化合物的积雪草对氧化应激的影响,在糖尿病肾病大鼠Keap1-Nrf2-ARE路径表达式

文摘

复合的积雪草的公式主要包含中国传统草药3:积雪草的(l)市区。(JiXueCao),黄芪鱼。(黄芪),雷公藤钩。f。(LeiGongTeng)。虽然这个公式是有效治疗糖尿病肾病(DKD)诊所的确切机制尚不清楚。本研究旨在探讨化合物的效果和抗氧化机制的积雪草DKD老鼠。应用高效液相色谱法(HPLC)分析3草药化合物积雪。Sprague-Dawley老鼠分为正常组(NG), DKD集团(DKDG),化合物的积雪草组(20),和洛沙坦组(LG),每组8老鼠。在实验的第一天,NG与普通饲料喂养老鼠,而另一组被喂以高脂肪和高糖饲料。在29日^th天,除了NG,其他3组收到一腹腔内注射链脲霉素(STZ 35毫克/公斤)。空腹血糖(FBG)测量在1^圣天,32^nd天,46^th56天,^th天,84^th天,112^th的一天。总蛋白/尿肌酐比值由酚红试验在1^圣112年的一天,^th的一天。血清肌酐(Scr)是在112年由一个自动生化分析仪^th的一天。肾脏被收集在112年^th分析和评价。周期性acid-Schiff (PAS)染色,hematoxylin-eosin(他)染色和透射电子显微镜用于观察肾脏病理变化。信使rna和蛋白质的表达Kelch-like ECH-associated蛋白1 (Keap1)和核factor-erythroid两个相关因子2 (Nrf2)在肾组织中检测到RT-qPCR,免疫印迹和免疫组织化学。氧化应激是评估通过检测丙二醛(MDA)的含量和血红素oxidase-1 (HO-1)。结果表明,asiaticoside的内容,套,和triptolide草是5960年,809年,2.42μg / g和复合积雪是340年,64年,0.1403μ通过高效液相色谱法g / mL。复合积雪草减少尿蛋白/肌酐比值,改善肾脏的肾病理DKD老鼠。此外,Keap1的mRNA和蛋白表达和Nrf2肾脏被复合积雪草调节。MDA的表情表达下调,但HO-1被复合积雪草调节。因此,复合积雪草的肾脏的保护作用DKD老鼠可能与调节Keap1-Nrf2-ARE通路在氧化应激,表明复合积雪草对DKD一种有前途的治疗方法。

1。介绍

糖尿病肾病(DKD)的一个最严重的慢性糖尿病并发症。近几十年来,DKD已经成为的主要原因终末期肾病(ESRD) worldwild [1]。随着医学的发展,有越来越多的方法来治疗DKD,包括生活方式的调整,血糖控制,血压控制、肾素-血管紧张素系统(RAS), sodium-dependent葡萄糖transporter-2 (SLGT-2)抑制剂,和glucagon-like peptide-1 (GLP-1)受体激动剂(2]。尽管大量的管理层一直在使用这种疾病,临床疗效仍不满意。因此,发现新的干预措施,克服这些限制来实现延迟DKD的发展是十分必要的。

在中国,中药(TCM)已广泛应用于治疗糖尿病及其并发症很多年了。现在,中医得到来自其他国家的更多的关注,成为一个有前途的新的治疗代理DKD [3]。这样的药物化合物的品种还是之一。这个公式是由Yongjun王教授,一位著名的当代中医医生。这个公式已经被证明是有效的治疗DKD诊所,但是最主要的机制仍不清楚。这个公式的主要内容积雪草的(l)市区。(JiXueCao)。其提取、asiaticoside已经证明等药理作用的降糖药效果在肥胖的糖尿病大鼠4),恢复肾脏酶的活动参与糖尿病、葡萄糖和氨基酸氧化和保护糖尿病组织的压力通过抗氧化机制管理DKD [5]。氧化应激DKD的发病机理中发挥着关键作用。的kelch-like ECH-associated蛋白1 (Keap1)无factor-erythroid两个相关因子2 (Nrf2)抗氧化反应元素(是)途径是最重要的内源性抗氧化应激通路(6];所以,在目前的研究中,化合物之间的关系的积雪草和Keap1-Nrf2-ARE通路的分子机制将深入探讨,提供更多的实验依据DKD复合积雪草治疗。

2。材料和方法

2.1。药品和试剂

洛沙坦钾片购买(默克公司大幅& Dohme(澳大利亚)的企业。,Ltd, South Granville, Australia, import drug registration nos. H20160398 and H20160401); streptozocin (STZ) was purchased from Sigma Chemical Co., St. Louis, USA, CAS no. 18883-66-4; Keap1 antibody was bought from Proteintech Group, Wuhan, China, no. 13161-1-ap; Nrf2 antibody was purchased from Proteintech Group, Wuhan, China, no. 16396-1-ap; heme oxidase-1 (HO-1) antibody was purchased from Proteintech Group, Wuhan, China, no. 10701-1-ap; the malondialdehyde (MDA) test box was purchased (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China, no. A003-1). Acetonitrile was purchased from Merck, Billerica, USA; asiaticoside reference was purchased from the National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing, China; astragaloside reference was purchased from the National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing, China; triptolide reference was purchased (content ≥98%, the National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing, China).

2.2。仪器

ABI 7900 ht荧光定量PCR购买(美国应用生物系统公司,培养);应用生物系统公司以5比2 LDZ低速自动平衡离心购买(北京Jingli有限公司有限公司,北京,中国;5810 r高速冷冻离心机收购(埃普多夫,汉堡,德国);的Bio-tek ELX800自动标购买(Bio-tek, Biotek Winooski,美国);相比II型(301)血糖仪购买形式Yuyue医疗设备和供应有限公司,有限公司,苏州,中国;ProStar 230高效液相色谱是购买的瓦里安,帕洛阿尔托,美国;BX 51光学显微镜是购买(奥林巴斯、东京、日本);JEM1400透射电子显微镜是购买(JEOL、东京、日本)。

2.3。动物和实验设计

32岁男性SPF Sprague-Dawley老鼠(4 - 5周大;重100±10 g)从上海Sippr-BK购买实验动物有限公司有限公司这些老鼠繁殖由浙江中国医科大学动物中心实验室(浙江、中国)与实验许可数量的SYXK(浙江)2018 - 0012。和批准的实验是浙江中国医科大学动物伦理委员会。所有的老鼠被安置在屏障环境(温度、20°C∼25°C;湿度、50%∼65%;光,12 h / d)。高脂肪和高糖饲料满足10%猪油、10%蔗糖、2.0%胆固醇、胆酸0.5%,5%蛋黄粉,72.5%普通饲料配方。高脂肪和高糖饲料的单位热量供应3.95千卡/克。每个老鼠的日常食物是25∼30 g。每日卡路里摄入量是计算每日食物摄入量克的质量乘以饮食的生理热值千卡/克。 So, the calories for each rat per day was about 98.75∼118.5 kcal. All Sprague-Dawley rats were divided into the normal group (NG), DKD group (DKDG), Compound Centella group (CCG), and losartan group (LG), with 8 rats in each group. On the first day of the experiment, 8 rats (in the NG) were fed with ordinary feed, while the other 24 rats (in the DKDG, CCG, and LG) were fed with high-fat and high-sugar feed. On the 29^th24天的实验中,大鼠(DKDG, 20, LG)给出的腹腔内注射STZ(溶解在柠檬酸钠缓冲液浓度为1%)。STZ剂量是35毫克/公斤为一只老鼠在禁食12小时。老鼠注射STZ后,24 (DKDG, 20, LG)被继续喂高脂肪和高糖饲料直到实验结束。在32^nd天的实验中,所有大鼠的空腹血糖(FBG)测量通过尾静脉。糖尿病大鼠模型成功建立了光纤光栅≥16.7时更易与L。

2.4。药品监督管理局

的主要药物化合物的积雪草每天一个成年人的如下:积雪草的(l)市区。(JiXueCao)(30克),黄芪鱼。(黄芪)(30克),雷公藤钩。f。(LeiGongTeng)(15克)。这种化合物的剂量为成人依靠王教授的学术知识和多年临床经验。老鼠的剂量可以从人类的剂量转换根据身体表面积公式。身体表面积计算基于Meeh-Rubner方程(一个=k(W^2/3)/ 10000 (k= 9.1))7]。因此,中药的剂量转换为相应的老鼠0.8克,0.8 g和0.4 g。这些草药混合在水里,“煮45分钟,然后集中。最终体积的浓汤2毫升每天一只老鼠。洛沙坦钾片的日常治疗剂量为每成人50 mg / d,这是4.5毫克/公斤/天为一只老鼠(与生理盐水稀释至2毫升)。所有的动物都被强饲法考虑到药物,和老鼠在NG和DKDG相同剂量的生理盐水。所有的老鼠都牺牲了112天^th的实验。

2.5。样本采集

尿液收集和112年的第一天^th本研究。老鼠与戊巴比妥钠麻醉在牺牲之前112年^th的一天。血液从腹主动脉。在液氮速冻后,肾组织的一边是存储在冰箱−80°C,和另一边组织在4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。

2.6。化学分析化合物的积雪草提取物的高效液相色谱法(HPLC)

2.6.1。的决心积雪草的(l)市区。(JiXueCao)和Asiaticoside复合积雪

色谱条件如下:列,YMC ODS C18(4.6毫米×250毫米,5μ米);移动乙腈:水(30:70);原子化温度,40°C;气化温度、90°C;流量、1.0毫升/分钟;和氮气流量,1.6 L / min。准备的参考解决方案如下:适当的参考asiaticoside正是重和添加甲醇溶液含0.27毫克/毫升。样品溶液的制备是如下:草的力量积雪草的(l)市区。(JiXueCao)(0.5克)和塞被带进一个锥形瓶。这是添加20毫升80%甲醇,然后重。解决方案是由超声波30分钟。接下来,它又被冷却,体重,体重的80%甲醇组成。最后,解决方案是动摇,离心,过滤0.45μ过滤膜。复合的积雪草的解决方案的步骤的准备是如上所述。内容确定如下:精密参考溶液的吸收asiaticoside (5μL)和样品溶液(10μL)是注入液相色谱,然后确定。

2.6.2。的决心黄芪鱼。(黄芪)和套在复合积雪

色谱条件如下:列,YMC ODS C18(4.6毫米×250毫米,5μ米);移动乙腈:水(35:65);原子化温度,40°C;气化温度、90°C;流量、1.0毫升/分钟;和氮气流量,1.6 L / min。准备的参考解决方案如下:适量的套正是重,和甲醇添加(0.30毫克/毫升)。样品溶液的制备是如下:草的力量黄芪鱼。(黄芪)(4 g)放入萃取器,蒸浴。40毫升的甲醇添加。然后,这是冷冷地浸泡隔夜。接下来,甲醇又添加了一些。这个解决方案是加热回流4小时。甲醇回收和浓缩至干。渣添加10毫升的水,加热溶解。正丁醇的四倍。然后,这个解决方案被氨和蒸洗两次。 The residue was added 5 mL water to dissolve and then was passed through the D101 macroporous adsorption resin column (diameter, 1.5 cm; length, 12 cm). Then, it was eluted with 50 mL of water, 30 mL of 40% ethanol, and 80 mL of 70% ethanol in turn. The eluent was dried and dissolved in methanol and transferred to a 5 mL measuring bottle. Methanol was added to the scale of 5 mL and shaken well. The steps of preparation of the sample of Compound Centella were as described above. Content determination was as follows: precision absorption of the reference solution of asiaticoside (5 μL)和样品溶液(10μL)注入液相色谱和确定。

2.6.3。的决心雷公藤钩。f。(LeiGongTeng)和Triptolide复合积雪

色谱条件如下:列,YMC ODS C18(4.6毫米×250毫米,5μ米);移动乙腈:水(30:70);检测波长220 nm;流量、1.0毫升/分钟;和氮气流量,1.6 L / min。准备的参考解决方案如下:适量的triptolide参考正是重,和甲醇添加(0.03毫克/毫升)。样品溶液的制备是如下:草的力量雷公藤钩。f。(LeiGongTeng) (2 g)在试管中设置和添加甲醇(100.0毫升)。解决方案被加热回流2小时,冷却,然后称重,由甲醇的体重,动摇和过滤。75毫升的解决方案是,然后在水浴蒸干。这是添加甲醇(2.5毫升)和二氯甲烷(2.5毫升)中性氧化铝(10克,直径1.5厘米,wet-packing列)。甲醇和二氯甲烷的混合物(1:3)是用于洗脱。洗脱液收集在100毫升和蒸。然后,解决方案是溶解在甲醇和恒定体积5.0毫升容量瓶动摇(通过0.45μ滤膜过滤)。的步骤制备复合积雪草的样本是如上所述。内容确定如下:精密参考溶液的吸收asiaticoside (5μL)和样品溶液(10μL)注入液相色谱,然后确定。

2.7。光纤光栅,测定总蛋白/尿肌酐比值和血清肌酐(Scr)

光纤光栅测量从尾静脉1^圣天,32^nd天,42^nd56天,^th天,84^th天,112^th的一天。总蛋白/尿肌酐比值由酚红试验在1^圣112年的一天,^th的一天。可控硅是在112年由一个自动生化分析仪^th的一天。

2.8。光学显微镜的肾脏病理观察

肾组织与10%中性缓冲福尔马林固定,与梯度酒精脱水。然后,这些组织与二甲苯,使透明蜡,嵌入式,分段。部分(3μ米厚)沾hematoxylin-eosin(他)和周期性acid-Schiff (PAS)染色。肾脏病理变化的显微镜下观察。肾小球的横截面的最大直径是拍照。系膜增殖指数(MMI %)计算与肾小球系膜区比面积×100%8]。

2.9。肾脏超微结构的透射电子显微镜(TEM)观察到

1毫米×1毫米×1毫米肾皮质组织群众,这是固定的2.5%戊二醛固定,1%锇酸固定。脱水后,组织被嵌入在环氧树脂。超薄部分与铀染色acetate-lead柠檬酸,然后使用透射电子显微镜检查。足突融合率(玻璃钢)的足突细胞在每个标本进行了计算。外周毛细血管基底膜的弯曲长度(BM)每个ultramicrograph上测量。与此同时,所有融合过程的长度上覆大英博物馆也是衡量。因此,玻璃钢是使用以下公式计算: 。 是融合过程的总长度;是外围毛细管BM的总长度(9]。

2.10。实时定量PCR方法

总RNA提取试剂盒的方法。和总RNA浓度由紫外分光光度计测定。然后,cDNA被逆转录合成紧随其后qPCR检测,合成了豆类和质量检查。引物序列见表1。

2.11。免疫印迹法

根据BCA法、总蛋白提取和测定蛋白质的内容。然后,sds - page凝胶制备。样品缓冲被加入到蛋白质样品(50μ在免疫印迹g / lane)解决。的混合物在95°C变性10分钟。样本添加到凝胶电泳的洞。乐队的蛋白质被转移电泳转移到PVDF膜。然后,密封膜直接投入的工作流体主要抗体(Keap1 1: 600稀释,Nrf2 1: 1000稀释和HO-1 1: 1000稀释)。一夜之间进行的反应是在4°C。的主要抗体是用1×TBST三次。洗后,膜放入二次抗体工作液体(1:10000稀释)60分钟。膜是用1×TBST 3次了。使用化学发光试剂盒的屁股被可视化。

2.12。免疫组织化学

石蜡切片脱蜡和水。抗原修复解决方案与PBS滴部分和洗3次。正常山羊血清封闭剂添加到片,室温20分钟。第一抗体(Keap1 1: 100稀释和Nrf2 1: 100稀释)被添加到部分与PBS洗3次在一夜之间在4°C。二次抗体被添加和PBS冲洗3次了。疣状进行轻拍。的部分与苏木精复染色。在显微镜下观察结果,和平均光密度(AOD)值的每个领域衡量Image-Pro + 6.0分析软件。

2.13。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法

在肾组织MDA值检测酶联免疫试剂盒的指示。

2.14。统计方法

使用SPSS 19.0统计软件。所有数据被当作平均值±标准偏差(SD)。方差分析是用来分析不同的组。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。的浓度在草药和复合的积雪草代表组件

代表在草化学成分和复合积雪草被高效液相色谱检测。asiaticoside峰保留时间和浓度,套,triptolide数据所示1- - - - - -3。代表组件的浓度如表所示2。

3.2。光纤光栅的结果,尿蛋白/肌酐比值,可控硅

在实验的第一天,有光纤光栅四组之间无显著差异。在32^nd天的实验中,与NG相比,其他组大鼠血糖的显著增加。光纤光栅是大于16.7更易与L。然而,各组之间没有显著差别DKDG, 20, LG。这一趋势一直持续到112年年底^th天的实验(图4(一))。在实验的第一天,没有明显尿蛋白/肌酐比值的差异。在112^th天的实验中,与NG相比,尿蛋白/肌酐比其他组显著增加。与DKDG相比,结果在20和LG显著下降,但没有在20和LG(图之间的显著差异4 (b))。在112^th天的实验中,与NG相比,DKDG可控硅的水平是最低的。可控硅是高的比在DKDG(图204 (c))。

3.3。肾脏病理结果通过光学显微镜和透射电镜

肾组织由他和PAS染色显示正常的外观,与普通肾小球形态、紧张有序的安排肾小管,肾小管上皮细胞的正常形态。DKDG,肾小球体积增加,丰满。肾腔空间很窄。系膜细胞和基质扩散。此外,肾小管空泡形成DKDG也观察到。然而,系膜细胞的增殖和基质是提高20和LG。小管的空泡变性在20和LG也提高了。结果表明,20和LG的系膜增殖指数下降(图5)。TEM的肾脏超微结构的观察显示,脚在正常大鼠完整有序的过程。然而,大多数的脚在DKDG融合过程。治疗后,足细胞病变显著提高20和LG。的玻璃钢DKDG NG相比显著增加。治疗后,玻璃钢是减少在20和LG(图6)。

3.4。信使rna Keap1的内容和Nrf2在肾组织中通过实时定量PCR检测

mRNA的表达Keap1 NG中最高的,但在其他三组明显减少。与DKDG相比,Keap1增加20和LG。然而,之间没有显著差异在Keap1 20和LG(图7(一))。同样,Nrf2的mRNA表达是最高的。Nrf2 mRNA的表达在其他三组表现出下降的趋势(图7 (b))。

3.5。蛋白质的表达Keap1、总Nrf2 HO-1在肾组织中免疫印迹检测

在112^th天的实验中,与NG相比,Keap1的蛋白表达在其他三组显著降低。与DKDG相比,Keap1的蛋白表达增加了20和LG。与NG相比,总Nrf2蛋白质表达和HO-1在其他三组降低。治疗后,Keap1的水平和HO-1 20和LG的上升趋势。总水平Nrf2治疗(图后变化不大8)。

3.6。蛋白质的表达Keap1和Nrf2肾组织通过免疫组织化学方法检测

Keap1蛋白阳性染色主要是集中在肾小管上皮细胞的细胞质NG显示淡黄色或褐黄色的色彩,但它不是明显的肾小球。与NG相比,这是最浅的,至少在DKDG。Keap1的染色在20和LG DKDG比这更深。没有显著差异之间的Keap1大气气溶胶在20和LG。Nrf2蛋白阳性染色主要是集中在肾小管上皮细胞的细胞质和肾小球细胞显示淡黄色或褐黄色颜色NG。与NG相比,其他三组显示浅阳性染色,Nrf2表达式的网站改变主要从细胞质也不仅细胞质,细胞核。这是最小和最浅的DKDG DKDG相比。Nrf2蛋白质的染色在20和LG略深。没有统计学差异的积极染色在20和LG(图之间的大气气溶胶9)。

3.7。在肾组织MDA由ELISA

肾组织MDA是最低的NG,和其他三组有不同程度的增加。与CKDG相比,MDA降低20和LG,但是没有在20和LG(图之间的显著差异10)。

4所示。讨论

在过去的十年中,透析的发病率已经稳定在一般人群和糖尿病患者,但他们仍然远远高于相比之下(7]。因此,重要的是尽早明确DKD的发病机理,找到有效的方法来延迟DKD的进步。目前,DKD的发病机制主要集中在代谢、血液流变学、炎症反应、免疫系统,蛋白激酶和氧化应激8- - - - - -11]。在这项研究中,DKD鼠模型建立了单一的STZ腹腔内注射结合持续的高脂肪和高糖饮食。结果表明,血糖持续在造型后糖尿病的水平,表明该方法是成功的。这项研究发现了一个有趣的结果,尿蛋白/肌酐比值最高,但DKDG可控硅是最低的水平。我们如何解释这一结果在这种模式吗?众所周知,DKD的病理过程包括肾小球肥大,基底膜增厚和系膜基质增加,典型的结节性肾小球硬化,最后大量肾小球硬化(10]。DKD的早期阶段,肾小球滤过率(GFR)通常是高于正常,因此可控硅通常是低于正常水平。在阶段4 - 5,肾小球滤过率(GFR)继续下降,但可控硅继续增加。在我们的研究中,在DKDG病理显示,系膜增殖及系膜细胞增殖没有经典Kimmelstiel-Wilson结节或阻力指标纤维化,也许可以明显的肾小球硬化或现象主要是在2 - 3阶段根据Mogensen阶段(11]。这一结果支持糖尿病大鼠的肾脏疾病在我们的研究是在DKD的早期阶段。所以,这种现象是合理的可控硅是DKDG最低的水平。

现在认为氧化应激是一种常见的因素在许多DKD的发病机制12]。生活在一个含氧环境要求有效的细胞的进化策略检测和分子氧解毒代谢产物被称为活性氧(ROS)。身体暴露在各种有害刺激时,体内会产生过多的活性氧清除,导致一个氧化系统和抗氧化系统失衡。然后,身体组织的商业活动将受到损害。这个过程称为氧化应激(13]。Keap1-Nrf2-ARE信号通路被认为是抗氧化机制的最重要的途径。Nrf2是一个氧化还原转录因子和氧化应激的受体,发挥着重要的作用在调节众多解毒和抗氧化剂的基底和诱导表达的基因。Nrf2表达在不同的组织如肾脏、肝脏、脾脏、心脏。在生理状态下,Nrf2由胞质蛋白Keap1,拴在针对ubiquitin-dependent蛋白酶体降解。Keap1的主要胞质抑制剂Nrf2和拥有数个半胱氨酸残基。修改这些残留的ROS和Nrf2-Keap1亲电子代理导致的空间变化复杂。接触氧化应激,Nrf2从Keap-1分离并迅速转移到细胞核,然后结合。它导致细胞的转录激活防御系统(14,15]。这个防御系统主要包括但不限于以下几点:(1)自由基的清道夫,SOD含量间接反映机体清除氧自由基的能力;(2)HO-1酶是一种重要的抗炎保护身体免受氧化应激和有毒物质(16]。这些自由基清除酶形成一个强大的抗氧化防御系统。相比之下,NADPH氧化酶4 (NOX4)是NADPH氧化酶亚基之一,在细胞内自由基的主要来源(17]。之前的研究指出,NADPH氧化酶包括NOX4可能导致糖尿病肾组织损伤(18]。MDA是脂质过氧化的产物。其内容反映脂质过氧化和细胞自由基攻击的严重性,这被认为是一个独立的危险因素DKD [19]。我们的结果与先前的研究一致,造型后,SOD的表达水平和HO-1下降但MDA增加糖尿病大鼠与正常细胞相比。它表明氧化应激损伤发生和抗氧化防御系统是DKD抑制。

目前,虽然一些学者发表文章Keap1或Nrf2,研究结果仍有争议。很难解释这些结果,特别是在复杂疾病如糖尿病的存在。在一个在活的有机体内研究中,有记录的水平总Nrf2及其下游目标HO-1在肾组织中检测到ELISA在STZ-induced减少糖尿病小鼠(20.]。另一项研究显示了相似的结果,总表达Nrf2有下行趋势在缺血/ reperfusion-induced糖尿病大鼠心肌损伤(21]。Nrf2基因被淘汰后,小鼠肾脏产生更多的活性氧和严重的DNA氧化损伤比正常小鼠22]。此外,无形的改变显示的总Nrf2水平当肾小球系膜细胞(gmc)挑战先进的糖化终端产品(年龄)23]。治疗后与一些抗氧化剂,Nrf2的总蛋白表达及其下游目标如SOD和HO-1明显高于糖尿病动物。然而,转染Nrf2 siRNA废除Nrf2-related蛋白质的表达和抗氧化剂的cytoprotective效果21]。有趣的是,其他研究人员获得一个相反的结果当他们测试的核表达Nrf2糖尿病模型。一项研究发现,核内容Nrf2 gmc的派拉蒙upregulation刺激增加了年龄(23]。略有增加核Nrf2水平在糖尿病大鼠的肾脏。抗氧化剂可以大幅提高核Nrf2水平(8]。至于Nrf2的主要负面的常规,Keap1表达表现出下降趋势与年龄(gmc的挑战时23]。的在活的有机体内研究显示了类似的结果,糖尿病的小鼠表现出下降趋势Keap1肾脏蛋白质水平(8]。这项研究的结果表明,Keap1的水平和总Nrf2减少糖尿病大鼠与正常相比。虽然我们没有分析核Nrf2通过免疫印迹,我们观察到的位置和积极Nrf2通过免疫组织化学染色。的大气气溶胶总Nrf2后代的阳性染色定位Nrf2主要从细胞质不仅细胞质核在糖尿病模型。从文献和我们的研究结果,我们推测,稍微增加核Nrf2和减少Keap1可以被认为是氧化应激的适应性反应。然而,认为糖尿病是一种复杂的疾病和进步,现有的慢性炎症和氧化应激。当与疾病相关的氧化应激超过身体的自我修复的能力,总Nrf2可能下降。正如我们所知,在氧化应激,Nrf2将从Keap1分离和易位到细胞核,然后激活下游靶基因。因此,核Nrf2的表达可能反向增加氧化应激的站下。

与化合物的积雪草治疗后,糖尿病大鼠尿蛋白/肌酐比值较低。此外,提高了DKD肾病理。这些建议对DKD复合积雪草有效。我们还发现Keap1的表达,以及总Nrf2与复合的积雪草治疗后增加。MDA的表达下调,HO-1调节20。在积极控制药物的集团,洛沙坦也有类似的趋势。建议复合积雪草可能改善DKD通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路,调节氧化应激。

这项研究有一些局限性。首先,Nrf2的核内容尚未阐明。第二,哪一个是复合的积雪草作为一种抗氧化剂的主要作用不是证实。因此,单组分复合积雪草和核Nrf2蛋白质必须在后续研究中探索。

5。结论

总之,复合的积雪草可以减少尿蛋白/肌酐比值,改善肾脏的肾病理DKD老鼠。Keap1的信使rna和蛋白质表达和总Nrf2肾脏被复合积雪草调节。MDA的表达下调,但HO-1调节DKD老鼠的肾脏。因此,复合积雪草的肾脏的保护作用DKD老鼠可能是由于氧化应激通路调节Keap1-Nrf2-ARE通路,建议进一步研究复合积雪对DKD一种有前途的治疗方法。

缩写

年龄:	高级糖化终端产品
是:	抗氧化反应的元素
大气气溶胶:	平均光密度
BM:	基底膜
轻拍:	3,3-Diaminobenzidine
DKD:	糖尿病肾病
迹象:	终末期肾脏疾病
光纤光栅:	空腹血糖
玻璃钢:	足突融合率
肾小球滤过率(GFR):	肾小球滤过率
GLP-1:	Glucagon-like peptide-1
gmc:	肾小球系膜细胞
HO-1:	血红素oxidase-1
高效液相色谱法:	高效液相色谱法
Keap1:	Kelch-like ECH-associated蛋白1
MDA:	丙二醛
MMI:	系膜增殖指数
NOX4:	NADPH氧化酶4
Nrf2:	2核factor-erythroid两个相关因素
拉:	肾素-血管紧张素系统
ROS:	活性氧
SGLT-2:	Sodium-dependent葡萄糖transporter-2
SOD:	超氧化物歧化酶
STZ:	链脲菌素
透射电镜:	透射电子显微镜法
中医:	中国传统医学。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

秦朱镕基曾是第一作者,秦文君是co-first作者。

的利益冲突

作者确认还没有已知的利益冲突与此相关出版物。

作者的贡献

秦朱镕基和秦文君曾庆红的贡献同样这项工作。

确认

这项研究是在经济上支持中国浙江省自然科学基金批准号下LQ19H290005,中国国家自然科学基金批准号81973760,卫生和计划生育和科技项目批准号下的杭州2017 a58。

引用

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