GDF-15抑制动脉粥样硬化通过抑制oxLDL-Induced脂质积累在巨噬细胞和炎症

文摘

生长分化15倍的防晒系数(GDF-15)可能参与动脉粥样硬化。然而,GDF-15在动脉粥样硬化中的作用尚不清楚。本研究的主要目的是验证GDF-15在动脉粥样化形成的作用和机制。我们首先比较了血清GDF-15水平在冠状动脉粥样硬化患者和健康人之间。然后一个ApoE^−−/动脉粥样硬化小鼠模型是用来探索GDF-15对氧化低密度脂蛋白的影响(oxLDL)积累,atherosclerosis-related基因表达,蛋白质和脂质积累相关表达式在小鼠巨噬细胞。因此,冠状动脉粥样硬化患者的血清GDF-15水平显著高于健康人群。在小鼠模型中,GDF-15表达升高血小板的核心,它主要是由巨噬细胞分泌。此外,GDF-15 oxLDL-induced减少脂质积累和炎症激活巨噬细胞。GDF-15 mRNA CD36的表达减少,LOX1,在巨噬细胞TLR4与脂蛋白相关积累。进一步研究表明,GDF-15可能通过抑制抑制oxLDL-induced脂蛋白积累CD36 LOX1和减少巨噬细胞通过抑制TLR4的炎症。因此,GDF-15可能抑制动脉粥样硬化斑块形成通过抑制脂蛋白积累和炎症激活。

1。介绍

动脉粥样硬化是血管疾病的主要原因,包括缺血性心脏疾病,缺血性中风,外周动脉疾病(1]。慢性炎性疾病,动脉粥样硬化通常发生在动脉血管的内在曲率和分支点,在内皮激活了层流流动(2]。一旦激活,内皮增加脂蛋白的渗透率,导致脂蛋白在动脉血管壁的积累。隔离脂蛋白诱发炎症反应,然后循环单核细胞被雇来这个网站和分化成巨噬细胞摄取的脂蛋白,因此对抗炎症。然而,这个过程不能清楚脂蛋白但转换lipoprotein-laden泡沫细胞,巨噬细胞可分泌多种物质启动和促进动脉粥样硬化斑块的形成。在斑块的形成,促炎细胞因子和趋化因子释放的巨噬细胞和其他细胞发挥着至关重要的作用3]。

GDF-15属于转化生长因子-β(TGF -β总科)/骨形成蛋白(bmp) (4),血管发展的有力监管机构和血管重建,在动脉粥样硬化和再狭窄中发挥关键作用。TGF -β每个位置调节和增殖、分化和存活的内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞和T细胞通过激活Smad-dependent Smad-independent信号通过heteromeric I型和II受体复合物也参与血管钙化的细胞的反应(5]。先前的研究表明,GDF-15表达与多种疾病的发生和发展相关的是(6]。例如,GDF-15可以诱导肿瘤细胞的凋亡抑制病情发展,肿瘤的侵袭性和转移7]。此外,据报道,GDF-15与心血管和noncardiovascular死亡率相关,它在多种心血管疾病中发挥了重要作用,如心力衰竭、心脏肥大,和冠心病8- - - - - -11]。动脉粥样硬化小鼠模型的研究表明,GDF-15增加了疾病的进展,和表达缺陷GDF-15降低早期斑块的形成和提高的稳定斑块(12]。因为斑块的稳定性起着屏蔽效应对动脉粥样硬化的发展和不足GDF-15表达式可以改善斑块的稳定性,一些研究认为,缺乏GDF-15有利于身体的抗血管损伤和炎症(12,13]。然而,一些其他的研究表明,GDF-15是心脏的保护因素,已antiatherosclerosis的影响(14,15]。据报道,GDF-15可以通过高葡萄糖抑制内皮细胞的凋亡诱导,提高内皮细胞的功能通过激活以挪士/ PI3K / Akt通路(16]。先前的研究表明GDF-15可能发挥重要作用在抑制动脉粥样硬化的发生,但GDF-15在动脉粥样硬化的混凝土的作用和机制仍不清楚。

在这项研究中,我们旨在探索在脂蛋白GDF-15积累的作用,炎症反应在动脉粥样硬化。动脉粥样硬化患者和健康人血清GDF-15水平的表达和位置GDF-15小鼠主动脉粥样斑块中检测到。然后GDF-15对脂蛋白积累和促炎细胞因子释放的影响在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对巨噬细胞被揭露出来了。此外,我们调查的可能机制GDF-15 oxLDL-induced脂蛋白积累和炎症巨噬细胞为了提供新线索为进一步理解GDF-15在动脉粥样硬化的作用和机制。

2。材料和方法

2.1。人类样本收集和伦理语句

本研究涉及从健康人血清样本的使用和动脉粥样硬化患者。六十五年健康人和101名患者从云南省第一人民医院。抽血后,血清分离收集血液和储存在−80°C到后来的分析。所有样本分析匿名,所有研究人员在这项研究没有获得任何话题识别信息。此外,所有招募参与者同意抽血并签署书面知情同意。

研究伦理批准和知情同意过程的伦理委员会批准云南省第一人民医院(没有。YYLH048)。研究进行了符合赫尔辛基宣言》的基本原则和有关国际规则。

2.2。酶联免疫吸附试验(ELISA)

GDF-15在人类血清白细胞介素- 6 (il - 6)、interleukin-8(引发)、单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1),和矩阵metalloproteinase-9 (MMP-9)细胞培养上清液和老鼠血清测定使用ELISA包根据制造商的协议(ELISA精灵,爱尔兰)。

2.3。动脉粥样硬化的小鼠模型

野生型(WT) C57BL / 6小鼠和载脂蛋白e^−−/与C57BL / 6小鼠背景是购自南京大学模式动物研究中心(中国南京)。的六个C57BL / 6小鼠和载脂蛋白e^−−/老鼠被喂食高脂肪的饮食(KlibaNafag 3200补充1.25% w / w w / w可可脂胆固醇和15%)为20周,随后牺牲。在进一步的研究中,重组GDF-15(50毫克/公斤/天)是通过静脉注入ApoE^−−/10周后小鼠高脂饲料每隔三天。主动脉斑块是收集在20周高脂饲料对后续)染色和免疫组织化学分析。所有动物实验动物伦理委员会批准云南省第一人民医院(批准号YYLH048)。

2.4。细胞培养和治疗

主要文化和识别巨噬细胞是来源于小鼠骨髓:6 - 8周大的老鼠牺牲和股骨和胫骨。骨髓是放置在一个10毫升离心管。与红细胞溶解产物溶解后,上层清液被离心机在1000 r / min后5分钟。骨髓细胞resuspended培养基,接种在10厘米培养皿均匀。这些细胞被培养在一夜之间删除其他不同种类的细胞,如纤维细胞。细胞不附在墙上接种到一个新的文化板块和培养50 ng / mL重组鼠标- csf。第三天和第七天,细胞的活动和形态在倒置显微镜下观察,包括附着状态、体积、形态、和伪足变化(照片记录)。巨噬细胞从骨髓生产(培养基的成分αmem + 10%的边后卫+ 1%双抗体)。F4/80和CD11抗体作为双重标准来识别巨噬细胞的纯度。

GDF-15对巨噬细胞功能的影响,研究巨噬细胞接受oxLDL (50μ克/毫升)或oxLDL (50μ2 g / mL) + GDF-15 (ng / mL)连续48小时不改变培养基或其他干扰。细胞和文化上层清液收集在48小时后处理的后续研究。然后验证的潜在机制脂蛋白积累和炎症的抑制作用由GDF-15 oxLDL-induced巨噬细胞,CD36超表达载体和LOX1(分别pcDNA-CD36和pcDNA-LOX1)是由广州RiboBio生物科技有限公司(广州)和转染成巨噬细胞细胞Lipofectamine®2000转染试剂(美国热费希尔科学,Inc .)遵循指令。、TLR4受体激动剂Neoseptin-3 (20μ米),用于激活巨噬细胞细胞TLR4。

2.5。油红O染色

对巨噬细胞的脂质积累水平,油红O染色的巨噬细胞。短暂,细胞被固定的4%多聚甲醛(PFA), 15分钟后用PBS 3次(5分钟/时间),然后孵化与油红O工作方案(石油红:蒸馏水= 3:2)在室温下10 - 15分钟,随后分化60%异丙醇30年代,用蒸馏水洗净,1分钟。最后,采用滤纸吸收周围的水,和甘油明胶用于密封的细胞。因此,脂滴鲜红的彩色橙红色。

2.6。苏木精和伊红染色和尼氏小

来验证是否发生动脉粥样硬化在WT和载脂蛋白e^−−/小鼠主动脉组织收割,固定为4% PFA 24 h,和乙醇洗涤脱水的一系列解决方案(75%乙醇为2 h;80%乙醇为2 h;95%乙醇我2 h;95%乙醇为1.5 h II;100%的乙醇我1 h;和100%乙醇二世30分钟)在室温下然后石蜡包埋和切片(横向部分,7μ米厚)。然后被染色的部分使用修改后的苏木精和伊红染色(圆))设备(阳光室,中国)为了观察主动脉组织形态学变化和斑块的形成。光学显微镜下图片被抓获(尼康,东京,日本)。

2.7。免疫组织化学分析

免疫组织化学分析,主动脉组织样本固定在4% PFA 24 h。然后组织块放入石蜡和分为7μ米厚的部分切片机。部分框架被抗原修复解决方案和加热10分钟在低火。切片框架就取出来放到PBS 5分钟;重复3次。洗涤后,样本准备阻塞和孵化的主要抗体GDF-15一夜之间或il - 6在4°C。Isotype-matched免疫球蛋白是用来代替主要的抗体是一种消极控制染色。部分被孵化与稀释streptavidin-peroxidase合在室温下用涂颜色,hematoxylin-rendering染色设备,遵循制造商的指示。最后,它是用中性树胶封起来后,梯度酒精脱水和干燥。5分钟的部分被沾染了苏木精和安装用相差显微镜观察。

2.8。免疫荧光分析

新鲜组织样本被PFA固定剂的解决方案,并立即沉浸在4%变成30%蔗糖溶液24 h,转移到10月胶4°C 48 h后,冻结在−80°C为30分钟,然后切成薄片。接下来,与PBST洗3次,每次5分钟,在室温下。增加200μ山羊血清L密封解决方案(10%)切片,放一个准备抗体(以10%的山羊血清稀释,稀释抗体说明书,通常1:200),一夜之间,让呆在4°C。与PBST洗3次,每次5分钟,加入荧光第二抗体(1:20 00)和孵化1 h在黑暗;用0.1% PBT,清洗三次每次5分钟,在室温下。DAPI没有曝光。在荧光显微镜下,观察并记录实验结果。

2.9。RNA提取和RT-qPCR分析

从巨噬细胞总RNA提取使用试剂盒(美国Ambion)根据制造商的协议。基因表达是量化使用iTaq普遍SYBR绿色Supermix (Bio-Rad)和它连接实时PCR检测系统(Bio-Rad)从RNA逆转录后成cDNA使用iScript反向转录Supermix RT-qPCR (Bio-Rad)。引物设计放大目标基因。引物序列基因表达分析表所示1。基因表达的相对数量计算使用2^−ΔΔCt方法。

2.10。免疫印迹分析

收集巨噬细胞和细胞溶解里帕缓冲区(Solarbio,中国)。蛋白质浓度是量化使用Bio-Rad分析工具包(Bio-Rad)。蛋白质样本12% sds - page分离。然后electrophoretically转移到聚乙二烯二氟化物(PVDF)膜(Bio-Rad)。膜被孵化主要抗体(β肌动蛋白(Proteintech,中国);il - 6抗体;MCP-1抗体;MMP-9抗体,稀释1:1,000 (CST、德国);和引发抗体稀释1:1,000(美国Abcam))在一夜之间在4°C。然后用辣根膜被孵化peroxidase-coupled二级抗体(antirabbit或antimouse抗体,稀释下(Proteintech,中国))1 h在室温下(圣克鲁斯生物技术)。信号被检测到的化学发光检测设备(热费希尔科学)。乐队的蛋白质被ImageJ可视化通过放射自显影法和量化软件(美国国家卫生研究院,马里兰州贝塞斯达)。

2.11。统计分析

所有结果被证实在至少三个独立的实验中,实验显示和数据从一个代表。定量数据都意味着±SEM。分析了使用GraphPad棱镜版本7(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)。进行了统计对比每组与未配对的学生t以及或单向方差分析(方差分析)其次是Bonferroni多个比较测试。对于所有的比较, 被认为是表明一个统计上的显著差异。

3所示。结果

3.1。动脉粥样硬化患者GDF-15表达升高

缺一个先前的动脉粥样硬化小鼠模型研究表明,GDF-15早期变弱,改善血管硬化斑块稳定性(12]。临床研究表明高水平的GDF-15与冠状动脉疾病有关,包括慢性炎性动脉粥样硬化疾病(17]。探索GDF-15与动脉粥样硬化之间的关系,我们招募了65名健康人和101例冠状动脉粥样硬化。抽血后,血清分离测量GDF-15。因此,GDF-15水平的患者明显高于健康对照组(960.1±26.35 pg / mL和769.6±26.75 pg / mL; ,我们可以看到在图1)被ELISA测定。这一发现表明,血清GDF-15水平可能与动脉粥样硬化有关。

3.2。高表达的GDF-15与动脉粥样硬化小鼠巨噬细胞

为了进一步确定GDF-15与动脉粥样硬化的相关性,我们比较GDF-15表达巨噬细胞居住在血管。在此,ApoE^−−/动脉粥样硬化小鼠模型,研究了动脉粥样硬化斑块和血管。如图2(一个)与野生型小鼠相比,载脂蛋白e^−−/高脂肪食物的老鼠显示重要的主动脉弓狭窄,伴随着明显的血管内皮细胞损伤和动脉粥样硬化斑块的形成。与此同时,免疫组织化学染色显示主动脉的GDF-15 ApoE的表达^−−/小鼠动脉粥样硬化斑块明显高于WT老鼠(图2 (b)),这是与血清GDF-15(图的表达一致1)。此外,免疫荧光染色结果表明,CD68阳性巨噬细胞和表达水平的动脉组织的GDF-15 WT老鼠低,而积极CD68和GDF-15载脂蛋白e^−−/老鼠明显高于那些在WT老鼠,和大多数GDF-15生产细胞CD68阳性巨噬细胞(图2 (c)),这表明,巨噬细胞可能生产GDF-15的主要细胞。因此,我们的数据表明GDF-15的表达在动脉粥样硬化主要由巨噬细胞调节。

3.3。GDF-15抑制巨噬细胞脂质积累

巨噬细胞在动脉粥样硬化内皮细胞发挥决定性的作用下萌生和发展2,18]。巨噬细胞在动脉粥样硬化病变积极参与脂蛋白摄取和积累,导致脂蛋白存储在内皮细胞和动脉粥样硬化的起始和进展19]。探索GDF-15在动脉粥样化形成的作用,我们首先诱导巨噬细胞主要文化,monocyte-derived巨噬细胞(mdm;图3(一个)),并研究了影响GDF-15脂蛋白存储在巨噬细胞的油红O染色。因此,独自oxLDL治疗诱导巨噬细胞脂蛋白积累,GDF-15治疗显著抑制oxLDL-induced脂蛋白积累(图3 (b))。这些结果表明GDF-15脂蛋白减少巨噬细胞中积累。

3.4。GDF-15抑制巨噬细胞炎症反应

动脉粥样硬化的炎症反应是一个显著特征,和oxLDL已被证实能引发炎症反应和促炎细胞因子的生产(3]。确定GDF-15对动脉粥样化形成的影响,我们研究了影响GDF-15促炎细胞因子,趋化因子,和基质蛋白,这都与动脉粥样硬化的起始与发展oxLDL的存在。与之前的研究一致3),我们的研究结果表明,oxLDL治疗调节il - 6的分泌,引发,MCP-1 MMP-9, GDF-15治疗明显抑制above-studied oxLDL-induced释放的蛋白质(图4(一))。接下来,探索GDF-15抑制蛋白分泌的机制,我们执行RT-qPCR试验和免疫印迹试验来研究GDF-15的影响胞内蛋白的转录和蛋白质表达。因此,oxLDL治疗调节的细胞内表达il - 6,引发,MCP-1,和MMP-9 mRNA和蛋白水平,而GDF-15治疗抑制细胞内信使rna和蛋白质的表达这些促炎细胞因子(数字4 (b)和4 (c))。因此,上述数据表明GDF-15可以抑制oxLDL-induced炎症反应,促进动脉粥样硬化的起始与发展。

3.5。GDF-15降低基因表达与脂蛋白相关积累

随后,我们探讨了GDF-15块动脉粥样化形成的潜在机制。脂蛋白积累在巨噬细胞是动脉粥样硬化的发病机制的核心和最早的事件在斑块形成20.]。在此,我们测量的影响GDF-15脂蛋白积累相关的基因表达。巨噬细胞是治疗oxLDL (50μ克/毫升)或oxLDL (50μ2 g / mL) + GDF-15 (ng / mL) 48小时。治疗后,CD36 LOX1、LXRA MSR1, SCARB1, FABP4, TLR2 TLR3和TLR4 mRNA水平衡量RT-qPCR化验。结果表明,GDF-15显著降低水平的三个基因,CD36 LOX1, TLR4(图5),在oxLDL-induced巨噬细胞。这个结果表明CD36 LOX1, TLR4可能参与GDF-15-mediated脂蛋白积累抑制。

3.6。GDF-15抑制oxLDL-Induced脂蛋白通过抑制DC36和LOX1积累

确定GDF-15抑制oxLDL-induced脂质积累在巨噬细胞,使转染pcDNA CD36和pcDNA LOX1应承担为mdm细胞CD36过表达和LOX1,然后诱导untransfected oxLDL转染mdm细胞,和治疗GDF15 48小时。油红O染色显示地理GDF 15量抑制脂质积累进入oxLDL诱导mdm,但过度CD36和LOX1逆转GDF的效果(图15治疗6(一)),这表明GDF-15抑制oxLDL-induced脂质积累部分通过抑制CD36 LOX1。然后,以验证是否通过抑制TLR4 GDF-15抑制oxLDL-induced巨噬细胞炎症,Neoseptin-3, TLR4受体激动剂,用于激活TLR4当oxLDL-induced细胞被GDF-15治疗。结果表明,GDF-15 mdm引起的表达下调TLR4的表达,而Neoseptin-3逆转GDF-15的抑制效果(图6 (b))。此外,il - 6的水平,引发MCP-1,和MMP9 oxLDL-induced mdm被GDF-15显著抑制,而Neoseptin-3治疗逆转这些促炎细胞因子(数据的水平6 (c)- - - - - -6 (f)),这表明GDF-15减少促炎细胞因子释放在oxLDL-induced巨噬细胞通过抑制TLR4信号的激活。

3.7。美联储ApoE重组GDF-15对脂肪的影响^−−/老鼠

确定重组的影响GDF-15 ApoE的炎症反应和动脉粥样硬化斑块的形成^−−/老鼠,重组GDF-15是静脉注射移植循环GDF-15水平。结果显示,重组GDF-15明显减轻内皮细胞损伤和动脉粥样硬化斑块形成ApoE的主动脉^−−/老鼠(图7(一))。免疫组织化学染色的il - 6表明,il - 6是ApoE的斑块中高度表达^−−/老鼠主动脉弓,重组GDF-15积极率降低il - 6在ApoE的斑块^−−/小鼠主动脉(图7 (b))。进一步研究表明,GDF-15可以抑制CD36的表达,LOX1, TLR4 ApoE的主动脉^−−/老鼠(图7 (c)),降低il - 6的水平,引发MCP-1, MMP9 ApoE的外周血^−−/老鼠(图7 (d))。这些结果表明,静脉注射重组GDF-15可能改善动脉粥样硬化。

4所示。讨论

GDF-15的新成员转化生长因子β(TGF -β)总科,最近被发现在激活巨噬细胞。GDF-15是人类巨噬细胞诱导oxLDL及其体外和应该有助于氧化介质stress-dependent后果在动脉硬化的斑块调节细胞凋亡和炎症过程激活巨噬细胞(21]。与动脉粥样硬化的关系来确定GDF-15,我们比较了动脉粥样硬化患者和健康人血清GDF-15水平。因此,GDF-15高度表达的患者与健康人相比(图1)。我们还测量了GDF-15 ApoE的动脉粥样硬化斑块^−−/小鼠动脉粥样硬化模型。在小鼠动脉粥样硬化,GDF-15高度表达的核心斑块和巨噬细胞(图2 (b))。本研究建议GDF-15可能是与动脉粥样硬化有关,可以起到保护作用。

动脉粥样硬化是由脂蛋白在动脉血管壁内膜的层积累,导致循环单核细胞的招募22]。一旦进入动脉内膜,单核细胞分化成巨噬细胞;那么后者摄食脂蛋白,特别是氧化脂蛋白,最后转化为泡沫细胞,促进动脉粥样硬化的进展(23- - - - - -26]。确定真正的GDF-15在动脉粥样硬化中的作用,我们发现的影响GDF-15 oxLDL-induced巨噬细胞脂蛋白积累和炎症反应。脂蛋白积累分析表明,GDF-15抑制脂质积累oxLDL-treated巨噬细胞(图3)。同时,GDF-15导致减少炎症反应在oxLDL-treated巨噬细胞(图4)。这些数据表明,GDF-15可以抑制动脉粥样硬化的起始和进展。在这项研究中,一种GDF-15抑制剂并不是用来证实GDF-15脂质积累和炎症的影响因素,可以成为未来的研究方向。

炎症反应中起着重要的作用在动脉粥样硬化的发展和恶化。促炎细胞因子il - 6是一个proatherogenic细胞因子,il - 6生产持续促进动脉粥样硬化的发展(27- - - - - -29日]。重组il - 6治疗加重动脉粥样硬化在野生型和atherosclerosis-prone ApoE^−−/与高脂肪饮食的老鼠,它显示了一个极大地提高了病变的大小(26]。引发另一个proinflammation细胞因子,趋化因子,MCP-1,参与单核细胞粘附和迁移在动脉粥样硬化(动脉血管壁29日]。MMP属于一个非常大的家庭的肽酶能降解细胞外基质(30.]。MMP-9 MMP的家族的一员,已经导致斑块的不稳定(3]。本研究表明,GDF-15能够降低il - 6的水平,引发,MCP-1, MMP-9 oxLDL-treated巨噬细胞(图4)。这个结果表明GDF-15多能atheroprotective效应,即阻止单核细胞进入动脉壁并抑制菌斑形成和扩张。

研究atheroprotective GDF-15机制,我们研究了GDF-15对基因表达的影响与脂蛋白相关巨噬细胞中积累。因此,我们发现GDF-15可以减少CD36的表达,LOX1, TLR4(图5)。受体CD36和LOX1都回收,识别和处理改性低密度脂蛋白(比如oxLDL) (31日]。先前的研究表明,CD36定位在巨噬细胞的表面可以绑定oxLDL然后促进oxLDL内化(32]。另一方面,CD36的交互oxLDL也可以激活免疫反应导致细胞因子的分泌,导致免疫细胞浸润并最终促进动脉粥样硬化的进展(33]。像CD36 LOX1还可以绑定oxLDL,载脂蛋白e^−−/动脉粥样硬化小鼠模型研究表明,LOX1超表达显著增强(34]。这项研究表明,GDF-15抑制CD36的表达和LOX1 GDF-15可能抑制oxLDL-induced脂蛋白积累通过抑制CD36的表达和LOX1(图6(一)),但具体的分子机制需要进一步研究。另一方面,GDF-15治疗也减少了TLR4的表达。先前的研究表明TLR4在动脉粥样硬化中发挥作用。作为一种模式识别受体TLR4激活可以诱导促炎反应,然后提高动脉粥样化形成。此外,最低限度,oxLDL可以被TLR4和促进TNF -α和il - 6生产(35]。因此,我们的研究结果表明,GDF-15 oxLDL和减毒动脉粥样硬化引起的抑制促炎反应起始和进展的表达下调TLR4(数字6 (b)和6 (c))。

总之,本研究表明,GDF-15抑制动脉粥样硬化通过抑制脂质积累和降低il - 6的表达,引发,MCP-1, MMP-9巨噬细胞。此外,CD36的表达,LOX1, TLR4可能发挥重要作用在GDF-15 atheroprotective机制。然而,具体的分子机制需要进一步探索。本研究表明,GDF-15可能抑制动脉粥样硬化斑块形成通过抑制脂蛋白积累和炎症激活。尽管这项研究的结果与现有的一些研究中,不一致和GDF-15在动脉粥样硬化中的作用仍有争议,这需要进一步的研究和说明,GDF-15仍然有潜力成为动脉粥样硬化的诊断和治疗的目标。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有这些手稿作者作出了显著贡献。所有作者阅读和批准最后的手稿。H H贡献多半以参与这个手稿的所有实验和写作手稿。ZL C和Y L参与主要在建立动物模型和组织病理学染色鉴定;公里G和L X的贡献主要是细胞培养和体外测试;H F和JJ Y导致收集病人的血清和部分ELISA检测;XY W贡献的主要细胞培养、数据整理和分析;和Q M导致本研究的概念和设计和指导的写作手稿。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(81460188和81460188号),云南省科学和Technology-Kunming医科大学联合应用基础研究(没有特殊项目。202001 ay070001 - 118),预防和治疗老年研究中心的云南省卫生和计划生育委员会(没有。2016 ns201),云南卫生培训项目(没有高水平的人才。l - 2017013);和一万年云南省人才Program-Famous医生项目(没有。ynwr -我- 2018 - 018)。

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