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循证补充和替代医学
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循证补充和替代医学/2020/文章
特殊的问题

2020年炎症疾病的补充和替代疗法

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体积 2020 |文章ID. 6738474 | https://doi.org/10.1155/2020/6738474

穆罕默德·穆罕默德·苏莱曼，萨阿德Hommod铝Osaimi，埃萨姆HassanMohamed，阿迪尔Aldhahrani，阿德尔Alkhedaide，法耶兹Althobaiti，Wafaa阿卜杜·穆罕默德那 “保护的影响辣木属鉴定叶提取物对甲氨蝶呤诱导的小鼠氧化应激和脾脏凋亡的抑制作用“，循证补充和替代医学那 卷。2020那 文章ID.6738474那 13. 页面那 2020． https://doi.org/10.1155/2020/6738474

保护的影响辣木属鉴定叶提取物对甲氨蝶呤诱导的小鼠氧化应激和脾脏凋亡的抑制作用

穆罕默德·穆罕默德·苏莱曼那1那2 萨阿德Hommod Al-Osaimi那3. 埃及HassanMohamed那4.那5. 阿迪尔Aldhahrani那1 阿德尔Alkhedaide那1 Fayez Althobaiti那6. 和 Wafaa Abdou Mohamed.7.

1塔伊夫大学图拉巴大学学院临床检验学系，塔伊夫21995，沙特阿拉伯

2本哈大学动物医学院生物化学系，埃及本哈13736

3.塔伊夫大学图拉巴大学学院化学系，塔伊夫21995，沙特阿拉伯

4.塔伊夫大学图拉巴大学学院生物系，塔伊夫21995，沙特阿拉伯

5.埃及扎加齐格大学动物医学院微生物学系，扎加齐格44519

6.沙特阿拉伯塔伊夫大学理学院生物技术系

7.临床病理科，兽医，宰加济格大学，宰加济格，埃及学院

学术编辑器:徐元
收到了 2020年3月10
修改 4月14日
公认 2020年5月06
发表 2020年5月29日

摘要

客观的．本研究旨在探讨MO叶提取物(MOLE)对mtx诱导的小鼠脾脏氧化应激改变的可能改善作用，并探讨其可能的分子机制。方法．成年雄性小鼠分为4组:对照组、对照组和对照组。辣木属鉴定叶提取物（摩尔），MTX，和MOLE加MTX。小鼠接受口服鼹鼠一个星期MTX注射前，持续12天。血清和脾取样用于生物化学和定量基因表达。结果．与mtx注射组相比，MOLE有效地降低了总蛋白、脾脏MDA、SOD和过氧化氢酶活性的变化以及血清抗氧化剂水平的变化。mtx注射组抗氧化基因(SOD、过氧化氢酶)和抗凋亡基因(XIAP、Bcl-xl)下调，凋亡基因Bax、caspase-3 mRNA上调。MTX诱导IL-1的变化β、il - 6、TNF -α， IL-10的表达。MOLE修复和改善MTX中毒诱导的生化、抗氧化剂、凋亡和凋亡相关基因的变化。结论．目前的研究结果表明，用MOLE预处理mtx中毒小鼠，表明MO有可能用于氧化应激和凋亡的治疗。

1.介绍

草本起源替代药物被广泛应用于世界各地的治疗毒性及其相关疾病[1那2］.草药作为抗氧化剂和自由基清除所有器官。它们诱导器官再生和保护，以提高其活力和稳定性[2那3.］.使用替代医学草药提取物的增加，并与药用参考许多植物的存在在治疗药物中成为常规。辣木属鉴定(MO)在许多国家(热带和亚热带)生长，是一种营养丰富的植物，具有多种药用特性[4.］.

辣木属鉴定叶（MOL）及其种子非常丰富的抗氧化剂，维生素（A，d E，C，和γβ-胡萝卜素）4.和多酚[5.］.辣木叶富含氨基酸、碳水化合物、脂肪、矿物质和维生素[5.］.以往的研究证实了其潜在的治疗作用辣木属鉴定作为抗糖尿病的，抗真菌的，抗菌的[6.和抗动脉粥样硬化药物[7.］.此外，MO具有调节甲状腺功能对抗氧化应激和损伤的潜力[5.那7.]和在应力下增强大鼠性能力[8.］.MO的消耗是安全的，其毒性率非常低[9.］.因此，当MO消费量较高时，表现为无毒事件[10.］.

抗氧化剂和促氧化剂之间的比例向促氧化状态转移，这是氧化应激的原因，即活性氧(ROS)。ROS以甲氨蝶呤(MTX)和化学中毒物质的形式从本地或外部来源产生[11.那12.］.ROS在正常生理过程中起着关键作用[12.但过量的ROS会破坏细胞结构，从而导致疾病[13.］.因此，器官和组织适应于保护它们的细胞免受ROS和氧化应激的影响，以保持适当的氧化还原稳态免受过量ROS的影响[13.］.

叶酸拮抗剂甲氨蝶呤(MTX)被用作治疗癌症的化疗药物[14.那15.］.然而，在治疗中使用甲氨蝶呤显示出一些毒性作用[16.］.甲氨蝶呤诱导毒性的机制尚未完全研究[17.］.MTX对肾脏、肝脏和心脏等内脏器官的毒性主要归因于氧化应激诱导[18.-20.］.截至目前，有许多关于脾MTX的直接毒性作用没有明确的研究。然而，MTX还在用药中使用的最有效的化疗药物。为此，医生努力防止和克服MTX的副作用必须定向。性能和功能辣木属鉴定（MO）已被几篇论文讨论;然而，直到现在，没有明确的研究表明摩尔对MTX刺激的脾氧化应激和凋亡的保护性影响。

脾起着身体的平衡至关重要配角。它作为一个阻挡层和过滤器对血液作为免疫系统的一部分。这是受应力最关键的器官;但是，没有更多的数据和报告，氧化应激过程中可以使用它。因此，目前的研究检验痣抗氧化应激及细胞凋亡的诱导的MTX雄性小鼠的脾脏中的保护影响。

2.材料和方法

2．1.化学品和测量

溴化乙锭、甲氨蝶呤和琼脂糖购自美国MO圣路易斯Sigma-Aldrich公司。逆转录酶和100 bp的ladder (DNA标记)购自美国thermofisher Scientific公司的MBI, Fermentas公司。Oligo dT引物和用于总RNA提取的Qiazol进口自美国加利福尼亚州巴伦西亚QIAGEN公司。过氧化氢酶、谷胱甘肽(还原性谷胱甘肽)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总蛋白、白蛋白和球蛋白的试剂盒来自生物诊断公司(Dokki，吉萨，埃及)。小鼠IL-1 ELISA试剂盒β（AB197742）和IL-6（AB100712）由日本东京ABCAM Co.公司购买。IL-1β和IL-6作为各试剂盒的方案手册中的描述进行测定。

2.2。的准备辣木属鉴定叶提取物(摩尔)

新鲜的叶子辣木属鉴定（MOL）通过在科学的塔伊夫大学学院，植物学（教授亚辛Alsudani）标识。凭证标本被存放在Hawiya，塔伊夫，沙特阿拉伯的熊猫标本馆。MOL物在黑暗中29℃，在此之后将叶子粉碎用CRESTOR高速铣床室温下干燥。MOL were immersed in hydroalcoholic solution (40% distilled water + 60% ethanol) in a stoppered flask and was kept at room temperature for 48 hrs at 100 rpm in an orbital shaker. The extract contents were filtered and passaged on whatman paper #1 [21］.用旋转蒸发器(Rotavapor®R-300/R-300 Pro，https://www.buchi.com/rotavapor-r-300)，以避免活性成分变性。残渣产率为12% (w/w)，并保持在−20°C直到使用。

2.3。总多酚复合估计，化学成分和紫外 - 可见（UV-Vis）光谱的摩尔

痣的总多酚化合物通过Foline-乔卡梯奥试剂评价[22]和人[改性23那24］.总多酚成分表示为每100克摩尔没食子酸当量毫克。所用的标准曲线是在不同浓度（25，50没食子酸，100，150，和200 μG /ml)制备标准曲线。对每个标准浓度和样品，测量760 nm处的吸光度，得到校准曲线并进行校准。摩尔的化学成分已如前所述进行了分析[25］.用紫外-可见光谱法测定了摩尔的总酚组分λ每个样品用去离子水稀释10倍后200-400 nm。采用紫外-可见分光光度计UV-240进行紫外-可见光谱分析。

2.4。动物，取样和实验设计

实验小鼠来自沙特阿拉伯国王阿卜杜勒 - 阿齐兹大学王室。总共28颗雄性小鼠，重量为40克，用于目前的研究。为了确保小鼠适应并避免处理应力，手动处理小鼠10天。拉巴赫大学的道德委员会批准了目前研究中使用的程序。这些动物被居住在拉巴赫大学学院的实验室房屋，并在25±5°C下免费获得食物和水。小鼠没有任何疾病，分配到4组：第一组：作为负面控制（CNT），可免费获得水和食物。组2:辣木属鉴定leaf extract (MOLE) administered orally in a dose of 300 mg/kg bw daily for consecutive 12 days [21］.这里使用的剂量是治疗器官毒性的最有效剂量，其他论文也报道过。ⅲ组:阳性中毒组，甲氨蝶呤(MTX)腹腔注射剂量20mg /kg体重，第7天1次。对于甲氨蝶呤，时间和最佳剂量是根据报道的研究确定的[17.那19.］.甲氨蝶呤的剂量(20 mg/kg bw IP)与人类报告的剂量几乎相同。因此，20mg /kg剂量的甲氨蝶呤是诱发动物器官毒性的最佳高剂量[19.］.IV组:MOLE口服1周，第7天注射甲氨蝶呤，再与MOLE联用5天。当前实验协议的原理图如图所示1．


图1
示意图，示出了实验设计。痣：辣木属鉴定叶提取物;MTX:甲氨蝶呤。

在MTX注射前给予1周的MOLE足够且适合刺激Th1/Th2细胞因子。因此，在注射甲氨蝶呤5天后是检查脾脏甲氨蝶呤毒性改变恢复的合适时间[26］.在研究设计结束时，小鼠吸入二甲醚，收集血液，然后小鼠断头处死用于组织取样。Serum was extracted from blood by centrifugation at 4000 rpm for 6 min and stored in the freezer at −20°C till biochemical measurements. The splenic tissues were immersed either in Qiazol (Qiagen Co, USA) for extraction of RNA or in ice phosphate buffer for splenic antioxidants measurements.

2.5。脾匀浆和氧化应激生物标记测量的制备

Spleen tissues were homogenized (10% w/v) in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) using a sonicator (4710 Ultrasonics Homogenizer, Cole- Parmer Instrument Co., USA) [27］.The homogenate was centrifuged at 5000 rpm for 5 min at 4°C. The supernatant layer was taken and kept at −20°C for measurements of MDA, GSH, and SOD. The MDA, GSH, and SOD activities in the homogenate were assayed using the ELISA reader (Bio-Rad Co., NY, USA), following the procedure written in the product instruction manual with reference to the previous reported studies [28-30.］.

2.6。生化和抗氧化剂的测量

收集血清样品并检查抗氧化剂和氧化应激生物标志物的变化。脂质过氧化（LPO;丙二醛（MDA））基于之前报告的方法测量[28］.超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)含量、过氧化氢酶活性根据已有报道测定[29-31];分别。根据Lowry等人的方法测定血清样本中的总蛋白[32］.如前所述测定白蛋白和球蛋白水平[33］.

2.7。半定量RT-PCR与基因表达

从所有小鼠脾脏中提取总RNA [34］.在变性凝胶中证实了RNA的完整性。rt - pcr, 3μg RNA在PCR热循环仪(Bio-Rad T100TM)中使用oligo dT引物逆转录，70℃5 min变性。两种的混合物μL 10X RT-buffer, 2μL of 10 mM dNTP, and 1 μL总量为100个MuL反向转录酶 μL was used for cDNA synthesis after incubation at 42°C for 1 hr and then incubated at 70°C for 10 min to ensure enzyme inactivation. The primers shown in Table1用于PCR反应。PCR基因及反应见表1总共有25卷μL使用2X Master Mix (Promega Corporation, Madison, WI, USA)。管家基因的表达，β肌动蛋白，用于检查样品的稳定性和定量检测基因。PCR产物在染色（溴化乙锭）的琼脂糖凝胶（1.5％）上运行，然后可视化，并使用凝胶文档系统复制。使用Image J软件（版本1.47）（条带强度进行定量https://imagej.nih.gov/ij/index.html)．
基因 产品尺寸（BP） 退火温度 引物序列
伯灵顿 483 53°C, 1分钟 提出5“-acacctgagctgaccttggagca-3”
反向5“-agacacagtccaaggcagtggga-3”
Caspase-3 478. 53°C, 1分钟 提出5“-acgcagccaacctcagagagaca-3”
反向5“-ttgtgcgcgtacagcttcagcat-3”
XIAP. 522 59°C, 1分钟 正向5'-gggtgggtcttagaggggcttat-3'
反向5“-acaagccatatacaccaggcgtc-3”
Bcl-XL 371 54°C, 1分钟 提出5“-ccactggccacagcagcagttt-3”
反向5“-aaaagtgtcccagccgccgtt-3”
草皮 320 55.°C, 1 min 正向5'-gtcctttcctgcggcgcctt-3'
反向5“-cgccgggccaccatgtttct-3”
催化剂 500 5.8.°C, 1 min 提出5“-ggcccctcctcgttcaggatgt-3”
反向5“-gccattcatgtgccggtgacca-3”
HO-1 460. 55.°C, 1 min 提出5“-tcaggtgtccagagaaggcttta-3”
反向5'-aggtgtcatctccagagtgttca-3'
NLRP3 434 56°C, 1分钟 提出5“-agctgctggcctgacccaaa-3”
反向5'-agccccgtgcacacaatcc-3'
肿瘤坏死因子-α 346. 56°C, 1分钟 提出5“-aactagtggtgccagccgat-3”
反向5“-cttcacagagcaatgactcc-3”
il - 1 -β 409 5.8.。5.°C, 1 min 提出5“-ccgtggaccttccaggatga-3”
反向5'-gatccacactctccagctgc-3'
il - 10 515 59°C, 1分钟 提出5“-agagcaaggcagtggagcaggt-3”
反向5“-aagggccctgcagctctcaagt-3”
正,γ 401 5.8.。5.°C, 1 min 正向5'-cccacaggtccagcgccaag-3'
反向5“-gctgtcccccacccccagat-3”
β肌动蛋白 560 56°C, 1分钟 提出5“-agatccacaacggatacatt-3”
反向5“-tccctcaagattgtcagcaa-3”
分别显示各自基因的PCR循环，每个PCR循环的变性和延伸步骤温度和时间分别为94℃、30 s和72℃、60 s;表中给出了每个基因的退火温度。
表格1
小鼠基因检测的PCR条件。
2.8。统计分析

结果以均数±均数标准误差(SEM)表示。使用SPSS软件(SPSS, IBM, Chicago, IL, USA)对目前的数据进行了单因素方差分析和Dunnett事后描述性检验。用…的方法值 在统计学上被认为是显著的。

3.结果

3．1.摩尔成分分析与检测

摩尔基于所使用的没食子酸标准曲线(图2(一个)和2 (b)和表格2)中发现4种主要多酚化合物(阿魏酸61.09%，槲皮素21.18%，间苯二酚7.46%，山柰素6.18%)。MOLE的组成为灰分11%，水分5.99%，粗纤维9.91%，粗脂肪10.7%，粗蛋白质22.1%，碳水化合物49.37%。辣木叶中总多酚化合物为65 ~ 75 mg/ 100g。

（一种）“name=
（一种）
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(b)
图2.
没食子酸标准曲线(a)和摩尔总多酚化合物(b)。
集成的结果
不。 山顶名 保留时间（分钟） 区(茂  min) 身高（MAU） 相对面积(%) 相对高度(%) 数量(ppm)
厦门市。 香豆素 厦门市。 厦门市。 厦门市。 厦门市。 厦门市。 厦门市。
1 阿魏酸 2.393 5.213 107.679 31.78 61.09 78.6167
2 间苯二酚 2.443 0.278 13.154 1．70 7.46 0.2834
3. 槲皮素 3.213 7.424 37.330 45.27 21.18 94.1503
4. 山柰酚 3.920 2.851 10.892 17.38 6.18 35.4734
厦门市:不可以。
表2
酚类化合物在辣木属鉴定叶提取物（摩尔）。
3.2。在脾组织匀浆氧化应激痣影响

MTX-injected老鼠(表3.)显示组织损伤增加，表现为脾脏匀浆中MDA水平升高，GSH和SOD活性降低。MOLE单独具有较好的抗氧化活性。在甲氨喋呤中毒前给予MOLE 1周，并持续5天，它可以保护甲氨喋呤中毒引起的脾脏中MDA、GSH和SOD水平的变化(表)3.)．
控制 痣 MTX 摩尔+ MTX
MDA (nmol / g组织) 14.78±1.2 13.7±3.3 46.3±2.5 19.3±1.87
SOD (U / g组织) 9.5±2.2 14. ± 2.8 6±0.3 10.1±1.1
GSH (nmol/100 mg) 65±5.4 75±6.9 22。4. ± 4.8 44.。1 ± 5.7
每次实验7只不同的小鼠，数值为平均值±SEM。值是在统计学上显著 与控制; 对照和辣木组和 与MTX组中。SOD:超氧化物歧化酶;MDA:丙二醛;痣：辣木属鉴定叶提取物;MTX:甲氨蝶呤。
表3
痣的改善作用对MTX诱导的氧化应激的小鼠脾匀浆。
３．３．血清抗氧化剂和氧化应激生物标志物的变化

表格4.显示mtx注射小鼠血清中SOD、GSH和过氧化氢酶活性。与对照组和MOLE给药组相比，SOD、GSH和过氧化氢酶水平显著降低。给mtx注射组预给MOLE后，所有检测的酶活性恢复到正常水平(表)4.)．与抗氧化剂水平降低不同，mtx注射组血清中MDA水平较对照组和mole注射组升高。给注射mtx的小鼠预给MOLE可以保护小鼠抵抗MDA水平的改变。mtx注射组明显下降( ）总蛋白，白蛋白和球蛋白水平。与mtx注射小鼠相比，MOLE预给药显著保护了这种降低(图)3.)．
控制 痣 MTX 摩尔+ MTX
IL-1β(pg / ml) 162±6.8 13.2。3. ± 2.3 260±28.2 163.3±14.3.
il - 6 (pg / ml) 66.3±8.8 45.3±1.2 208±31.3 92±3.08
数值为平均±标准误差(SEM) 7个不同的小鼠每次处理。值是在统计学上显著 与控制; 与对照组和MOLE组相比 对MTX组。SOD:超氧化物歧化酶;MDA:丙二醛;谷胱甘肽:减少谷胱甘肽;痣：辣木属鉴定叶提取物;MTX:甲氨蝶呤。
表4
摩尔对血清抗氧化剂水平的改善作用在MTX注射的小鼠。

图3.
痣的改善效果针对总蛋白，白蛋白，球蛋白MTX引起的变化。值是在统计学上显著 与控制; 对照组和辣木组;和 与MTX组。
3．4．MOLE对mtx诱导的炎症细胞因子(IL-1)水平变化的改善作用β和il - 6)

注射MTX显着提高了血清IL-1的血清水平β和il - 6(表5.)．摩尔单药可降低IL-1和IL-6水平。与对照组相比，mtx组给予MOLE前，检测到的IL-1和IL-6水平维持在正常水平5.)．
草皮（U / ml） GSH（纳摩尔/升） 过氧化氢酶（U / L） MDA（纳摩尔/ ml）的
控制 3.4±0.15 3.5±0.3 17.9. ± 8.8 14.01±1.5
痣 3.9±。08 4.6±0.2 208.7±5.1 12.7±1.5
MTX 1.8. ± 0.3 2.4±0.08 138.2±2.9 38.3±1.8
摩尔+ MTX 2.9±0.2 3.5±0.1 170.7±5.1 20.4±1.2
Values are mean ± SEM for 7 different mice per each experiment. Values are statistically significant at 与控制; 与对照痣组和 与MTX组中。
表5
MOLE对mtx诱导的血清IL-1水平变化的改善作用β和il - 6。
3．5．抗氧化剂表达的变化

研究了MOLE对SOD和过氧化氢酶基因的影响。小鼠单独注射甲氨蝶呤或经MOLE预处理后注射。mtx注射小鼠SOD和过氧化氢酶mRNA表达下调(图)4.)．MOLE前施与回收此下调与MTX注射的小鼠相比（图4.)．


图4
摩尔对mtx处理小鼠SOD和过氧化氢酶mRNA表达的改善作用。用半定量PCR分析不同组小鼠经β -肌动蛋白正常化后脾脏中SOD和过氧化氢酶mRNA水平。 相对于对照组; 与对照和MOLE基;和 与MTX-treated组。
3.6。细胞因子表达变化

接下来，我们研究了MOLE给药对脾脏中MTX毒性改变的细胞因子表达的保护作用。数字5(一个)显示MTX上调TNF-的表达α；相比之下，MOLE下调了TNF-α表达式。给mtx注射小鼠预给MOLE使TNF-的上调正常化α表达式。与肿瘤坏死因子-α表达，遗传表达IFN-γ与对照组相比，MOLE上调，MTX下调(图图5（b）)．鼹鼠预施用标准化和回收IFN-γγ控制水平。有趣的是，MOLE上调了IL-10的表达，在mtx注射组中表达更多(图)图5（c）)．令人惊讶的是，MTX组预先给药MOLE可诱导更多的IL-10的加性表达。

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（一种）
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(b)
(c)“name=
(c)
图5
MOLE对TNF- mRNA表达的改善作用α，IFN-γγ和IL-10在mtx治疗小鼠中的作用。半定量PCR分析TNF-显示脾脏mRNA水平α，IFN-γγ和IL-10在小鼠的不同组，beta肌动蛋白标准化后。 相对于对照组; 与对照和MOLE基;和 与MTX-treated组。
3.7。在细胞凋亡和抗凋亡基因的变化

与对照组和摩尔给药小鼠相比，注射MTX可上调BAX和caspase-3(凋亡相关基因)的基因表达(图)6.)．MOLE前施与从BAX和由MTX注射改变报道变化caspase-3表达保护小鼠。值得注意的是，MOLE给予小鼠上调抗凋亡基因，以摩尔上调XIAP和Bcl-xL（图中的表达7.)．与对照和摩尔施用小鼠的小鼠相比，MTX注射的小鼠在表达和Bcl-XL的表达中显示下调。感兴趣的是，摩尔对MTX注射的小鼠的预先分析标准化了凋亡相关基因的增加，并回收了MTX醉酒小鼠中报道的抗痘病基因的减少（图6.和7.)．


图6
MOLE对mtx处理小鼠BAX和caspase -3 mRNA表达的改善作用。用β - actin正常化后，用半定量PCR分析不同组小鼠的BAX和caspase -3的脾脏mRNA水平。 相对于对照组; 与对照和MOLE基;和 与MTX-treated组。

图7
摩尔对mtx处理小鼠XIAP和Bcl-xl mRNA表达的改善作用。半定量PCR分析不同组小鼠β - actin正常化后脾脏mRNA水平。 相对于对照组; 与对照和MOLE基;和 与MTX-treated组。
3.8。NLRP3和HO-1表达的变化

与对照组和摩尔给药组相比，注射甲氨蝶呤可上调NLRP3的表达，下调HO-1的表达，从而诱导脾脏组织的一般炎症状态(图)8（a）和8 (b))．与MTX注射组相比，MTX注射前给药一周的MOLE改善了NLRP3和HO-1表达的变化(图)8.)．

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（一种）
(b)“name=
(b)
图8
摩尔对mtx处理小鼠NLRP3和HO-1 mRNA表达的改善作用。半定量PCR分析不同组小鼠经β - actin正常化后NLRP3和HO-1的脾脏mRNA水平。 相对于对照组; 与对照和MOLE基;和 与MTX-treated组。

4.讨论

目前的研究证实，干叶MO是酚酸和类黄酮等多酚化合物的重要来源。摄取和摄入类黄酮可保护患者免受与氧化应激相关的慢性疾病[35］.MO叶黄酮的良好来源。中所含的黄酮类化合物鼹鼠分别为槲皮素和山奈酚，在21.18和6.18，浓度，如在这里和其他人报道[36］.众所周知，槲皮素等类黄酮是强抗氧化剂、降血脂、抗糖尿病和低血压，并减少氧化应激和相关的细胞凋亡[37］.阿魏酸和间苯二酚分别为61.09%和7.46%的酚类化合物。MOL中的酚类化合物作为抗炎、抗氧化和抗凋亡因子[38］.

有报道认为甲氨蝶呤作为化疗和癌症治疗的有效药物被广泛应用。但是，它会导致一些直接中毒的症状[16.那39］.此外，它是与多种治疗方法相关的第二种恶性肿瘤的原因[40］.在该研究中，通过摩尔在脾脏中的较普拉中，MTX诱导的抗氧化剂和增加的氧化应激生物标志物的显着改变。MTX和其他化疗药物的毒性作用是由于氧化应激和ROS形成[39］.

众所周知，来自草本植物的膳食抗氧化剂通过减少和/或防止与甲氨蝶呤中毒相关的某些副作用来改善甲氨蝶呤化疗的影响[11.］.MTX增加了内源性(细胞激活和炎症)和外源性(环境污染物和化疗)来源产生的自由基[41.］.文献表明MTX毒性中存在氧化应激[41.］.MTX介导的氧化应激诱导SOD、GSH和CAT活性衰竭和诱导脂质过氧化[42.］.所有这些副作用都是通过给mtx注射组预先给予MOLE来保护和维持在正常范围内的3.和4.和数字3.和4.)．

以前的作品(42.那43.]报道MTX毒性增加了炎性细胞因子的产生和ROS产生。这里，MTX诱导促炎应答，因为它上调IL-1的表达β、il - 6、TNF -α、IL-10和IFN-下调γ表达式。甲氨蝶呤组单独给药或预给药均可保护和改善甲氨蝶呤的不良反应。MOLE通过上调不同细胞因子的表达来改善抗炎状态。众所周知，MOLE富含阿魏酸、槲皮素和山茶酚等多酚化合物[44.］.阿魏酸，摩尔的主要成分，是酚类化合物，具有抗氧化剂，抗炎，抗糖尿病和器官保护性能[45.］.MOLE通过控制细胞因子的分泌来实现和控制促炎和抗炎信号通路之间的平衡[46.］.因此，本文所报道的MOLE的抗氧化和抗炎功能可以归因于MOLE中所含的酚类化合物和黄酮类化合物。

在本研究中，IFN-表达的变化γ肿瘤坏死因子-α, il - 10。干扰素-γ被检查。这些细胞因子由淋巴细胞分泌，参与组织相容性抗原的表达和免疫调节[47.］.IFN-之间的相互作用γ其他促炎细胞因子可以改变细胞的结构并影响细胞的渗透性[48.］.此外，有报道称MTX可增加促炎细胞因子(TNF-)的分泌α,il - 1β和il-6）[48.那49.］.这些结果表明，摩尔作为抗炎和抗氧化因子的组合效果将是在预防MTX诱导的脾毒性的有益的。因此，痣诱导增强了IL-10的表达，以控制和调节TNF-α的表达α，IFN-γγ，和IL-10 [1那47.那50.］.

Bax和Bcl-2基因是Bcl-2家族的成员，控制细胞对破坏、降解和凋亡的易感性[51.］.Bax被称为氧化应激和炎症细胞因子激活的促凋亡蛋白[52.］.不像Bax和Bcl-2的块并拮抗凋亡通过胱天蛋白酶活化[53.］.甲氨蝶呤诱导的脾脏细胞上调Bax和caspase-3的表达，下调XIAP和Bcl-xl的表达。当给mtx注射的小鼠预先给予MOLE时，所有的症状都有所改善。预给药MOLE通过其抗氧化和抗炎作用防止mtx诱导的细胞死亡。在mtx中毒小鼠的脾脏中，MOLE下调Bax和caspase-3，上调Bcl-xl，证实了MOLE可能的抗凋亡作用。与此同时，XIAP (apoptosis inhibitor of apoptosis)也能阻止凋亡细胞的死亡。本研究结果证实了MOLE作为抗凋亡因子的增强作用，通过其作为抗凋亡基因影响Bcl-xl和XIAP的表达。

为了探讨MOLE对MTX诱导的脾脏毒性的作用机制，我们检测了NLRP3和HO-1的表达模式。ROS诱导NLRP3激活的事实可能为HO-1的抗炎潜力提供了解释。HO-1是一种保护性基因，可参与抗炎、抗氧化剂和抗凋亡代谢物的调控和产生[54.］.HO-1防止炎症。ROS参与并诱导炎症小体激活。炎性小体特别是NLRP3通过激活一些细胞因子(如IL-1)来调节不同组织的炎症β和地震55.］.HO-1调节炎性（NLRP3）的表达作为这里报告和其他人[56.］.我们报道了MTX下调HO-1和上调的NLRP3表达，尽管鼹鼠脂肪分子明显增强了HO-1表达并降低了NLRP3表达。在这里，痣上调HO-1以恢复NLRP3表达的增加及其相关的炎症级联[57.］.MOLE对mtx诱导的脾脏毒性的集体保护作用总结在一个图形中(图9.)．


图9
图形抽象代表摩尔对MTX诱导的脾中毒脾-保护作用。

总之，目前的研究结果表明，摩尔对MTX诱导的脾脏毒性和氧化应激产生了保护性影响。通过调节抗炎，抗氧化剂和抗透露信号传导途径来介导摩尔的保护性。因此，摩尔作为脾氧化应激缓解和处理的治疗剂是有效的。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据可从通信作者在合理要求

伦理批准

Turabah大学学院的科研伦理委员会，塔伊夫大学，沙特阿拉伯，欣然同意了基于美国国立卫生研究院指南照料和使用实验动物的研究中使用的所有程序。这里使用的所有的预防措施同样的方式来减少整个实验动物的痛苦。

的利益冲突

作者声明本研究的发表不存在利益冲突。

作者的贡献

MMS和AA构思和设计了实验。MMS EHM、AA和FA进行了实验。MMS、WAM和FA分析了数据。WAM、SHA和EHM进行了生化分析。紫外-可见光谱由SHA负责。MMS、AA和AA负责基因表达分析。MMS对数据进行了解释。MMS, AA, AA, EHM对手稿进行了修改。所有作者都已经阅读并批准了论文的最终版本。

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