抗菌活性对口腔病原体确认使用穆萨paradisiaca果茎Ethnodentistry

文摘

背景。Ethnodentistry是使用本土口腔清洗代理等植物部分由当地人们不仅保持口腔卫生,而且治疗口腔感染。主要ethnodentistry灵感来自传统和当地社区的信仰体系。穆萨paradisiaca在许多文化中是广泛栽培和用于它的营养和药用价值。在加纳,水果的茎穆萨paradisiaca用作口腔清洗代理维护口腔卫生;然而,民间说法还有待科学地确定。客观的。这项研究评估了三种提取的抗菌和抗真菌效果分数(水、乙醇和乙酸乙酯分数)穆萨paradisiaca果茎对嗜酸乳杆菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,白色念珠菌,常见的口腔病原体与龋齿和牙周炎。材料和方法。水、乙醇和乙酸乙酯的分数穆萨paradisiaca果茎是由冷浸渍和定性筛选植物化学的成分。抗菌效果的三种提取分数评估通过使用串行肉汤稀释浓度增加(62.5、125、250、500和1000µg / ml)和标准相比,抗菌药物(红霉素、强力霉素和氟康唑)。随后,吸光度的微生物悬浮液处理浓度增加提取测量分数在450 nm,和细胞密度测定。结果。除了水提物,不是很有效减少微生物生长,乙酸乙酯和乙醇提取分数证明抗菌药物功效类似的标准。所有三个提取分数证明浓度增长抑制对测试的影响口腔病原体虽然不像标准的有效药物。结论。穆萨paradisiaca果茎已经证明对抗菌效果嗜酸乳杆菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,白色念珠菌,常见的口腔病原体与龋齿和牙周炎,和这一发现证实了部分民间使用穆萨paradisiaca果茎为传统的牙科保健的代理。因此,水果的茎穆萨paradisiaca可以探索使用廉价的和容易获得的牙科保健剂人禁锢在贫困线以下。

1。介绍

尽管进步在牙科、口腔疾病(龋齿、牙周炎、牙龈出血、牙痛、口腔溃疡、口臭、牙齿敏感,牙齿脱落,和口腔癌)仍然是一个主要的健康问题在世界范围内(1,2]。超过23亿人被报道患有恒牙龋齿和5.3亿多名儿童患有龋齿的乳牙3]。证据比比皆是连接结直肠癌的风险,牙龈出血,牙痛,早产孕妇中,慢性肾脏疾病,心肌梗死和中风口腔疾病(4- - - - - -9]。据报道,大多数形式的牙周疾病,如斑块,龋齿,口臭,牙龈炎,牙周炎,牙痛引起的复杂和难以捉摸的物种栖息活动超过600幼童腹壁薄弱的口腔10]。这些口头pathobionts常见革兰氏阳性和阴性细菌等韦永氏球菌属物种,Atopobium物种,普氏菌物种,变形链球菌,乳酸菌物种,粪肠球菌和一些nonmutant链球菌,与龋齿的形成和发展10- - - - - -12]。另外,常见的革兰氏阴性细菌,如Aggregatibacter actinomycetemcomitans,与激进的牙周炎相关13),而共生的酵母,等白色念珠菌,也涉及口腔念珠菌病(14),需要全面的治疗。

口腔疾病的治疗包括使用各种代理有明显的抗菌,抗氧化,抗炎,抗真菌,镇痛效果。荨麻疹的风险,味道掩盖,微积分的形成,增加牙齿和粘膜,口腔黏膜脱屑,和腮腺肿胀与长期使用一些传统的口腔护理剂,如洗必泰(11,15,16]。鉴于口腔疾病的发病率,增加微生物抵抗,一些传统的口腔护理人员相关的副作用目前用于口腔护理,和高成本的传统口腔护理剂,它已成为必要的替代治疗前景相对便宜,容易获得,有效和安全的。

利用植物和植物产品改善人类健康已存在几个世纪甚至在现代医学的黎明之前。大部分疗效的药用植物已经决定在数百年通过几个世纪的平淡无奇(17,18]。世界卫生组织(世卫组织)报告说,在发展中国家,65 - 80%的人口依赖传统疗法,主要是植物性治疗(17]。因此,世卫组织建议,国家应该制定国家政策和法规植物疗法融入他们的医疗系统19]。

有趣的是,使用植物性治疗来提高整体健康是很常见的在加纳(20.]。例如,穆萨paradisiaca果茎常用在加纳农村保持口腔卫生;然而,这种科学的民间说法还有待确定。生态,m . paradisiaca(家庭、芭蕉科)是分布在热带和亚热带地区。传统上,穆萨paradisiaca用于治疗腹泻、痢疾、肠道溃疡性结肠炎病变,糖尿病、浇道、尿毒症、肾炎、痛风、高血压和心脏疾病(21,22]。在视图的民族植物学的重要性m . paradisiaca,许多研究已经调查了一些传统的使用。例如,水果的皮已经证明了抗真菌活性白念珠菌(23]。提取的生水果皮和树叶穆萨paradisiaca展示了抗菌活性对吗假单胞菌物种,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌,变形杆菌(23,24]。同时,提取的各个部分m . paradisiaca止泻剂所证明的那样,低血糖,抗氧化,抗高血压,伤口愈合,抗过敏药,抗疟,leishmanicidal和anti-snake毒液活动21,25,26]。观察到的药理特性是由有机和无机成分m . paradisiaca包括维生素、叶黄素、胡萝卜素、钾和镁(23,27)以及植物化学物质如类黄酮、5 -羟色胺,色氨酸,吲哚,丹宁酸,三萜21,22]。本研究评估的抗菌效果m . paradisiaca果茎提取物对三种常见口腔病原体与龋齿和牙周炎。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

研究中使用的材料包括Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA),蛋白胨水、血琼脂,强力霉素(Actavis,至于,英国),红霉素(康科迪亚国际资本,英国)和氟康唑(FDC国际Fareham雄鹿,英国)。同时,乙酸乙酯、乙醇、氢氧化钠(VWR Prolab化工、法国),过氧化氢,瓦格纳试剂,梅耶尔试剂,氯化铁化学品使用的均为分析纯。设备,如气浴振荡器,干燥的空气炉,有氧孵化器,和其他设备,如培养皿,烧杯,吸量管也被使用。

2.2。植物收集、识别和身份验证

新鲜的m . paradisiaca果梗(红色箭头在图1海岸角)收集Abura市场大都市,加纳。识别和身份验证是由弗朗西斯Otoo,标本的馆长单位,海岸角大学生物科学学院。绿色水果外边的覆盖物,用干净锋利的刀茎被移除和丢弃。遗体被切成小块,干了两个星期。干果茎仍是手工粉用研钵和研杵捣碎。粉末样品挤在透明的塑料样品袋、标签、储存在室温下。

2.3。的制备穆萨paradisiaca果茎提取物

三个平底烧瓶内都充满了20克的粉末样品。200毫升蒸馏水、乙醇,乙酸乙酯被添加到每个烧瓶和适当标记。烧瓶用干净的棉花用软木塞塞住,铝箔和允许与间歇摇晃站72小时的机械振动。摇晃后,所有四个样本真空过滤滤纸(绘画纸54号)分别与Buckner烟囱和抽吸泵。滤液是每个收集到单独的锥形烧瓶和标记。然后四个样本集中使用旋转蒸发器和集中转移到称重和标记坩埚为进一步在水浴蒸发。所有四个样本然后放入干燥器,允许干燥。合成分数的称重和标记根据溶剂用于提取这些水(AEMP),乙醇(EEMP)和乙酸乙酯分数(EAMP)。五个不同浓度(62.5、125、250、500和1000µg / ml)准备从每个提取的连续稀释。

2.4。植物化学的初步筛选

植物化学物质筛查包括生物碱、黄酮类、单宁、萜类、皂苷、酚类,如下所示。

2.4.1。检测生物碱

生物碱的存在决定如前所述[28]。简单地说,0.4 g的干提取盐酸溶解在5毫升的1%和混合加热和过滤。1毫升的滤液分别处理(a)几滴碘化汞钾(Mayer试剂)和(b)铋钾(Dragendorff试剂)。混浊或沉淀与这两种试剂被作为生物碱存在的证据。

2.4.2。测试类黄酮

黄酮类化合物的存在被使用先前描述的方法进行评估。短暂,0.5克每提取部分悬浮在1毫升蒸馏水搅拌,过滤得到滤液。0.5毫升的稀氨溶液添加到0.5毫升的滤液紧随其后的几滴浓硫酸。外观的黄色颜色确认黄酮类化合物的存在。

2.4.3。测试单宁

单宁被发现使用修改后的版本的测试如前所述氯化铁(28]。简而言之,2滴1%水氯化铁试剂添加到0.5毫升的粗提取液,观察蓝黑色或绿色颜色的形成,这表明单宁的存在。

2.4.4。检测酚类化合物

酚类化合物被发现使用修改后的版本的Folin-Ciocalteu过程(29日]。简单地说,200年μl的粗提取液加入2毫升的水碳酸钠3%,其次是200μl Folin-Ciocalteu试剂。混合物在室温下被允许站30分钟。蓝色/灰色颜色的形成表明酚组的存在。

2.4.5。测试常用药用

常用药用检测使用修改后的版本的Salkowski测试(30.]。简单地说,400毫升的提取在慢慢增加µl氯仿,其次是注意增加400µl浓硫酸。红色/棕色/紫色的颜色形成的界面显示常用药用的存在。

2.4.6。测试心脏苷

心苷检测使用修改后的版本的Keller-Kiliani测试(29日]。500年μ我提取了500μl冰醋酸。几滴1%水氯化铁和浓硫酸被小心翼翼地补充道。红色/棕色环的存在的界面显示脱氧糖心脏苷的特征。

2.4.7。测试蒽醌类

醌类化合物被发现使用修改后的版本的Kumar和Ajaiyeoba测试(28,29日]。修改后的Kumar测试中添加几滴浓硫酸为500μl纯提取物,其次是小心增加500μl的氨气。玫瑰粉色的颜色显示免费的醌类化合物的存在。Ajaiyeoba测试,450年μl的粗提取液添加到50μl集中盐酸和允许在室温下站了几分钟。500年μl(氯仿当时仔细补充道。玫瑰粉色的颜色表示的形成存在的自由羟基蒽醌类。

2.5。道德的间隙

这项研究是通过(UCCIRB /底盘/ 2016/29)海岸角大学的机构审查委员会(UCCIRB)和海岸角大学牙科诊所的管理。另外,病人的同意是寻求通过口头或书面协议后研究的目的显然是向病人解释。

2.6。收购、培养和测试生物的识别

这是一个实验室实验研究来确定水的抗菌和抗真菌的活动,乙醇,乙酸乙酯提取物穆萨paradisiaca果茎对三种常见口腔病原体。测试细菌从海岸角大学的牙科诊所。这项研究是在实验室进行的医学实验室科学,海岸角海岸角大学教学医院。植物提取物的筛选抗菌活性的植物化学物质礼物然后化验使用串行肉汤稀释。测试真菌菌株,白色念珠菌,被用于研究临床分离株和微生物实验室提供的海岸角教学医院。这些物种在Sabouraud葡萄糖琼脂培养(SDA)在室温下盘子和孵化(28±3°C)为3天。假丝酵母物种对SDA亚文化与氯霉素和孵化补充37°C 72小时获得纯粹的隔离。的识别白色念珠菌是使用生殖管测试完成的。细菌菌株,嗜酸乳杆菌和Aggregatibacter actinomycetemcomitans,并通过口腔拭子从病人访问海岸角大学的牙科诊所。用无菌棉签棒、拭子从深牙齿蛀牙,还从斑块的牙齿。包含无菌拭子被安置在宝石瓶蛋白胨水和孵化一夜之间在35°C。细菌菌落亚文化在血琼脂和孵化24小时35°C。孵化后,殖民地的外表,生化测试之前执行(31日),革兰氏染色证实的存在嗜酸乳杆菌和Aggregatibacter actinomycetemcomitans被执行。表1显示了一个概要的生化测试的结果进行确认或者测试生物体的身份。

2.7。串行肉汤稀释

每个部分的提取是在无菌蒸馏水溶解,形成股票10380年的浓度µg / ml, 10230µ克/毫升和10300µ克/毫升乙醇、水和乙酸乙酯分数,分别。从这些股票的解决方案,工作浓度的1000年,500年,250年,125年,62.5µg / ml准备和用于抗菌活性的测试。氟康唑(FDC国际Fareham雄鹿,英国),强力霉素(Actavis,至于,英国),和红霉素(康科迪亚国际资本,英国)被用作积极控制药物白色念珠菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,嗜酸乳杆菌分别与相同的浓度分数。0.5麦克法兰标准用于规范的三个新培养分离密度为1.5×10⁸CFU /毫升无菌蛋白胨水。0.5毫升的这剂添加到无菌试管标签的比例和浓度。1毫升每个分数浓度添加到相应的包含培养液的试管。相同的是药物与药物控制取代了分数。浊度标准的细菌是准备通过增加0.5毫升无菌蛋白胨培养液为1毫升的水而不育的标准是由使用无菌蛋白胨没有任何增加。细菌和真菌悬浮液在35°C和孵化25°C,分别为24小时。吸光度的内容每个试管的决心的波长450 nm。每个孵化后悬挂的密度取决于比例是0.5的密度和吸光度相比麦克法兰。每个实验至少重复三次。

2.8。统计分析

数据产生的三种植物提取物的抗菌效果穆萨paradisiaca2测试细菌和真菌的形式进入和组织在Microsoft Excel。这些数据被导出到IBM SPSS 24.0版(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)计算描述性统计的平均值和标准偏差。数据分析与GraphPad棱镜version 6 (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)执行单向方差分析(方差分析)使用图基的多个不同抗菌活性之间的比较来比较不同提取液浓度对每个测试细菌与控制。双向方差分析是用来确定是否有显著差异之间的抗菌活性水,乙醇,乙酸乙酯提取物不同浓度对测试细菌。值≤0.05被认为是在所有分析具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。收益率的提取物和植物化学的筛选

粗提取液的水提物取得最高的分数m . paradisiaca茎。在植物化学的筛选m . paradisiaca果茎提取物(MPFSEs),观察到酚类,在所有三个提取分数(表2)。常用药用和心脏苷在乙酸乙酯检测到分数。所有分数除了水分数显示生物碱(表的存在2)。

3.2。提取物对平均细胞密度的影响(CFU /毫升)l .嗜酸的

红霉素证明浓度平均细胞密度下降l .嗜酸的。尽管提取分数表明抑制对平均细胞密度的影响l .嗜酸的,这不是与红霉素(图2)。提取三个分数中,乙酸乙酯部分展示了对细胞密度显著的抑制作用,这种抑制作用是浓度依赖性。

3.3。提取物对平均细胞密度的影响(CFU m / L)答:actinomycetemcomitans

两个菌群置于脱氧土霉素,水和乙醇分数没有证明对平均细胞密度显著抑制的影响答:actinomycetemcomitans。乙酸乙酯分数证明平均细胞密度(图上浓度的抑制作用3)。

3.4。提取物对平均细胞密度的影响(CFU m / L)白色念珠菌

水提取的分数平均细胞密度没有抑制作用白念珠菌与氟康唑。乙酸乙酯和乙醇提取的分数表明浓度抑制对的平均细胞密度的影响白念珠菌与氟康唑(图4)。均等的浓度最高,乙酸乙酯部分证明了比氟康唑抑制效果(图4)。

3.5。生物提取物对经济增长的影响的测试

所有这三个分数(水、乙醇和乙酸乙酯)对三个测试显示出某种程度的增长抑制生物(l .嗜酸的actinomycetemcomitans,白念珠菌)。分数中,乙酸乙酯部分是最有效的对所有测试生物体(图5)。

4所示。讨论

这项研究表明提取物m . paradisiaca果茎有抗菌作用对常见的口腔病原体(嗜酸乳杆菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,白色念珠菌),主要涉及口腔感染。例如,这些pathobionts一直与龋齿的发生和发展,口腔鹅口疮,牙周炎(12,14,32]。抗菌财产被认为是口腔护理人员的主要特征之一,针对致病性细菌和真菌物种参与口腔感染。水果的茎穆萨paradisiaca用于农村加纳维持口腔卫生。具体地说,一个粉准备的水果茎穆萨paradisiaca有或没有木炭也用来清洁牙齿和保持口腔卫生。使用m . paradisiaca果茎由农村人一直流传下来许多代,这古老的实践一直平淡无奇。,使用传统的口腔清洁代理不仅收到了声称反弹不利影响但也被视为昂贵但无效的;很高兴学习现成的替代或补充的口腔护理疗法。然而,这样的选择口腔护理疗法需要验证科学证实这些说法。

在这项研究中,三个(水、乙醇和乙酸乙酯)提取的分数m . paradisiaca口腔病原体产生浓度抑制增长的测试;特别是,乙酸乙酯提取部分展示了重要的抗菌活性比其他提取分数。除了水提物没有演示测试病原体的细胞密度显著下降,乙酸乙酯和乙醇分数显示显著的抗菌活性。演示的乙酸乙酯提取物浓度广谱细胞密度下降的三个测试的病原体。的乙醇提取物,抗真菌活性白色念珠菌被观察到。目前观察到的抗菌活性m . paradisiaca果茎提取物对口腔病原体与口腔感染补充其他研究表明,从水果中提取,小花,根、叶、皮m . paradisiaca具有抗菌性(23,27,33,34]。目前的观察与先前的研究证明m . paradisiaca抗菌活性反对答:actinomycetemcomitans(35),白念珠菌(23清楚地显示了可能的前景m . paradisiaca作为一种替代或补充口服治疗,可以利用供土著居民使用。

药用植物的生物活性一直与他们的植物化学的成分和官能团浓缩(36]。抗氧化,抗增殖、chemopreventive和抗菌性证明了协同交互的天然phytocompounds包括生物碱、酚类化合物、丹宁酸、皂苷、萜类化合物已报告在口腔健康16,37]。目前的研究表明穆萨paradisiaca果茎含有生物碱、萜类、强心苷、酚类,支持了先前的报告穆萨paradisiaca(21,23),这些phytocompounds可能可以解释观察到的抗菌活性在当前的研究中。

在增加订单,三种提取物的抗菌活性的分数m . paradisiaca果茎水的顺序是< <乙酸乙酯,乙醇抗菌活性的顺序可能反映了他们的植物化学的成分和溶剂系统的依赖。令人惊讶的观察,乙酸乙酯部分展示了重要的抗菌活性提取大部分phytocompounds,包括生物碱和心脏苷,这水分数(表中缺席2)。心苷从其他药用植物具有抗真菌特性38]。因此,也有可能的抗真菌活性表明乙酸乙酯和乙醇提取的分数m . paradisiaca果茎可能是由于他们的强心苷组件。令人惊讶的是,生物碱和心脏苷的水提物分数的缺席m . paradisiaca果梗在当前的研究中。然而,在一项研究中涉及的果皮m . sapientum,结果表明,水分数显著的抗菌效果比绝对乙醇分数,这是导致其生物碱的组件(39),这个观察站在方差与当前观察水的一部分m . paradisiaca果梗了抗菌活性。总之,观察到的抗菌活性的分数(水、乙醇和乙酸乙酯)直接关系到他们的能力从水果中提取不同化合物茎;然而,当前的结果之间的差异和其他物种属穆萨可能是由于不同的物种和植物调查的一部分。

5。结论

m . paradisiaca果茎提取物具有抗菌效果嗜酸乳杆菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,白色念珠菌,这也许观察人的民间使用维护口腔卫生。观察到的抗菌活性是归因于的植物化学的成分m . paradisiaca果茎;因此,未来的研究应该关注bio-assay引导提取、识别、和净化的具体抗菌phytocompounds与特定的对口腔病原体的抗菌活性。

数据可用性

所有数据用于支持本研究的发现文章中是可用的。

的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

亚历克斯Boye构思、设计和写和批判性回顾了最后的手稿中知识内容。欧内斯特Owusu-Boadi,盖伯瑞尔曼沙和伊曼纽尔Ayamba Ayimbissa进行实验。Mainprice Akuoko Essuman分析结果和文献信息检索。

确认

作者感谢Emmanuel Birikorang和乔纳森Ntow(实验室技术的部门,海岸角大学)和弗朗西斯Kobina亚瑟(海岸角教学医院微生物实验室,海岸角)。

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