葡萄籽、芝麻和胡芦巴油的伤口愈合性能评估

摘要

出身背景．药用植物在任何时候都被证明是一种有效的保健药物。因此，研究了葡萄籽、芝麻和葫芦巴提取油的药理特性作为创伤治疗。这项研究评估了我们的油对大鼠伤口愈合的潜力。方法对油脂进行的植物化学分析包括：品质值、多酚、叶绿素、胡萝卜素和脂肪酸。进行了抗菌活性。评估了抗氧化活性：对DPPH自由基的清除作用、还原能力和抗氧化能力β-胡萝卜素变色。在大鼠背部诱导均匀伤口切除，随机分为五组：给予“治疗”的组西卡弗洛拉®“和测试油和未处理油。愈合后的活组织检查进行组织学评估。后果．与对照组相比，油处理的伤口活检显示出最好的组织再生。用我们的油处理的群体西卡弗洛拉具有较高的伤口收缩率。油脂中的多不饱和脂肪酸作为炎症介质，增加新生血管、细胞外重塑、迁移和细胞分化。伤口愈合效果归因于抗菌和抗氧化协同作用。结论.根据研究结果，与“清洁剂”相比，油在伤口愈合方面表现出更好的活性西卡弗洛拉由于植物成分的协同作用。然而，有必要在人体上进行临床试验，以确认对人体病理学的疗效。

1.背景

伤口无论其类型和原因如何，都是常见的疾病，在全球范围内，主要是在发展过程中的国家，这是一个严重的公共卫生问题。然而，尽管现代医学取得了令人印象深刻的进步，但用于治疗皮肤的药物占预期药物的3%，尚未真正有效.

各种药用植物，主要是它们的油，一直被用来治疗各种各样的伤口。文献介绍了各种草药配方和含有几种植物化学化合物（维生素、酚类、甾醇等）的天然提取物，用于伤口护理的愈合植物。这些药用植物的完整列表传统上用于民间医学，包括我们选择的三种植物，葡萄籽、胡芦巴和芝麻，在本研究中进行了调查，以探索它们的植物化学成分，评估它们的伤口愈合效果，并更好地解释伤口愈合的机制。

生长foenum graecum胡芦巴是一种一年生草本植物，属于蝶形花科一种香料，在东方国家常用作食物制备中的香料。据报道，这些种子具有营养和恢复功能，可以刺激消化过程[1]；此外，它们被用作治疗糖尿病的传统药物[2]．

芝麻芝麻（Sesame）是一种先锋栽培的一年生自花授粉植物，原产于非洲，属于山茶科芝麻在人类营养中起着重要作用，其种子基本上用于生产油脂。

果实为微细的椭圆形蒴果，内含大量种子[3.]1.这种油籽有多种营养成分[4]，民族植物学、制药和医学应用。事实上，它是泻药、润肤剂和镇痛剂[5]这促使我们进一步探索这种油籽，关注皮肤修复，特别是伤口愈合方面的研究。

葡萄L.（葡萄）属于维生素科家庭。几千年来，葡萄一直是欧洲的一种传统治疗方法。葡萄籽油富含不饱和脂肪酸，特别是亚油酸[6构成相当大比例的种子。

伤口愈合是病理学的重要关注点，如术后、烧伤和疤痕，是一个动态而复杂的过程，涉及从炎症到增殖再到重塑的生化和生理现象，以和谐的方式运行以确保组织修复[7]。在炎症阶段，这一过程受到高水平自由基产生的阻碍。如果不受宿主抗氧化能力的控制，细胞迁移和增殖都会受到抑制，这会损害周围的伤口组织[8]因此，本研究评估了之前提到的三种药用植物（胡芦巴籽油、芝麻油和葡萄籽油）的伤口愈合效果通过探索植物化学成分和抗菌、抗氧化活性的不同参数来解释伤口愈合的关键机制。

2.方法

2.1.植物材料和试剂

2．1．1．试剂

(DPPH) 1,1-二苯基-2-苦基肼购自Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)。丁基羟基甲苯(BHT)和其他所有化学物质均为分析级。

用于评估伤口愈合情况，”西卡弗洛拉“被用作参考产品．它包含在含有含羞草作为一种主要活性成分，以乳霜的形式销售。

2.1.2.材料

脂肪酸甲酯的分析是由在气相色谱法(C.P.G)的UNICAM 610色谱仪,配备一个检测器(FID)允许化合物的检测,一列(15米长,直径0.22毫米)内衬电影(0.25μM厚)的极性相(50%氰丙基甲基和50%苯甲基聚硅氧烷)，以及进样除数。检测器温度为250℃，柱温度为180℃，进样器温度为220℃。注油量为0.2μl

2.2.分析方法

2.2.1.植物化学分析

（1） 品质价值与脂肪酸

（i） 过氧化值．根据ISO 3960/2001方法，任何油脂的过氧化值都是初级氧化水平的重要指标。脂肪酸的过氧化物指数是1公斤产品中活性氧含量的毫当量数，以及钾中的碘的氧化，通过碘的释放和硫代硫酸钠的滴定。

(2)酸度值。酸值表示测试油中存在的游离脂肪酸含量，以油酸表示。根据ISO 660/2003方法，它代表产品商业分类的一个重要质量参数。5 油溶于30克 中和mL等体积的乙醇/乙醚（1/1）。通过氢氧化钾溶液在1%酚酞存在下测量游离羧基功能。体验结束时，呈现粉红色。

（三）皂化值。皂化值是一种间接测量方法，允许根据脂肪酸链的长度对油进行分类；该标准与脂肪酸的分子量有关。该测量方法非常有用，因为根据ISO 3657/2002方法，该值给出了油的质量。皂化值表示转化1中所含游离脂肪酸和甘油酯所需的氢氧化钾的毫克量 g脂肪加入肥皂中，通过将一定体积的油与氢氧化钾混合并用盐酸滴定来测定。

（iv）232时的比消光系数 纳米和270 纳米. UV比消光值的测定给出了不饱和油中氧化过程的近似值[9]根据COI/T.20/Doc（2008年11月第19/Rev.2号）方法0.25 g的油溶解在25%的溶液中 用紫外/可见分光光度计在270比波长下测量脂肪油溶液的吸光度 在270纳米处消光 未加工脂肪的nm可以提供关于二次氧化水平的信息。

（v） 游离脂肪酸百分比。游离脂肪酸法COI/T.20/Doc（No 342015年11月）通过气相色谱法测定油中的游离脂肪酸。游离脂肪酸的含量以酸度表示，以油酸的百分比计算。它包括稀释0.2 在3中提取油g mL己烷和0.3 毫升甲醇氢氧化钾。反应混合物在悬挂漩涡中摇动2分钟 min，然后旋转干燥。因此，上段含有溶解在己烷中的脂肪酸酯，而下相由甘油馏分和空白油的次要组分来训练。

(2)多酚的定量分析。根据Tsai等人描述的方法测定各种样品中总酚的含量[10]在该方法中，向试验油中添加Folin-Ciocalteu试剂。搅拌后，添加洗涤苏打溶液。2 孵育h后，在760处测量吸光度 纳米。

（3） 叶绿素和胡萝卜素．利用胡萝卜素和总叶绿素的消光系数，读取670 nm和470 nm的光密度后，计算出油脂中叶绿素色素和类胡萝卜素的含量[11]．

2.2.2。抗氧化活动

(1) DPPH自由基清除试验。该分析已用于研究抗氧化化合物的清除活性。事实上，DPPH是一种稳定的自由基，可通过给予质子的底物（如抗氧化剂）还原，导致DPPH变色，并降低517处的吸光度 纳米。

根据Bersuder等的报道，测定了三种精油对DPPH自由基的清除能力[12].自由基清除活性表示为抑制百分比，并使用DPPH自由基清除活性方程式计算。 是对照反应的吸光度，以及是油/标准BHT样品的吸光度。IC50值（mg样品/mL）是清除DPPH自由基50%的有效浓度。试验分两次进行。

（2） 铁还原抗氧化能力FRAP.机油的性能（0.06 mg/mL至1 根据Yildirim等人的方法测定还原铁（III）的浓度（mg/mL）[13]．IC50值(mg sample/mL)是吸光度为0.5时的有效浓度。BHT用于比较，所有数据值均为重复分析的平均值。

(3) β-胡萝卜素漂白试验这种紫外线分光光度技术是由Marco开发的[14]然后由米勒稍加修改[15]．它包含在470纳米的测量中。的变色β-胡萝卜素是亚油酸氧化的产物。

2.2.3.抗菌活性

(1)微生物菌株．研究精油的抗菌活性通过一系列实验室控制染色剂进行评估:两种革兰氏阳性细菌:枯草芽孢杆菌（JN 934392）和金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）；两种革兰氏阴性菌：大肠杆菌（ATCC 25922）和肠炎沙门氏菌（ATCC 43972）。

(2)纸片扩散法测定抗菌活性根据国家临床实验室标准委员会（NCCLS，2001），使用受试微生物悬浮液，通过圆盘扩散法测试油的抗菌活性。Mueller-Hinton琼脂（MHA）在烧瓶中灭菌并冷却，分配到灭菌培养皿中。滤纸圆盘（6 （直径mm）分别用油浸渍，然后放置在先前接种了受试微生物的琼脂板上。将皮氏培养皿在4°C下保存2小时 h、 用细菌接种平板，并在37℃下培养24小时 h、 所有抑制区的直径均以毫米为单位进行测量。所有试验一式两份。

（3） 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定。根据国家临床实验室标准委员会（NCCLS，2001），使用微量稀释法研究最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。所有试验均在Mueller-Hinton肉汤（MHB）中进行。油溶解在20%二甲基亚砜（DMSO）中然后从最高浓度稀释至最低浓度。在96孔板中制备油的连续加倍稀释。制备每个菌株的过夜肉汤培养物。将皮氏培养皿在4°C下保存2小时 h、 然后，将细菌在37℃下培养24小时 h、 通过在600℃下的吸光度测定微生物生长 使用通用微孔板读卡器的nm[16]．为了评价MBC，取每孔的肉汤，在37°C的Mueller Hinton Agar (MHA)中接种细菌48 h。

（4） MBC/MIC比.MBC/MIC比率[17]可以清楚地了解正在研究的油对细菌的影响。事实上，如果该比率高于4，则称该油具有抑菌作用，如果该油具有杀菌作用，则该比率低于4。

2.2.4. 伤口愈合活性试验

（1） 实验动物.30只Wistar雄性大鼠称重g被用于实验。在22-25°C、60-70%相对湿度和12小时暗光循环的控制条件下，它们被随机地单独饲养在清洁的聚乙烯笼子中，并自由获得水和食物。程序和动物舒适度由《国际动物护理指南》控制。

（2） 环形切除伤口模型.氯胺酮麻醉后（100 mg/kg体重）肌肉注射，椭圆形区域的全厚度约为200 嗯²在剃光的大鼠背侧肩胛间区造成创伤[18].伤口形成的那天被认为是第0天，所有伤口都用纱布包扎，并进行治疗，直到完全愈合。

(3)切除创面处理大鼠分为5组，每组6只。第（I）组未经治疗，作为对照组（伤口仅用生理盐水清洗）。第（II）组用胡芦巴油治疗，第（III）组用芝麻油治疗，第（IV）组用葡萄籽油治疗，作为试验组，而第（V）组用生理盐水清洗用“治疗”西卡弗洛拉作为标准对照品（阳性对照）。

用生理盐水冲洗伤口后，测试样品（胡芦巴油、葡萄籽油和芝麻油）和西卡弗洛拉”每两天在伤口表面涂抹一层薄薄的乳膏，直到伤口完全愈合。因此，当第一组的伤口完全愈合时，停止治疗；然后处死大鼠，从动物身上切除肉芽组织。将一部分湿组织固定在10%的福尔马林中（v/v），石蜡包埋，用于组织学观察。

(4)伤口愈合评价参数.为了评估5个研究组的伤口愈合过程，我们依据两个临床宏观标准，包括定性（伤口颜色）和定量标准（伤口闭合率）以及一个微观标准（组织学评估）。

（5） 色彩研究. 浅表伤口往往会从红色变为淡粉色，愈合后会变得更加均匀，质地更加一致。通过拍摄伤口，对愈合过程进行色度评估。这项研究包括对每只大鼠的伤口进行编码：覆盖伤口的血液为鲜红色，表皮凝固的血液为暗红色，肉芽组织为红色，上皮化阶段为粉红色[19]．

（6） 伤口愈合率和上皮化时间．对照组和治疗组每个单独伤口的闭合率被用作伤口愈合的指标。伤口切口后用透明纸描出伤口边缘，然后通过Mayrovitz规则测量面积[20.].在伤口完全愈合前的第3天、第5天、第7天、第9天和第10天测量伤口收缩，并以愈合面积百分比表示。伤口收缩，即原始伤口大小的缩小百分比，使用以下表达式计算： 第0天的初始伤口面积和随后所有天的伤口面积表示为和,分别。

上皮形成期被认为是结痂脱落而无任何残余创面所需的天数[21]．

（7） 组织学检查．所有皮肤样本均固定在10%中性缓冲福尔马林中。固定后，3μm石蜡切片垂直于皮肤表面，包括整个皮肤厚度。连续切片用苏木精-伊红（HE）染色[22]显示组织形态：组织、上皮增生和肉芽肿组织形成、胶原化、新毛细血管形成和真皮瘢痕形成。

组织病理学切片的研究标准包括再上皮化、上皮的角化、成纤维细胞和胶原含量。此外，组织学活检检查了晚期组织再生的特点是存在组织良好的表皮层和真皮。

2.2.5。统计分析

使用SPSS版本17（美国伊利诺伊州芝加哥市SPSS公司）进行统计分析。

学生测试用于比较油处理组和阴性和阳性对照组治疗前后的平均体重，以确定显著差异。非参数测试、Kruskal-Wallis测试和Mann-Whitney测试用于比较不同的组。原始数据显示每个组的IQR中值以上差异在统计学上具有显著性．

3.结果

3.1.植物化学分析

3.1.1.质量值和脂肪酸

桌子1给出了酸度、比消光系数、过氧化物和皂化作用的值。

桌子2葡萄籽油、芝麻油和胡芦巴油中多不饱和脂肪酸的比例不同，特别是油酸、亚油酸和亚麻酸的比例分别为89.37%、82.5%和84.28%。

3.1.2。定量多酚，叶绿素和胡萝卜素

油中总酚类化合物的定量剂量显示出较高的油值，但葡萄籽油和胡芦巴油的叶绿素含量较高（8.078 ppm）和胡萝卜素（56.78 ppm）（表3.）.

3.2.抗氧化活性

3.2.1.DPPH自由基清除试验

抗氧化效率随油浓度的增加而增加(图)1）.与BHT活性相比，这三种油似乎具有潜在的抗氧化活性。在1 mg/g浓度下，葡萄籽油、香油和胡芦巴油的抑制率分别为68.12%、84.59%和84.6%，BHT的抑制率为54.6%。

3.2.2。铁还原抗氧化能力FRAP

数字2说明了机油对铁III的还原能力。

3.2.3.β-胡萝卜素漂白试验

数字3.展示β-胡萝卜素漂白试验结果。

３．３．抗菌活性

3.3.1。缓蚀带直径

油对不同细菌革兰氏（+）和革兰氏阴性菌的抗菌活性(−) 在表中列出4．

3.3.2.最小抑菌和杀菌浓度（MIC和MBC）的测定μg / mL MH)

桌子5指向MIC和MBC的浓度。

3.3.3。比率= MBC /麦克风

该比率用于验证油的抗菌潜力，需要MBC/MIC比率（表1）6）.

3.4.伤口愈合活性试验

伤口愈合过程通过色度学研究进行，研究的基础是各组在不同愈合阶段伤口颜色的渐进变化：胡芦巴油、葡萄籽油、芝麻油西卡弗洛拉，生理血清。

3.4.1.伤口愈合评估参数

Wistar大鼠体重见表7.同一组患者治疗前后平均体重的统计比较无显著性差异(）.

3.4.2. 色彩研究

同组大鼠创面摄影见图4．选择的天数(0/3/5/7/9和10)分别对应创面诱导日、炎症期、肉芽组织形成和再上皮化。

对伤口颜色的研究显示，在头三天里，伤口的颜色是类似的。事实上，在受伤当天观察到的鲜红色反映了皮肤切除后覆盖下层肌肉的血液的颜色。这种颜色在第二天变成暗红色，这是血栓形成的证据。这个凝块使血液凝固。从第3天开始，治疗组大鼠的血凝块转化为可收缩的结痂。

到第7天，对照组（未治疗组）大鼠的结痂出现红色，与伤口两侧的组织肉芽相对应。

从第10天开始，用油脂和参考产品处理的大鼠结痂开始下降，11天后出现粉红色，标志着上皮化结束。油的伤口收缩能力西卡弗洛拉“比对照组更显著。对照组和胡芦巴油、芝麻油、葡萄籽油和CICAFLORA的伤口闭合率如表所示8和数字5第11天伤口闭合率分别为99.84%、99.83%、99.84%、94.82%和86.05%。

3.4.3.组织学检查

用苏木精-伊红染色观察胡芦巴、葡萄籽和芝麻油处理后创面上的表皮再生，观察上皮和组织组织(图)6）.

我们注意到，在参考活组织检查和三种受试油的活组织检查中，纤维结缔组织再生，没有毛茸茸的附件或腺体结构。然而，对照组大鼠的活组织检查中，这种组织再生较低。用各种油处理的疤痕区的显微镜检查突出显示表皮完全再生而且，对于葡萄籽油、芝麻油和胡芦巴油来说，上皮的厚度比西卡弗洛拉“奶油。

4.讨论

各种植物，主要是它们的油，已被用于治疗伤口。文献介绍了几种植物化学成分、各种草药配方和药用植物的天然提取物，用于伤口护理。其中一些药用植物传统上用于民间医学，包括我们的植物、葡萄、胡芦巴，和芝麻，以探索其植物化学成分，评估其伤口愈合效果，并更好地了解其伤口愈合机制。因此，局部应用受试油和愈合参考药物似乎可以加速伤口愈合，而对照组的伤口愈合速度更快与对照组相比，皮肤的愈合速度更快。最佳愈合活性归因于其理化性质、抗氧化和抗菌活性。

因此，油的酸度是三酰甘油在脂解反应中分布程度的结果，在脂解反应中形成了游离脂肪酸。油样的酸度较低，胡芦巴油为0.2%，芝麻油为0.4%，葡萄籽油为1.83%。所有被研究的油脂均为酸性pH，促进抑制细菌生长的能力，加速伤口愈合过程[23]．

过氧化是脂肪自氧化的开始，是一个不可避免的缓慢现象。油的处理和贮藏方式可以减少自氧化作用。根据一般规定，特级初榨橄榄油的过氧化值必须在20 Meq O以下₂/公斤(24]，这与三种油的结果一致。这些低过氧化值表明，受试油是新采集和提取的，然后在良好的条件下储存，这表明它们在这项工作中保持了良好的质量。比紫外吸收值为232 油的主要氧化指示剂nm为3.01，而K₂₇₀值低。根据通用标准，特级初榨橄榄油在232nm处的紫外吸光度必须低于2.5 [25]．这些发现与以前的过氧化值一致。这两个参数反映了油脂的自氧化程度，随油脂的年龄和暴露在阳光或高温下而增加。

测试油含有大量不饱和脂肪酸，葡萄籽油、芝麻油和胡芦巴油的不饱和脂肪酸含量分别达到89.37%、82.5%和84.28%。多不饱和脂肪酸含量高，极易被氧化[26]。然而，由于存在大量抗氧化剂，如多酚、胡萝卜素和叶绿素，因此油非常稳定。本研究中所述的抗氧化剂可以解释自氧化参数值较低的原因。事实上，多项研究报告表明，许多植物油是类胡萝卜素的重要天然来源例如黄连木乳香树该值介于5.8和10.57之间 毫克/千克油[27]，但我们研究的油的含量要高得多，尤其是胡芦巴油和芝麻油，含量分别为56.78 mg/kg和15.24 mg/kg。类胡萝卜素是维生素A最重要的来源。

自氧化是油在储存过程中变质的主要原因。它取决于多种因素，如油的初始成分和具有促氧化或抗氧化活性的次要化合物（如叶绿素）的存在[28]在我们的研究中，葡萄籽油的含量最高（8.078 mg/kg）。

自氧化通过降解必需脂肪酸使食用油变形，从而降低营养价值并形成分解产物[29，30.].三种油中的酚类化合物( mg/kg），由于其抗氧化活性，有助于保持该产品的质量[31]DPPH是一种稳定的自由基，在存在抗氧化剂的情况下，主要由酚类化合物还原[32]。事实上，多酚的化学结构使它们能够通过氢转移捕获自由基。我们的结果表明，我们的测试油对DPPH自由基反应强烈。这一发现可能与油中多酚的高浓度有关，并解释了它们的相对稳定性和较低的自氧化性。

文献中描述的我们研究的油中的其他抗氧化剂也有助于它们的稳定性和伤口愈合现象，如维生素E和甾醇[33]．

我们的研究表明，用这种油和抗生素治疗的伤口完全愈合西卡弗洛拉11天后，与组织新生不完全的对照活组织检查相比，具有组织结构良好的真皮和表皮层的高级组织再生。根据文献，伤口的自然收缩发生在第21天[34]．这一发现强调了被研究的石油加速扩散的能力，有助于快速恢复。两种药用植物油的愈合时间也相同:Cucurbita浆果。l（葫芦科）和美国亚麻（莲科）[35]．

对伤口的色度学研究显示，在最初的三天内，伤口呈现类似的颜色，这与在最初的炎症阶段形成的血凝块相对应，血凝块中充满了细胞碎片。因此，纤维蛋白一旦稳定在血凝块中，便是皮肤愈合初期的一个关键因素。它允许新兵t细胞通过趋化作用诱导成纤维细胞凋亡，并刺激胶原的产生[36].当炎性细胞到达损伤部位时，它们开始延长炎症期，导致基质成分沉积延迟、伤口重塑和闭合[37]．

从第3天开始，一个增生阶段被触发，其特征是肉芽组织的形成，包括血管生成、成纤维细胞的迁移和胶原蛋白的合成[38]．在我们的研究中，从第3天开始，治疗组大鼠的血凝块转化为可收缩的结痂。但炎症反应，表现为伤口上的水肿和渗出，似乎在对照组的大鼠中比所有三组的大鼠更重要。第7天，对照组大鼠的结痂出现红色，与伤口扩散侧的组织肉芽组织相对应。在治疗组中，观察到严重的伤口收缩和进一步的再上皮化。创面边缘的上皮细胞向中心增生，导致创面在第11天完全闭合(图)5）.

所研究的油脂的植物成分可以解释皮肤创面愈合过程的机制。因此，其相当数量的多不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸和亚麻酸。亚油酸是花生四烯酸的前体，在炎症级联反应(前列腺素、血栓烷和白三烯)中起重要作用[39].这些物质作为炎症介质，加速炎症过程。因此，它们增加了局部新生血管、细胞外基质重塑、迁移和成纤维细胞分化[38]脂肪酸据报道具有减少经皮皮肤失水、增加皮肤水合作用和促进皮肤伤口愈合的支持环境的能力[40]．

此外，伤口愈合效果也归因于在我们的研究中观察到并在文献中描述的抗菌和抗氧化作用之间的协同作用。

一般来说，细菌的最适含水量接近于中性。细菌通常需要pH值在5.5到8.0之间才能生长；否则，它们的发育活动会减慢，在pH值低于4.5或高于9.0时，它们会完全停止生长。所有的油都显示出酸性pH值，这会促进抑制细菌生长，加速伤口愈合过程，尤其是在炎症中酸性pH有助于成纤维细胞活动、细胞迁移、细胞增殖和胶原重组的理想环境，从而刺激伤口愈合[41]．

多酚和类胡萝卜素以及维生素E和甾醇通过防止自由基的破坏作用和确保生物膜的稳定性和完整性，对伤口愈合和胶原蛋白合成具有有益作用[42]Palmieri等人[43也描述了维生素E对皮肤伤口疤痕的保湿作用。

此外，甾醇是有助于减少全身炎症的有效化合物[44]通过刺激巨噬细胞和增加成纤维细胞和胶原蛋白的生成，它们可以加速新皮肤的生长。

5.结论

综上所述，根据我们的实验结果，胡芦巴、葡萄籽和芝麻油被证明对伤口愈合的作用比西卡弗洛拉。“这可能是由于油中的植物成分的协同作用。然而，有必要开展人体临床试验，以证实其在人体病理学中的疗效。

附加点

数据和材料的可用性。任何希望将其用于非商业目的的科学家都可以随时获取已发布的应用程序和软件/工具，不受任何限制。

道德认同

实验方案是根据《实验动物护理和使用指南》进行的，因此，实验方案是根据1964年《赫尔辛基宣言》及其后续修正案中规定并经动物伦理委员会批准的伦理标准进行的（第94-1939号方案）。

竞争利益

作者声明他们没有相互竞争的利益。

作者的贡献

多尔萨夫·莫亚拉·雷基克和萨迈赫·本·赫迪尔构思并设计了实验。多尔萨夫·莫亚拉·雷基克、萨迈赫·本·赫迪尔、纳齐哈·格雷蒂·卡姆蒙和卡米利亚·克苏达·莫亚拉进行了实验。多尔萨夫·莫亚拉·雷基克、萨迈赫·本·赫迪尔、纳齐哈·格雷蒂·卡姆蒙和卡米利亚·克苏达·莫亚尔分析了数据。多尔萨夫·莫亚拉·雷基克ati Kammoun、Kamilia Ksouda Moalla和Zouheir Sahnoun贡献了试剂/材料/分析工具。Dorsaf Moalla Rekik、Kamilia Ksouda Moalla和Sameh Ben Khedir撰写了论文。所有作者都阅读并批准了最终手稿。

致谢

这项工作得到了突尼斯高等教育和科学研究部的支持。作者感谢斯法克斯医学院英语教授Madiha JALLOULI对手稿的校对。这项研究是由突尼斯高等教育和科学研究部通过斯法克斯大学支持的。

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