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Chureeporn Imphat, Pakakrong Thongdeeying, Arunporn Itharat, Sumalee Panthong, Sunita Makchuchit Buncha Ooraikul,尼尔·m·戴维斯, ”提取物的抗炎调查花椒属植物rhetsa”,以证据为基础的补充和替代医学, 卷。2021年, 文章的ID5512961, 15 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/5512961
提取物的抗炎调查花椒属植物rhetsa
Chureeporn Imphat
,1
Pakakrong Thongdeeying,2,3
Arunporn Itharat,2,3
Sumalee Panthong,2,3
(Sunita Makchuchit,3
Buncha Ooraikul,4
和
尼尔·m·戴维斯5
1研究生院申请泰国传统医药项目,医学院,法政大学、12120年府,泰国
2应用泰国传统医药,医学院,法政大学、12120年府,泰国
3应用泰国传统医药研究卓越中心(CEATMR),泰国法政大学,12120年府
4农业食品和营养科学部门,农业生命与环境科学学院、阿尔伯塔大学,埃德蒙顿,AB T6G 2 p5,加拿大
5学院药学和制药科学、阿尔伯塔大学,埃德蒙顿,AB T6G 2 p5,加拿大
文摘
花椒属植物rhetsa已经在泰国北部的饮食消费,也用作医药在古代经文关节病。因此,本研究旨在评估各种提取物微分部分的活动z rhetsa通过抑制炎症介质(不,TNF -α和铂族元素2在RAW264.7巨噬细胞)。活性提取物的化学成分被GC / MS分析。这种植物研究的部分是整个水果(F)、果皮(P)和种子(O),提取的方法包括浸渍在己烷,95%乙醇和50%乙醇,沸腾的水,和水蒸馏。结果表明,己烷和95%乙醇提取从外果皮(PH值和P95)及其种子植物精油(所以)是最活跃的提取物。PH值和P95没有给的最高抑制生产集成电路50为11.99±1.66μg / ml和15.33±1.05μg / ml,分别,他们也显示出最高的对肿瘤坏死因子-抗炎作用α与集成电路50为36.08±0.55μg / ml和34.90±2.58μ分别g / ml。PH值和P95还显示最高的铂族元素的抑制作用2但不到IC50为13.72±0.81μg / ml, 12.26±0.71μg / ml, 8.61±2.23μ分别g / ml。2,3-Pinanediol是主要的抗炎化合物分析了PH值(11.28%)和P95 (19.82%), terpinen-4-ol构成主要抗炎化合物在35.13%。这些发现是第一个支持数据ethnomedical用于镇痛和抗炎活动急性(所以)和慢性(PH值和P95)炎症。
1。介绍
疼痛是一种常见的症状,炎症和组织损伤的迹象1- - - - - -3]。病因包括物理、生物和化学因素,如外伤、过度使用,化学毒素,病原体可以激活炎症反应(1]。炎症反应,保护和恢复正常状态的细胞和组织4]。刺激激活白细胞产生炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)[1]。网站的组织损伤、前列腺素E2(铂族元素2)中扮演一个重要的角色在急性炎症和水肿心律不齐,剧烈的疼痛,和发烧5]。肿瘤坏死因子-α是一种炎性细胞因子,与铂族元素交织在一起吗2因为它刺激磷脂酶一个2和发布类花生酸环氧酶和脂氧合酶途径在花生四烯酸代谢5]。环氧酶是铂族元素的重要的产品2(5]。此外,高水平的肿瘤坏死因子-α会引起发烧和激活内皮细胞表达黏附分子导致白细胞粘附和长期炎症(6]。巨噬细胞触发生产TNF -α细胞因子引起疼痛和发烧,细胞功能的损失,或损失的流动性在关节2]。肿瘤坏死因子-α也可以激活巨噬细胞产生一氧化氮(NO) (7]。没有是一个来自精氨酸和氧自由基诱导一氧化氮合酶(间接宾语)酶从巨噬细胞8]。没有引发毒性与超氧化物和产生过氧亚硝基剧毒微生物和邻近正常细胞(8]。细胞和组织正逐渐被过度生产,因此,疼痛的感觉依然存在。
尽管炎症反应的结果包括生理功能保护和恢复正常的细胞和组织状态,过度炎症反应的原因是持续的炎症,会导致慢性炎症和疼痛9,10]。慢性炎症的影响参与慢性疾病如系统性红斑狼疮(SLE),类风湿性关节炎、骨关节炎、癌症和心血管疾病是众所周知的(10]。
草药疗法已用于抗炎和缓解疼痛的性质根据民间智慧和传统民族医学几个世纪。根据泰国传统医学原则,草药有辣的味道和辛辣的香气如辣椒、生姜、plai (姜cassumunar)常用于缓解疼痛11]。
一些人的生化分类研究花椒属植物物种如z acanthopodium,z nitidum,z myriacanthum在泰国北部[12,13]或z budrunga,z水保,z青椒,所有显示抗炎和antinociceptive行动14- - - - - -17]。花椒属植物rhetsa是一种刺激性的植物和芸香科的一员。整个水果由果皮和种子和用于饮食在泰国的北部。果皮和果都Pra-O-Sod-Pra-Narai圣经中描述和泰国传统家庭治疗肌肉痉挛,肌肉和肌腱疼痛减轻肿胀,也从脓肿和痔疮疼痛11,18]。z rhetsa水果还广泛用作抗炎剂和防腐剂在印度(19]。z rhetsa水果和种子也用作止痛治疗牙痛,消化问题,炎症和感染在东南亚(19]。z rhetsa活动的驱蚊剂,其杀灭幼虫,抗菌,抗氧化和抗肿瘤活动特征(20.]。此外,果皮的主要化合物,水果和种子的z rhetsa柠檬烯等单萜、terpinen-4-ol桧烯α蒎烯(21- - - - - -30.)已报告的抗炎活性(31日- - - - - -33]。
因此,目前的研究比较和研究不同解剖部位的抗炎活动如整个水果,果皮和种子z rhetsa提取通过抑制脂多糖(LPS)诱导不,TNF -α和铂族元素2在RAW264.7巨噬细胞。此外,化学成分的活性提取物也被划定为抗炎,和缓解疼痛的活动z rhetsa已经不研究[21- - - - - -23]。此外,果皮的化学成分分析,水果和种子的z rhetsa各种的抽取和描述没有进行抗炎活动(31日- - - - - -33]。
2。材料和方法
2.1。植物材料
z rhetsa收集从它的自然栖息地禁止美新加坡汤姆Thasud村孟区,泰国清莱省。凭证标本被发现通过使用两花和果实的形态的重要特征。之后,植物的学名是由植物学家在美国国家公园、野生动植物保护、曼谷,泰国。凭证标本BKF数量193835年森林植物标本的保存在办公室,曼谷,泰国。
2.2。化学药品和试剂
乙醇95% (EtOH)(商业级)从C.M.J.锚购买公司(泰国)。分析级二甲亚砜(DMSO)、己烷、盐酸(HCl)和异丙醇从RCI Labscan购买(泰国)。蒸馏水是由Milli-Q从微孔(美国)水净化系统。格里斯试剂(1%磺胺和0.1%N——(1-naphthyl) 2.5%磷酸乙二胺盐酸盐),蓝色噻唑基溴化四唑(MTT),脂多糖(LPS)大肠杆菌(O55: B5),强的松从Sigma-Aldrich购买(美国)。胎牛血清的边后卫,penicillin-streptomycin (P / S), RPMI 1640培养基,杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)从Gibco购买(美国)。前列腺素的E2酶联免疫试剂盒购自开曼化学(美国),和鼠标TNF -αQuantikine ELISA检测组件购买从研发系统公司(美国)。
2.3。准备的提取
在植物材料被晒干后,他们分为果皮,水果和种子。每一部分是地面粗粉,然后提取3方法与己烷组成的浸渍,EtOH EtOH 95%和50%,水蒸馏,煎煮。
浸渍:每个部分粉(1公斤)被浸渍用不同的溶剂提取三天(溶剂:粉率= 2:1),通过绘画纸没有过滤。1滤纸。marc remacerated两次,合并滤液被旋转蒸发器蒸发给己烷提取物、ethanolic提取95%,和50% ethanolic提取的果皮(PH值、P95和P50),水果(FH、F95和F50),和种子(SH、S95和S50),分别。
水蒸馏:每一部分粉末(500克)在Clevenger蒸馏装置收集的100分钟,精油,给从果皮精油(PO),水果(FO),种子(所以)。
汤:粉(500克)的每个部分在蒸馏水煮15分钟,过滤。残留有反复煎煮两次,合并滤液被减少到1/3沸腾然后冷冻乾给水从果皮中提取(PW),水果(FW),种子(SW)。所有原油提取图显示的百分比收益率1。原油提取保持在−20°C,和精油使用前保持在4°C。
2.4。细胞培养和文化媒体
生264.7从老鼠巨噬细胞(亩骶)从美国购买类型文化集合(写明ATCC®矿- 71)(美国)。细胞培养的两种类型的媒体根据化验:(1)RPMI 1640中等LPS-induced化验的抑制一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)建立后生产方法(34)和程序制造商的手册(35分别),和(2)测定的DMEM培养基LPS-induced抑制前列腺素E2(铂族元素2)生产的方法程序制造商的手册(36]。每个媒体都补充了10%的边后卫和1% P / S(100单位/毫升)和在孵化器孵化37°C, 5%的股份有限公司2,95%的湿度。
2.5。测定细胞生存能力
细胞生存能力是通过使用MTT试验(一式三份34]。简而言之,后1×105细胞/的原始264.7巨噬细胞被播种在消毒96孔板(100μl /)和孵化24 h,媒介被删除,取而代之的是100年μ信用证的新鲜培养基。不同稀释的样本添加(100μl /)和孵化24小时。随后,上层清液(100μ信用证)被移除,可行的细胞被确定通过添加10μl / MTT的解决方案(5毫克/毫升)和进一步孵化2 h。中被删除,取而代之的是100年μ包含0.04 l /异丙醇的盐酸溶解甲瓒的细胞。标仪测得的吸光度是570海里。细胞生存能力高于70%控制(控制介质水提取物和控制溶剂:0.2% DMSO的最终浓度对原油提取物、精油、和强的松)表示,测试样本的活动并不是由于细胞毒性34]。细胞生存能力的百分比计算通过使用以下方程: 在OD =光密度;样本=平均OD ODs;ODs OD控制=意味着控制。
2.6。抗炎活动
2.6.1。确定抑制LPS-Induced没有生产
抑制作用的决心LPS-induced没有生产完成后一式三份协议的建立方法(34]。简单地说,100年μ信用证的原始264.7巨噬细胞(1×105细胞/)被播种在消毒96孔板和孵化24 h,然后中被删除,取而代之的是100年μ信用证的新鲜培养基含有有限合伙人(2 ng / ml的最终浓度)。不同稀释的样本添加(100μl /)和孵化24小时。随后,一个100μ信用证的上层清液转移到nonsterilized 96板,添加了格里斯试剂(100μ信用证)。混合溶液的吸光度测量标在570海里。测试样本的结果与强的松相比,积极控制。抑制LPS-induced没有生产的百分比计算使用以下方程,以及集成电路50值的计算是通过使用GraphPad棱镜软件(美国CA): 在OD =光密度;OD控制=意味着控制ODs (+ LPS)——意味着控制ODs(−有限合伙人);样本=平均OD ODs (+ LPS)——意味着样品ODs(−有限合伙人)。
2.6.2。测定LPS-Induced抑制TNF -α生产
LPS-induced的抑制TNF -α通过使用鼠标TNF -生产决定αQuantikine ELISA检测组件在制造商的手册程序后(35]。简单地说,生264.7巨噬细胞(1×105细胞/)被播种在消毒96孔板(100μl /)和孵化24小时;然后,介质被删除,取而代之的是100年μ信用证的新鲜培养基含有有限合伙人在2 ng / ml最终浓度。不同稀释的样本添加(100μl /)和孵化24小时。孵化后,上层清液(50μ信用证)转移到96孔板的酶联免疫试剂盒和它是根据制造商的手册的方法(35]。吸光度测量在450 nm通过使用微型板块读者。测试样本的结果与强的松相比,积极控制。实验进行了一式三份。LPS-induced抑制肿瘤坏死因子-的百分比α生产使用以下方程,计算和集成电路50值的计算是通过使用GraphPad棱镜软件(美国CA): 在OD =光密度;OD控制=意味着控制ODs (+ LPS)——意味着控制ODs (LPS);样本=平均OD ODs (+ LPS)——意味着样品ODs(−有限合伙人)。
2.6.3。抑制LPS-Induced测定铂族元素2生产
的抑制LPS-induced铂族元素2生产是由使用前列腺素E2ELISA Kit-Monoclonal后程序制造商的手册(36]。简单地说,生264.7巨噬细胞(1×105细胞/)被播种在消毒96孔板(100μl /)和孵化24 h,然后中被删除,取而代之的是100年μ信用证的新鲜培养基含有有限合伙人在5μg / ml最终浓度。不同稀释的样本添加(100μl /)和孵化24小时。孵化后,上层清液(50μ信用证)转移到96孔板的酶联免疫试剂盒和程序进行根据制造商的手册的方法(36]。吸光度测量在412 nm通过使用微型板块读者。测试样本的结果与强的松相比,积极控制。实验进行了一式三份。抑制的百分比LPS-induced铂族元素2生产使用以下方程,计算和集成电路50值的计算是通过使用GraphPad棱镜软件(美国CA): 在OD =光密度。
2.6.4。化学成分分析,气相色谱/质谱(GC / MS)
活性提取物的化学成分进行了分析通过使用热集中GC,北极星问一个自我注射器和毛细管柱TG-5减轻体重(30 m×0.25毫米×0.25μ米)(热费希尔科学)。柱温箱温度程序使用初始温度60°C和5分钟初始时间,然后加热5°C /分钟的速度到300°C和5分钟。喷油器温度为200°C,氦(他)作为载气与恒流率1.0 ml / min,注入体积是2μl(分裂率1:50)。电离能是70 eV。GC / MS质谱的峰值是由质谱检测并与图书馆数据库的国家标准与技术研究院(NIST 08年,医学博士,美国)匹配所有化合物分析超过870的分数将被选中37]。化学成分分析是由草本和泰国传统医药部门,泰国科技园区。
2.6.5。统计分析
细胞生存能力的抑制百分比LPS-induced不,TNF -α和铂族元素2生产、集成电路50提出了平均值±标准误差的方法(SEM)。意味着控制和治疗组之间的比较是由单向方差分析Dunnett紧随其后的多重比较检验。意味着在独立治疗组之间的比较(2组)使用未配对进行了分析t测试。意味着在多个比较治疗组(3组)进行了分析通过使用单向方差分析单向方差分析紧随其后。水平的显著差异< 0.05。
3所示。结果
3.1。准备的提取
比例提取物的产量和精油如图1。果皮显示等三种方法提取的最高产量的50%乙醇,石油,水提取物(分别为16.47%、14.30%和13.37%)。种子显示提取的最高收益率95%乙醇和正己烷。
3.2。测定细胞生存能力
接触的各种提取后细胞生存能力z rhetsa(积极控制)和强的松(Pred)呈现在图2(一个)为抑制LPS-induced没有和TNF -α生产和图2 (b)为抑制LPS-induced铂族元素2生产。的各种提取z rhetsa和强的松(Pred)显示细胞生存能力大于70%时浓度测试。
(一)
(b)
3.3。确定抑制LPS-Induced没有生产
不同提取物的抗炎活性z rhetsa通过抑制生产生264.7 LPS诱导的巨噬细胞与强的松(积极控制)如表所示1。
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结果显示为均值的平均值±标准误差(SEM) (n= 3)。有限合伙人:脂多糖;集成电路50:半抑制浓度最大。__:%抑制不显著不同于氢泼尼松;
值< 0.01,
值< 0.001与强的松相比是一个积极的控制;一个PH值和P95之间没有明显不同;b明显不同(值< 0.01)之间的PH值、P95 F95;c明显不同(值< 0.05)之间F95和跳频;(-)没有测试。 |
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PH值和P95 50μg / ml没有给的最高%抑制生产(分别为97.15%±0.37和97.66%±1.12)而跳频,F95 F50, S50 100μg / ml没有给的最高%抑制生产(3.04±91.55%,93.36%±3.23,1.26±82.62%,和81.94%±2.79,分别)。这些结果与强的松在50岁没有显著不同μ克/毫升(0.34±96.82%)(图3)。
提取结果表明,PH值和P95的抑制作用没有生产集成电路50值为11.99±1.66μg / ml和15.33±1.05μ分别g / ml。他们明显不同(值< 0.01和值< 0.001,分别从强的松(IC)50= 0.07±0.001μg / ml或0.19±0.001μ米)。然而,果皮是95%的乙醇和正己烷浸软。结果表明整个水果浸渍在95%乙醇和正己烷显示活动高于煎煮水和50%乙醇浸渍。对种子进行了水蒸馏,重大anti-inflamatory活动展示与其他提取方法相比没有生产。提取的方法揭示了大多数活动的抑制果皮不生产证明与浸渍在95%乙醇和正己烷。所有水提取物(PW,弗兰克-威廉姆斯和SW)的精油percarp (PO)和水果(FO),和种子的己烷提取物(IC (SH)并不活跃50> 100μg / ml)。
3.4。测定LPS-Induced抑制TNF -α生产
PH值和P95 50μg / ml给最高的%抑制TNF -α生产(分别为64.79%±0.26和60.46%±3.07)明显不同( - - - - - -从50岁强的松值< 0.001)μ克/毫升(0.70±89.00%)与其他提取100μg / ml %抑制肿瘤坏死因子-最高α生产明显不同(从50岁强的松值< 0.001)μ克/毫升(图3)。
集成电路的结果50肿瘤坏死因子-的抑制作用α产量如表所示2。果皮在95%乙醇和正己烷浸软维护抑制生产的影响。PH值和P95分别为36.08±0.55μg / ml和34.90±2.58μg / ml,分别,但明显不同(从强的松(IC值< 0.001)50= 0.08±0.003μg / ml或0.22±0.003μ米),IC50所以(49.85±4.29μg / ml)明显不同(从PH值和P95值< 0.05)。所有的水提取物(PW,弗雷德里克和SW)和种子的提取物(除了种子的精油:)没有活动LPS-induced TNF -α生产抑制(集成电路50> 100μg / ml)。
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结果显示为均值的平均值±标准误差(SEM) (n= 3)。有限合伙人:脂多糖;集成电路50:半抑制浓度最大。
值< 0.001与强的松相比是一个积极的控制;一个PH值和P95之间没有显著不同的统计;b不同的显著的统计(值< 0.05)之间的PH值、P95和;(-)没有测试。 |
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3.5。抑制LPS-Induced测定铂族元素2生产
所以在100年μg / ml了铂族元素的抑制百分比最高2生产(0.22±83.70%),与强的松在50岁没有显著不同μ克/毫升(3.80±93.20%),而PH值和P95 50岁μg / ml了铂族元素的抑制百分比最高2生产(分别为71.83%±7.51和67.44%±2.53)明显不同(从强的松(图值< 0.001)3)。
结果在铂族元素的抑制作用2生产集成电路所示50值(表3);所以对铂族元素表现出最高的抗炎效果2与集成电路50为8.61±2.23μg / ml和明显不同(从强的松(IC值< 0.05)50= 0.07±0.003μg / ml或0.19±0.003μ米)。产生PGE2的抑制作用PH值和P95 (IC50 = 13.72±0.8, 12.26±0.71μg / ml)没有显著不同,但他们与强的松明显不同。然而,它的果皮证明更高的抗炎活性铂族元素的抑制作用2比整个水果和种子生产只接受籽油(这样)。所有的水提取物(PW,弗兰克-威廉姆斯和SW)和种子的提取物(除了种子的精油:所以)没有活动LPS-induced TNF -α生产抑制(集成电路50> 100μg / ml)。
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结果显示为均值的平均值±标准误差(SEM) (n= 3)。有限合伙人:脂多糖;集成电路50:半抑制浓度最大。¶%抑制不显著不同于强的松;
值< 0.05,
值< 0.01,
值< 0.001与强的松相比是一个积极的控制;一个没有显著不同的PH值之间的统计,P95,所以;b不同的显著的统计(值< 0.01)之间的PH值、P95和阿宝;cF95 P50之间没有显著不同的统计,佛;(-)没有测试。 |
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3.6。化学成分分析,气相色谱/质谱(GC / MS)
PH值和P95显示的最高生产抑制LPS-induced不,TNF -α和铂族元素2而因此显示的最高生产抑制LPS-induced铂族元素2。因此,PH值,P95等成分进行GC / MS分析(表4)和PH值的GC / MS色谱图(图4(一)),P95(图4 (b)),所以(图4 (c))。PH值和P95含有一些化合物;这些都是γ萜品烯(分别为0.68%、0.79%和4.91%),terpinen-4-ol(分别为1.07%、3.38%和35.13%),醋酸和terpinenyl(分别为1.57%、1.62%和6.65%)。PH值和P95共享成分相似但不同的百分比。Bicyclo (3.1.1) heptane-2 3-diol 2 6日6-trimethyl或2,3-pinanediol (11.28%)、neryl醋酸(7.65%)、石竹烯氧化物(7.50%)、spathulenol(6.65%),和十六醇(3.78%)的组分在前5名的博士Bicyclo (3.1.1) heptane-2 3-diol, 2, 6日6-trimethyl或2,3-pinanediol (19.82%), 2, 3-camphanediol (5.87%)、durenol(4.53%)、氧化piperitone(4.46%),和spathulenol(4.39%)是在前5 P95的成分。Terpinen-4-ol是主要的化合物(35.13%);下一个前5化合物p甲基异丙基苯(10.95%)、terpinenyl醋酸(6.65%)、cuminol(5.60%),和柠檬烯(5.48%)。
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GC / MS:气相色谱/质谱分析;RT:保留时间;分钟:分钟;ND:没有检测到。 |
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(一)
(b)
(c)
4所示。讨论
疼痛可能是急性或慢性的持续时间取决于体内炎症反应(38,39]。炎症机制协助消除病原体或刺激伤口愈合,以保护和恢复细胞和组织成正常的生理功能(4]。炎症反应,导致过度的炎症介质和细胞因子的释放,可能导致组织损伤,慢性疾病,和痛苦9,10]。尽管可以有效的缓解疼痛的药物治疗炎症、药物的副作用(例如、类固醇、非甾体抗炎药、阿片类药物对乙酰氨基酚等)是重要的。草药被认为是和利用自然的替代治疗与潜在的缓解疼痛,以避免一些副作用40]。
细胞和组织损伤后,身体感知疼痛。急性炎症介质引起的炎症机制。铂族元素2是化学介质:组胺、P物质、缓激肽、乙酰胆碱,白细胞三烯,前列腺素,导致热量,发红,肿胀,伤害感受。铂族元素2全身的血管舒张在第一步的急性炎症机制导致微血管通透性增加并诱发疼痛的作用于周围感觉神经元(41]。铂族元素的抑制2生产可以有效降低热量,发红、水肿和疼痛。在目前的研究中,PH值、P95,等z rhetsa被最有效的组(集成电路吗50< 20μg / ml)显示的最大力量LPS-induced铂族元素2生产RAW264.7巨噬细胞,而阿宝是第二个最强大的集团(IC50< 30μg / ml);P50 FO, F95效力的第三组(IC50< 50μg / ml),和其他的提取z rhetsa弱到不活跃(集成电路吗50> 50μg / ml)。这些结果表明,整体z rhetsa水果应该分为果皮和种子,铂族元素的抑制作用2生产更高的结果。一项研究报道,ethanolic提取物z rhetsa水果(包括果皮和种子)可以抑制COX-1(90.80%)和cox - 2 (94.40%)21]。铂族元素2是一个产品环氧酶通路(5];因此,PH值,P95,因此可以减少急性疼痛的急性炎症机制通过抑制COX-1和cox - 2和铂族元素类二十烷酸产品2。此外,一个在活的有机体内研究一类凝胶含有精油的水果可以抑制舔行为,水肿,发红的口腔前庭大鼠(22由于降低了铂族元素)也是2在急性炎症。在临床试验中,一个包含精油按摩油从水果缓解小腿肌肉疼痛与载体油(安慰剂)在健康志愿者感应站和脚跟提高(23]。
尽管之前的研究是整个水果,我们的研究表明,z rhetsa果皮和种子可以执行相同的药理作用。这是一个重要的发现,因为它将这种草药的准备不仅从果皮和种子整个水果。尽管产量的比例(0.27%)(图1),制备蒸馏的种子应该进一步研究,以提高其产量。本研究还显示铂族元素的抑制百分比最高2所以在100年生产μ克/毫升(0.22±83.70%)与强的松在50岁而没有明显不同μ克/毫升(3.80±93.20%)而PH值和P95 50岁μg / ml了铂族元素的抑制百分比最高2生产(分别为71.83%±7.51和67.44%±2.53)显著不同(从强的松(图值< 0.001)3),而集成电路50PH值和P95没有显著不同(表3)。我们的结果显示;的镇痛和抗炎剂制备急性炎症从PH值,P95,所以很明显。而PH值的百分比收益率(5.89%)和P95(13.10%)高于(0.27%)(图1)。我们的研究也是第一次报告抗炎活性的PH值,P95,所以z rhetsa铂族元素的抑制2在原始生产264.7巨噬细胞。
肿瘤坏死因子-α是一种炎性细胞因子的释放在急性和慢性炎症;肿瘤坏死因子-α诱发疼痛和发烧和扮演一个角色在类风湿性关节炎,骨关节炎,系统性红斑狼疮42]。泰国民族医学的使用z rhetsa能够证明关节的抗炎作用。z rhetsa水果是用作石油(名为Pa-Ra-Ti-Tri)和软膏(名为Bee-Pra-Sen)治疗肌肉和关节炎症在泰国古代经文(名为Pra-O-Sod-Pra-Na-Rai) (18]。此外,TNF -我们的提取物是有效α生产由PH值和P95,而也不活跃。因此,PH值和P95可能通过抑制肿瘤坏死因子-减轻疼痛和炎症α生产。我们的研究结果可以用来改进民族医学发展中局部镇痛药物使用PH值或P95演示临床效用。
PH值和P95还演示了最高的力量抑制没有生产,由诱导自由基合成一氧化氮合酶(间接宾语)巨噬细胞与精氨酸是一种前体(8]。增加亚硝酸盐在关节滑液的浓度与类风湿性关节炎和骨关节炎43]。因此,PH值和P95可能由于没有保护细胞和组织免受伤害。我们的研究结果也证明了最高效力的%抑制生产的PH值(97.15%±0.37)和P95 50 (97.66%±1.12)μg / ml没有显著不同于强的松(96.82%±0.34)在50岁μ克/毫升(图3);因此,PH值和P95可能从炎症减轻疼痛。跳频和F95 100μg / ml没有给的最高%抑制生产(分别为91.55%±3.04和93.36%±3.23)而没有显著不同于强的松(96.82%±0.34)在50岁μ克/毫升(图3)。这些结果表明的效力z rhetsa果皮比z rhetsa水果作为抗炎剂由于感染。民族医学的使用z rhetsa水果能够展示一个组件的抗炎作用由于感染脓肿的Ma-Ha-Wat-Ta-Na补救治疗Pra-O-Sod-Pra-Na-Rai古代经文(18]。
此外,没有和TNF -α有重要的作用在进步骨关节炎和类风湿性关节炎44- - - - - -46]。肿瘤坏死因子-α刺激软骨细胞在软骨产生高水平的不44]。PH值和P95可能减少疼痛,肿胀,并通过抑制没有和TNF -组织损伤α生产。
所有提取和精油z rhetsa强的松(积极控制)显示,超过70%的细胞浓度(图生存能力2)测试时,没有细胞毒性,细胞,表明化合物及其抗炎活性通过抑制LPS-induced不,TNF -α和铂族元素2生产生264.7巨噬细胞并不是由于细胞毒性34]。
此外,我们的提取方法和结果是支持数据提取的泰国传统制备药物己烷制备类似民间方法称为Hung-Nam-Mun(热油提取)47]。这些方法广泛使用椰子油煎植物材料;然而,腐臭的气味,因为椰子油是明显的。而浸渍在己烷没有气味,提取率高。
一些化合物分析了活性提取物,PH值,P95,所以(表4),曾报道抑制炎症介质。Terpinen-4-ol被发现在PH值(1.07%)、P95(3.38%),所以(35.13%),和以前的研究报道,Terpinen-4-ol可以抑制肿瘤坏死因子-α,il - 1β和铂族元素2生产LPS-activated人类血液单核细胞(31日]。第二个最丰富的化合物,p甲基异丙基苯(10.95%)、证明,已经表现出小鼠的镇痛和抗炎特性(48,49]。Cuminaldehyde(5.60%)竞争性抑制15-lipoxygenase的活动,一种酶参与炎症介质如白细胞三烯的生产,使用脂肪氧合酶抑制试验(50]。柠檬烯(5.48%)被发现在前五的化合物,也为了抑制生产LPS-induced不,铂族元素2肿瘤坏死因子-α,il - 1β,il - 6 (33]。这些化合物的发生这样的原因是其在体外的活动。化合物在PH值和P95 spathulenol(分别为6.65%和4.39%)和石竹烯氧化物(分别为7.50%和3.66%),之前显示他们可以抑制生产的不,il - 1β,il - 6 (32]。的主要组件PH值和P95被发现bicyclo (3.1.1) heptane-2 3-diol, 2, 6日6-trimethyl或2,3-pinanediol(11.28%和19.82%)。早些时候报道了这种化合物作为代理,增加微循环当局部使用51];因此,2,3-pinanediol可能有助于缓解疼痛当PH值和P95发炎领域的应用52]。
5。结论
PH值,P95等z rhetsa对缓解疼痛和抗炎活动通过抑制炎症介质通过LPS-induced不,TNF -α和铂族元素2在RAW264.7巨噬细胞。我们的研究表明,PH值和P95提取分数分析可以提供成分适合缓解疼痛的慢性炎症没有和TNF -由于他们的活动α所以对铂族元素的抑制作用2生产。此外,PH值,P95,所以包含terpinen-4-ol以前报道的抑制剂LPS-induced铂族元素2和肿瘤坏死因子-α。其他组件,p甲基异丙基苯,柠檬烯以前报道的体外和体内抗炎活性。因此,所以可能有潜力发展成炎症的镇痛和抗炎产品,及其有效成分应进一步细化或进一步研究与额外的参考标准。主要活性组分确定PH值和P95使抑制不,TNF -α和铂族元素2似乎是2,3-pinanediol P95由近20%。这些发现是第一个基本支持数据用于ethnomedical作为抗炎、镇痛中药治疗。z rhetsa果皮与己烷和95%乙醇浸渍和种子植物精油正在研究镇痛产品开发的研究在我们的实验室。
数据可用性
数据用于支持本研究的发现文章中是可用的。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
本研究获得的资助和支持应用泰国传统医药研究的卓越中心(CEATMR)和医学院Bualuang东盟讲座教授,府、泰国法政大学。作者要感谢草本和泰国传统医药部门,泰国科技园区进行GC / MS分析,国家公园、野生动植物保护,曼谷,泰国的工厂认证和办公室森林植物标本,曼谷,泰国为凭证标本。
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