文摘
背景。黄芩(某人),常用中药,治疗炎症和疼痛的条件。本研究的目的是检查某人偏头痛的效果。材料和方法。我们研究了某人的临床应用基于获得的数据来自台湾全民健康保险的研究数据库和证实它是常用的在台湾治疗头痛。建立了一个实验性偏头痛模型大鼠的腹腔内注射硝酸甘油(NTG、10毫克/公斤)。与某人预处理是口服NTG政府前30分钟。老鼠受到migraine-related行为的测试和分析使用EthoVision XT 12.0软件视频。结果。探索性和运动行为的频率是相对NTG组低于对照组,而休息和修饰行为的频率增加。这些现象都是由预处理改善为1.0 g / kg某人的总时间花在光滑的表面上再NTG组比对照组,但时间缩短预处理与1.0克/公斤…结论。预处理为1.0 g / kg某人宽慰migraine-related行为在实验NTG-induced偏头痛模型。因此结果表明预处理和1.0克/公斤某人对偏头痛的治疗有益。
1。介绍
偏头痛是一种普遍和复杂的神经紊乱,表现为周期性的单边,脉动,甚至是严重疼痛,加重日常身体活动,并伴有恶心、畏光,或者声音恐惧症(1]。根据最近的大规模研究中,偏头痛在全世界影响大约12%的人口,有更高的发病率在女性人群中,学校/学院的学生,和城市居民2,3]。
传统中药(TCM)已被用于治疗偏头痛几千年来运用中医理论经验。最近,大量的基础和临床研究证实中医治疗偏头痛的科学的好处(4- - - - - -7]。的根源黄芩(某人,在中药黄芩)是一个中医草药,分布在国家如中国、日本、朝鲜、俄罗斯、蒙古(8]。众所周知,从传统中医的经验,镇痛,抗炎,神经保护作用[9,10]。偏头痛是现在被称为炎症血管疾病(11]。虽然某人有抗炎和神经保护效力,某人在中医临床或实验研究学术界对偏头痛的治疗几乎没有被报道。
结果,本研究首先探讨了临床使用在台湾的某人。系统性管理硝酸甘油(NTG)在啮齿动物中诱导痛觉过敏或migraine-related行为是一种最广为接受的实验性偏头痛模型(12- - - - - -15]。此后,我们研究了影响某人的行为分析偏头痛的NTG-induced偏头痛大鼠模型。
2。材料和方法
2.1。临床应用的某人
国家健康保险计划在台湾,这是一个集成的公共保险系统,提供了传统的西医和中医的保险(16,17]。中医使用的详细信息收集从国家健康保险研究数据库(NHIRD)。
我们2000年纵向健康保险数据库进行了分析(LHID 2000),这是一个随机抽取的一百万名新生NHIRD纵向的数据跨越1997年到2013年的时期。诊断代码从国际疾病分类收集,第九次修订,临床修改(ICD-9-CM)。我们提取某人的十大最常见的适应症主要诊断代码。本研究机构审查委员会批准中国医科大学在台湾中部(cmuh - 104 - rec2 - 115 - r3)。
2.2。动物
男性的雄性sd大鼠中,从BioLASCO购买(台北,台湾),重225 - 300克被用于这项研究。十二12 h的光暗周期,相对湿度为55%±5%,室温23°C±1°C的维护。提供食物和自来水随意。动物使用批准的机构动物保健和使用委员会秀传纪念医院(没有。106021)和后实验动物的使用指南(国家科学院出版社)。
2.3。某人准备
某人提取细微的颗粒是由Ko达药业有限公司有限公司(桃园、台湾)。黄芩基数,干的根源黄芩格奥尔基(Fam。唇形科),购买来自甘肃省,中华人民共和国(图1(一))。的起源和凭证标本被Ko识别和保持达药业有限公司有限公司。总之,210公斤的黄芩提取基数(w / v)的10倍开水1 h紧随其后通过40-mesh筛过滤。滤液收集,进行真空浓缩生产70公斤的提取物。辅料,包括40.6千克的淀粉、28公斤的黄芩根粉,和1.4公斤的羧甲基纤维素钠,在制粒机干,然后提取增加了造粒紧随其后。提取的比例和淀粉在某人提取细微颗粒1:1 (w / w)。
(一)
(b)
分析高效液相色谱法进行了使用日立d - 7000接口配备了一个l - 7100泵、l - 7455探测器,l - 7200 autosampler(日本东京)检查某人提取细微颗粒中黄芩苷含量。测试准备的解决方案是混合大约0.5 g的某人提取细微颗粒30毫升乙腈和稀磷酸的混合物在一个比28和72 (v / v)下加热回流了30分钟。在4000转离心10分钟后,上层的收集和添加到乙腈和稀磷酸的混合物的比例28 72 (v / v)的最后一卷100毫升,然后通过一个0.45μm过滤器。黄芩苷5毫克,纯度高于98%所宣称的供应商(ChemFaces,湖北,中国),混合着10毫升获得股票的标准解决方案,和2毫升的股票标准溶液添加到乙腈和稀磷酸的混合物在一个28比72 (v / v)最后的20毫升量获得工作标准溶液。进行色谱分离一个Mightysil RP-18列(250×4.6毫米,5μ米)使用一种权力平等主义的溶剂系统组成的混合乙腈和稀磷酸28比72 (v / v)。紫外线的波长、流量、注入体积,和停止时间设定在270海里,1.0毫升/分钟,10μ分别L, 30分钟。某人提取细微颗粒的黄芩苷含量为148.51毫克/克(图1 (b))。
2.4。分组
诱发偏头痛发作,老鼠有腹腔内(i.p)注入NTG(10毫克/公斤)14]。共有24个老鼠被随机分配成四组(n= 6)如下:(1)对照组:腹腔注射生理盐水(2)NTG组:ip注入NTG(3)安慰剂组:口服1.0克/公斤淀粉ip注入NTG前30分钟(4)某人- 1.0组:口服1.0克/公斤某人ip注入NTG前30分钟
本研究中使用的剂量的某人是计算基于Nair雅各的报告(18]。他们报告说,老鼠等效剂量(毫克/ g) =人类剂量(毫克/克)×6.2。我们认为人类平均体重60公斤。因此,基于人类的临床剂量的9.6 g,这是理性的剂量常用临床中医实践和建议制药公司在台湾,我们计算合适的某人剂量对大鼠1.0克/公斤。
实验过程如图2。
2.5。大鼠行为测试
2.5.1。评估自发性疼痛的行为
三十分钟与NTG腹腔注射后,观察自发性疼痛的行为用一个透明的丙烯酸装置(45 45××35厘米3)。相机被1 m装置前,老鼠的行为是20分钟的视频。老鼠的行为是使用大鼠行为自动分析识别模块EthoVision XT 12.0软件(美国弗吉尼亚州Noldus信息技术、斯)。
老鼠的行为描述的信息和分析引用先前的研究[19,20.]。总之,老鼠的行为分为五种类型:探索性行为(包括饲养起来,嗅探),运动行为(包括步行和跳),冻结行为(包括抽搐),休息行为,和修饰行为。
对于上述行为,参与行为的频率计算。
2.5.2。评估Light-Aversive行为
九十分钟后ip注入NTG、light-aversive行为使用光/黑盒测试。光/暗框由两个相同的隔间(30×30×22.5厘米3),光室放置一个明亮的环境下没有封面,和黑盒完全黑色的带盖子的。一个小打开门(10厘米×10厘米3)连接两院,老鼠可以自由跨越两个室。在评估的开始,老鼠被放置在光腔的中心,允许自由跨越两院10分钟。测试是录像和分析使用EthoVision XT 12.0。总时间的参数根据室进一步分析。
2.5.3。自发的触觉异常性疼痛的评估
一百二十分钟NTG腹腔注射后,自发的触觉异常性疼痛测试使用一个粗略的/仪器表面光滑,这是修改后的从一个先前的研究(21]。装置由一个透明的丙烯酸框(45 45××35厘米3),地板被划分为两个相同的领域(22.5×45厘米3每个)。左侧地板表面由光滑的砂纸(P1000丸),右地板表面是由粗砂纸(P40勇气)。在测试的开始,老鼠被放置在仪器的中心,允许自由跨越两个领域为5分钟。测试是录像和分析使用EthoVision XT 12.0。在表面光滑舞台上所花费的总时间和热地图块均值计算组的位置。
完成后所有的老鼠都牺牲了所有行为测试。
2.6。统计分析
所有的数据显示为±SEM。统计学意义之间的控制、NTG安慰剂,和某人- 1.0组织分析了使用单向方差分析,后跟一个图基的事后测试。一个值< 0.05被认为是具有统计学意义。GraphPad Prism 7.0软件(美国圣地亚哥,CA)是用于统计分析。
3所示。结果
3.1。某人在台湾的临床应用
探讨临床应用中医医生的某人在台湾,我们进行了一项以人群为基础的分析使用LHID 2000,由随机抽取的一百万名参与者NHIRD在1997和2013之间。某人的十大最频繁的临床应用在1997年和2013年之间在台湾如表所示1。某人的使用来治疗头痛N= 4849,2.51%)是第四最常见的临床应用。
3.2。预处理的效果与某人在老鼠NTG-Induced自发疼痛的行为
3.2.1之上。探索性行为包括饲养和嗅探
值得注意的是,NTG组的老鼠少从事饲养行为比对照组( ;图3(一)(a))。预处理与某人(1.0克/公斤 ;图3()()),但不是安慰剂( ;图3(一)(a)),导致相对更频繁的养育行为相比,NTG组。
类似于上面的结果,NTG组的老鼠没有参与嗅探行为和对照组一样频繁( ;图3(a) (B))。预处理与某人(1.0克/公斤 ;图3(a) (B)),但不是安慰剂( ;图3(a) (B)),导致更频繁的嗅探行为比NTG组。
3.2.2。运动行为包括步行和跳跃
老鼠NTG集团从事行走行为经常低于对照组( ;图3(b) (A))。预处理与某人(1.0克/公斤 ;图3(b) (A)),但不是与安慰剂( ;图3(b) (A)),导致更高频率的步行行为相比,NTG的组。
没有指出之间的显著差异控制,NTG、安慰剂,和某人- 1.0 g / kg组(所有 ;图3(b) (b))跳的频率分析的行为。
3.2.3。冻结行为包括抽搐
NTG组的老鼠并没有显示出明显不同的抽搐行为与对照组大鼠( ;图3(c))。预处理为1.0 g / kg某人导致更频繁的抽搐的行为相比,NTG集团( ;图3(c))。然而,与安慰剂预处理导致类似的动作行为的频率,在NTG集团( ;图3(c))。
3.2.4。休息的行为
休息行为的患病率高的老鼠NTG组比对照组( ,图3(d))。预处理与某人(1.0克/公斤 ;图3(d)),但不是安慰剂( ;图3(d)),导致低参与休息行为相比,在NTG组。
3.2.5。梳理行为
NTG组的老鼠表现出修饰行为比对照组更频繁,差异显著( ;图3(e))。预处理与某人(1.0克/公斤 ;图3(e)),但不与安慰剂( ;图3(e)),导致这种行为的频率下降。
3.2.6。与某人预处理对NTG-Induced光厌恶老鼠
NTG组的大鼠相比,光室花更少的时间花的对照组( ;图4)。老鼠使用1.0克/公斤某人表现出不同的行为,接近边际意义( ;图4),这与安慰剂预处理(没有被观察到 ;图4),根据时间比老鼠NTG组室。
3.2.7。与某人预处理对NTG-Induced自发的触觉异常性疼痛的影响行为的老鼠
NTG组的老鼠在光滑表面上花了相当长的时间比对照组( ;图5(一个))。所花费的时间从事这种行为降低了预处理与某人(1.0克/公斤 ;图5(一个))。组平均位置热图证明老鼠NTG组有更高的优先领域边界角和光滑的表面上花了更多的时间比对照组(图5 (b))。这种行为降低了预处理与某人(图1.0克/公斤5 (b))。
(一)
(b)
4所示。讨论
被认为是偏头痛头痛障碍,包括疼痛的神经和血管组件的传播,并与多个病理生理学,如炎症、神经递质功能受损,离子通道,免疫系统,线粒体功能,氧化应激因素(22]。尽管西方医学迅速发展治疗偏头痛,一些患者面临这些药物的副作用寻求替代治疗偏头痛的预防和治疗23]。根据中医理论和中国历史书,记录某人被认为是一个优秀的抗炎、镇痛药物在传统中医的经验;它的使用可以追溯到书”神农本曹京“写在汉代8]。此外,某人不仅在中国广泛使用,但也用作药用植物在世界各地的许多国家。例如,某人是一种传统的植物药物应用于伤口和虫咬在尼泊尔8]。化学成分,如类黄酮、二萜、多酚和氨基酸,某人的24)有几个重要的生物活性,包括抗炎,抗肿瘤,抗氧化,抗菌,抗病毒效果(25]。此外,最近的一项研究表明,某人有潜在的治疗效果在2019年冠状病毒病(26]。此外,黄芩苷和黄芩甙元,某人的主要生物活性化合物,已经证明了一个重要的角色在抑制炎性细胞因子的生产25,27),NF -κB信号(28,29日],c-fos表达式(30.在多个实验模型)。这些机制在偏头痛的病理生理过程是至关重要的。因此,我们认为,某人可能会有效地治疗偏头痛。
然而,到目前为止,还没有大规模勘探的实际临床使用某人,包括分配和使用的频率。在台湾,中医是一个流行的医学体系。我们也有一个健壮的医疗体系和完整的数据库记录。因此,我们进行了一项回顾性全国中医医生的处方实践调查,了解某人的实际临床应用。我们的研究结果显示,某人被推荐为各种不同的疾病,主要是呼吸道炎症疾病,头痛、睡眠障碍、肠胃不适,在台湾。这些研究结果类似于先前的研究中,通常用于显示某人和睡眠障碍具有良好的治疗效果,肝炎、腹泻、呕吐、出血、高血压、和呼吸道感染8]。我们发现,某人可用于不同疾病,并不局限于特定的条件;因此,十大疾病的比例在某人使用不是特别高。虽然只有2.51%的迹象(某人的第四最常见的适应症)在台湾是治疗头痛、偏头痛、令人惊讶的是,它并不包含在临床或某人在以前的科学报告的基本应用程序。应该注意,适应症的临床研究某人使用非常可信,因为我们使用从NHIRD全国性的随机样本,而最小的选择性偏差由于被保险人个人的非常高的速度,所有的中国草药产品是由训练有素的规定和合格的中医从业者在台湾。因此,我们进一步设计了一种使用被广泛接受的NTG-induced偏头痛模型动物实验证明某人的有效性。
在目前的研究中,我们评估了各种migraine-like NTG-induced偏头痛大鼠模型的行为通过使用记录的视频被可靠的自动化分析软件(31日,32];因此,本研究的结果可以被认为比手动得分更可靠和更客观的行为。
偏头痛的诊断是根据临床自述疼痛和伴随症状。尽管动物并不言语,最近的研究认为NTG-induced动物模型作为临床相关的转化能力行为端点(12,21]。我们先前的研究显示,NTG-induced疼痛的行为与偏头痛大鼠包括减少探索性和运动行为和增加休息行为(33,34]。上述疼痛的行为与偏头痛啮齿动物模仿那些有经验的人,通常表现为参与日常体力活动减少和降低兴趣探索新环境或对象在急性偏头痛攻击事件(34,35]。因此,我们可以利用大鼠模型的参数测试antianalgesic药物效力。本研究的结果表明,预处理和1.0克/公斤某人可以增加运动活动和减少休息NTG-induced偏头痛大鼠的行为,这表明人类与某人预处理可以减轻偏头痛。
畏光,是其中非常重要的偏头痛的症状(36]。先前的报道表明,光厌恶的行为,使用光/黑盒测试,NTG-induced偏头痛啮齿动物有效模仿畏光的现象(35,37]。我们的研究结果表明,预处理和1.0克/公斤某人导致减少光厌恶,这接近边际意义,暗示某人可能缓解偏头痛畏光的个人经历。
皮肤异常性疼痛是一种常见的症状在偏头痛患者;它表明颅过敏症和偏头痛似乎预测chronification38,39]。最近,一个粗略的/平滑器测试是用来评估自发触觉异常性疼痛的NTG-induced偏头痛啮齿动物模型(21]。我们的研究结果表明,预处理和1.0克/公斤某人的总时间减少花在粗糙的表面光滑/平滑的测试,表明某人可以减少触觉异常性疼痛在NTG-induced偏头痛大鼠模型中,这表明某人可以帮助皮肤异常性疼痛的临床治疗偏头痛患者。
目前的研究仍然存在一些局限性:(1)动物实验缺乏组与药物治疗,如布洛芬,某人和常规西药的疗效进行比较。此外,某人生物活性制剂的剂量依赖性关系,如黄芩苷、不是在当前动物实验报告;(2)某人的监管机制在偏头痛大鼠没有探索,并进一步验证,例如生物标志物测定(不,CGRP怎样级别)和免疫组织化学分析,应进行调查神经活动在未来;(3)尽管目前研究的结果说明某人是有用的治疗NTG-induced偏头痛大鼠,一个设计良好的临床试验需要评估某人在人类的功效。
5。结论
本研究的结果表明,预处理与某人饲养起来,嗅探的频率增加探索性行为和走在运动行为的频率增加NTG-induced偏头痛模型。NTG-induced偏头痛大鼠进行预处理与某人也有较低频率的休息行为和修饰行为。这些现象表明,某人可能有助于减少偏头痛的水平。此外,NTG-induced偏头痛大鼠进行预处理与某人花费更少的时间在表面光滑而花费的时间没有收到某人预处理的老鼠,这表明某人可以帮助减少皮肤的偏头痛患者的异常性疼痛。这些结果支持某人的应用治疗头痛,在台湾作为是一种常见的实践。
缩写
| i.p。 | 腹腔内注射 |
| ICD-9-CM: | 国际疾病分类,第九次修订,临床修改 |
| NHIRD: | 国家健康保险研究数据库 |
| NTG: | 硝化甘油 |
| 某人: | 黄芩 |
| 中医: | 中国传统医学。 |
数据可用性
使用的数据集和分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。
伦理批准
1。人类数据:本研究机构审查委员会批准中国医科大学在台湾中部(cmuh - 104 - rec2 - 115 - r3)。2。动物:动物使用批准的机构动物保健和使用委员会秀传纪念医院(没有。106021)和后实验动物的使用指南(国家科学院出版社)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
碳碳廖廖K-R进行动物实验和写的手稿,林价氯分析的数据NHIRD在台湾,和李J-M设计了协议和修订后的手稿。所有作者阅读和批准最终的手稿。Chung-Chih廖廖和Ke-Ru贡献同样这项工作。
确认
本研究支持格兰特秀传纪念医院(RD106087)和部分也支持台湾卫生和福利部临床试验中心(mohw109 - tdu - b - 212 - 114004),大多数临床试验财团中风(大多数108 - 2321 - b - 039 - 003),和林Tseng-Lien基金会,台中,台湾。