文摘
目标。确定的止痛和退热的活动平板来自穿心莲香乙酸乙酯部分(AS201-01)动物模型。方法。平板电脑来自AS201-01包含一个相当于35毫克andrographolide /平板电脑。镇痛活性决定使用醋酸段翻滚测试成年雄性老鼠。记录一个扭动秒表和被定义为拉伸腹部和/或拉伸的至少一个后肢。退热的活动的决心,发热引起的皮下注射15%的w / v啤酒酵母为成年雄性老鼠。直肠温度监测,1,2,3,4小时后治疗。结果。结果表明,AS201-01平板有止痛和退热的活动。在痛苦挣扎的醋酸段模型中,AS201-01平板电脑方面表现出显著的镇痛效应减少了66.73%扭动的剂量响应andrographolide 50毫克/公斤体重比阴性对照组。平板电脑还显示一个重要退热的效果。最大的退热的效果观察后的第三个小时管理AS201-01 andrographolide平板的剂量100毫克/公斤体重。结论。平板电脑的穿心莲香乙酸乙酯部分(AS201-01)展出止痛和退热的活动。
1。介绍
非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)在全球范围内用于治疗炎症,疼痛和发烧。然而,他们经常产生明显的副作用,对身体的各种器官有毒,导致肾功能衰竭等问题,过敏反应,听觉能力降低,增加出血的风险,由于干扰血小板功能(1,2]。因此,新化合物的开发需要有止痛和退热的活动没有副作用(3]。
传统使用的药用植物为新药的开发提供合适的资源(4]。穿心莲香,俗称“苦味药之王”,是一个属于爵床科草本植物的家庭。这种植物被广泛生长在热带地区,尤其是在印度、斯里兰卡、巴基斯坦和印尼(5]。穿心莲香是一个最受欢迎的传统药用植物用于治疗发烧和传染病。这种植物已经报道有抗炎、抗菌、抗氧化、抗癌、治疗糖尿病药,抗疟,王亚南,免疫增强药、抗过敏药,止痛和退热的效果6- - - - - -10]。
几项研究已经进行确定的止痛和活动答:香。分离出的化合物答:香穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯,即14-deoxy-11 12-didehydroandrographolide,以及衍生品的,显示止痛和退热的活动(11]。镇痛活性测定在活的有机体内在小鼠使用热板和翻滚测试中,虽然退热的活动确定在活的有机体内在老鼠使用贝克yeast-induced热测试。Andrographolide产生显著的镇痛效应的剂量4毫克/公斤体重给予腹腔内(11- - - - - -13]。乙醇提取答:香显示翻滚测试小鼠的镇痛活性(2]。的乙醇提取物答:香介绍了口头的老鼠,结果表明,答:香34%乙醇提取物的镇痛活性。双氯芬酸钠、积极控制了76%的镇痛活性。
先前的研究已经报道,乙酸乙酯部分答:香包含andrographolide相比高出27.22%乙醇提取物(14]。因此,增加的乙酸乙酯分数的可能性答:香将会有更强的止痛和退热的效果比乙醇提取。然而,这从未被测试。这里我们展示第一调查止痛和乙酸乙酯部分平板电脑的活动答:香。
2。材料和方法
2.1。材料
本研究中使用的植物材料穿心莲香粉与1.82% andrographolide内容来自制药业PT Kimia Farma Tbk (Persero)。、印度尼西亚。平板电脑来自答:香乙酸乙酯部分(AS201-01)包含一个相当于35毫克andrographolide /平板电脑,是在学院制药、意大利Airlangga。
2.2。提取和分离
Andrographolide中的主要活性化合物答:香。最佳溶于甲醇和乙醇,溶解度增加增加的温度范围在15—50°C (15]。可以使用乙醇作为提取溶剂和适合人类食用16]。因此,使用乙醇进行提取温度50°C优化提取结果。的答:香粉高达1公斤是使用6 L的96%的乙醇作为提取溶剂。提取是由60分钟的搅拌温度50°C。提取过滤,进一步提取残留再次使用6 L(96%乙醇。第二次提取与第一个提取过滤和聚集。总溶剂用于提取12 L。收集到的液体提取然后蒸发40%的初始体积获得集中提取。集中提取然后分馏与water-ethyl乙酸(2:1)得到乙酸乙酯混合物分数。液体分数然后蒸发获得干燥的乙酸乙酯部分(14]。
2.3。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯测定乙酸乙酯部分和平板电脑中的内容
Andrographolide乙酸乙酯部分内容和平板电脑是由薄层色谱法(TLC)微。Andrographolide标准(奥德里奇365645 - 100毫克)和样品(乙酸乙酯部分和AS201-01平板)被发现在一个薄层色谱硅胶GF254 60盘子。chloroform-methanol解决方案(9:1)使用的流动相。TLC板就分析下紫外线波长200 - 400纳米的CAMAG薄层色谱扫描仪3和最大吸光度被发现228海里。andrographolide标准确定的回归曲线,然后它被用来计算andrographolide内容在分数和平板电脑14]。
2.4。配方和生产乙酸乙酯部分平板电脑
乙酸乙酯部分平板电脑生产含有35毫克andrographolide。每片的乙酸乙酯部分计算基于andrographolide内容决定之前。平板电脑组成如下:乙酸乙酯部分(相当于35毫克andrographolide) 167.5毫克,PVP k 30 13毫克,微晶纤维素(MCC) 150毫克,淀粉木薯150毫克,乳糖120毫克,peg - 4000 13.75毫克,羧甲淀粉钠(江源发展促进会)26个毫克,讨论4.875毫克,硬脂酸镁4.875毫克。平板电脑的总重量是650毫克。
平板电脑在实验室规模生产,每批100平板电脑。生产平板电脑,首先,乙酸乙酯部分被溶解在足够数量的乙醇。peg - 4000和PVP k 30被添加和混合。MCC当时作为稀释剂添加,紧随其后的是淀粉木薯和乳糖。混合物然后干在温度40°C 12小时,筛选18-mesh筛(1毫米)。江源发展促进会、谈话和镁硬脂酸添加稀释剂和润滑剂,分别,然后混合15分钟。准备的混合物被压缩成一个平板电脑使用13毫米打孔压片机。
2.5。评价平板电脑
的平板电脑答:香乙酸乙酯部分(AS201-01)评估了以下参数17]。
2.6。平板电脑重量差异
平板电脑的高重量差异有能力影响剂量。因此,重量差异进行了测试。20平板电脑重单独使用一个电子天平(Precisa)和平均重量计算。
2.7。硬度
平板电脑必须有一定的硬度,承受机械冲击。片剂硬度还会影响溶解释放,影响药物的生物利用度。因此,进行硬度试验用硬度计(Schleuniger)。跑道由一个电动马达驱动压平板电脑到平板电脑休息,规模指令给出了强度值(公斤/厘米2)。推荐值是4 - 8公斤/厘米2这表明硬度的平板电脑。
2.8。易碎性
平板电脑重,放在设备(Friabilator),那么操作设备多达100转(25 rpm)。然后,平板电脑是五箱和reweighed。减肥不应超过0.5 - -1%。易碎性百分比(%F)计算如下:
2.9。解体的时间
解体时间评估使用解体装置在37±2°C。我们放置1平板电脑在每个行李架6管的装配,和仪器操作使用水。我们观察到平板电脑所需的时间完全瓦解。30分钟后,行李架总成从液体被取消,我们观察到平板电脑。所有的平板电脑应该完全解体。如果1或2平板电脑无法分解,我们12日重复测试额外的平板电脑。不少于16 18测试平板电脑必须完全解体后30分钟。
2.10。实验动物
雄性老鼠(BALB / C株,25 - 30 g)是用于止痛剂活性试验,和雄性老鼠(纯种菌株,100 - 150克)是用于退热剂活性试验。动物被维护在一个标准的动物球饮食(NUVO来说丸)和水随意在动物实验室研究所的热带疾病,意大利Airlangga,泗水。动物们保持在标准温度(25±1°C)和12/12 h光/暗周期。所有的动物都适应的研究(前七天4]。许可和批准了动物研究从兽医学院,获得意大利Airlangga,批准文号753 -柯。
2.11。镇痛活性试验使用醋酸段翻滚测试
镇痛活性是由乙酸腹部收缩测试(18,19]。25雄性小鼠随机分为5组,每组由5老鼠。组1治疗与羧甲基纤维素(CMC-Na 0.5%)(如负控制)。组2与标准药物治疗的剂量双氯芬酸钠40毫克/公斤体重(2]。组3、4、5与AS201-01药片治疗剂量等于12.5,25日,分别和andrographolide 50毫克/公斤体重。所有的口服药物治疗。三十分钟后政府所有的治疗,每只小鼠注射1%醋酸的剂量腹腔内(10毫升/公斤体重20.,21]。5、15、25、35和45分钟乙酸注射后,扭动反应5分钟期间观察到的数量清点和记录(11]。
镇痛活性的百分比计算如下: 在哪里是翻滚的数量,c是消极的控制,t是测试。
2.12。在老鼠身上使用Yeast-Induced高热的退热剂活性测试
退热的活动评估啤酒酵母引起的发烧(51475年σ)方法建立大鼠后做了一些调整(13]。正常的温度记录之前注入啤酒酵母使用老鼠的直肠使用数字探头温度计路线(BIOSEP®)向直肠3厘米的深度。发热是由皮下注射20%的w / v暂停啤酒酵母在蒸馏水剂量10毫克/公斤体重。18小时后,直肠温度的上升被记录,只有动物显示温度的增加至少0.6°C被选作研究。动物被随机分为6组,每组包含五个老鼠。组1接受CMC-Na 0.5%(如负控制)。组2与标准治疗药物对乙酰氨基酚的剂量(150毫克/公斤体重21]。组3、4、5、6与AS201-01药片治疗剂量等于12.5,25岁,50岁,分别andrographolide和100毫克/公斤体重。所有的口服药物治疗。治疗后,每个动物的直肠温度再次记录每隔1小时到4小时。比例减少发热计算使用以下公式: 在哪里一个是正常的温度,B是酵母的直肠温度18 h后注入,然后呢Cn是直肠温度后1、2、3、4 h。
2.13。数据分析
结果被表示为均值±SEM(均值的标准误差)的六个动物。为统计分析、单因子变异数分析是紧随其后的是因果Dunnett测试多个比较。影响被认为是重要的 的水平。GraphPad Prism 7.0软件(GraphPad有限公司、圣地亚哥、钙、美国)是用于统计分析。
3所示。结果
3.1。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯测定乙酸乙酯部分和平板电脑中的内容
Andrographolide用的薄层扫描法测定乙酸乙酯馏分中的硫含量的方法使用Andrographolide(奥德里奇365645 - 100毫克)作为标准。Andrographolide内容在纯乙酸乙酯部分为20.90±2.72%和6.51±0.20% AS201-01平板制造从这个分数(表1和2)。这个结果是在准备andrographolide剂量为12.5毫克/公斤体重。
3.2。乙酸乙酯的配方、生产、和评估分数的平板电脑
AS201-01平板的几个物理特征评估根据Depkes RI的方法,201417]。AS201-01平板的规格如表所示3。平板电脑由Farmakope印尼满足规范要求。
3.3。镇痛活性
AS201-01平板电脑的影响在醋酸段老鼠提出了表中打滚4。结果表明,AS201-01平板显著降低( )扭动着计数在口服剂量依赖性的方式相比,消极的控制。观察最大抑制andrographolide 50毫克/公斤的AS201-01平板电脑(66.73%)。然而,双氯芬酸钠(参考药物)腹部翻腾的数量减少了74.62%。统计分析显示显著差异的三个剂量相比,双氯芬酸钠( )。双氯芬酸钠的抑制作用大于最高剂量的AS201-01平板电脑。
3.4。退热的活动
AS201-01平板电脑的影响和对乙酰氨基酚在大鼠发热yeast-induced表所示5。的皮下注射酵母直肠温度增加了1.26 - 2°C 18小时后注射。
AS201-01表现出一个退热的效果在第一小时后政府在剂量依赖性的方式明显不同( )从负控制。的剂量50和100毫克/公斤体重明显下降后,大鼠发热1小时( ),和温度的降低是更重要( )从2 h - 3 h相比,消极的控制。最大减少andrographolide观察到100毫克/公斤的AS201-01平板第三小时后管理(100%)。数据如图1。同时,最大的降低表明了扑热息痛(参考药物)后的第二个小时管理(100%)。减少的比例是下降在第三小时,四小时后显示最低的扑热息痛。这个活动概要文件可能是归因于他们的药物动力学特征。
4所示。讨论
药用植物是开发新药的重要来源,因为大多数这些产品被认为是生物活性化合物的负责治疗各种疾病没有任何副作用,以更低的成本22]。穿心莲香是一种最常用的传统药用植物,具有广泛的药理作用。Andrographolide是主要的组成部分答:香和可能的止痛和退热的效果负责答:香(11]。马达夫等人报道,穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯300毫克/公斤,口服药物,有明显的镇痛活性acetic-induced盘绕在老鼠剂量的100和300毫克/公斤体重12]。此外,剂量穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯180和360毫克/公斤体重还发现人类能够缓解发烧后第三天政府(23]。
答:香广泛用于传统医学和安全使用。口服急性毒性评价报告ethanolic提取的答:香上固定剂量5000毫克/公斤体重,没有明显的急性毒性效应(24]。与此同时,andrographolide作为生物活性的化合物答:香据报道,LD吗50高于5克/公斤体重口服治疗在雄性和雌性老鼠(25]。这些数据支持的安全使用答:香替代医学。
先前的研究已经报道,乙酸乙酯部分答:香andrographolide含量高于乙醇提取物(14]。根据结果,乙酸乙酯部分是进一步发展平板剂型,即AS201-01平板电脑。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的决心的乙酸乙酯部分内容用的薄层扫描法进行了方法。数据被用来制造AS201-01平板电脑使用乙酸乙酯部分作为活性成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯等于35毫克/平板电脑。乙酸乙酯部分(167.5毫克)包含35毫克andrographolide,需要产生一个平板电脑。乙酸乙酯部分可能包含其他二萜、黄酮和多酚化合物。答:香被称为源2′含氧类黄酮和labdane型二萜26- - - - - -28]。本研究使用andrographolide活跃的标志答:香由于其丰富和各种生物活性属性。因此,描述中包含的其他化合物的乙酸乙酯不执行。
AS201-01平板电脑被追究其止痛和退热的活动。镇痛活性决定使用醋酸段翻滚测试。醋酸段盘绕在老鼠是一个被广泛接受的反射模型,简单、敏感和有效的疼痛模型评估周边地表演止痛剂(29日,30.]。疼痛的特点提出了活动由腹腔内注射醋酸与腹部肌肉的收缩之后,扩展的后肢和伸长的身体部位,等收缩被认为是由当地的腹膜受体(31日]。醋酸诱发炎性疼痛的推动(毛细血管通透性32)和释放物质刺激疼痛神经末梢如5 -羟色胺、组胺、缓激肽、前列腺素(PGE2和PG2α)通过花生四烯酸环氧合酶(COX)酶[33,34]。前列腺素的释放,通过前列腺素神经末梢回应它E2 (PGE2)受体捡和传输疼痛和受伤的消息通过大脑神经系统和导致小鼠内脏蠕动着的刺激。前列腺素合成的抑制作用非常有效antinociceptive机制在内脏疼痛35,36]。双氯芬酸钠作为阳性对照。它是一种非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)镇痛,退热剂,抗炎活性。双氯芬酸执行的行动通过抑制前列腺素合成抑制COX-1和cox - 2 (37]。在我们的研究中,答:香平板电脑的数量显著降低剂量依赖性的方式得打滚。观察最大抑制andrographolide 50毫克/公斤的AS201-01平板电脑(66.73%)。这些发现强烈建议AS201-01平板显示其镇痛活性通过外围的机制,这是前列腺素生物合成的抑制作用于内脏感受器敏感乙酸(38]。
本研究也进行了评估的退热的活动AS201-01平板在动物模型(老鼠)。面包师的yeast-induced热测试,模拟致病性发烧,是一种低成本的、可靠的方法来评估新退烧药13,39]。发烧是由一些内生致热源如interleukin-1引起的β(il - 1β)和白介素、干扰素-α(IFN -α)、肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)、巨噬细胞蛋白1和前列腺素PGE2和PGI2等。啤酒酵母诱导肿瘤坏死因子-α和前列腺素的合成40,41]。
AS201-01平板显著的口服减毒的直肠温度yeast-induced发热大鼠。的疗效观察AS201-01平板电脑的退热的效果增加剂量依赖性的方式。观察最大减少剂量100毫克andrographolide /公斤AS201-01平板三小时后的政府(100%)。抑制前列腺素的合成和细胞因子释放的抑制可能是AS201-01平板的解热作用的可能机制。Andrographolide的主要化合物答:香据报道,镇痛、解热、抗炎活动,但是确切的机制尚不明了。沈等人报道,穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯抗炎效应的解释是通过抑制中性粒细胞粘附能力/轮回抑制Mac-1 upregulation [42]。
扑热息痛作为一个积极的控制在这个研究。它是一个标准的药物与中央镇痛效应和由于降血清素激活的激活途径(43]。的最大发热减少显示了扑热息痛作为参考第二个小时后药物管理(100%)。对乙酰氨基酚是广泛代谢和排泄尿液不变,只有2 - 5%的治疗量。快速和相对均匀分布在组织和血浆半衰期1.5 - 2小时(44]。扑热息痛的快速吸收导致发热很高比例的减少在第一小时后药物管理局和减少达到最大值后第二个小时的管理。扑热息痛的活动是减少在第三小时,四小时后显示最低的活动管理。扑热息痛的活动概要文件是按照它的药物动力学特征。另一方面,andrographolide需要更长的时间达到最大限度的减少而扑热息痛。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯药物动力学和口服生物利用度的研究在老鼠和人类Panossian et al。研究报道,在老鼠的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯最大浓度的血浆政府估计2小时后,血浆半衰期是3小时。此外,很大一部分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯(55%)绑定到等离子体蛋白质,和只有有限可以进入细胞(45]。生物药剂学分类系统(BCS)把andrographolide列为第三类药物低溶解度和低渗透(46]。它显示口腔生物利用度由于其高亲油性,低溶解度迅速转型,由22[流出47]。这andrographolide药物动力学资料表明AS201-01平板电脑可能需要更多的时间来产生最大退热的活动与扑热息痛。AS201-01平板电脑仍显示更高的活动在第四政府与扑热息痛。建议AS201-01平板电脑是潜在的一种退热的药物。
各种研究报告的止痛和活动答:香提取或其化合物。另一方面,人们却很少关注指向的发展答:香作为一个草药产品。这项研究证明了止痛和退热的活动的乙酸乙酯部分制定答:香在平板电脑剂型。乙酸乙酯的配方研究分数作为一个剂型需要进一步进行专门提高生物利用度,减少时间达到最大血浆浓度。
5。结论
乙酸乙酯部分平板电脑答:香表现出止痛和退热的活动。最大的止痛和退热的活动是观察到50毫克andrographolide andrographolide /公斤和100毫克/公斤的乙酸乙酯部分平板电脑的答:香。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者感谢意大利Airlangga资金通过药房学院优秀的研究(Penelitian Unggulan Fakultas Farmasi),合同编号。1145 / UN3.1.5 / LT / 2018。