左晋Wan公式通过Cofilin-1有顺铂耐药性胃癌细胞的细胞凋亡的线粒体

文摘

尽管顺铂(DDP)的地位作为一个经典的化学治疗剂治疗癌症、多药耐药性的发展通常会导致DDP治疗的失败。这里我们发现磷酸化cofilin-1 (p-cofilin-1)过表达在DDP-resistant人类胃癌细胞株SGC7901 / DDP和BGC823 / DDP,相对于各自的父母细胞株(SGC7901和BGC823),而顺铂诱导的去磷酸化两父p-cofilin-1线而不是DDP-resistant线。然而,我们注意到,中国传统医学公式左晋Wan (ZJW)可以诱导p-cofilin-1脱磷酸作用,促进cofilin-1易位从细胞质中线粒体SGC7901 / DDP和BGC823 / DDP细胞。这线粒体易位cofilin-1发现诱导转换globular-actin丝状肌动蛋白,激活线粒体损伤和钙超载和诱导线粒体凋亡通路。我们进一步观察到这些影响ZJW DDP-resistant人类胃癌细胞系可以逆转通过转染cofilin-1-specific siRNA,或治疗PP1和PP2A抑制剂。这些结果表明,ZJW DDP-resistant患者是一种有效的药物治疗胃癌。

1。介绍

胃癌是全球最为常见的一种癌症第四;大约989600新的胃癌病例和738000胃癌症相关的死亡在2008年估计全世界(1]。手术切除是目前治疗胃癌的首选;化疗、放疗和基因疗法被认为是主要的辅助治疗方法。疗效率50%已报告的化疗药物,如顺铂(DDP),广泛应用于临床设置(2,3]。尽管化疗是主要方法用于治疗胃癌,耐多药耐药性(MDR)的发展通常会导致化疗的失败。因此,研究MDR机制,探索影响MDR-reversing药物克服癌症化疗的瓶颈是必要的。

最近的研究表明,磷酸化cofilin-1 (p-cofilin-1)和cofilin-1 MDR的癌症中发挥了重要作用。一项研究发现,p-cofilin-1 high-expressed在taxol-resistant细胞和chemoresistant主要人类卵巢癌组织(4]。在另一项研究中,p-cofilin-1还显示高表达水平在人类骨肉瘤细胞系vincristine-resistant MG63 / VCR,由过度调节LIMK1 [5]。cofilin-1显示较高的表达水平在DDP-resistant非小细胞肺癌(NSCLC)细胞ICR-A549 [6]。Cofilin-1属于actin-binding蛋白家族的成员,调节肌动蛋白解聚。cofilin-1的主要功能是分解和海拔的肌动蛋白微丝骨架的肌动蛋白解聚,肌动蛋白细胞骨架重塑的影响。此外,cofilin-1可以诱导丝状肌动蛋白(f -肌动蛋白)的变换globular-actin (G-actin),激活线粒体损伤和钙超载和诱导线粒体凋亡通路。值得注意的是,p-cofilin-1必须脱去磷酸参与肌动蛋白解聚和易位到线粒体(7,8]。

近年来,中国传统医学(中医)作为辅助化疗的癌症药物在中国被广泛用于癌症治疗。中药功能加强化疗的效果,减少毒副作用,逆转肿瘤的耐药性。左晋Wan (ZJW),中药配方,显示更好的辅助治疗肿瘤的治疗效果9- - - - - -12]。此外,ZJW也逆转耐药的影响在胃癌和结直肠癌细胞(13- - - - - -15]。通过药效学实验,ZJW逆转耐药的影响胃癌被证明,但其确切机制仍不清楚。

在目前的研究中,我们发现了一个新颖的分子机制,ZJW抑制DDP-resistance通过诱导线粒体cofilin-1易位。

2。材料和方法

2.1。细胞系和文化

BGC823和人类胃癌细胞SGC7901细胞从上海购买集合(上海,中国)。在RPMI 1640培养基培养细胞(Gibco实验室、美国)补充10% (v / v)胎牛血清(Gibco实验室、美国),100年μg / mL链霉素和100 U /毫升青霉素在37°C和5%的公司₂。DDP购买从σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。

DDP-resistant SGC7901 / DDP和BGC823 / DDP细胞诱导BGC823和SGC7901细胞,分别使用浓度梯度方法增加最大抑制浓度(IC的一半₅₀DDP)。起初,SGC7901和BGC823细胞治疗与培养基含有0.05μg / mL DDP 24 h。然后,包含DDP的培养基是代替新鲜培养基。当细胞密度达到80%,细胞消化和通道。细胞治疗0.05μg / mL DDP一次又一次,直到细胞可以稳定段DDP浓度。随后,细胞治疗DDP浓度较高的反过来,直到最终DDP浓度达到1μ克/毫升。细胞培养在培养基含有1μg / mL DDP耐药性维持。每次实验前,DDP-resistant胃细胞系都无毒RPMI 1640培养基培养2周。

2.2。ZJW提取物的制备

ZJW公式组成的两个中药黄连和吴萸6:1比(w: w)。黄连和吴萸从普陀医院中药房,上海中医药大学(上海,中国)。ZJW提取准备如前所述[13- - - - - -15]。ZJW提取通过两个小时在乙醇回流过程(1:8 v: v)。提取的混合物随后被过滤、浓缩和vacuum-dried 60°C。ZJW提取物的制备是标准化和质量控制按照中国国家食品药品监督管理局的指导方针。

2.3。抗体

Anti-cofilin-1 (# 5175), anti-p-cofilin-1 (# 3313), anti-GAPDH(# 2118),反β肌动蛋白(8456),anti-cleaved caspase-9 (# 7237), anti-cleaved caspase-3 (# 9664) anti-cytochrome c (# 11940), anti-PARP (# 9532), anti-cox IV(# 11967),辣根过氧化物酶,(合)共轭anti-rabbit(7075),和anti-mouse二级抗体(7076)从细胞信号技术,Inc .(丹弗斯、马、美国)。Anti-slingshot同族体1 (ab76943) anti-gamma肌动蛋白(ab194952)和anti-F-actin抗体(ab205)获得Abcam(美国Cambridge, MA)。anti-PP1 (E-9)抗体(sc - 7482)是来自圣克鲁斯生物技术(美国达拉斯,TX)。

2.4。击倒的Cofilin-1基因

三个siRNAs,具体为人类cofilin-1基因(基因ID: 49472823),被Biomics合成生物技术(南通,中国)。三核和控制序列如下:序列1:5′-GAGUGAGGACAAGAAGAACAU-3′;序列2:5′-CGCCACCTTTGTCAAGATGCT-3′;序列3:5′-GAUUUAUGCCAGCUCCAAGGA-3′;控制序列:5′-UAAGGCUAUGAAGAGAUAC-3′。可拆卸的实验,5×10⁵每口井的细胞被镀,six-well板。24小时后,与上述核细胞转染50 nM使用Lipofectamine 3000的浓度(美国生活技术,卡尔斯巴德,CA) 48 h。

2.5。实时定量PCR试验

细胞总RNA分离使用+ RNAiso(豆类生物、志贺、日本);随后,PrimeScript RT试剂盒(豆类Bio)被用来合成互补。实时定量PCR (Q-RTPCR)检测cofilin-1基因表达进行根据唐et al。8]。以下cofilin-1引物序列使用:向前,5′-AAGGCGGTGCTCTTCTGC-3′;相反,5′-TTGACAAAGGTGGCGTAG-3′;TaqMan探针5′-FAM-CATCCTGGAGGAGGGCAAGGAGAT-TAMRA-3′。以下GAPDH引物序列被用作控制:向前,5′-GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3′;相反,5′-CCAAATTCGTTGTCATACCAGGAAATG-3′;TaqMan探针5′-FAM-CGACACCCACTCCTCCACCTTTGACGC-TAMRA-3′。这些引物和探针从Sangon购买生物技术(上海,中国)。

2.6。细胞凋亡率测定

细胞凋亡率决定使用一个膜联蛋白V-FITC / propidium碘(PI)细胞凋亡检测设备(美国BD生物科学,圣何塞,CA)。细胞被trypsinisation收获,用冷洗两次磷酸盐血清(PBS)和孵化膜联蛋白V-FITC,紧随其后的是π。流仪分析FACSCalibur系统(美国新泽西州,正欲富兰克林湖)。

2.7。免疫荧光分析

HCT116细胞被播种在封面的过失预镀0.01% poly-lysine 5000细胞的密度在24-well室。ZJW治疗后,细胞治疗在下列顺序:4%多聚甲醛20分钟,0.1% Triton x - 100 10分钟,5%牛血清白蛋白(BSA) 60分钟,和初级抗体在一夜之间在4°C。随后,这些细胞被洗了三次用PBS和孵化Alexa萤石488 -共轭anti-mouse IgG抗体或Alexa萤石555 -共轭anti-rabbit IgG抗体(生命技术)1 h与荧光显微镜观察之前(徕卡,位于德国)。

2.8。细胞生存能力分析

细胞被镀在10%的边后卫RPMI 1640中5000个细胞的密度/好吧,在一个96孔板。细胞生存能力分析了用细胞计数Kit-8 (CCK-8 Dojindo实验室、熊本、日本),根据制造商的协议。吸光度的井在450 nm读者阅读使用板(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。分析了每个样本一式六份,实验重复三次。

2.9。线粒体膜电位测定和细胞内钙测定

线粒体膜电位()分析了使用JC-1 (Beyotime、海门、中国)在两个流仪和细胞荧光检测。JC-1,荧光探针检测线粒体膜电位,形成一个红色荧光聚合物在线粒体基质中积累的条件下高膜电位;在一个较低的膜电位,JC-1存在绿色荧光单体。因此,线粒体膜电位是衡量的程度改变红/绿荧光比率。细胞内钙离子浓度的测量使用Fluo-3化验(Beyotime、海门、中国)。在这个试验,使用绿色荧光的强度来确定细胞内钙的相对浓度。细胞内钙离子浓度的增加被认为是线粒体膜电位的结果损害和proapoptosis标记。流仪和细胞荧光化验也被用来测量细胞内钙离子浓度。

2.10。分析Caspase-3和Caspase-9蛋白酶活性

Caspase-3蛋白酶活性测定使用Caspase-3活动分析工具包(Beyotime、海门、中国),根据制造商的指示。同样,Caspase-9活动分析工具被用来检测Caspase-9蛋白酶活性。工具用于生成一个标准曲线的caspase-3 / caspase-9蛋白酶活动每个样本的计算,之后相对折叠活动计算使用控制价值的变化。

2.11。西方墨点法和Coimmunoprecipitation (co-IP)测定

细胞总蛋白提取和细胞质和线粒体蛋白质分数使用细胞裂解缓冲对西方,IP、线粒体和细胞隔离设备,分别(Beyotime、海门、中国)。分离后用钠十二烷基硫酸盐(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜,阻止了5% BSA和孵化主要抗体和相应HRP-conjugated序列的二次抗体。贴上膜呈现使用一个增强化学发光免疫印迹检测系统(美国微孔,Billerica的)。GAPDH和第四考克斯被用作总加载控制/细胞质和线粒体蛋白质,分别。一个Dynabeads®Coimmunoprecipitation工具包(美国皮尔斯生物技术,罗克福德,IL)是用于co-IP分析。总细胞,细胞质和线粒体蛋白质被孵化anti-cofilin-1抗体和正常小鼠免疫球蛋白在一夜之间在4°C。随后,co-IP样品受到西方墨点法如上所述,使用适当的抗体。

2.12。G / f -肌动蛋白比率分析

细胞G / f -肌动蛋白比率分析是引用先前描述(16,17]。简单地说,在冰冷的PBS细胞被洗,然后悬浮在裂解缓冲(50 mm玫瑰,pH值6.4,1毫米MgCl₂,10毫米EDTA, 1% Triton x - 100) 5分钟和30分钟的离心18000×g分离出上层清液(含G-actin)。剩下的颗粒含f -肌动蛋白是水洗的PBS和resuspended在同等体积下裂解缓冲激烈的搅动。G-actin蛋白从上层清液和f -肌动蛋白的蛋白质颗粒被免疫印迹检查。量化了G-actin比f -肌动蛋白的蛋白质表达水平。

2.13。统计分析

使用SPSS 13.0软件包(SPSS, Inc .)、芝加哥,美国),数据受到单因素方差分析和学生的以及。结果表现为手段(±SDs)。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。ZJW DDP-Resistant胃癌细胞对顺铂的敏感性增加

我们建立了DDP-resistant细胞株BGC823 / DDP和SGC7901 / DDP的慢性接触DDP-sensitive父胃癌细胞株BGC823和SGC7901低剂量顺铂。CCK8细胞生存能力分析被用来检测对BGC823 DDP的抑制性影响,BGC823 / DDP,胃癌细胞SGC7901和SGC7901 /顺铂48 h。如数据所示1(一)和1 (b)对BGC823 DDP的抑制有显著降低作用/ DDP (IC₅₀= 10.26μg / mL)和SGC7901 / DDP (IC₅₀= 7.84μg / mL),相对于各自DDP-sensitive父细胞系(BGC823 IC₅₀= 0.89μg / mL;国网公司- 7901集成电路₅₀= 0.93μg / mL)。

先前的研究已经报道,ZJW可以逆转多药耐药性的影响13- - - - - -15]。在目前的研究中,我们还观察到的能力ZJW反向DDP耐药性BGC823 / DDP和SGC7901 / DDP细胞与不同浓度的ZJW治疗后48 h。对BGC823 / DDP细胞,IC₅₀DDP的从10.26下降到3.54μg / mL ZJW治疗后;同样,集成电路₅₀DDP SGC7901 / DDP细胞从7.84下降到2.92μ克/毫升。这些结果表明,ZJW可以增强的敏感性BGC823 / DDP和SGC7901 / DDP细胞对顺铂(数字1 (c)和1 (d))。

3.2。ZJW对线粒体信号通路的影响

鉴于逆转耐药的作用,我们提出ZJW可以诱导线粒体在DDP-resistant胃癌细胞凋亡。免疫印迹结果图2(一个),ZJW诱导caspase-9 caspase-3激活时间和剂量依赖性的方式和PARP退化SGC7901 / DDP细胞。这些活动都伴随着增加细胞凋亡的启动子伯灵顿,bcl - 2细胞凋亡抑制剂减少,线粒体细胞色素C的释放到细胞质中。

我们还研究了两个关键的活动蛋白酶caspase-3和caspase-9线粒体凋亡信号通路通过使用caspase-3活动分析工具。如图2 (b)、caspase-9 ZJW诱导激活和以时间和剂量依赖性的方式caspase-3 SGC7901 / DDP细胞。这些结果说明ZJW可以触发线粒体在DDP-resistant胃癌细胞凋亡。

3.3。ZJW诱发SGC7901 / DDP细胞线粒体损伤

线粒体损伤代表线粒体凋亡通路的早期阶段,特点是变化的和胞质钙离子浓度。因此,我们发现了和胞质钙离子浓度的SGC7901 / DDP细胞用流式细胞仪和免疫荧光,分别。使用JC-1,我们观察到增加FLH1绿色荧光密度(JC-1单体)和减少FLH2红色荧光密度(JC-1聚合物),表明相对减少(MeanFLH2 / MeanFLH1数字3(一个)和3 (b))。使用Fluo-3试剂,我们观察到的增加FLH1绿色荧光密度(钙离子浓度)(数据3 (c)和3 (d))。这些结果表明,ZJW SGC7901细胞诱导线粒体损伤。

3.4。ZJW诱发p-Cofilin-1的去磷酸化DDP-Resistant胃癌细胞系

鉴于p-cofilin-1和cofilin-1耐药性的作用的癌症7,8,18,19),我们发现p-cofilin-1 cofilin-1蛋白质表达水平的四个胃癌细胞系。如图4(一),DDP-resistant细胞株BGC823 / DDP和SGC7901 / DDP表现出明显高于p-cofilin-1表达水平,相对于相应DDP-sensitive父细胞系。

与DDP治疗后24 h,的表达p-cofilin-1 BGC823和SGC7901细胞明显减少,表明DDP可能诱发p-cofilin-1脱磷酸作用和cofilin-1激活DDP-sensitive胃癌细胞系(数字4 (b)和4 (c))。相比之下,水平的p-cofilin-1 DDP-resistant细胞系SGC7901 / DDP和BGC823 / DDP没有明显变化,表明治疗DDP浓度较低不能诱导p-cofilin-1的去磷酸化。这些结果表明,p-cofilin-1 DDP-resistance在胃癌细胞中起着重要的作用。

接下来,我们使用西方墨点法评估p-cofilin-1蛋白的表达BGC823 / DDP和SGC7901 / DDP细胞治疗DDP和ZJW。值得注意的是,p-cofilin-1表达显著减少治疗的联合DDP和ZJW之后,虽然总cofilin-1表达水平没有明显改变。这些结果表明,ZJW的能力的诱导去磷酸化调节DDP耐药性与p-cofilin-1(图4 (d))。

3.5。易位的Cofilin-1线粒体和肌动蛋白是引起ZJW SGC7901 / DDP细胞

先前的研究表明,p-cofilin-1和退化的去磷酸化G-actin f -肌动蛋白,其次是肌动蛋白的易位cofilin-1线粒体,线粒体凋亡信号通路中重要的启动因素(7,19]。因此,我们首先检查p-cofilin-1, cofilin-1,肌动蛋白蛋白质水平ZJW-treated SGC7901 / DDP细胞。如图5(一个)p-cofilin-1 ZJW治疗后下降的表达;此外,该表达式模式cofilin-1从细胞质中转移到线粒体。同样,γ肌动蛋白的表达模式(而不是G-actin)也从细胞质中转移到线粒体。co-IP化验,anti-cofilin-1抗体,证明增加与cofilin-1相关的肌动蛋白在细胞质中线粒体和相应减少后ZJW治疗(图5 (b))。

免疫荧光分析表明ZJW诱导退化的f -肌动蛋白和易位在线粒体和肌动蛋白的聚合和cofilin-1(数字5 (c)和5 (d))。这些发现表明,ZJW脱去磷酸p-cofilin-1,导致G-actin f -肌动蛋白的降解,易位的肌动蛋白和cofilin-1线粒体,线粒体凋亡的起始。

3.6。沉默ZJW-Mediated Cofilin-1能保护细胞的凋亡

的能力验证的作用cofilin-1 ZJW调节DDP耐药性在胃癌细胞系,我们利用RNA干扰减少cofilin-1 SGC7901 / DDP细胞的表达,随后观察ZJW的影响。我们使用的评估cofilin-1蛋白质和mRNA的表达蛋白免疫印迹和Q-RTPCR,分别转染72 h后三个cofilin-1 siRNA结构。结果(数据6(一)和6 (b))表明,所有三个核结构施加良好的抑制影响cofilin-1蛋白质和mRNA的表达。

流式细胞仪是用来评估细胞凋亡在SGC7901 / DDP细胞处理后不同浓度ZJW cofilin-1击倒(图6 (c))。没有观察到明显的细胞凋亡在cofilin-1 siRNA-treated或控制siRNA-treated SGC7901 / DDP没有ZJW治疗。ZJW诱导细胞凋亡cofilin-1 siRNA -和控制siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞剂量依赖性的方式。然而,细胞凋亡率明显高于SGC7901 / DDP细胞治疗控制核与cofilin-1 siRNA处理相比,表明的重要性cofilin-1 ZJW-induced细胞凋亡的过程中。

CCK8试验是用来探测的可行性cofilin-1 siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞与ZJW治疗后。如图6 (d),ZJW明显更强的抑制作用控制siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞(IC₅₀= 134.37μg / mL)比cofilin-1 siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞(IC₅₀= 287.43μg / mL),表明的重要性cofilin-1 ZJW诱导细胞凋亡的能力和规范DDP耐药性。

f -肌动蛋白的表达水平和模式的变化,G-actin, cofilin-1 ZJW治疗后被发现在cofilin-1 siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞使用免疫荧光。如图6 (e),为了应对ZJW治疗,控制siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞表现出线粒体易位,cofilin-1 G-actin,积累和低水平的f -肌动蛋白,而cofilin-1 siRNA-treated SGC7901 / DDP细胞表现出减少的表达cofilin-1 G-actin和f -肌动蛋白水平增加。

3.7。ZJW诱发的去磷酸化p-Cofilin-1 PP1和PP2A

表达式的磷酸酶PP1 PP2A和弹弓(SSH),它参与细胞内磷酸化反应,评估在ZJW-treated SGC7901 / DDP细胞使用西方墨点法。我们观察到的表达增加PP1 PP2A和这些细胞,而SSH的表达没有明显改变(图7(一))。

来验证是否激活PP2A和PP1 p-cofilin-1 ZJW-induced去磷酸化的一个关键步骤,PP1和PP2A抑制剂calyculin被用来抑制这些磷酸酯酶的活动。一co-IP测定anti-cofilin-1抗体展示了强烈的calyculin磷酸酶的抑制能力;特别是calyculin治疗逆转增加PP1 PP2A和减少p-cofilin-1表达式由ZJW(图7 (b))。

SGC7901 / DDP细胞接受ZJW和calyculin受到凋亡评估。ZJW或calyculin就可以诱导细胞凋亡(图7 (c))。然而,ZJW和calyculin产生了一个观察到的细胞凋亡率显著低于ZJW(图7 (d))。这些结果表明,calyculin凋亡诱导效应的抑制ZJW SGC7901 / DDP细胞。最后,发现了与线粒体凋亡相关的蛋白质。如图7 (e)calyculin抑制PARP的激活,caspase-3, caspase-9和细胞色素c的释放这些结果表明,激活PP2A和PP1扮演着一个重要的角色在p-cofilin-1 ZJW-mediated去磷酸化。

4所示。讨论

在这项研究中,我们发现了一个更高的表达p-cofilin-1 DDP-resistant细胞系,在一个较低的DDP浓度不能诱导p-cofilin-1的去磷酸化。此外,我们进一步确定ZJW可以诱导BGC823 p-cofilin-1和增强顺铂敏感性的脱磷酸化/ DDP和SGC7901 / DDP细胞,通过线粒体信号通路诱导细胞凋亡,ZJW促进p-cofilin-1体外的脱磷酸作用是通过激活PP1 PP2A。这些结果提供了进一步的证据,ZJW DDP-resistant胃癌细胞诱导细胞凋亡。

DDP,常用于治疗胃癌的化疗药物(20.- - - - - -22)行为诱导线粒体凋亡的肿瘤细胞;然而,耐药胃癌细胞对这个代理不敏感,因此,相当大的注意力都放在这个问题(23,24]。研究表明,中医结合化疗的癌症可以提高疗效和减少化疗引起的副作用和并发症。黄连的粉末黄连法语,这属于毛茛科家族是一种多年生草本植物,主要生长在中国。黄连含有多种生物碱、小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱,和非洲防己碱可以治愈急性结膜炎、急性菌痢、急性肠胃炎、吐血、疖和其他疾病。黄连及其主要生物碱化合物小檗碱逆转耐药性已报告在癌症25- - - - - -27]。吴萸是芸香科;它的果实是ZJW的草。从吴萸Evodiamine,一种生物碱提取,据报道诱导细胞凋亡和抑制肿瘤增殖28- - - - - -30.]。虽然产生的抗癌活性黄连和吴萸及其生物碱单独使用已经证实,公式ZJW显示更好的效果(12]。因此,我们决定的影响ZJW DDP-resistant胃癌细胞的耐药性。结果也验证了影响ZJW逆转耐药性的DDP-resistant胃癌细胞。

最近的研究表明,高表达水平的cofilin-1在许多癌症与入侵和转移,化疗抵抗,和不良预后4,6,31日- - - - - -33]。哺乳动物cofilin-encoding基因编码两个actin-binding蛋白质家族成员:cofilin-1,各nonmuscle组织表示,cofilin-2,主要在肌肉组织中表达34]。cofilin-1的主要功能是肌动蛋白微丝骨架分解;这将导致增加肌动蛋白单体,这依赖于末端的离解率,肌动蛋白微丝骨架的肌动蛋白微丝骨架,促进循环,从而影响和调节细胞骨架肌动蛋白细胞骨架重组改造。这个过程的重要性,强调了肌动蛋白丝的参与细胞骨架在许多重要的生理过程,如细胞生长、分化、转移、膜重组,和细胞动力学(35]。Cofilin-1蛋白质存在于两种状态,激活(Cofilin-1)和灭活(p-cofilin-1),和这些国家细胞扮演着不同的角色36]。p-cofilin-1的脱磷酸作用可以诱导退化f -肌动蛋白G-actin促进肌动蛋白的易位和cofilin-1线粒体复合物,引起线粒体凋亡[7,8]。磷酸脂酶、PP1 PP2A和SSH,可以激活cofilin-1,允许cofilin-1 f -肌动蛋白结合,促进微丝解聚。先前的研究表明,cofilin-1或p-cofilin-1模式的变化发挥了重要作用在肿瘤细胞的多药耐药性(4,5,33]。在这项研究中,高表达的p-cofilin-1 DDP-resistant胃细胞中被发现。在同一浓度、DDP DDP-sensitive胃癌细胞可以诱导p-cofilin-1去磷酸化而不是DDP-resistant胃癌细胞。结果表明p-cofilin-1作为一个有效的治疗胃癌的目标。因此我们的研究结果验证的能力ZJW诱导激活PP1 PP2A,进一步促进p-cofilin-1脱磷酸作用。当然,退化G-actin f -肌动蛋白,肌动蛋白的易位和cofilin-1线粒体复合体,和观察线粒体凋亡DDP-resistant胃癌细胞。

5。结论

按照我们之前的研究,我们得出结论,ZJW可以作为抑制剂的药物抗性在胃癌,这可能部分是由于脱磷酸作用通过激活PP1和PP2A p-cofilin-1。我们相信,我们的研究从而演示了一个自然派生耐药性抑制剂在人类癌症。此外,这种草药的结合可能产生更好的结果比现代医学在癌症治疗中。ZJW-based治疗应该探索作为人类耐药肿瘤潜在的治疗策略。当然,p-cofilin-1高表达的原因和机制激活PP1和ZJW PP2A DDP-resistant胃细胞值得进一步调查。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

Qing-Feng Tang和剑的太阳同样这项工作。

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金(没有。81473481),构造程序的国家中医药管理局重点学科的中华人民共和国,和上海市科学基金会卫生和计划生育委员会(没有。20124065)。

引用

1. a . Jemal f·布雷,m . m .中心,j . Ferlay e·沃德·d·福尔曼,“全球癌症统计数据,”CA-A癌症期刊对临床医师,卷61,不。2、69 - 90年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. x Paoletti, k . Oba t Burzykowski et al .,“可切除的胃癌的辅助化疗中受益:一个荟萃分析,“《美国医学协会杂志》上,卷303,不。17日,第1737 - 1729页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. w·a·d·瓦格纳Grothe, j .一颗心去坐落,克雷贝尔g . a . Grothey和w·e·Fleig“化疗在晚期胃癌:系统回顾和荟萃分析基于聚合数据,”临床肿瘤学杂志,24卷,不。18日,第2909 - 2903页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. j . m . Li阴:毛,l .锅”Upregulation磷酸化cofilin 1与人类卵巢癌紫杉醇耐药在体外和体内,”肿瘤的报道卷,29号1,58 - 66、2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. f . y . h . Zhang Wang邢et al .,“过度的LIMK1促进耐多药骨肉瘤细胞的迁移能力,”肿瘤研究,19卷,不。年级,501 - 509年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m·贝克·m·a . De Bastiani c·b·穆勒m . m . Markoski m·a·a·卡斯特罗和f . Klamt”高cofilin-1水平与顺铂耐药性在肺腺癌中,“肿瘤生物学,35卷,不。2、1233 - 1238年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. b . t . Chua c . Volbracht k . o . Tan r·李和p . Li v c . Yu”线粒体易位cofilin细胞凋亡诱导的早期步骤,”自然细胞生物学,5卷,不。12日,第1089 - 1083页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 问:唐,霁,y唐et al .,“线粒体的易位cofilin-1促进胃癌bgc - 823细胞的凋亡诱导乌索酸,”肿瘤生物学,35卷,不。3、2451 - 2459年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. l .徐y气、l . Lv et al .,“体外anti-proliferative Zuojinwan对八种人类癌症细胞系,”Cytotechnology,卷66,不。1,37-50,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. j . Du y太阳,x。王,y y。陆,Q.-M。周,S.-B。乳腺癌郑苏”,建立一个实验模型和疗效评价左晋湾”以证据为基础的补充和替代医学324732卷,2013篇文章ID, 6页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 华盛顿特区。曹国伟,L.-J。林,S.-T。花王et al .,“Zuo-Jin-Wan抑制效应及其生物碱的成分在激活蛋白1、核因子-κB细胞HepG2细胞转变。”Fitoterapia,卷82,不。4、696 - 703年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. X.-N。王,L.-N。徐,J.-Y。彭,K.-X。刘,L.-H。张,Y.-K。张,“体内抑制S180肿瘤中国草药的协同效应黄连和吴茱萸”,足底》,卷75,不。11日,第1220 - 1215页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 刘B.-H h .隋x。金et al .,“左晋Wan,传统中草药配方,逆转P-gp-mediated MDR体外和体内,”以证据为基础的补充和替代医学文章ID 957078卷,2013年,13页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. h .隋S.-F。锅,y冯et al .,“左晋Wan逆转P-gp-mediated耐药性通过抑制PI3K / Akt / NF -激活κB通路。”BMC补充和替代医学第279条,卷。14日,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. Q.-F。唐,霁,y y。邱et al .,“协同效应的左晋Wan DDP-induced人类胃癌细胞凋亡国网公司- 7901 / DDP细胞,”以证据为基础的补充和替代医学文章ID 724764卷,2014年,10页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 。拉斯穆森彼得森l·h·l . Byg铃木k h . Sumimoto F . Vilhardt,“F / G-actin比率和肌动蛋白的影响离职率在小胶质细胞NADPH氧化酶的活动,“BMC免疫学第四十四条,卷。11日,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. o·穆萨·d·p·特纳,m . Sauane p·b·费舍尔和d·k·沃森“Prostate-derived ETS是转移的中介因素可能通过抑制乳腺癌的迁移和入侵”癌症研究,卷67,不。4、1618 - 1625年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. c . Wang G.-L。周,美国Vedantam、p·李和j .字段“线粒体CAP1促进肌动蛋白-和cofilin-dependent凋亡之间来回穿梭,“《细胞科学,卷121,不。17日,第2920 - 2913页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. r·李x Wang X.-H。张,h。陈,Y.-D。刘,”乌索酸促进胃癌细胞凋亡国网公司- 7901细胞通过岩石/ PTEN介导线粒体cofilin-1易位,”亚洲太平洋癌症预防杂志》上,15卷,不。22日,第9597 - 9593页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 黄黄d . h .段h . et al .,“顺铂耐药性在胃癌细胞与HER2 upregulation-induced epithelial-mesenchymal过渡,“科学报告》第六卷,ID 20502条,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m .壮族史,x Zhang et al .,“mir - 143参与顺铂耐药性通过针对IGF1R和BCL2胃癌细胞,”肿瘤生物学,36卷,不。4、2737 - 2745年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. x智,j . t g .香et al .,“四月通过激活诱导胃癌细胞中顺铂耐药性的NF -λB通路。”细胞生理学和生物化学,35卷,不。2、571 - 585年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. h . j .赵k·e·门敏S.-M。公园et al .,”RhoGDI2授予胃癌细胞抵抗cisplatin-induced upregulation凋亡的bcl - 2表达,“癌症的信,卷311,不。1,48-56,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 诉诉Subhash, s . h . Tan w . l . Tan et al。”GTSE1压制表达凋亡信号和授予顺铂耐药性在胃癌细胞,”BMC癌症第550条,卷。15日,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. y . d . Min m . c .杨k·h·李,k·r·金,美国美国崔和k·r·李”Protoberberine生物碱及其逆转活动P-gp表示的多药耐药性(MDR)的粉末黄连粳稻牧野,”档案调药的研究卷,29号9日,第761 - 757页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. j . c, r·荣j . Liu Wan,周k和j . x Kang“黄连提取物结合化疗药物对活性氧的影响生产、多药耐药性,在人类肺癌细胞A549细胞生长,”中药,7卷,不。1,第十一条,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. w·l·傅w . Chen郭et al .,“目标AP-2小檗碱/ hTERT, NF -κB / cox - 2, HIF-1α/ VEGF和细胞色素c /半胱天冬酶信号抑制人类癌症细胞生长,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。7篇文章ID e69240 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. j .杨L.-J。吴,我。Tashino, s . Onodera和t . Ikejima活性氧的关键角色在线粒体渗透性转换中介evodiamine-induced人类黑色素瘤A375-S2细胞凋亡,”自由基的研究第41卷。。10日,1099 - 1108年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. W.-T。魏、h·陈,Z.-H。王et al .,“增强的抗肿瘤功效的吉西他滨在胰腺癌evodiamine通过调节PI3K / Akt通路,”国际生物科学杂志》上,8卷,不。1、1 - 14,2011页。视图:谷歌学术搜索
30. d·l·杨,x Liu吴et al .,“生长抑制和诱导细胞凋亡在人类胃癌细胞SGC7901 evodiamine,”分子医学报告,9卷,不。4、1147 - 1152年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. r . w . Wang艾迪,j . Condeelis”cofilin通路在乳腺癌浸润和转移,”自然评论癌症,7卷,不。6,429 - 440年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. h .山口和j . Condeelis”调节肌动蛋白细胞骨架的癌细胞迁移和入侵,”Biochimica et Biophysica学报-分子细胞研究,卷1773,不。5,642 - 652年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. c·b·穆勒m·a·德Bastiani m·贝克尔et al .,“潜在cofilin-1之间的串扰和EGFR通路在非小细胞肺癌的顺铂耐药性,”Oncotarget》第六卷,没有。6,3531 - 3539年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 诉DesMarais m . Ghosh、r·艾迪和j . Condeelis”Cofilin带头。”《细胞科学,卷118,不。1,19-26,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. j . r . Bamburg和b·w·伯恩斯坦ADF / cofilin肌动蛋白聚合的角色,”F1000生物学报告,2卷,第62条,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m·范·特洛伊l . Huyck s Leyman s Dhaese j . Vandekerkhove和c . Ampe”进进出出的ADF / cofilin活动和监管,”欧洲细胞生物学杂志》上,卷87,不。8 - 9,649 - 667年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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