抗氧化剂和抗炎作用青春痘occidentale.土地Anacardium microcarpumD.在IL-10敲除小鼠的肝脏上提取物

摘要

背景．的青春痘occidentale.l .(腰果)和Anacardium microcarpumD.（cajuí）在巴西常见的植物。它们呈现具有抗氧化和抗炎作用的植物化学化合物。因此，本研究的目的是分析从叶乙醇提取物的抗氧化和抗炎活性A. occidentale.和答:microcarpum其实验淘汰赛模型对肝组织的影响后，他们收到Paracetamol®。方法．乙醇提取物A. occidentale.和答:microcarpum叶子准备。用福林-西卡多试剂测定总酚，黄酮类化合物与金属铝进行络合反应，形成有色络合物。采用HPLC指纹图谱检测酚类化合物。IL-10基因敲除小鼠随机分为6组，给予G1，仅水处理;G2，A. occidentale.提取;G3，答:microcarpum提取;G4,扑热息痛®;G5,扑热息痛®+A. occidentale.提取(400毫克/公斤);G6,扑热息痛®+答:microcarpum提取(400毫克/公斤)。测定血液生化指标和白细胞计数。对其肝组织进行氧化标志物和组织病理学分析。结果．在分析的两种提取物中检测到酚类化合物和总黄酮。HPLC指纹检测到两种提取物中的酚醛酸，小酸和儿茶素黄酮类化合物。肝组织的组织病理学分析允许评估核增加，正弦血压和炎症性浸润。答:迷你车在使用Paracetamol®后，与其他处理相比，pum表现出更强的抗氧化活性，增加抗氧化酶水平，降低TBARS和羰基蛋白。组织病理学分析显示提取物治疗后炎症浸润减少。结论．我们的研究结果表明，两种提取物，尤其是答:microcarpum，可减轻对乙酰氨基酚敲除小鼠的肝损伤，表明这些提取物可减轻脂质过氧化和对肝实质形态功能损伤的疗效。

1.介绍

的青春痘occidentale.L.(腰果树)是一种腰果科植物，原产于巴西北部和东北部地区[1］．的Anacardium microcarpumD.（cajuí）也在这些区域中发现，被广泛用于传统医学炎症，风湿病，肿瘤的治疗，和感染性疾病[2］．A. occidentale.，也称为腰果树，是最广泛栽培和使用的物种[3.］．两种物种富含酚类化合物和它们的叶子，树皮，水果和坚果的黄酮类化合物。它们的高抗炎和抗氧化能力提供给细胞的保护[4］．此外，叶子，假果，还有果皮A. occidentale.有多酚，主要是单宁酸，其充当天然抗生素[5］．假果答:microcarpum主要含有维生素C、多酚和矿物质，有预防心血管疾病的作用，以及抗炎和抗菌作用[6］．

肝脏是机体的排毒的主要器官，负责生物转化和消除在自由基的生成作用的化学化合物。这些基团产生在组织中强烈病变，如炎症和变性过程可能损害器官功能[7］．Paracetamol®目前是世界上最广泛使用的镇痛药，并在动物模型中认识到肝毒性和肾毒性作用。其有害影响与反应性氧物种的产生和抗氧化酶合成的降解和抑制有关[8］．肝组织中这些化合物的增加促进链式反应，其特征在于脂质和蛋白质过氧化[9］．这些反应促进炎症细胞的迁移和变性病变的形成，这些病变可能演变成不可逆的过程，如细胞死亡[10.，11.］．

白介素10 (IL-10)是一种抗炎细胞因子，控制巨噬细胞和中性粒细胞的信号转导，对防止正常炎症反应的异常调节是必要的。此外，它通过诱导血管生成和血管抑制因子的细胞依赖型表达来调控血管生成。

动物模型已经被使用了好几年，使用了各种各样的物种。大鼠和小鼠由于体积小、繁殖率高，在解剖学、生理学和遗传学上与人类有一些相似之处，为某些疾病的研究提供了重要信息，因此常被使用[12.，13.］．肠道炎症的动物模型已经被使用了几十年，除了能够评估在IBDs中观察到的肠道炎症外，还能够提供有关粘膜免疫、肠道稳态维持和紊乱的各种信息[14.］．IL-10敲除小鼠(IL-10 -/-)被用于肠炎症疾病(DII)研究，因为它们会自发发生结肠炎，并影响影响小肠和大肠整个延伸的不连续的结肠炎。这些现象的发生是由于细胞因子IL-10的缺失，IL-10在调节肠道稳态中起作用。它的缺乏与炎症浸润、上皮增生和溃疡的出现以及肠上皮的其他变化有关[15.］．因此，IL-10敲除小鼠是一种理想的动物模型，一旦敲除，在愈合过程中可能出现更大的炎症和血管化减少。目前，已知有效的组织修复是通过抗炎和促炎介质的平衡和适当的血管化来实现的。长期的炎症会导致有害的组织损伤，而血管数量的减少会减缓再生过程[16.］．那么，我们的目标是如何研究效果A. occidentale.和答:microcarpum在乙酰氨基酚促进后的病变后肝组织，我们认为这种动物模型非常有效，因为它允许我们在极端条件下研究这种病理病症，低血管化和高型炎症。因此，这种动物模型的使用增强了炎症过程，并使我们能够更好地了解在肝脏修复过程中测试的草药的作用。

在炎症状态下，主要疾病与一氧化氮，脂质过氧化，细胞因子级联的活化的不平衡有关，主要是反应性氧（ROS）和氮气（RNS）物种的释放，当过度引起的可能导致细胞损伤时;然而，生物体使用能够最小化这些效果的防御系统，使用SOD（超氧化物歧化酶），猫（过氧化氢酶）和谷胱甘肽过氧化物酶和非酶蛋白如羰基化蛋白（如羰基化蛋白）来最小化这些效果17.］．

的抗炎特性腰果提取物有待进一步阐明，机理有待进一步阐明。一些特性已经在叶子、树皮、栗子和花梗中得到证实，并被用于传统医学治疗炎症性疾病，如关节炎。在炎症模型中，果皮提取物抑制中性粒细胞产生前列腺素，并在小鼠脂多糖(LPS)诱导的微血管通透性和败血性休克试验中产生抗炎活性，抑制炎症细胞因子，以及阻断NF-kB和MAPK通路的iNOS和COX-2基因的表达和炎症过程的调节[18.］．在一项对瑞士老鼠模型的研究中使用了A. occidentale.通过灌胃治疗实验性皮肤水肿，观察到与对照组相比，二甲苯诱导的炎症过程减少，耳水肿和愈合过程的记录减少[19.］．这些影响归因于酚类化合物存在的所有部分腰果可能通过改变促炎细胞因子(如TNF-)的释放和基因表达而起作用α，IL-1和IL-6 [20.]，并阻断5-脂氧基酶（5-LOX）或环氧化酶2（COX-2）的活性，抑制炎症介质的生物合成[17.］．

为了进行身体排毒肝脏，重要的酶必须保持器官的氧化还原平衡。在氧化标志物和抗氧化酶的增加的减小典型地指示用于在改变氧化/抗氧化平衡的过程中产生的，并已被广泛用于在植物提取物的研究[自由基的阻力的电位21.，22.］．发现和使用可以减少炎症和氧化过程的新分子是基本的，因为目前的非甾体药物会引起副作用，因为蔬菜的次级代谢物，特别是酚类物质，是重要的盟友[17.，18.］．除了氧化型材之外，一些血清酶的分析，例如丙氨酸转氨酶（ALT），天冬氨酸转氨酶（AST），胆红素（BB）和γ-谷氨酸磷酸酶（GGT）通常用作肝损伤的间接标志物并且被认为是敏感的参数来评估器官的功能状态[23.，24.］．

在此基础上，本研究的目的是实现提取物的化学和生化特性，并分析叶的抗氧化和抗炎潜力A. occidentale.和答:microcarpum在暴露于Paracetamol®后敲除动物的肝脏上。

2。材料和方法

2.1。化学品

Paracetamol®(成分:500mg / ml Paracetamol)， Tylenol-Janssen强生®品牌。硫代巴比妥酸、过氧化氢、磷酸钠、甲醛、戊二醛、苏木精和伊红购自Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)。天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ -谷氨酰基转移酶(GGT)生化试剂盒购自Human In Vitro Diagnostics (Minas Gerais, Brazil)。

2.2。植物材料

的叶子A. occidentale.和答:microcarpum从联邦大学的校园里收集做托坎廷斯州（UFT），帕尔马斯，TO，巴西。甲腊叶凭证标本沉积在交错生态脆弱植物标本（植物园教师DSC。罗德尼那根Oliveira的维亚纳），在托坎廷斯联邦学报（编号109和875，分别地）。其干燥和一把刀磨研磨。To obtain the ethanolic extract, the previously ground plant material was concentrated in ethanol PA for 72 h, and the supernatant was withdrawn and reserved. This procedure was replicated three consecutive times. The supernatant was filtered, and then the solvent was distilled off in a rotary evaporator at 60°C under reduced pressure. The ethanolic extract was placed in sterile glass vials and in an oven at 40°C to complete the total evaporation of the ethanol [25.］．将粗提取物包装在瓶子中，用铝箔包裹，并置于冰箱中以进一步分析。提取阶段是在乌斯特，帕尔马斯，巴西的基本科学和健康实验室进行的。

2.3。化学分析

2.3.1。总酚类化合物的定量

用福林-西卡多试剂测定乙醇提取物中总酚的浓度。首先，将8.0 mg/mL的干提取物用80%乙醇稀释。600年μl of the solution was poured into a flask, and 3.0 mL of Folin’s reagent was added to it; it was left resting for 3 minutes, after which 2.4 mL of the 4% saturated sodium carbonate solution was added thereto. The tubes rested in the dark for 60 minutes. A white reagent was conducted under the same conditions. A gallic acid calibration curve was prepared at concentrations of 5, 15, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, and 200 mg/mL. The reading was taken at 760 nm by a UV-vis spectrophotometer. Results were expressed as mg EAG g⁻¹（每克干燥提取物相当），适用于博罗斯基和佩雷斯 - 吉米尼斯等人。[26.，27.］．

2.3.2。总黄酮的含量测定

黄酮类化合物的测定是基于与金属铝的络合反应，形成一种有色络合物。叶提取物中黄酮类化合物的含量A. occidentale.和答:microcarpum分光光度法测定。用芦丁标准品在浓度为10、20、40、60、80和100 mg L时构建标定曲线⁻¹．含有1mg提取物的溶液A. occidentale.和答:microcarpum用1ml甲醇稀释。500年μ将提取液的L加入到500μL在甲醇中5％氯化铝，并补充含有2.5ml甲醇。将该混合物保持在室温下在室温下保护1小时，然后在用500制备的白色uV-Vis分光光度计上读取415nm μl氯化铝和2.5 mL甲醇。结果在mg ER g中表达⁻¹(每克提取物的芦丁当量毫克数)[28.］．

2.3.3。高效液相色谱（HPLC）

在相同条件下，采用HPLC (Shimadzu®，Kyoto, Japão)分析乙醇提取物以及真实的酚类化合物样品，并配备泵(LC-10AT)、脱气器(DGU-14A)和UV-vis SPD-10A检测器。使用的柱是Phenomenex Luna C18 5μm (250 mm × 4.6 mm)带有C18 Phenomenex Security Guard cartridge (4 × 3.0 mm)。色谱洗脱检测在不同波长(254和280 e320 nm)。利用Class-VP软件对探测器的响应进行了记录和集成。流动相为0.1%磷酸水溶液(A相)和0.1%磷酸水溶液/乙腈/甲醇(54:35:11 v/v) (B相)，梯度曲线如下:0-5 min, 0% B;5−10 min, 30% B, 10−20 min, 40% B, 20−60 min, 40% B, 60 - 70 min, 50% B, 70-90 min, 60% B, 90-100 min, 80% B, 100-110 min, 100% B, 110-120 min, 100% B。流速为1.0 mL/min。通过比较样品的保留时间和对照品如没食子酸、绿原酸、香草酸、丁香酸、儿茶素、槲皮素、香豆酸、芦丁、柚皮苷和黄酮(Sigma®)的真实标准来鉴别化合物。对萃取物色谱图中保留时间相同的酚类化合物峰进行共注射，以确定其化学鉴别。分析前，所有提取物(1 mg/mL)和正宗标准品(0.18 mg/mL)通过0.20过滤μ聚偏氟乙烯的微米的膜过滤器。一个方法是基于阿劳若等人。和Costa等人。[29.，30.］．

２.４.体内试验

2.4.1。实验设计

使用36只60日龄雄性小鼠，IL-10敲除小鼠，来自巴西米纳斯吉拉斯的阿尔费纳斯联邦阿尔费纳斯大学(ual)中央Vivarium。动物饲养于平均温度22±2℃、光/暗周期为12小时的集体笼中。他们得到了水和商业饲料自由．实验程序通过动物研究伦理委员会编号23101.001539/2017-08 CEUA-UFT批准，动物实验按照国家动物实验控制委员会(CONCEA)规范处理。

将动物随机分为六组（N = 6): G1, negative control, received only water and feed; G2, control, received by gavage extract ofA. occidentale.；G3，控制，由饲养提取物接收答:microcarpum；G4, Paracetamol®，浓度500 mg/kg;G5, Paracetamol®500 mg/kg + extract ofA. occidentale.浓度400mg / kg;和G6，帕拉基因酰胺®500mg/ kg +提取物答:microcarpum浓度为400mg / kg。每天收到的动物100 μ含有蒸馏水或从叶子中提取的溶液的LA. occidentale.或者答:microcarpum，总共30天[31.，32.］．对乙酰氨基酚损伤组通过灌胃给予0.1 mL浓度为500 mg/kg(泰诺)的药物，连续8天[33.[在第九天，用叶片的粗萃取物治疗A. occidentale.和答:microcarpum．

通过用5％异氟醚吸入动物并使动物安乐死。通过复古轨道收集获得的血液（10 μL)置于立即产生血液涂片的玻片上，并放入微管(2ml)进行生化试验。颈椎移位，全放血后将肝脏分为两部分。其中一部分保存在液氮(−196℃)中，然后在−80℃下保存在超冷冻器中，另一部分浸泡在卡森福尔马林中。

2.4.2。血清的生化分析

的B.lood was centrifuged at 870 g for 10 minutes, and the serum was used for the analysis of biochemical parameters. The parameters evaluated were ALT (alanine aminotransferase), AST (aspartate aminotransferase), GGT (gamma-glutamyl transferase), ALP (alkaline phosphatase), total cholesterol, and triglycerides. The parameters were analyzed using the appropriate enzymatic colorimetric kits following the manufacturer’s instructions (Assay Kit, Bioclin, Quibasa, Belo Horizonte, MG, Brazil). The serum was read by specific colorimetric assays (Bioclin®, Brazil) using a clinical chemistry analyzer BS-200 (Mindray®).

2.4.3。血液学分析:白细胞计数差异

血液涂片用10次进行 μL在安乐死当天采集的血液切片，Panótico系统染色(Laborclin ltd .) [34.］．在每个载玻片上，用最低的细胞浓度的字段被选择用于计数差的白细胞（中性粒细胞，淋巴细胞，单核细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞和），累加100个细胞的绝对值。白细胞分类计数用作参考值是基于由Santos等人提出的值。[35.］．

2.4.4。氧化标记

150 (150 mg)肝碎片被制备用于氧化分析。在0.1 M磷酸盐缓冲液中均质，pH 7.4, 4°C离心。在上清液(匀浆)中分析过氧化标志物。根据Winterbourn等人之前描述的方案，将匀浆与硫代巴比妥酸混合，在535 nm处监测硫代巴比妥酸反应种(TBARS)的形成。[36.］．使用基于蛋白质的羰基化反应与2,4-二硝基苯基肼（DNPH）形成二硝基苯基肼的方法进行蛋白质羰基的测定[37.］．用摩尔消光系数(21 × 1031 mol cm)计算羰基化蛋白含量。TBARS和总蛋白的结果根据上清液中总蛋白水平归一化，以(nmol/mg)蛋白表达[38.］．

2.4.5。抗氧化酶

以150 mg的肝脏样品进行抗氧化活性测定，以黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性₂O₂并减少硝基唑唑鎓[39.］．根据AEBI描述的协议评估过氧化氢酶活性（CAT）[40通过测量H的分解率₂O₂．如Flohé和Günzler所述的NADPH的衰减率对S转移酶谷胱甘肽活性（GST）的测定[41.］．匀浆中蛋白质的总剂量采用Lowry等人的方法测定[38.]，数据按上清中总蛋白水平归一化，结果以U CAT/SOD/GST mg蛋白表达。

2.4.6。组织病理学分析

在卡森的福尔马林中除去肝脏片段并固定24小时[42.在室温下。固定后，组织在逐渐增加的乙醇梯度中脱水，并纳入(羟乙基)甲基丙烯酸酯树脂(Historesin®，Leica)。横断面和纵断面5μ用Multicut 2045旋转性显微摩（Reichert-Jung，Germany）获得M厚度，并用苏木精和eosin（He）染色，以分析细胞和血管。然后将削减安装在Entellan（Merck，Frankfurt，德国）。为了防止对半动物部分的重复分析，仅使用1个段。观察到幻灯片，使用连接到数码相机（Olympus QColor-3，Tokyo，Japan）的轻场显微镜（Leica DM 750）捕获图像。所选择的增加为20倍，在10个字段中，每组60个字段。

2.5。统计处理

统计程序SPSS 20和Graph Pad Prism 5®。正态检验采用夏皮罗-威尔克检验，三个自变量之间采用方差分析进行比较。对于正态分布的数据，采用post hoc Tukey检验检测未服用Paracetamol®(G1;G2;G3)和服用扑热息痛®(G4;G5和G6)。它被认为是有统计学意义的时候 ．在曲线图上绘制了没食子酸和芦丁溶液的吸光度，以分别以总酚类和黄酮类化合物的定量产生校准曲线。

3.结果

3.1。化学分析

3.1.1。总酚和总黄酮的含量测定

酚类化合物含量为2.32 mg EAG g⁻¹1.64 mg eag g⁻¹摘录的A. occidentale.和答:microcarpum， 分别。的concentrations found in 1 g of a sample of flavonoid compounds were 0.29 mg ER g⁻¹0.34 mg ER g⁻¹在A. occidentale.和答:microcarpum提取物，分别。

3.1.2。HPLC分析

HPLC-UV色谱图的混合物来自真实化合物，如Gallic酸（1; RT 16.25分钟），绿原酸（2; RT 21.55分钟），香草酸（3; RT 23.35分钟），注射酸（4; RT）24.39分钟），儿茶素（5; RT 26.24分钟），槲皮素（6; RT 31.00分钟），香豆酸（7; RT 35.62分钟），Rutin（8; RT 44.73分钟），Naringin（9; RT 65.77分钟），和黄酮（10; RT 93.88分钟），在图中表示1(一)．提取物的HPLC指纹A. occidentale.和答:microcarpum如图所示1 (b)和1（c）， 分别。

通过比较提取物的色谱图的峰的酚类化合物的可信样品的峰的保留时间，这是可能的，以确定所述化合物没食子酸和儿茶素在两种提取物。将这两种化合物用同样在提取由这些标准共注射识别。的detection at the wavelength at 280 nm showed the best selectivity for the detection of phenolic compounds in the extracts.

３．２．体内研究

3.2.1之上。IL-10敲除小鼠血清浓度的生化分析

接受Paracetamol®组的小鼠和提取物A. occidentale.（G5）与仅与寄生Amol®（G4）治疗的组相比，Alt水平的减少。用提取物治疗的小鼠A. occidentale.(G2)和答:microcarpum相比于对照组（G1）时（G3）提出了一个降低AFO的，并且相比于对照组（G1），当处理组中（G5和G6）显示太降低。接受动物答:microcarpum和A. occidentale.相比对照动物（G1）时提取物（G2和G3）显示血清标记值的降低，并A. occidentale.- 与对照（G1）相比，治疗的小鼠减少标签水平（表1）.

3.2.2。差分白细胞计数

对照组(G1)单核细胞数量明显多于对照组(G1)A. occidentale.(G2)和答:microcarpum（G3）。这个结果是预期的，因为IL-10敲除动物自然有炎性细胞的更大的量。在另一方面，接收Paracetamol®只（G4）的动物还提出增加了这些细胞的水平相比，具有相关联接收Paracetamol®组A. occidentale.(G5)和答:microcarpum（G6）。接受扑热息痛（G4）的基团显示与对照相比单核细胞的显着增加。与对照（G1，G2和G3）相比，接受扑热息痛（G4）的基团中的中性粒细胞的数量增加，与G4和G2相比，G4组中这些细胞的数量减少（数字2）.100个细胞中嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的平均值在0到1之间，组间没有显著差异，也没有发现年轻细胞。

3.2.3。在肝脏样本氧化应激标志物的定量

与治疗组答:microcarpum与仅服用Paracetamol®(G4)组相比，与Paracetamol®(G4)相关的(G6)提取物的TBARS水平降低，而服用Paracetamol (G4)组的TBARS水平较对照组(G3)升高(图)3（a））.用提取物处理的基团中羰基蛋白（CNP）的含量较低A. occidentale.(G5)和答:microcarpum(G6)与仅接受Paracetamol®(G4)组比较(图3（b））.

3.2.4。肝脏中抗氧化酶的评价

与阴性对照（G1）相比，超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（G2）升高。与对照（G1）和SOD相比，猫与接收的控制相比，接受寄生阳离子®（G4）的组减少A. occidentale.(G2)。接受治疗的那群人答:microcarpum（G6）中的关系提高了其活性的治疗用对乙酰氨基酚（G4）。在谷胱甘肽过氧化物酶（GST）的分析，有一个增加与处理的组中答:microcarpum与接受Paracetamol®治疗组相关(图4（c））.

3.2.5。组织病理学分析

动物治疗A. occidentale.（G5）表明炎症性浸润，核体积，正弦充血和胆汁淤积以及收到的人的降低答:microcarpum（G6）从正弦拥塞仅差异（图5；表格2）.与对照组(G1、G2和G3)相比，Paracetamol®(G4)组在诱导浸润、核体积增加、窦道充血和肝炎胆汁淤积方面有效。对照组(G2和G3)显示核体积减少，阴性对照组(G1)和炎症浸润仅在接受提取物的组答:microcarpum（桌子2）.

4.讨论

本研究调查了效果A. occidentale.和答:microcarpum对扑热氨醇对IL-10敲除小鼠肝损伤的影响。扑热息痛的实验性损伤曾被证实为氧化性和炎性肝损伤的模型[43.，44.］．对乙酰氨基酚的毒性是由于过氧亚硝酸盐的形成和一氧化氮的增加，而一氧化氮是由胞质变性和核内切酶分裂引起的。此外，由于炎症细胞数量的增加，这些化合物会释放导致炎症、变性和最终坏死的介质，从而促进肝脏损伤。从这个意义上说，为了显示提取物对肝毒性物质(扑热息痛)引起的肝损伤的积极作用，使用了已知会造成急性和严重肝损伤的剂量，即500 mg/kg的大剂量动物。此外，在一项类似的研究中，当在cd -18缺陷小鼠中使用300 mg/kg剂量时，观察到急性肝毒性，线粒体膜电位打开，导致死亡细胞损害所有肝脏功能[43.］．使用野生型菌株，在实验性白化大鼠中诱导的乙酰氨基酚显示出血清标记酶，天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶的水平和脂质过氧化物的显着升高，其抗氧化酶如超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的降低，显示出其高有害潜力[45.］．此外，该方案还广泛用于分析植物提取物的保护和疗效，特别是与消化系统的病理相关[46.，47.］．

近几十年来，在许多国家，由化学制剂引起的肝脏疾病的流行程度逐渐增加[48.］．肝脏参与异卵代谢，在排毒生物体中发挥着重要作用。接触到肝毒性的化合物如源自真菌的产品，细菌代谢物，重金属，环境污染物和化学治疗剂，肝脏变得易于几种疾病[10.，49.］．生物多样性是生物活性次级代谢物的巨大宝库，与传统知识相结合，已经导致了治疗不同人类病理的药物的发现。在这方面，许多国家设法引进药用植物，作为初级保健的综合和补充做法。然而，尽管普通药物中使用不同的植物，但据估计，对小于10%的植物进行了足够深入的研究，以评估它们的治疗特性[16.］．因此,A. occidentale.和答:microcarpum在我们的研究已经在巴西传统医药用于感染，咽喉发炎，支气管炎，关节炎，肠绞痛，黄疸，糖尿病的治疗中使用的提取物，和哮喘[50.］．另外，在先前的研究中，分析了毒性的研究A. occidentale.观察到400 mg/kg的剂量没有显示毒性活性，相反，这确实促进了组织修复和抗氧化保护[51.，52.］．

通过检测植物次生代谢的化合物，可以更好地了解植物的代谢活动，从而推断出植物的生理机制[1，3.，4］．高水平的酚类化合物，主要是类黄酮和单宁，可能是抗氧化活性的原因腰果物种是因为若干报告将该属性归因于这些次要代谢物组[53.，54.］．HPLC指纹图谱显示没食子酸(峰1)和儿茶素(峰5)的存在，保留时间与真实化合物一致。没食子酸和儿茶素分别是可水解单宁和缩合单宁的前体，在阿纳心科组织中常见，主要存在于分泌上皮和嗜中膜上皮，这表明在这两种提取物的叶子中存在这些代谢物[53.］．此外，我们的研究证实了Salehi等人[4]所检测的多酚化合物中的叶腰果如单宁、香豆素和皂素，这些化合物可以激活抗氧化和抗炎能力。在其他的研究中体外模型中，作者证明了酚类化合物的存在和抗氧化活性腰果叶提取物具有清除自由基、还原铁、螯合铁离子的能力，增强了植物的抗氧化活性[55.］．证实这些发现，Filho等。[2]表明了答:microcarpum茎皮的提取物具有没食子酸和儿茶素，以及这些化合物促进了脂质过氧化的减少增强这些化合物的抗氧化活性。

通常，生物化学分析表明，只接受提取物的小鼠中没有肝脏损伤，这是没有提取物的毒性的强烈指标。与接受亚乙酰氨基酚的组相比，接受亚律丙氨酸®（丙氨酸氨基转移酶）的肝脏含量增加，并用A. occidentale.（腰果）。该评价肝脏代谢这些生化酵素是肝脏和胆管改变的间接指标，所以与草药治疗后进行剂量是很重要的。ALT活性是用于检测肝毒性的重要的生化参数，以及其它标志物如AST是结果互补56.，57.］．这些标志物的结合提供了更准确的肝脏损伤的结果。GGT和碱性磷酸酶也被认为是肝功能的重要附加标志物，包括胆道功能的鉴别诊断[18.］．这些数据表明，提取物可能起到保护肝功能的作用，因为即使动物没有达到这些参数的参考值，它们的值仍然有显著的下降。Tédong等[58.[关键词]小鼠肝脏;叶提取物A. occidentale.并观察到，通过灌胃，每公斤动物的提取物高达14克是无毒的。一种药物的肝保护指数可以通过其减少有害作用和保存肝脏形态生理学的能力来评估。因此，AST、ALT、GGT常被作为肝损伤的间接标志物，被认为是评价功能状态的敏感参数[44.，59.］．甘油三酯表明与对照组之间的显著减少和那些接受A. occidentale.和答:microcarpum提取物，这表明提取物可以用作降血脂，降低血浆甘油三酯的水平。这一结果要求我们注意，在未来，评估提取物，以防止在特定的心血管疾病（CVD）模型动脉粥样硬化的形成的能力。

自由基促进细胞膜的变化，因此也在细胞的氧化还原平衡中，导致与炎症相关的退行性方法[57.］．炎症过程的调节来自于促炎介质的释放，这可能与NF-kB的表达有关，NF-kB调控炎症过程中负责介质或蛋白质生成的基因。细胞质中的发现与调控蛋白我废话,以应对不同的刺激,如感染、缺氧氧化应激、细胞外信号,和炎症,调节蛋白我废话是由酶磷酸化的激酶b NF-kB调节炎性蛋白的激活TNF和il - 1 (60.］．这些变化在我们的结果中观察到，当组单独使用Paracetamol®时，肝组织中脂质和蛋白质的过氧化和蛋白质氧化标记物增加。脂质过氧化和蛋白质氧化是与形态功能性肝损伤发病机制相关的典型代谢过程[61.，62.］．虽然脂质过氧化也在生理条件下发生，但外部因素可能会放大这一过程，导致膜脂强烈氧化，最终细胞死亡[63.，64.］．通常，这些标记反映了由自由基释放引起的应力水平体内，因为氢过氧化物是在氧化性事件[从质膜的多不饱和脂肪酸的分解的主要产品之一58.，64.］．在目前的研究中，这些标记物在使用提取物后有所下降A. occidentale.和答:microcarpum，通过扑热酰胺诱导应力诱导，这表明在肝脏中毒过程中这些提取物的保护作用。Filho等人报道了类似的结果。[2一种使用在治疗小鼠的脑中与提取物的级分答:microcarpum吠。测试乙醇分数时在脂质过氧化反应中观察到显著减少。在另一方面，Broinizi等。[32.试验腰果梗(A. occidentale.）在Wistar大鼠的肝脏组织中，证明了治疗组中TBARS的脂质过氧化没有显着差异。这些发现表明，在所有比较研究中，必须谨慎地解释分析其他氧化/亚硝化标记的新研究，并且必须谨慎地解释本研究中的结果，并在所有比较研究中报告不同的措施．

在生物氧化过程中，猫和素SOD在保护肝脏对许多异种学的毒性作用中发挥着重要作用[65.，代表了细胞对抗活性氧的防御机制。在我们的研究中，我们观察到只接受提取物的组A. occidentale.以及接受了答:microcarpum与Paracetamol®相关的抗氧化酶SOD和CAT增加。这些发现表明，这些提取物就像一个抗氧化系统，保护肝组织免受活性氧(ROS)的伤害，从而减少氧化损伤。SOD和CAT是最先参与细胞抗氧化防御过程的酶，因此是细胞内抗氧化系统研究中极其重要的标记物[66.，67.］．在我们的研究中观察到另一个有趣的一点是，仅接受对乙酰氨基酚组介绍了这些抗氧化酶的数量的减少。类似我们的研究结果，研究表明，在激烈的组织氧化，抗氧化酶水平通常降低由于高生产水平和O积累₂Xenobiotics诱发醉酒组织中的酶消耗[65.，68.］．在分析谷胱甘肽S转移酶的情况下，用提取物接受治疗的小鼠答:microcarpum + Paracetamol® showed an increase in the activity of these enzymes when compared to the group that received only paracetamol.

这些发现表明了效果答:microcarpum在抗氧化系统的防御的第二线的产生。结果类似于那些在我们的研究中所描述被Ukwenya等人发现。[69.]谁分析了效果A. occidentale.在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH），GST和SOD活性上留下提取物，并证明这些提取物在刺激这些抗氧化酶的刺激中的有效抗氧化效果，以及抑制脂质过氧化的增加。

本研究中，与两种提取物组比较，对照组(G1)和扑热息痛组(G4)单核细胞和中性粒细胞数量增加，淋巴细胞减少。这是预期的结果，因为IL-10敲除动物自然存在更多的炎症细胞。另一个有趣的事实证明了这种敲除模型所呈现的炎症状态，即肝组织中的炎症浸润量也更高。进行白细胞的差异计数和识别主要的细胞类型可以帮助阐明病理过程，并识别被提出的提取物发挥保护作用的主要机制[35.］．另一方面，与接受与寄生虫Amol®相关的基团相比，仅接受帕拉基酰胺的动物也增加了这些细胞的水平A. occidentale.和答:microcarpum提取物。这些发现证明了Paracetamol®对肝组织的损伤能力，同时也证明了提取物对抑制炎症的显著保护作用。考虑到，一般来说，损伤机制会经历炎症过程的发展，在炎症过程中会释放能引起组织中重要的细胞和血管变化的介质[70，开发一种抑制或减少组织炎症的疗法是非常可取的。

组织病理学分析是一种可重复和可靠的方法，用于评估药物的肝保护作用，特别是在化合物的化学特性和剂量提供足够的毒性以诱导形态学组织紊乱的情况下[71.］．因此，为了检查小鼠中可能的肝细胞损伤，完成了组织病理学研究，补充了酶促和生物化学分析中获得的数据。在我们的研究中，在暴露于扑热息痛后观察到炎症渗透的增加，可能与敲除模型相关。此外，核体积，血管包血和胆汁淤积的增加，这些组接受寄生虫Amol®主要与接受与提取物相关的寄生虫酰胺®的群体相比。基于数据，据信，提取物具有高抗炎动力，可能是由于其富含多酚。已知富含这些化合物的提取物通过改善细胞迁移和组织氧合来降低静脉淤滞[72.- - - - - -74.］．类似的结果Wang等人获得。[75.]治疗后欧亚活血丹extract at the dose of 0.5 g/kg for 4 weeks demonstrated an effect in the reduction of cholestatic liver injury. The extract ofA. occidentale.和答:microcarpum在这个过程中显示出可能的减少，因为在治疗后，组织呈现出与正常组织非常相似的特征。以上结果表明，该提取物在试验剂量下无毒性作用，具有肝保护作用。

5。结论

本研究表明，来自叶子的提取物答:microcarpum和A. occidentale.施加对抗由Paracetamol®病变保肝作用，在IL-10敲除小鼠。结果表明，两种提取物都具有抗氧化活性的功能性食品，因为它们降低了生产的氧化标志物和增加了抗氧化剂酶。此外，有一个在炎性浸润和单核细胞的在正接受Paracetamol®之后与提取物处理的组的数目的减少。进一步的药理学评价仍然必须确定该提取物的活性成分，并充分阐明其作用机理，其可以与用于急性和慢性肝损伤的预防和治疗高电位相关联。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包括在稿件内。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

致谢

这项研究得到了“Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)”、“Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)”和“Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG)”的支持。作者感谢Bioclin Quibasa实验室提供的生物化学试剂盒。

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