文摘

采用verniciflua斯托克一直在常用的传统医学治疗胃肠道(GI)功能障碍的疾病。为了研究药理性质采用verniciflua斯托克水提取物(RVX) cisplatin-induced失忆,RVX(0、25、50或100毫克/公斤)是口头管理后连续五天一个顺铂腹腔内注射SD大鼠(6毫克/公斤)。顺铂注射液显著增加高岭土摄入量(呕吐),但降低了正常的饮食摄入量(厌食症)而RVX治疗显著改善这些不正常的饮食行为在急性和延迟阶段。5 -羟色胺浓度和相关基因表达(5-HT3受体和泽特)在小肠组织被注射顺铂异常改变,RVX明显减毒的治疗。胃肠道的组织学研究,以及蛋白质水平的促炎细胞因子(TNF -α、il - 6和il - 1β),显示的有益作用RVX cisplatin-induced胃肠道炎症。此外,RVX显著提高cisplatin-induced myelosuppression,就是明证的白血球减少症和组织学检查观察骨髓。我们的研究结果共同表明采用verniciflua斯托克城改善大鼠的抗chemotherapy-related不利影响胃肠道的跟踪和骨髓。

1。介绍

最近的一项研究报道,超过1410万人每年新诊断为全球各种恶性肿瘤(1]。抗癌疗法的应用程序依赖于状态的临床进展,肿瘤的特点,和病人的条件(2]。关于治疗癌症患者,不同的医疗模式,包括手术、放疗、化疗、免疫治疗、开发(3,4]。尤其是对晚期癌症患者,化疗是首选在美国每年有超过800万名患者(5,6]。化疗,然而,不可避免地引发不同的副作用包括催吐的症状,白细胞减少,胃肠道毒性,脱发,和疲劳7]。一般来说,70 - 80%的患者接受化疗的抱怨主要催吐的症状,如呕吐和恶心8,9]。传统对呕吐剂包括5 -羟色胺3受体拮抗剂(5-HT3),神经激肽1受体拮抗剂(NK1),糖皮质激素,胃复安(10]。然而,这些药物只能有效急性呕吐或延迟呕吐(11),或者他们唤起其他副作用,包括失眠、便秘,腹泻,头痛12,13]。

另一方面,草本植物或其派生的天然化合物在抗癌药物的研究吸引了越来越多的关注尤其是antiadverse效果,如呕吐引起的胃炎肠功能紊乱。r . verniciflua斯托克城,叫做漆树,属于Anacardiaceae家庭,传统上被认为治疗消化问题[14]。根据中国传统医学文献,被称为Ben-cao-gang-mu(本草纲目)的药理功效r . verniciflua胃肠道问题都表示(15]。

一些动物研究报道r . verniciflua对炎症和一些代谢疾病[施加有益的影响16,17对药物毒性[]和保护效应18]。先前的研究表明r . verniciflua将是一个强有力的候选药物开发治疗化疗所致的副作用,特别是呕吐。

因此,本研究旨在调查的影响r . verniciflua水提取物(RVX)反对chemotherapy-related副作用,尤其是呕吐和胃肠道炎症使用老鼠注射顺铂的典范。

2。方法

2.1。指纹识别过程和测序分析

r . verniciflua从当地获得特定的农场吗r . verniciflua在Ok-Cheon (Chung-buk、韩国)。在获得r . verniciflua水提取物(RVX),最后一个收益率为0.70% (w / w),我们进行了指纹使用HPLC-DAD仪器(YL9100系列、韩国)中描述的补充信息网上(见补充材料https://doi.org/10.1155/2017/9830342)。

提取基因组DNA的叶子RVX使用DNeasy植物迷你包(试剂盒,瓦伦西亚、钙、美国)。内部转录间隔区(ITS)基因,包括5.8 s核糖体DNA聚合酶链反应(PCR)扩大了使用ITS1的引物(5′标签公司治理文化AGA ACG ACC公司治理文化创新艺人经纪公司有条件现金援助侠盗猎车手条t - 3′)和ITS2 (5′cac CTG ACC TGG GGT公司治理文化得到GCG-3′)。扩增片段进行的2 x SG Taq主混合(有限合伙人的解决方案,大田、韩国),和PCR条件得到使用IQ5 PCR热循环(Bio-Rad、大力神、钙、美国)在以下步骤:在95°C predenaturation 5分钟,35周期95°C / 30年代(变性),55°C / 40年代(退火),72°C / 1分钟(扩展),最后在72°C扩展了5分钟。PCR分析了产品1%琼脂糖凝胶和区分乐队使用QIAQuick凝胶萃取净化设备(试剂盒)。产品使用一个BigDye终结者v3.1周期序列测序工具包(美国应用生物系统公司,CA)与一个ABI3730XL(应用生物系统公司)自动测序仪。ClustalW对齐后的结果进行了分析和向量NTI推进软件使用BioEdit 7.0版本,版本11。

2.2。化工材料

本研究的试剂如下:顺铂(cis-diammineplatinum (II)二氯化),胃复安,原儿茶酸,fustin,非瑟酮,sulfuretin, butein从σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。阿拉伯树胶是购自Junsei化工有限公司有限公司(日本东京)。Calci-Clear快速购买国家诊断(亚特兰大,乔治亚州,美国)。橄榄油是购买直流化工有限公司有限公司(韩国首尔)。

2.3。高岭土的饮食准备

高岭土(H₂艾尔₂如果₂O₈·H₂根据先前的方法(O)准备19]。简而言之,pharmacological-grade高岭土(Samchun纯化工有限公司,有限公司,平泽市,韩国)和1%金合欢或阿拉伯树胶重蒸馏的水形成一个厚粘贴。粘贴卷,切成小颗粒。球在室温下是完全干了3 - 4天,在无菌条件下保存。

2.4。动物和实验设计

36特定无菌Sprague-Dawley雄性老鼠(6周大,160 - 180 g)买来Dae-Han生物链接(Chung-buk、韩国)。老鼠住在一个房间温度控制°C,在相对湿度55%±10% 12 h: 12 h光暗周期,他们自由美联储商业标准的食物(Dae-Han生物链接)和自来水随意提供7天。适应后,大鼠分别被安置在笼子里,熟悉测试程序。除了常规的鼠粮和自来水,高岭土的测定量(5克)颗粒在单独的容器提供了实验前3天让老鼠适应它的存在心理上的。经过3天的习惯化,动物受到异食癖实验。

适应大鼠被分成六组():正常对照组,三个RVX剂量治疗组(25、50、100),和一个25组。在0 h,正常组生理盐水,而所有的其他组织收到一个顺铂腹腔注射生理盐水(6毫克/公斤)。两个小时后注射顺铂,每组最初接受口服水(正常对照组),RVX(25、50或100毫克/公斤),或胃复安(25毫克/公斤),紧随其后的是同一个政府每隔24小时96 h。所有的组被允许自由进入高岭土饮食直到120 h。所有的老鼠监控正常和高岭土的饮食消费,每天和身体重量测定。在实验的最后一天,所有的老鼠都牺牲了集合的乙醚麻醉下经腹部静脉全血。

这种动物实验机构批准的大田大学动物保健和使用委员会(djuarb2015 - 041),并按照指南进行发表的实验动物保健和使用由美国国立卫生研究院(贝塞斯达,医学博士,美国)。

2.5。血液学和组织病理学

最后一天的实验中,血液参数测量使用丙烯酸-兽医850自动分析仪(疾控中心技术,美国)。白细胞(WBC)、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱细胞,嗜曙红细胞,红细胞(RBC)、血红蛋白和血小板计数测定。脾脏和胸腺被移除,测量他们的重量。胃组织,小肠(近端和远端)和结肠解剖,在冰冷的磷酸盐缓冲盐水洗,10%福尔马林固定为3天。石蜡包埋的样本切割(4μ米厚度)和幻灯片沾)或马森的三色的染色。骨髓与Calci-Clear快速脱钙(国家诊断),然后嵌入石蜡,切割在6μm,沾着他走时污渍。代表图像获得使用光学显微镜(徕卡微系统公司,位于德国)。积极染色细胞的百分比地区进行了分析使用图像J图像分析软件(Rasband,马里兰州贝塞斯达,美国),1.46版。

2.6。定量实时聚合酶链反应分析

小肠总RNA提取样品使用试剂盒试剂(分子研究中心,辛辛那提,哦,美国)。总RNA的互补脱氧核糖核酸合成(2μ在20 g)μL使用高容量cDNA逆转录反应工具包(Ambion、奥斯汀、TX,美国)。实时PCR进行使用SYBR绿色PCR反应混合液(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)和PCR扩增执行依照标准协议使用IQ5 PCR热循环(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。使用以下引物(5′3′,正向和反向):5-HT3A受体GGA CTC CTG gg TCG行动ACA和TTC CCC ACG ACA AAC TC移行细胞癌;泽特,CTG TTC ATC ATT TGC AGT TTT CTG和CTA TGC AGT AGC CCA AGA移行细胞癌;和β肌动蛋白,gg CCA ACC GTG AAA AGA TG和CCA TAC gg广汽AAC甘氨胆酸呕吐。

2.7。血清素和促炎细胞因子的测量

5 -羟色胺在小肠测量使用5 -羟色胺酶联免疫试剂盒(LDN Nordhorn,德国)和胃组织的促炎细胞因子水平进行了分析使用商业ELISA试剂盒(TNF -α从BD OptEIA、钙、美国;il - 6和il - 1β从研发系统、锰、美国)。

2.8。统计分析

结果表示为意味着±标准差(SD)。组间差异的统计意义分析了单向方差分析(方差分析),紧随其后的是费雪的最低位的区别(LSD)测试,或学生的以及。在所有的分析,的值被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。指纹RVX和验证的r . verniciflua

RVX的化学组成分析被执行HPLC-DAD分析评估使用四个参考组件:一个酚类化合物(原儿茶酸)和三个黄酮类化合物(fustin、非瑟酮和sulfuretin),分别为(图1(一))。fustin被量化为普遍的化合物(μg /毫克),其次是非瑟酮、原儿茶酸,分别和sulfuretin(图1 (b))。基因序列的its1 - 5.8 - s - its2地区完全一致r . verniciflua斯托克(AY510151.1基因库)(“漆树科vernicifluum5.8内部转录间隔区s核糖体RNA基因,和内部转录间隔区2,完整的序列,“(图2004)1 (c))。

3.2。高岭土的饮食摄入量的变化

注射顺铂(6毫克/公斤)大大增加高岭土饮食摄入2.6 - 3.3倍,24小时至120 h,与正常组相比。高岭土的饮食摄入量明显减少了RVX 25毫克/公斤(72 h和120 h,),RVX 50毫克/公斤(从48 h - 72 h,或),RVX 100毫克/公斤(从24小时到96小时,或,图2(一个))。胃复安抑制高岭土摄入量在很大程度上从72 h - 96 h。进行分析时总高岭土摄入量在0 - 120 h, cisplatin-induced增加高岭土总摄入量(3.0倍)明显减毒RVX治疗(50毫克/公斤;100毫克/公斤,人物2 (b))。

3.3。正常饮食摄入量和体重的变化

顺铂注射液显著降低正常饮食摄入0.5 - 0.7倍,24 - 120 h,与正常组相比,虽然政府明显减毒的RVX 50毫克/公斤(从48到96小时,)和RVX 100毫克/公斤(从24到96小时,或,图2 (c))。体重也显著减少了47.14 g,与正常组(120 h,)。治疗RVX(50和100毫克/公斤),然而,这个体重与对照组相比显著改善(图2 (c))。胃复安显示类似的效果RVX(50毫克/公斤)在正常饮食摄入和恢复体重。

3.4。组织病理学结果胃肠道损伤

苏木精和伊红染色(圆))显示,注射顺铂诱导严重的退行性变化,特别是在小肠和结肠,作为上皮结构和扩张的特点是破坏细胞间的空间。治疗RVX显著逆转这些病理改变,与对照组相比。在胃组织,没有明显损伤但密集蓝染色观察,表明胃首席迁移细胞的外层胃粘膜,只有控制和胃复安组而不是RVX-treated组(图3(一个))。马森的三色的染色证实胶原蛋白流失在小肠和结肠黏膜下地区的对照组,而RVX治疗明显降低这些胶原蛋白的损失(图3 (b))。

3.5。5 -羟色胺浓度和相关基因表达在小肠组织中

在小肠组织中5 -羟色胺的浓度升高了1.8倍的注射顺铂与正常组相比,虽然RVX治疗(特别是50毫克/公斤)与对照组相比显著减毒这(,图4(一))。顺铂注射液显著调节mRNA的表达5-HT3A受体(2.1倍),但下调羟色胺转运体(泽特0.5倍),与正常组相比,在小肠组织()。治疗显著RVX调制这些改变5-HT3A受体(50毫克/公斤,100毫克/公斤)和泽特(50毫克/公斤,100毫克/公斤)与对照组相比,分别(图4 (b))。胃复安显示类似的效果RVX(50毫克/公斤)5-HT3A受体的表达,但不是在5 -羟色胺浓度或泽特基因表达。

3.6。促炎细胞因子在胃组织的蛋白质含量

顺铂注射促炎细胞因子的蛋白质含量升高,包括TNF -α(1.5倍),il - 6(3.4倍)和il - 1β(3.4倍)在胃癌组织,与正常组相比。这些异常海拔RVX三个细胞因子显著减毒的治疗与对照组相比,图4 (c))。胃复安RVX治疗显示出类似的影响。

3.7。血液参数的变化

在实验的最后一天,对照组显示大约57%的正常组的白血球减少症;特别是,淋巴细胞数量减少正常组织的一半。这些变化是显著提高到接近正常组通过RVX治疗(特别是100毫克/公斤,、表1)。红细胞和血小板计数和血红蛋白浓度没有显著影响注射顺铂。适度提高淋巴细胞计数的胃复安集团。

3.8。组织病理学发现骨髓损害

)染色显示,注射顺铂明显受伤的骨髓组织,就是明证骨髓细胞和骨小梁稀疏,与正常组相比。这些变化(特别是骨髓空空间)与对照组相比明显减毒RVX治疗(或0.001,数据5(一个)和5 (b))。胃复安也改善了骨髓的病理改变与对照组相比。

3.9。脾脏和胸腺重量变化

注射顺铂大大降低胸腺的重量(0.5倍)、脾(0.6倍),与正常组相比,然而,治疗RVX(50和100毫克/公斤)显著减弱这些器官重量的变化(、0.01或0.001)与对照组相比(表1)。这种积极的发现是观察胃复安组,胸腺重量,但不是脾脏重量。

4所示。讨论

r . verniciflua传统上用于治疗“血瘀(瘀血)”与慢性疾病有关,包括疼痛、胃的问题,和癌症,据东方传统医学理论(14]。r . verniciflua是草药中描述公式提取中医文献的一部分(Ben-cao-gang-mu)改善胃炎肠障碍(15]。除此之外,r . verniciflua已被用来治疗消化问题通过添加在韩国传统医学(鸡汤20.,21]。关于化疗的副作用,特别是呕吐的药理机制r . verniciflua仍不清楚。在此,因此,我们评估了医药的影响r . verniciflua反对cisplatin-induced副作用,尤其是胃肠道失真。顺铂的抗癌药物platinum-containing类用于治疗各种类型的癌症,包括肉瘤、小细胞肺癌、淋巴瘤,卵巢癌,但它会带来很多副作用22,23]。低再现性经常在制药研究使用草药材料成为一个问题(24]。减少偏见的结果由于样品质量差,我们进行指纹分析和植物物种的基因序列苏醒,r . verniciflua。

正如预期的那样,一个注射顺铂明显增加了高岭土的饮食摄入量(呕吐)增加和减少了正常的饮食摄入量(增加厌食症)对照组。大约90%的患者接受顺铂遭受恶心和呕吐,厌食也常常伴随着呕吐在这些病人25]。本研究适应异食癖模型动物回应催吐剂刺激通过食用无营养的物质,如高岭土(26]。食物摄入的行为变化频繁被评估在动物不能呕吐27]。一般来说,化疗所致呕吐分为两个阶段:急性(24小时)和延迟(24 - 120 h),分别为(28],RVX呕吐的治疗改善阶段和厌食症。

5-HT3受体的激活与5 -羟色胺(5 -)在chemotherapy-induced-emesis中扮演着重要角色29日]。化疗可以从肠嗜铬细胞的诱导释放5 - (EC)细胞,因此在迷走神经刺激5-HT3受体的激活神经,导致呕吐反射(30.]。正如所料,RVX治疗显著提高cisplatin-induced upregulation 5-HT3受体基因表达的激活释放5 -肠。肠道5 -通过泽特,然后在胃肠道上皮细胞的代谢;因此,破坏上皮细胞可以损害5新陈代谢,导致长时间接触时间与5-HT3受体(5 -31日]。RVX治疗规范化的表达下调基因表达在小肠泽特顺铂注入。胃复安25毫克/公斤施加止吐剂效果只有在延迟阶段,它影响5-HT3受体的基因表达而不是泽特。

组织病理学结果显示严重的胃肠道损伤通过注射顺铂在我们的研究中,就是明证的损失绒毛细胞,上皮结构的破坏,大量减少胶原蛋白通过内容)染色以及三色的染色。这些改变更明显比胃小肠和结肠;然而,胃在蓝色显示,密集的原子核,据说因为胃迁移的主要细胞的外层胃粘膜。胃主要细胞染色嗜碱)染色后由于大部分细胞质内质网。这些细胞通常位于深处的粘膜层胃粘膜;胃首席然后进入外层细胞在炎症反应中的32]。这个改变是明显减毒与RVX治疗组,但不是胃复安治疗。与顺铂化疗治疗也是引发胃炎(而闻名33]。而促炎细胞因子,包括TNF -α、il - 6和il - 1β胃组织中,大幅提高,这些异常海拔这三种细胞因子被RVX治疗我们的结果明显改善。

另一方面,骨髓是化疗中最脆弱的器官之一。Myelosuppression会增加感染的风险,疲劳,降低患者生活质量(QoL);因此,它是一个主要dose-limiting因素化疗的临床使用34]。此外,myelosuppression,例如,白血球减少症,主要是延迟的原因,减少或停止化疗治疗,发生在大约15%的总病例化疗(35]。我们之前的研究报道,最严重的白血球减少症观察单一注射顺铂在5天后大鼠模型(36]。正如我们所料,明显的骨髓抑制和白血球减少症观察顺铂注入5天后,这些病理条件提供了极大的保留RVX治疗,特别是在最高剂量100毫克/公斤。除了骨髓、脾脏和胸腺是免疫器官,代表和损失在实验模型的权重注射顺铂被广泛报道的37),显著减毒RVX治疗在我们当前的研究。这些研究结果预期RVX可能潜在的用于预防化疗引起的免疫抑制。当前依照先前的研究结果,这旅游房车显著改善cisplatin-induced负面影响肝脏和肾脏功能在结肠癌细胞(CT-26细胞株)注射肿瘤模型(38]。

综上所述,当前的研究报告首次全面的影响r . verniciflua化疗的副作用,主要专注于呕吐和免疫抑制。此外,调制5-HT3受体的建议是一个潜在的止吐剂影响的机制r . verniciflua。

相互竞争的利益

作者声明没有竞争的经济利益。

作者的贡献

Hyo-Seon金和金Hyeong-Geug主要写手稿文本并进行了实验。Sung-Bae李,李Jin-Seok进行基因测序分析r . verniciflua(图1 (c))。Hye-Won Lee Sam-Keun Lee Chang Kyu Byun指纹分析的数据分析1(一)和1 (b)(高效液相色谱法分析)。Won-Yong金姆准备r . verniciflua提取和行为测试报道高岭土饮食和正常的饮食摄入。Hwi-Jin Im支持组织病理学结果等),马森的三色的染色。Chang-Gue儿子监督手稿和导演最终版本的所有内容。所有这些手稿的作者进行审核和批准。Hyo-Seon金和金Hyeong-Geug同样促成了当前的研究。

确认

这项研究受到了“领导人工业大学合作”项目的教育部、科学技术和格兰特的韩国传统医学研发项目,卫生和福利部,大韩民国(hi12c - 1920 - 010014和hi15c - 0112 - 000015)。

补充材料