数字1 (c)和1 (d))。UA alcohol-treated组为174.3±41.7毫米2在老鼠身上,而使用奥美拉唑或杨梅酮54.0±42.8毫米2抑制(69%)和74.2±19.1毫米2抑制(57%),分别为(表3)。组织病理学分析显示严重出血,粘膜下水肿,从胃胃粘膜组织的损失ethanol-treated老鼠(图2 (b)),但这ethanol-induced损失明显减少了奥美拉唑或杨梅酮预处理(数据2 (c)和2 (d))。这些结果表明,杨梅酮显著减少饮酒导致胃溃疡和损伤大鼠模型。

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图1
发现胃粘膜的总值。(一)正常对照组。(b) Ethanol-treated组。(c)奥美拉唑+ ethanol-treated组。(d)杨梅酮+ ethanol-treated组。
表3
杨梅酮对胃溃疡的影响区域(UA,毫米2)和抑制百分比。
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图2
胃组织的组织病理学检查。(一)正常对照组。(b) Ethanol-treated组。(c)奥美拉唑+ ethanol-treated组。(d)杨梅酮+ ethanol-treated组。胃粘膜中没有干扰中检测出正常对照组,而ethanol-treated组显示严重破坏表面的上皮细胞和坏死病灶。黑色箭头表示严重出血的粘膜层。放大,100和400××。
3.2。杨梅酮对脂质过氧化和抗氧化酶的影响

胃组织MDA水平显著增强在ethanol-treated老鼠比正常对照组。奥美拉唑或杨梅酮预处理显著降低MDA ethanol-induced增加(图3(一个))。胃总谷胱甘肽浓度ethanol-treated组和SOD活性低于正常对照组,但奥美拉唑或杨梅酮预处理明显减弱这些减少,这样总谷胱甘肽浓度和SOD活性是奥美拉唑,myricetin-pretreated组高于ethanol-treated组(数字3 (b)和3 (c))。这些发现表明,杨梅酮显著减轻乙醇诱导的氧化应激管理。

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图3
MDA的水平,总谷胱甘肽(GSSG /谷胱甘肽),和胃组织中超氧化物歧化酶(SOD)。(一)MDA浓度。总谷胱甘肽浓度(b)。(c) SOD活性。价值观代表意味着±SD ( 和 与正常对照组相比, 和 相比ethanol-treated组)。
3.3。NF -杨梅酮对激活的影响κB

免疫印迹分析显示,磷酸化的NF -κB在胃组织中增加ethanol-treated组与正常对照组相比,但奥美拉唑或杨梅酮预处理明显减毒NF -κB活动而ethanol-treated组(图4)。这表明杨梅酮产生保护性活动通过抑制NF -κB-dependent途径。


图4
NF -κB的活动。价值观代表意味着±SD ( 和 与正常对照组相比, 和 相比ethanol-treated组)。
3.4。杨梅酮对Cyclooxygenase-1的表达的影响(COX-1)和铂族元素2

COX-1的信使rna表达水平升高后乙醇,这增加显著增强预处理与奥美拉唑或杨梅酮(图5(一个))。铂族元素的水平2略低的老鼠受到乙醇胃内的管理与正常对照组相比,但这水平显著增加了预处理与奥美拉唑或杨梅酮(图5 (b))。这些结果表明,杨梅酮可能显示ethanol-induced胃损伤保护作用至少部分通过COX-1和铂族元素2。

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图5
表达COX-1和铂族元素的生产2。(一)COX-1 mRNA水平。(b)铂族元素2的水平。价值观代表意味着±SD ( 和 与正常对照组相比, 和 相比ethanol-treated组)。

4所示。讨论

杨梅酮是一种黄酮类药物提供很多益处,如抗氧化、抗炎、抗癌活动(10,13]。在这里,我们评估了药物的潜在影响杨梅酮对ethanol-induced在SD大鼠胃粘膜损伤。我们发现杨梅酮预处理保护胃组织对无水酒精导致的急性损伤,抑制胃损伤、脂质过氧化、NF -κB激活而增加抗氧化活性和铂族元素2表达式。

Ethanol-induced胃部溃疡是一个经典的模型,通常用于评估研究药物在胃里的保护作用,特别是cytoprotective和/或抗氧化活动(26,27]。在管理、乙醇迅速穿透胃粘膜;这让粘膜层,盐酸和胃蛋白酶28),蛋白水解和水解作用,破坏细胞膜引起细胞表皮脱落,侵蚀和溃疡29日]。在这里,我们表明,杨梅酮预处理抑制溃疡∼57%在这个模型中,从而显示奥美拉唑的疗效相似。杨梅酮的抗溃疡的作用是支持我们的组织病理学检查,显示,myricetin-administered老鼠完整的粘膜结构和腺体的元素,以及减少粘膜下水肿和出血。这些结果表明,杨梅酮对ethanol-induced保护胃损伤胃粘膜。

酒精引起的胃损伤密切相关的生成活性氧(ROS),反映病变是导致氧化与抗氧化平衡细胞过程(30.]。这种转变到一种氧化状态起源于hydroperoxy自由基和超氧化物阴离子的释放,增加导致的氧化应激可以可视化为MDA水平的增加(31日,32]。MDA生成多不饱和脂肪酸的过氧化作用或相关细胞膜和内酯作为ROS-induced细胞损伤的标志(33]。谷胱甘肽和SOD防御机制,保护细胞免受ROS-induced脂质过氧化(34]。谷胱甘肽能抑制脂质过氧化反应,进行清除自由基;它是最丰富的细胞抗氧化剂,能消除各种谷胱甘肽过氧化氢氧化酵素(35]。草皮,与此同时,作用于氧化应激过程中产生过氧化物,将它转化为过氧化氢(36]。在目前的研究中,口服的酒精显著增加MDA的含量和总谷胱甘肽和SOD活性下降,支持认为氧化应激的发病机制中发挥着重要作用ethanol-induced胃损伤。预处理与杨梅酮显著增加SOD和总谷胱甘肽水平,减少MDA。这些发现与先前的报道是一致的,杨梅酮产生很强的抗氧化活性,清除羟基自由基(37),可以恢复细胞抗氧化防御酶,包括SOD、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx) [38]。综上所述,我们的研究结果表明,杨梅酮似乎发挥gastroprotective效应通过抗氧化机制。

活性氧激活NF -κB,这是一个重要的监管机构,促进炎症相关基因的转录,细胞生存,和免疫反应。在ethanol-induced胃溃疡形成,NF -κB控制基因转录的增加编码诱导一氧化氮合酶(间接宾语),cox - 2和炎性细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)、白介素6 (IL)和IL - 1β(2]。NF -κB表达因此胃溃疡的形成至关重要的关系,使其治疗炎症性疾病的一个合乎逻辑的目标(39]。在这里,我们发现,酒精政府诱导显著增加的NF -κB与杨梅酮显著抑制预处理。这些结果与先前的报道是一致的,杨梅酮产生抗炎活动通过压制我κ激酶/ NF - BκB-dependent信号(40,41]。

胃粘膜细胞产生前列腺素(后卫),作为重要的内源性介质在急性胃粘膜损伤(42,43),导致粘膜防御通过调节酸和刺激的粘液的分泌,碳酸氢盐和磷脂。后卫也加速恢复上皮和粘膜愈合(44通过增加血管通透性)和调节炎症反应,导致血管扩张,血流量增加45]。动力由考克斯生成酶;其中,COX-1产生动力,在稳态功能发挥重要作用,包括维护粘膜的完整性和粘膜血流量(46]。在这里,我们发现COX-1和铂族元素的水平2(最丰富的前列腺素47])myricetin-pretreated组明显高于alcohol-treated组。这表明,杨梅酮通过COX-1和铂族元素2对ethanol-induced胃粘膜损伤起到保护作用。

我们在此使用奥美拉唑,服用ppi抑制胃酸分泌(5),作为一个积极的控制。奥美拉唑可以产生不良的负面影响和成本负担强加于胃溃疡患者(6,7),有越来越多的需求替代策略,可以用更少的副作用治疗胃肠疾病。杨梅酮之前显示抑制H+K+腺苷三磷酸酶和减弱胃酸分泌,暗示其可能缓解胃acid-related疾病当单独使用或联合治疗(21]。目前的研究表明第一个证据,杨梅酮可能gastroprotective对酒精诱发胃溃疡的影响。杨梅酮的gastroprotective效应似乎至少部分由它能够降低氧化应激,抑制NF -κB,刺激铂族元素2分泌。还需要进一步的研究来证实杨梅酮是一个可行的选择,胃溃疡疾病的临床管理。

5。结论

我们的研究结果表明,杨梅酮有效地阻止了氧化损伤,抑制ethanol-induced急性胃损伤刺激铂族元素2生产和抑制NF -κB激活。杨梅酮可能是另一种治疗胃损伤由饮酒引起的。

数据可用性

从本研究的结果生成的数据是包含在这篇文章。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是支持的一个研究忠南国立大学的奖学金。