的保护作用Zizyphus Lotus.L.（desf。）对CCL的果实_4.诱发大鼠急性肝损伤

摘要

在摩洛哥,”Zizyphus Lotus.是最广泛和最传统的用于治疗各种疾病的植物物种之一，包括肝脏疾病。本研究对水提物进行了评价Zizyphus Lotus.果实抗四氯化碳(CCL_4.-)诱导Wistar大鼠肝损伤。每天对动物进行水提取物处理Zizyphus Lotus.用200和400 mg/kg体重两种剂量，连续14天。创新领导力_4.腹腔注射(1ml /kg体重)2次，7^th和14^th天。治疗结束时处死大鼠，取血进行生化指标测定。同时测定体重和肝脏重量。注射CCl_4.对大鼠引起肝脏相对重量、血清碱性磷酸酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、直接胆红素、甘油三酯、极低密度脂蛋白、总胆固醇(轻微升高)、肌酐、尿素、尿酸、丙二醛等变化。相反，CCL的效果_4.导致血清高密度脂蛋白水平下降。然而，每天给药的水提取物Zizyphus Lotus.L. fruit的用法和样例_4.将这些生化参数的异常变化恢复到正常值。从本研究的结果来看，黄酮的水提物Zizyphus Lotus.枸杞子对CCL引起的肝损伤有一定的保护作用_4.在老鼠身上。

1.介绍

肝脏是人体最重要的重要器官之一;它负责一些基本的生理功能，如代谢、分泌和储存[1］．此外，肝脏在内源性和外源性物质如外源性物质、药物、病毒感染的解毒和排泄中起着至关重要的作用[1那2］．因此，这表明了肝脏的脆弱性，主要受到外源性化合物的毒性作用的威胁，导致肝脏功能不全。事实上，肝脏的改变被认为是致命疾病之一，每年有近2万例死亡和25万例新病例记录是由于肝脏疾病[3.］．此外，传统药物治疗肝衰竭可能对机体产生不良影响，特别是肝脏[4.］．因此，替代疗法仍然是一个必要的选择，特别是在发展中国家，如摩洛哥，那里的贫穷和卫生系统的不稳定占主导地位。此外，在这个国家，传统的植物疗法根深蒂固[5.］．在摩洛哥人用来治疗各种疾病的药用植物中，Zizyphus Lotus.L.（DESF）（ZLF）在摩洛哥众所周知的“萨德拉”，属于家庭鼠李科，广泛分布于干旱和半干旱地区[6.］．ZLF的一些部分传统上用于治疗几种疾病，如肝病、尿路感染、胃肠问题、失眠、皮肤感染、腹泻和糖尿病[7.那8.］．此外，这种植物以其安全性而闻名[9.］．这种物种的几种药理研究已经致力于治疗各种疾病，例如抗痉挛[10]，消炎的，止痛的[11], antiulcerogenic [12]，胃肠保护剂[13,抗糖尿病的14]和锂解效应[7.］．然而，该植物果实的保肝作用尚未被研究。因此，本论文试图评估ZLF提取物的肝保护作用。最后，我们通过腹腔注射四氯化碳(CCl)诱导大鼠肝损伤_4.），这是一种优异的肝毒性化合物，最常用于诱导实验性大鼠的肝脏毒性[5.］．事实上，这种化合物(CCl_4.)，无色无味，挥发性强，毒性强，通过细胞色素P450酶作用于肝脏，随后与氧反应形成反应性强的衍生物三氯甲基过氧自由基，诱导脂质过氧化，损伤肝细胞和细胞器膜，导致肝细胞肿胀和坏死，并导致细胞浆酶如天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)释放到血液循环中[15-17］．由于这些原因，CCl_4.已被广泛应用于动物模型中，用于研究化学毒素引起的肝损伤[18那19］．腹腔注射CCl_4.导致CCL的相互作用_3.具有结构或生物功能的重要细胞分子，如蛋白质、脂类和核酸，可引起肝损伤和肝功能受损[20.］．

本研究的目的是评价紫茎泽兰水提物对紫茎泽兰的肝保护作用_4.诱导大鼠急性肝毒性。

2.材料和方法

2．1.化合物

天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、胆红素直接和总、尿素、肌酐和尿酸(UA)试剂盒购自西班牙Biosystems。水飞蓟素，四氯化碳(CCl_4.)购自美国西格玛化学公司。本研究使用的其他试剂均为高质量、分析级试剂。

２.２.植物材料

该植物于2018年9月至10月期间从Oujda地区(摩洛哥)采集。植物物种ZLF的鉴定是由Mohammed V.大学科学研究所的植物学家Mohammed Fennane进行的。该标本以凭证编号HUMPOM428保存在Oujda的Mohammed I大学(摩洛哥)的植物标本室。

２.３.植物提取物的制备

ZLF是在粉末上接地和改造的。然后在2000 mL煮沸的蒸馏水中加入100 g ZLF粉，摇匀20分钟制备水提物。将混合物过滤，滤液蒸发以除去水分，得到粉状的提取物。

2.4。动物

选取体重180 ~ 270 g的Wistar大鼠30只(♂/♀= 1)和体重20 ~ 30 g的瑞士白化小鼠36只。在处理前15天，动物被饲养在塑料笼子里，可以自由获得食物和水，并适应标准的宠物店条件(23°C, 12 h黑暗/12 h明亮)。所有大鼠均按照美国国立卫生研究院(NIH)出版的国际公认的《实验室动物护理和使用指南》(National Institutes of Health, NIH)进行护理。85-23, 1985年修订)。

2．5．急性毒性研究

急性口服毒性研究是根据经济合作与发展组织指南(425)进行的[21］．在200 ~ 2000 mg/kg体重范围内给药未见毒性反应。选取上限剂量的1/10 ~ 1/5 (2000 mg/kg)作为检测水平，评价枳实水提物的保肝作用。

2.6。实验协议和程序

适应15天后，将大鼠分为5组( ;♂/♀= 1)[22]，处理方法如下:正常对照组只注射蒸馏水(10 mL/kg)，阴性对照组注射CCL_4.阳性组给予40 mg/kg的水飞蓟素治疗，两组分别给予200 mg/kg和400 mg/kg的ZLF水提取物。适用产品经口服14天。此外，除对照组外，所有治疗组之前均经CCl腹腔注射_4.溶于橄榄油(1/4;v/v)，剂量1 mL/kg，分2次^th和14^th天的治疗。测定治疗前后大鼠体重。

2.7。血液采样

最后一次CCl注射后12小时_4.注射后，所有大鼠吸入轻乙醚麻醉后处死。颈动脉采血，4℃，3000rpm离心10min，分离血浆。分离的血浆在−20°C下存储以供进一步评估。此外，称重并保存肝脏，用于制备肝脏匀浆(10% w/v)在磷酸钠缓冲液(pH 7.0)中，并在−20℃保存，以评估丙二醛(MDA)的水平。

2.8。血清生化指标测定

采用IFCC方法测定天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶[23］．采用磷酸对硝基苯法测定碱性磷酸酶[24]，甘油磷酸氧化酶法测定甘油三酯[25]，重氮盐法测定胆红素总量[26]，用超hdl法测定高密度脂蛋白，用酶解法测定总胆固醇[27]，重氮反应法直接测定胆红素[26，尿酸酶过氧化物酶法测定尿酸[28]，尿素酶- gldh法测定尿素[29]，动态碱性苦味酸法测定肌酐[30.］．对于每个参数，使用商业试剂盒重复三次。

根据[31的公式如下:

公式VLDL-c = TG/5 [32]用于推断极低密度脂蛋白水平。

2.9。丙二醛的测定

根据Buege和Aust的方法测定肝脏脂质过氧化[32］．该方法包括量化TBAR生产的水平。制备肝脏匀浆后，将0.5ml这种匀浆酸盐加入到0.5ml三氯乙酸（30％w / v）中，然后在4℃下进行离心10分钟（3500rpm）。然后，将离心后得到的1ml上清液用1ml硫氨基吡啶酸（0.67％w / v）均化，并在100℃下置于煮沸的水10分钟，然后浸入冰中以停止反应。将测试混合物的光学密度分光光度测量，在535nm的波长下测量。结果以37℃在37℃下在37℃下产生的MDA的摩尔数表示，使用以下摩尔消光系数：

2.10。统计分析

结果用平均值±SEM表示。采用GraphPad Prism 5软件进行方差分析(ANOVA)，计算阴性对照组与治疗组的统计学差异。差异被认为是显著的如果 那适度重要如果 那并且非常重要的话 ．

3.结果

3．1.急性毒性研究

在2000 mg/kg体重的剂量限制下，ZLF水提取物的使用并不代表动物的任何死亡或行为变化。选择1/10和1/5的剂量来评价水提物的肝保护作用。

３．２．枳实对小鼠相对肝重及体重增加的影响

各组动物的体重和相对肝脏重量如图所示1．相对于组（对照）的增加，观察到体重显着降低。然而，分别用200和400mg / kg ZLF治疗的基团显着减弱了肝毒性（ ）以逆转CCl的有害作用_4.注射，具有明显的剂量反应。400mg / kg ZLF提取物的给药导致对肝脏和身体的重量与西米林参考药物相当的保护作用。

３．３．ZLF对AST、ALT、ALP的影响

腹腔注射CCl致肝损伤后，ZLF水提物2个剂量(200和400 mg/kg)对血浆肝标志物(AST、ALT、ALP)的影响_4.如图所示2．注射CCl_4.对老鼠的刺激显著增加( ）血浆谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平与对照组比较然而，两种不同剂量(200和400 mg/kg)的ZLF水提取物与CCl相比，显示出显著的剂量相关的肝标志物(ALT、AST和ALP)的血浆水平下降_4.组。

ZLF水提物400mg /kg剂量对谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平的影响与水飞蓟素治疗具有生物等效性，水飞蓟素是一种常用的治疗肝纤维化的有效药物，被认为是这方面的标准治疗方法。

3．4．ZLF对血浆直接胆红素和总胆红素的影响

用ZLF水提取物处理后，研究组中所有动物中的直接和总胆红素的血浆水平均显示在图中3.．一个重要的( ）在暴露于CCl的大鼠中观察到直接胆红素和总胆红素水平的增加_4.与对照组相比。此外，这种增加表明CCL_4.导致肝脏排泄细胞的功能障碍。然而，用ZLF含水提取物在剂量200和400mg / kg诱导显着（ ）与CCl暴露组相比，血浆胆红素浓度(直接和总)呈剂量依赖性下降_4.．给药(400 mg/kg)的效果与水飞蓟素(40 mg/kg)相当。

3．5．ZLF对血浆总胆固醇和甘油三酯的影响

本研究通过检测血浆中总胆固醇和甘油三酯的浓度来评价ZLF水提物对肝脏代谢功能的影响(图)4.)．在本研究中，一个显著的( ）暴露于CCl的动物组甘油三酯水平升高_4，与对照组相比，但总胆固醇水平没有变化。然而，一个显著的( ）治疗组每日口服ZLF提取物后甘油三酯水平出现剂量依赖性逆转。此外，治疗组(400 mg/kg)和水飞蓟素治疗组(40 mg/kg)的甘油三酯降低效果相似。

3.6。LDL-c、vlldl -c和HDL-c

观察200和400 mg/kg的ZLF水提物对大鼠暴露于CCL后血浆脂蛋白水平的影响_4.（数字5.)．受CCL伤害的动物群_4.重要的( ）增加VLDL的数量，重要（ ）与组对照大鼠相比，观察到HDL水平的降低，并且没有改变LDL含量的变化。然而，通过剂量200和400ml / kg施用ZLF含水提取物略微校正HDL和VLDL水平的不平衡。剂量400ml / kg对VLDL量回收的功效与体米林的效果非常相似，并且在维持HD​​L水平方面几乎相当。

3.7。ZLF对血浆尿酸、尿素和肌酐的影响

通过测定血浆中肌酐、尿酸和尿素等肾功能生物标志物的水平来评价ZLF水提物的肾保护作用(图)6.)．腹腔注射CCl损伤组_4.显示肌酐显著增加( )，尿酸 （ )，和尿素（ ）血浆中的浓度。此外，水飞蓟素治疗组在40 mg/kg剂量下测量参数显著降低。然而，每日摄入200和400毫升/kg的ZLF水提取物可显著降低肌酐( ）（ ）和尿酸（（ ）（ ）），尿素水平略有降低。此外，ZLF水提物对CCl具有剂量依赖性的肾保护作用_4.- 诱导的肝脏毒性。

3.8。ZLF对MDA水平的影响

如图所示7.重要的( ）CCl中脂质过氧化的增加_4.与健康组比较，MDA水平较高。200和400 mg/kg的ZLF提取物的剂量显著( ）（ ）降低MDA水平。在400 mg/kg时，MDA水平的降低几乎与水飞蓟素的护理标准相同。

4.讨论

在目前的研究中，四氯化碳(CCl_4.)诱导大鼠肝毒性，评价其肝保护作用。创新领导力_4.出现在身体中作为异卵，并通过细胞色素p的作用₄₅₀加氧酶系统，肝脏将四氯化碳转化成两个自由基;三氯甲基过氧和三氯甲基[4.］．然而，这两种自由基是高度活性的，它们通过结合蛋白质或内质网的多不饱和脂肪酸作用于肝脏的微粒体膜[33那34］．此外，在氧存在下将这些自由基固定到不饱和脂质的情况下导致脂质过氧化[34］．后者导致肝脏酶促和代谢功能的恶化，如白蛋白的合成，并抑制糖和胆固醇在肝细胞中的储存[35］．众所周知，肝脏对CCl有预防作用_4.是基于刺激肝细胞的再生，还是基于保护肝脏免受CCl侵害的抗氧化剂系统_4.-在此过程中捕获自由基并氧化而引起的急性毒性[36］．为此，一些从植物中提取的具有强大抗氧化作用的化合物，如多酚、黄酮类化合物、香豆素和生物碱，被认为可以预防肝脏毒性[37-40］．

本实验通过观察紫苏叶水提物对腹腔注射紫苏叶所致大鼠肝毒性的保护作用，探讨紫苏叶水提物对大鼠肝毒性的影响_4.．CCL造成的肝损伤评估_4.是基于血浆标记酶(ALT、AST和ALP)、总胆固醇、甘油三酯、VLDL、LDL、HDL、MDA和胆红素(总和直接)水平的测量。除了肝脏指标外，我们还通过测定血浆尿素、尿酸和肌酐水平来评估肾脏排泄功能指标。CCl注入_4.与对照组相比，大鼠血浆ALT、AST、ALP、胆红素(总和直接)、尿素、尿酸、肌酐、甘油三酯、VLDL、LDL和MDA水平显著升高，HDL水平显著降低。两种剂量(200和400 mg/kg)给药后，与CCl相比，上述变化均出现逆转_4.组。这些结果表明，枳实水提物具有保护肝细胞免受CCl引起的肝脏生化指标异常变化的作用_4.腹腔内注射。结果表明，ZLF对CC1所致肝损伤有一定的保护作用_4.，可能是由于ZLF提取物的抗氧化活性。此外，一项研究证明ZLF的水性提取物富含多酚和黄酮类化合物[7.］．已知这些化合物具有抗氧化特性，可以捕获由CCl影响肝脏产生的自由基_4.[41］．由此可见，黄芪具有一定的肝保护作用，其作用机制是通过降低注射黄芪所致的自由基_4.．

5.结论

基于我们的研究结果，我们得出结论Zizyphus Lotus.枸杞子对CCl有较强的肝保护作用_4.诱导的大鼠肝损伤。因此，该研究提供了实验证据，并清楚地证明了传统主张及其在肝病治疗中的应用。基于安全、使用价值的传统医学ZLF和当前有前景的结果,我们假装在未来,这种植物的调查,一些研究旨在发现之间的生物等效性剂量400毫克/公斤ZLF 'extract和40毫克/公斤的水飞蓟素药物参考。

数据可用性

没有数据支持本研究。

的利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

发件人谨对Badraoui Mustapha和Ramdaoui Karim提供的技术援助表示感谢。

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