文摘
纳米乳(MEs)制定使用PEG-8辛/癸甘油酯和ethanolic蜂胶提取物。MEs是由确定的意思是液滴大小的特性,多分散性指数稳定在不同的外部因素,制定影响交付的酚类化合物到皮肤上体外。精油被包括进了MEs的配方及其影响纳米系统的物理特性以及渗透表皮和真皮。液滴的大小、分布和制定MEs的稳定性没有影响。的精油配方增加渗透的酚类化合物,但只有阿魏酸的含量显著增加。意味着液滴尺寸增加而增加的油相,表明酚类化合物和精油的组成部分没有修改界面膜的形成成分和/或结构。酚类化合物主要是位于MEs的脂质阶段从而最大限度地减少他们的可用性在皮肤的表面。
1。介绍
越来越影响人体皮肤的理解风险和威胁的合成病理学支持寻找新的方法和制定创新产品来保护人类有机体的最远的细胞。外部压力因素尤其是紫外线辐射可以造成损害的裸露的皮肤细胞导致氧化应激,过早老化和皮肤癌1]。皮肤老化,增加氧化应激之间的关系是澄清的事实皮肤老化变化可能导致的氧化应激水平升高。应该强调,增加氧化应激可能引起皮肤老化,皮肤老化和氧化应激水平升高可能表明存在一些潜在的一般原因2]。局部应用防晒霜产品可以保护皮肤免受紫外线辐射的有害影响。可能将防晒配方中自然产生的物质正成为一个实际的主题与次生代谢产物通常证明抗氧化和防紫外线能力。nonflavonoids,它确定酚酸和类黄酮可以作为紫外线阻滞剂减少炎症,氧化应激,DNA损伤(3]。
科学评价蜂胶及其产品演示了抗氧化,抗菌,抗病毒,抗真菌,抗炎,antitumoral,蜂胶和伤口愈合性能;它刺激组织再生,伤口愈合,抑制疼痛,肿胀4- - - - - -6]。蜂胶是常用的液体提取物在化妆品和医药制剂因其杀菌、消炎,麻醉属性。复杂变化的定性和定量蜂胶提取物的组成是一个公认的挑战在标准化蜂胶产品。酚酸及其酯类、类黄酮、芳香醇类和醛类和萜烯不同起源蜂胶及其存在的基本组件定义了蜂胶的产品质量以及生物活性和可能的应用程序(7,8]。功效的能力造成的局部应用产品活性成分渗入皮肤的应用载体系统。的强度和皮肤渗透的速度由蜂胶提取组件依赖于单个化合物的物理化学性质和结构和成分的载体系统。蜂胶的多酚类化合物的能力有限(咖啡,香荚兰香豆、阿魏酸和香兰素)渗透皮肤已经确定;因此可以被视为潜在的解决方案的应用程序实现改进交付蜂胶抗氧化剂组件到皮肤(9]。
药妆品开发增强皮肤的健康和美丽,被归类为一个类别的产品定位之间的化妆品和药品10]。保护药用化妆品配方应该是有效的和可接受的消费者。蜂胶产品的生物活性成分的防护潜力可以增强开发有效的交付系统运输要求保护化合物的数量正确的网站在皮肤上。被认为是纳米乳化妆品活性成分,因为他们有前途的载体系统进行有效的增溶剂亲水性和高的亲脂性的成分封装能力,提高产品效率,稳定,和外观。他们提供良好的化妆品的品质和高水化性能从而可能提高皮肤渗透可能强调其重要性在局部产品(11]。纳米乳是光学各向同性系统包含亲水、亲脂性的阶段和表面活性剂的混合物。热稳定和透明的纳米乳很容易扩散和吸收率高的系统制定。纳米乳的低界面张力提供良好的润湿特性确保配方和皮肤之间的良好接触。纳米乳的成分可以有效地克服扩散障碍和渗透皮肤的角质层,提供高效的皮肤和皮肤给药(12]。纳米乳的平均液滴直径可以从10到140纳米范围内从而表现出纳米系统的属性。适当的选择的组件配方乳能保证其生物相容性、无毒性和临床可接受性。
本研究的目的是制定纳米乳含有蜂胶提取物和评估他们的理化特性、稳定性和交付蜂胶酚类化合物的能力到皮肤上体外。
2。材料和方法
2.1。化学药品和试剂
生蜂胶获得UAB Medicata无双》(立陶宛维尔纽斯)。乙腈(Chromasolv)和醋酸(冰川)高效液相色谱梯度级,≥99.8%的纯质量(Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim,德国)。超纯水生产过滤纯化水通过微孔简单高效液相色谱级水制备墨盒(美国贝德福德)。PEG-8辛/癸甘油酯(Labrasol)从Gattefosse购买(Saint-Priest、法国);乙醇从AB“Vilniaus degtinė”,维尔纽斯,立陶宛;十四烷酸异丙酯、合成等级从Scharlab SL,巴塞罗那,西班牙;氯化钠从卡尔罗斯GmbH,卡尔斯鲁厄,德国;与叠氮化钠POCh格利维策,波兰。
2.2。Ethanolic和水蜂胶提取物
酚类化合物从原始蜂胶提取使用96%的乙醇或纯净水的material-to-solvent比1:10 (w / v),搅拌在一个电炉电磁搅拌器WiseStir MSH-20D(韦特海姆,德国)1小时在70°C的温度(水蜂胶提取物)。ethanolic或水蜂胶提取使用毕希纳真空过滤系统过滤。
2.3。蜂胶样品的高效液相色谱分析
酚酸(p香豆、阿魏、咖啡和香子兰的酸)和香兰素在蜂胶提取和量化样本使用安捷伦1260无穷毛细管LC(安捷伦科技有限公司、圣克拉拉、钙、美国)与安捷伦二极管阵列检测器(爸爸)和应用验证的高效液相色谱方法:C18柱(150×0.5毫米,5μ米颗粒大小);线性洗脱梯度从1到21%的溶剂(乙腈)B (0.5% (v / v)乙酸在超纯水)25分钟;注射体积是0.2μL,流量是20μL / min,列温度是25°C。酚类化合物峰的集成是在290 nm (9]。
2.4。建设Pseudoternary相图
Labrasol, 96%乙醇、十四烷酸异丙酯和纯净水被选为表面活性剂,通过,油和水相,分别建设pseudoternary相图。油滴定方法用于水包油的生产(o / w)纳米乳13,14]。表面活性剂的比例,通过纳米乳是2:1,3:1,4:1,5:1,6:1,7:1,8:1,和9:1。首先,纯净水(15 - 70%),表面活性剂,通过(30 - 85%的混合物)混合搅拌在电炉电磁搅拌器WiseStir MSH-20D室温。然后添加搅拌下滴油当样品出现浑浊的液体(o / w微乳液的极限)。水乳状液的地区是在pseudoternary相图(图绘制1)。
2.5。纳米乳的配方含有Ethanolic蜂胶提取物
相同的o / w微乳液组成百分比从pseudoternary相图中选择:5%的油相,水相的25%,和70%的表面活性剂的混合物,通过不同的比率(2,1,3:1,4:1,5:1,6:1,7:1,8:1和9:1)。纯净水,labrasol(表面活性剂),乙醇蜂胶提取物(通过),及其十四烷酸异丙酯混合时出现纳米乳清澈液体(表1)。
2.6。热力学稳定性的研究蜂胶乳
热力学稳定性的o / w蜂胶乳是评估执行离心试验和heating-cooling和冻融循环试验(15]。纳米乳在3500 rpm离心机30分钟。纳米乳被储存在4°C, 20°C, 32°C,和45°C温度不低于48小时heating-cooling周期和−21°C, 4°C, 25°C温度不低于48小时在冻融循环。
2.7。O / W乳状的物理特性
液滴的大小、标准差和多分散性指数(PDI)的o / w乳状测量使用Zetasizer纳米粒度分析仪(英国莫尔文)[z16]。纳米乳pH值确定使用酸碱计766(德国裂);电导率测定使用电导仪(气孔导度3110组1、德国);粘度是决定使用Vibro-Viscometer SV-10(我公司、有限公司、日本)。
2.8。体外皮肤渗透研究
白人女性(年龄范围的批准年)腹部皮肤获得整形外科学系,立陶宛的医院,整形手术后健康科学大学。考纳斯地区生命伦理委员会已批准经皮肤渗透研究人类皮肤的使用。体外皮肤渗透的研究()进行使用Bronaugh类型材料扩散与人体皮肤全层细胞。细胞中有效扩散面积是0.64厘米2。扩散细胞被放置在金属加热块保持37°C温度由格兰特TC120循环水浴恒温器(格兰特仪器有限公司、剑桥,英国)。受体介质(0.9%氯化钠溶液与0.005% NaN3)流传下皮肤样品保持0.6毫升/分钟的循环率Masterflex L / S与多通道蠕动泵泵头(美国IL Cole-Parmer仪器有限公司)。无限的剂量的o / w蜂胶微乳液应用外人类皮肤一侧表面,扩散细胞满是铝箔。24小时后,纳米乳被逐出人类皮肤表面。皮肤样品(0.64厘米2去除外)修剪残差。表皮和真皮之间是应用干热分离方法(9,17),他们分别提取与甲醇的混合物和去离子水(1:1)声波降解法。
2.9。统计分析
实验数据使用SPSS软件进行统计分析(版本19.0)。Mann-Whitney测试和单向方差分析(图基的诚实的显著差异标准)被用于数据分析。相关分析采用斯皮尔曼等级系数。
3所示。结果与讨论
酚酸和香兰素的浓度测定ethanolic和水蜂胶提取(表2)。总酚酸和香兰素浓度(2472.7±24.6µg / mL) ethanolic蜂胶提取物的价格高出7.5倍比较水蜂胶提取(330.5±8.9µg / mL)。乙醇蜂胶提取物被用作活性成分及其通过纳米乳的配方(MEs)。
提出在构建pseudoternary相图(图1),MEs的成分包含5%的油相、水相的25%,和70%的表面活性剂的混合物,通过比率2:1,3:1,4:1,5:1,6:1,7:1,8:1和9:1导致稳定的MEs和被选为进一步发展。乙醇作为通过制定o / w MEs在初始测试和获得的数据被用于评估酚类化合物对MEs的影响特征。
热力学稳定性研究表明,o / w MEs在离心稳定和heating-cooling测试虽然小不稳定在冻融试验确定。
pH值的测量、电导率和粘度进行24小时后形成o / w MEs (18)来检测可能的影响ethanolic蜂胶提取(表3)。结果证实缺乏关键的影响蜂胶酚类化合物对MEs的物理特性。
MEs的pH值和粘度没有显著(通过改变乙醇ethanolic蜂胶提取)的影响。MEs的导电率包含ethanolic蜂胶提取类似于MEs含有乙醇从而确认相同类型的o / w分散。
所有o / w乳状特征测量液滴大小和多分散性指数(PDI)(表4),确定数量的粒子在MEs分数。液滴尺寸的测量MEs 24小时和1星期后进行评估纳米系统的可能的变化。
意味着液滴大小含有乙醇的MEs或ethanolic蜂胶提取24小时后相似的值确定后1周。在MEs surfactant-cosurfactant比率的增加导致增加意味着液滴大小但对MEs的PDI没有影响。Two-peak粒子分布格局决定了MEs制定S-CoS比2:1;因此不考虑进一步发展我的配方。蜂胶微乳液与S-CoS重量比3:1、含银量为5%的十四烷酸异丙酯油阶段被选为提供最大数量的ethanolic蜂胶提取合并。油阶段的评价数量影响的物理参数和稳定性MEs进行变量十四烷酸异丙酯含量(表3到7%5)。
o / w的值意味着液滴大小蜂胶MEs含3%,5%或7%的十四烷酸异丙酯1周后配方没有什么区别值确定配方后24小时。单液滴分布峰值被确认为十四烷酸异丙酯,MEs的MEs含有7% 3%和5%浓度的十四烷酸异丙酯含有水滴的大小两个分数。
生物制药的MEs包含7%的十四烷酸异丙酯进行评估的渗透香豆、阿魏、咖啡、香荚兰酸和香兰素为皮肤层体外。表皮没有蜂胶的多酚类化合物被确定在24小时后申请我,只有香兰素香豆酸测定在真皮。松针精油和云杉针被添加到o / w蜂胶乳提高酚类化合物的渗透到皮肤(19]。MEs中含有1%的精油减少十四烷酸异丙酯的浓度,分别。蜂胶MEs特征测量他们的液滴大小和PDI和24小时和1星期后峰的数量(表6)。平均液滴大小和PDI并不影响添加精油,1周后并没有改变。
酚类化合物的通量决定人类表皮和真皮从包含7%的蜂胶MEs十四烷酸异丙酯和化学渗透增强剂在表7。包含松针精油或云杉针精油导致没有香荚兰的显著增加,咖啡,p香豆、阿魏酸和香兰素在表皮。只有p香豆酸被发现但量化的数量低于限制。数量的增加p香豆、阿魏酸和香兰素测定在真皮的精油,和他们的增长是当我高含有1%云杉针精油。香荚兰和咖啡酸的存在决定在真皮,但大量量化的数量低于限制。
低渗透的蜂胶MEs可以解释的酚类化合物的分布格局香荚兰,咖啡,p香豆、阿魏酸和香兰素MEs的由于他们的溶解度可以集中在界面膜,由表面活性剂和通过以及MEs(油相的9,13]。这样的可用性MEs的酚类化合物在外部相吸收到皮肤上可能是一个限制因素的渗透进皮肤。添加精油的MEs增加了大量的酚类化合物穿透到皮肤,但没有统计上显著的增加。只在阿魏酸的量化数量在真皮应用我云杉针精油显著增加1%。
4所示。结论
蜂胶酚类化合物被认为是强有力的抗氧化剂,可以申请最小化有害效应的氧化应激的生物的生物系统。实现理想的生物效应的重要前提是蜂胶的可用性酚类化合物的氧化损伤。因此增加皮内渗透的酚类化合物的技术吸引了很多兴趣。MEs的应用可能导致增加大量的酚类化合物在皮肤层由于存在相对较高的表面活性剂和干扰脂质矩阵的能力结构和合成增加皮肤的渗透性。结果表明能力有限的MEs制定使用PEG-8辛/癸甘油酯和ethanolic蜂胶提取物改善交付酚类化合物进入皮肤体外。包含1%的松针或云杉针精油到MEs生产没有影响液滴大小和多分散性指数,这可能表明精油成分集中在油相;因此他们的潜在影响皮肤屏障是有限的。考虑有限的蜂胶酚类化合物的渗透到皮肤的体外测试中,应努力制定MEs能够将蜂胶提取物的量更高。MEs的成分必须优化实现更高浓度的蜂胶外部阶段从而确保可用性的酚类化合物的生物活性化合物对生物膜渗透。
相互竞争的利益
作者声明他们没有利益冲突。