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Yongjun Mi-Ra Lee Bohye Kim Lee Soung-Yong公园,Jae-Hoon垫片,Seong-Il Heo Bong-Hwan涌, ”改善的效果葛根提取在绝经后症状通过促进雌激素的活动和骨标记切除卵巢的老鼠”,以证据为基础的补充和替代医学, 卷。2021年, 文章的ID7924400, 8 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/7924400
改善的效果葛根提取在绝经后症状通过促进雌激素的活动和骨标记切除卵巢的老鼠
Mi-Ra李
,1
Bohye金,1
Yongjun李,1
Soung-Yong公园,2
Jae-Hoon垫片,3
Bong-Hwan涌,1
和
Seong-Il Heo1
1Hongcheon研究所的草药,Hongcheon-gun 25142,江原道,韩国
2Hongcheon-gun Sejun F & B有限公司,25107年,韩国江原道
3Hallym大学食品科学与营养系24252年春川,江原道,韩国
文摘
葛根(Willd)。Ohwi,被称为野葛,是最受欢迎的传统药物之一的亚洲国家。它已经被广泛地应用于自然选择激素替代疗法治疗绝经后症状。本研究旨在调查的雌激素效应p .兜水母目提取(PE)对绝经后骨质疏松症切除卵巢的老鼠(OVX)。OVX大鼠服用PE(25 - 1600毫克/公斤)8周。生化参数、雌二醇、骨代谢标记(例如,骨钙素、I型胶原蛋白,c端端肽片段的deoxypyridinoline,和pyridinoline)测定血浆样品。此外,雌激素receptor-alpha (ER -α)蛋白表达和形态学的子宫进行评估。长期治疗PE不导致OVX大鼠肝损伤。PE补充身体体重减少肥胖大鼠高脂质积累引起卵巢切除术。此外,体育表现出对胰岛素抵抗的保护作用,高脂血症和肝脂质过氧化作用。PE治疗增加子宫的子宫重量和厚度层在子宫萎缩的情况下由于切除卵巢。骨代谢标志物的水平,这在OVX大鼠显著增加,减少了PE治疗。免疫印迹分析表明,ER -α蛋白表达是调节与OVX大鼠相比,PE-treated老鼠。这些结果表明,PE可能是一个有前途的替代功能改善更年期症状的食物。
1。介绍
更年期,也称为更年期,生理阶段,代表了女性生殖寿命结束(1]。Menopause-induced雌激素缺乏可能增加代谢疾病的风险,如肥胖、骨质疏松症,心血管疾病和糖尿病2,3]。激素替代疗法(HRT)通常用于治疗更年期症状,但长期激素替代疗法可能会导致增加致癌的风险和心血管疾病4,5]。因此,有必要对自然替代疗法,包括膳食补充剂和新的草药,以减少副作用。植物雌激素是雌激素的化合物来源于植物的结构类似于17β雌二醇(6]。antipostmenopausal植物雌激素的影响已经演示了各种生物活动,预防骨质疏松的影响和改善更年期症状等,作为潜在的替代激素替代治疗(7- - - - - -9]。
葛根(Willd)。Ohwi,被称为野葛,传统上与其它草药结合使用产生协同和添加剂影响疾病(通过多目标方法10]。它含有高水平的几个异黄酮,如葛根素、黄豆苷、大豆苷、精制,染料木黄酮(11]。葛根已知有多种药理作用,帮助减轻肝脏疾病等各种疾病,心血管疾病,糖尿病和骨质疏松症(12,13]。特别是,葛根素的主要活性成分p .兜水母目已经证明对骨质疏松症有预防活动在几项研究中使用切除卵巢的(OVX)动物模型14,15]。OVX大鼠模型被认为是适合调查与绝经后骨质疏松相关的问题,骨质疏松症的一个主要危险因素(16]。然而,几乎没有信息的影响p .兜水母目在OVX大鼠血脂异常和骨代谢。基于葛根素的雌激素的活动,我们预测p .兜水母目提取(PE)可能对更年期有利影响代谢功能紊乱,内分泌系统,OVX大鼠骨质疏松症。因此,我们研究了长期补充体育的保护作用与OVX大鼠代谢参数。此外,白色脂肪组织重量、萎缩性子宫形态、骨代谢标志物,雌激素水平进行评估,明确行动的潜在机制的PE提取。
2。材料和方法
2.1。的制备p .兜水母目提取
体育是Sejun F & B提供的有限公司,有限公司(韩国江原道)。这是在喷雾干粉的形式,这是准备如下。将淀粉、干p .叶状的在50%乙醇浸泡1小时然后离心机。的残渣p .叶状的在五量的50%的乙醇提取1 h 60°C。提取过滤和集中在减少压力。体育是喷雾干燥粉系统混合30%糊精。葛根素的内容,这是一个主要异黄酮在PE, 42.38毫克/克。
2.2。动物和治疗
Nine-week-old雌雄性sd大鼠中,切除卵巢的或sham-operated 8周的年龄,买来Chemon Inc .(京畿道、韩国)和维护在实验室控制条件下(23°C±1°C,湿度55%±5%,12 h光/暗周期)前2周的实验。老鼠被随机分为以下治疗组(n每组= 8):(1)虚假的组,(2)OVX组,(3)OVX + PE 25毫克/公斤,(4)OVX + PE 100毫克/公斤,(5)OVX + PE 400毫克/公斤,和(6)OVX组+ PE 1600毫克/公斤。所有动物实验协议在本研究综述了机构批准的动物保健和使用委员会Hongcheon研究所的草药(19-07号)。体育是悬浮在磷酸缓冲盐(PBS)所需的剂量的口服一次卷5毫升/公斤每天8周。老鼠的食物摄入量和体重测量每周两次。禁食16 h以后实验的最后一天,血从门静脉收集。子宫和白色脂肪组织收集并称重。
2.3。生化参数
血浆样本由离心法收集的血液在肝素化管(4000 rpm在4°C)为15分钟,然后储存在−80°C的测定。天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、钙、磷、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl - c)、低密度脂蛋白胆固醇(低密度脂蛋白)和甘油三酯(TG)水平测定使用自动化临床化学分析仪(Konelab 20 xt;美国马热费希尔科学、沃尔瑟姆)。游离脂肪酸(FFA);美国生物测定系统,海沃德,CA),胰岛素,雌二醇(E2)和5 -羟色胺水平测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(Cusabio、武汉、中国)根据制造商的指示。
2.4。肝脂质过氧化作用分析
肝脏样本(120毫克)均质在1毫升的PBS然后离心机在4°C 10000 rpm 15分钟。得到的上层清液源用于试验。丙二醛(MDA)水平测定采用硫代巴比土酸活性物质(TBARS)分析根据制造商的(Dogenbio,首尔,韩国)指令。
2.5。骨代谢标记血浆样本
骨形成标志物骨钙素(OC)确定使用大鼠骨钙素酶联免疫试剂盒(Cusabio)。骨吸收标记,如c端端肽片段的I型胶原蛋白(CTX-1;Cusabio), deoxypyridinoline (DPD;Cusabio)和pyridinoline (PYD;美国圣地亚哥MyBioSource),使用商业ELISA试剂盒测定。
2.6。免疫印迹分析
子宫中的总蛋白提取使用里帕裂解缓冲含有磷酸酯酶和蛋白酶抑制剂鸡尾酒。等量的蛋白质(15μg)分离10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶,然后将聚偏二氟乙烯膜。膜被封锁的5%脱脂牛奶1 h,然后用特定的探测主要抗体的最终稀释1:1000。免疫反应性的蛋白带检测使用一个增强化学发光免疫印迹检测设备(清晰马克斯TM西方ECL衬底;Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国)和使用Chemidoc触摸图像系统(Chemidoc可视化TMXRS +系统;Bio-Rad实验室)。
2.7。组织学分析
子宫样品固定在10%福尔马林和嵌入在石蜡。组织部分是安装在玻璃幻灯片和苏木精和伊红染色。的静态参数子宫、子宫内膜、子宫肌层的,并使用ImageJ上皮长度计算软件(美国国家卫生研究院)。
2.8。统计分析
所有的数据都表示为平均值±标准平均误差(SEM)。他们分析了使用方差分析Dunnett紧随其后的多重比较检验。被认为具有统计显著性差异 。所有统计分析使用GraphPad Prism 7.05。
3所示。结果
3.1。体育对体重的影响,食品效率比,白色脂肪组织在OVX大鼠
如图1(一)OVX组显示,显著增加的体重比虚假的组在整个实验周期。然而,PE治疗(400和1600毫克/公斤)显著降低身体体重从星期6 15%和35%,分别比OVX组(图1 (b))。食物的效率比pe - 1600组为6.28%±0.88%,由28%相比,显著降低OVX组(图1 (c))。肠系膜白色脂肪组织的重量(mWAT)显著提高OVX组与虚假的组。PE治疗显著抑制mWAT体重增加OVX大鼠(图1 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2。体育对子宫重量和组织学的影响分析
OVX大鼠提供杰出的子宫萎缩,如图2 (e)。OVX组大鼠的子宫重量(0.27±0.22毫克/克)是86%低于假组(2.03±0.49毫克/克)(图2(一个))。虽然不显著,PE治疗恢复子宫重量下降9% -46%剂量依赖性的方式与OVX组。数据2 (b)- - - - - -2 (d)显示彩色子宫的组织学分析的结果部分。子宫内膜的厚度、子宫肌层和上皮OVX组显著下降的价格相比骗局。然而,PE治疗显示出明显的逆转OVX-induced子宫萎缩。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.3。体育对等离子体的影响生化参数
结果血浆生化参数列于表1。血浆ALT和AST水平各组之间没有显著差异。OVX组血钙水平下降了10%的价格相比虚假的集团,但它并没有统计学意义。治疗PE 400或1600毫克/公斤显著增加血钙水平与OVX组。血液P水平组之间没有显著差异。OVX组空腹血浆FFA表现出相当大的增加和胰岛素水平与虚假的组。pe - 1600组明显下降与OVX组相比FFA水平50%。OVX大鼠的胰岛素水平升高显著降低在所有PE-treated组除了pe - 100组。
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数据提出了均值的平均值±标准误差(SEM)。假的,虚假的操作;OVX卵巢切除术;PE-25 OVX + PE 25毫克/公斤;PE - 100, OVX + PE 100毫克/公斤;PE - 400, OVX + PE 400毫克/公斤;PE - 1600, OVX + PE 1600毫克/公斤;FFA,游离脂肪酸;ALT,丙氨酸转氨酶;AST,天冬氨酸转氨酶。和与OVX组;和
vs。OVX组。 |
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3.4。体育的影响在OVX大鼠血浆脂质和肝脏MDA水平
进一步调查是否PE治疗可以改善高脂质积累引起卵巢切除术,我们测量血浆血脂水平的变化和肝匀浆MDA含量(表2)。等离子体OVX TC和低密度脂蛋白胆固醇水平没有变化,PE-treated组。然而,慢性PE治疗增加高密度脂蛋白胆固醇的水平,与PE - 400组,尤其是显示与OVX组相比显著增加。OVX组显示显著TG水平升高而虚假的集团。PE-treated组抑制TG水平提高16%到43%。此外,PE-25组显著降低TG水平的类似的结果虚假的集团( )。肝脏MDA水平显著增加25% OVX组与虚假的组。PE治疗显著降低MDA水平值的增加与那些虚假的组。
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数据提出了均值的平均值±标准误差(SEM)。假的,虚假的操作;OVX卵巢切除术;PE-25 OVX + PE 25毫克/公斤;PE - 100, OVX + PE 100毫克/公斤;PE - 400, OVX + PE 400毫克/公斤;PE - 1600, OVX + PE 1600毫克/公斤;TC、总胆固醇;高密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇;低密度脂蛋白、低密度脂蛋白胆固醇; triglyceride, TG; MDA, malondialdehyde.和
vs。虚假的集团;
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,和
vs。OVX组。 |
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3.5。体育对骨矿物质密度的影响,OC, E2和ER -α蛋白质含量
股骨的骨密度(BMD)如图3(一个)。OVX组BMD下降了5%的价格相比骗局。PE治疗并不影响ovariectomy-induced BMD下降。OC水平明显提高OVX组相比虚假的组(图3 (b))。然而,PE治疗(100、400、或1600毫克/公斤)显著抑制OC水平升高值类似的骗局。OVX组血清E2水平明显下降比虚假的组。然而,PE治疗,除了1600毫克/公斤,显著提高OVX大鼠E2水平(图3 (c))。ER的表达α减少在OVX大鼠,PE治疗调节ER -α剂量依赖性的方式(图表达3 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.6。体育对血清素和骨代谢指标的影响
表3总结了血清素和骨代谢指标的变化,如CTX-1 DPD, PYD。OVX组在血清素,会增加相当大的多元印刷,PYD水平而虚假的集团。CTX-1水平没有显著差异之间的虚假和OVX组。PE治疗OVX大鼠显著减少这些骨代谢标记和5 -羟色胺水平。
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数据提出了均值的平均值±标准误差(SEM)。假的,虚假的操作;OVX卵巢切除术;PE-25 OVX + PE 25毫克/公斤;PE - 100, OVX + PE 100毫克/公斤;PE - 400, OVX + PE 400毫克/公斤;PE - 1600, OVX + PE 1600毫克/公斤;CTX-1 I型胶原蛋白c端端肽片段的;多元印刷,deoxypyridinoline;PYD pyridinoline。和
vs。虚假的集团;
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vs。OVX组。 |
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4所示。讨论
在绝经后妇女雌激素缺乏和OVX大鼠促进代谢综合症(17]。OVX大鼠模型已被广泛用于评估天然的雌激素活性化合物(18]。在这项研究中,我们研究了PE的雌激素活性与绝经后症状如肥胖、骨质疏松症和OVX大鼠的血脂异常。
OVX大鼠表现为体重增加,子宫萎缩,骨质疏松,雌激素减少,所有这些通常发生在绝经后妇女。如前所述(19),OVX大鼠有显著提高身体体重增加,不同的子宫萎缩,和子宫减肥与sham-operated老鼠相比,表明卵巢切除术成功诱导绝经期。然而,PE治疗抑制子宫减肥和身体体重增加和提高OVX大鼠子宫内膜厚度。这些结果表明,PE可以改善绝经后症状OVX大鼠。
我们还证实,PE补充ER的表达升高α蛋白质在OVX大鼠子宫和血浆E2水平。呃- - - - - -α至关重要的感应子宫肌肉组织的破坏和阴道上皮细胞增殖的雌性激素(生长发育的关键阶段20.]。这些结果暗示PE可能通过提高E2水平起到雌激素作用和改善子宫。
PE的补充1600毫克/公斤没有改变ALT和AST水平,这是肝脏损伤的生物标志物。这个结果类似于之前的研究,报告说野葛根不剧毒根据毒性评估21]。这些数据表明,PE摄入剂量没有造成任何不利影响OVX大鼠的肝脏。
雌激素不足,卵巢切除术导致增加脂肪堆积和肝脂肪变性22]。ER -α淘汰赛据报道,雌性老鼠表现出一个肥胖与增加内脏肥胖表现型,能量消耗减少,胰岛素抵抗[23,24]。类似于之前的研究,OVX组显示,内脏脂肪质量显著增加,血浆FFA,胰岛素水平和肝脂质过氧化作用。ER -α也是必要的身体体重增加后的衰减OVX [25]。在这项研究中,PE治疗显著抑制身体体重,腹部脂肪堆积、和血脂水平。这些结果表明,体育作为植物雌激素在OVX大鼠脂质代谢。
血钙和P水平反映骨质流失的程度(26]。本研究显示Ca OVX组水平略低于那些虚假的组。然而,PE治疗(400和1600毫克/公斤)显著提高OVX大鼠的血钙水平。骨代谢生化标记物的被广泛用于评估骨重塑的代谢活动27,28]。结果表明:OVX大鼠的股骨BMD低比虚假的老鼠。骨营业额增加了OVX-induced雌激素缺乏,就是明证高骨吸收(CTX、DPD PYD)和更高的骨形成(OC) OVX大鼠比虚假的老鼠。这些发现与之前的研究相一致(29日,30.]。相比之下,PE补充显著抑制骨营业额的增加标记的水平,这表明PE可能有足够的雌激素活性影响OVX大鼠的骨代谢率。
据报道,血与骨代谢的增加血清素水平增加OVX大鼠模型的人类和绝经后骨质疏松症(31日]。在目前的研究中,我们发现循环OVX组的血清素显著增加。然而,PE治疗显著地抑制血清素水平的增加。因此,血清素水平可能被用作标记的绝经后骨质疏松症。
5。结论
在目前的研究中,这是表明,PE展品phytoestrogen-like OVX大鼠的活动。体育补充血浆雌二醇水平增加,子宫层厚度和ER -α蛋白表达,而不影响血清肝损伤的生物标志物。此外,PE治疗抑制骨营业额的增加标记,如CTX-1 OC,多元印刷,PYD OVX大鼠。总的来说,体育可能是一个潜在的功能性食品控制更年期症状。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作是支持的技术开发项目(P0010099)由中小企业和创业公司(海量存储系统(MSS)中,韩国)。
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