文摘

我们调查的长期消费水(KME-W)和70%乙醇(KME-E)槲寄生提取物有抗糖尿病的活动部分pancreatectomized老鼠(Px)。Px老鼠提供高脂肪饮食KME-E含0.6%,0.6% KME-W, 0.6%糊精(控制)8周。正常控制,Sham-operated老鼠提供0.6%糊精。在细胞的研究中,其主要的影响萜类化合物(桦木醇、桦木酸和齐墩果酸)测量葡萄糖代谢。KME-W和KME-E附睾的减少脂肪量增加糖尿病大鼠脂肪氧化。KME-E但不是KME-W表现出更强的第一阶段的强化胰岛素分泌比Px-control高血糖的夹。KME-E也β通过增加细胞质量大于控制β细胞增殖及其细胞凋亡减少。euglycemic-hyperinsulinemic夹,全身葡萄糖输注率和肝葡萄糖输出增加,其余肝胰岛素信号按照以下顺序:Px-control, KME-W KME-E,正常控制。通过增加PPAR -桦木醇强刺激葡萄糖摄取γ活动和胰岛素信号3 t3-l1脂肪细胞,而齐墩果酸增强分子生物学在胰岛瘤细胞胰岛素分泌和细胞增殖。总之,KME-E防止恶化糖尿病大鼠的葡萄糖代谢比KME-W和KME-E可以更好更有效地比KME-W剂治疗2型糖尿病。

1。介绍

有2型糖尿病的患病率显著增加个体年龄超过40岁,在韩国,大约20%的人年龄超过65岁有2型糖尿病,这是超过两倍的平均利率对经济合作与发展组织国家(1]。2型糖尿病与增量增加胰岛素抵抗有关,由于西化的生活方式和饮食1- - - - - -3]。白种人在西方国家中,高脂肪饮食会导致高胰岛素血症,旨在弥补增加胰岛素抵抗[3];然而,据报道,亚洲人没有足够的胰岛素分泌能力来弥补这种类型的增加胰岛素抵抗[4,5]。亚洲人也表现出更高水平的内源基础葡萄糖生产,这意味着这个群体具有较高水平的肝胰岛素抵抗[6]。此外,由于亚洲人不太可能发展高胰岛素血,他们更容易患2型糖尿病的发展。这些差异可能与β细胞质量,因为亚洲的2型糖尿病患者,尤其是朝鲜和中国,较低β细胞质量(5]。衰老这个过程也是一个重要因素。因此,识别和开发的草药可以减弱胰岛素抵抗以及加强β细胞功能和质量正变得越来越重要,因为这些草药可以摄取食物或饮料,可以预防2型糖尿病的发展。

槲寄生(槲寄生专辑coloratum伍迪寄生虫的)是一个通用名称的几个工厂的家庭,和大多数属韩国槲寄生的属于家庭檀香科。韩国槲寄生生长在橡树和一直被用作中药在欧洲,非洲和亚洲国家,包括韩国。韩国槲寄生提取物在水中(KME-W)和韩国的槲寄生提取物在乙醇(KME-E)不与任何毒性7),它已被证实,槲寄生具有免疫调节、抗糖尿病的,抗菌,抗癌,抗氧化和降血脂药活动8- - - - - -10]。这种植物还包含各种萜类、生物碱、凝集素、viscotoxins,糖类,单宁,木酚素、茶多酚(11,12];然而,其内容可能有所不同根据宿主树木从他们收集和该地区的增长。同样,组件和各种槲寄生提取物的生物活性根据不同提取溶剂用于生产解决方案。例如,三萜烯酸在水量化槲寄生提取物(pH值:7.3),和分析表明,齐墩果酸(1.1μ和桦木酸(0.9 g / mL)μg / mL)提取不到5%的收益率(12]。此外,高效液相色谱法(HPLC)分析由我们的研究小组(10]表明KME-E包含桦木醇、桦木酸和齐墩果酸但KME-W不。另一方面,KMW-W含有凝集素和viscothionins [10]。这些研究结果表明,两种不同的槲寄生提取物具有不同的生物活性成分。这一结果表明,这些化合物应该评估来确定其抗糖尿病的活动的差异。

因此,本研究旨在确定的长期消费KME-W或KME-E不同的抗糖尿病的活动在nonobese 2型糖尿病大鼠的动物模型和任何差异是否会与主要萜类化合物(桦木醇、桦木酸和齐墩果酸)中发现的槲寄生提取物。这些假设进行测试使用部分pancreatectomized (Px)接受高脂肪饮食。此外,该机制的抗糖尿病的活动桦木醇的提取通过调查评估,桦木酸、齐墩果酸在脂肪细胞和胰岛瘤细胞。本研究的主要目的是确定哪些元素中主要萜类化合物(桦木醇、桦木酸和齐墩果酸)提取的最突出的衰减和辅助胰岛素抵抗和胰岛素分泌和细胞增殖的增强作用。

2。材料和方法

2.1。水提取物槲寄生和萜类化合物的内容

新鲜的槲寄生生长在橡树收集2011年1月在原太白山脉,大韩民国,储存在−70°C到使用。准备槲寄生提取物、槲寄生(100克)清洗后在室温下干燥,冷冻干燥粉。粉中提取蒸馏水在100°C 12 h或70%乙醇在70°C 12 h,它们中的每一个离心机在4°C 10000 g 20分钟。上层清液冻干在冷冻干燥器中脱。

的内容总酚类化合物在水或70%乙醇提取测定使用Folin-Ciocalteu试剂和表达为毫克没食子酸当量·g⁻¹。总黄酮类化合物的内容被修改的方法测量报告的修改戴维斯方法和芦丁作为标准。每个free-dried提取物溶解在70%乙醇和注射器过滤器去除未溶解的内容。萜类化合物在每个提取进行了分析通过高效液相色谱使用Luna C18柱(4.6毫米×250毫米ID 5μ米)。流动相溶剂由乙腈和0.2%醋酸水(8:2 v: v)和权力平等主义的洗脱流速为0.5毫升/分钟和40°C柱温度和紫外线检测在210海里。萜类化合物的内容从每个标准的计算如桦木酸、齐墩果酸、桦木醇。

2.2。动物和道德

八周大男性Sprague-Dawley老鼠(称重g)分别被安置在不锈钢的笼子里在一个被控制的环境中(23°C和12 h光/暗周期)。所有外科手术和实验过程进行根据指南的动物保健和使用Hoseo大学审查委员会,韩国(2013 - 01)。大鼠胰腺切除术使用90%细川护熙技术(13]或接收一个虚假的胰腺切除术(虚假)麻醉诱导的肌内注射氯胺酮和甲苯噻嗪(100毫克/公斤体重,职责)。Px老鼠表现出2型糖尿病的特点(随机血糖水平超过180 mg / dL),而虚假的老鼠没有(13,14]。

2.3。实验设计

特制产品的用量在目前的研究是基于一项研究[10)提供的饮食含有0.2%或0.6%的70% KME-E或KME-W Px老鼠。我们的初步研究表明,低剂量(0.5 - 2μg / mL)韩国槲寄生水提取物治疗肿瘤坏死因子-低α264.7原始细胞中表达方式存在剂量依赖的相关性与脂多糖激活,但高剂量10μg / mL不会改变效果(10]。在目前的研究中,30 Px老鼠被随机分配到以下三组,根据不同的饮食:(1)0.6%的KMW-W KME-E(2) 0.6%的70%,(3)0.6%的葡聚糖(Px-control)。此外,10 sham-operated老鼠(正常控制)收到包含0.6%葡萄糖的高脂肪食物。所有实验动物能够自由水和高脂肪饮食包含指定提取或葡萄糖在8周实验时间。高脂肪饮食是修改semipurified ain - 93配方实验动物(15),由40%能源来自碳水化合物,20%能源来自蛋白质,45%能源来自脂肪。主要的碳水化合物、蛋白质、淀粉和糖和脂肪来源,酪蛋白(牛奶蛋白)和猪油(CJ有限公司,首尔,韩国),分别。

通宵禁食血清葡萄糖水平,食物和水的摄入量和体重测量每个星期二上午10点。口服葡萄糖耐量试验(OGTT)在一夜之间禁食动物每三周进行口头管理2 g葡萄糖/公斤体重。血清葡萄糖和胰岛素测定尾出血在0,10、20、30、45、60、90和120分钟后葡萄糖负荷。血清葡萄糖水平进行了分析与葡萄糖分析器II(贝克曼,帕洛阿尔托,CA)和血清胰岛素和瘦素水平是衡量未及工具包(Linco研究、Billerica MA)。血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活动是衡量标准比色方法使用商业套装(峨山制药、首尔、韩国)。

2.4。高血糖的夹

七周的治疗后,导管手术植入的右颈动脉和左颈静脉有意识和隔夜禁食每组十大鼠麻醉后氯胺酮和甲苯噻嗪。植入后5 - 6天,高血糖的夹了一夜之间在自由和禁食大鼠来确定胰岛素分泌能力描述在先前的研究13,16,17]。夹中,葡萄糖是注入来维持血清葡萄糖水平的5.5毫米高于基线和血清胰岛素水平在指定的时间测量。夹后,老鼠免费提供食物和水两天,第二天他们失去了食物的16个小时。老鼠麻醉与氯胺酮和甲苯噻嗪和人类常规胰岛素(5 U /公斤体重)通过下腔静脉注射的老鼠。十分钟后,他们被斩首和组织迅速收集,在液态氮冷冻,储存在−70°C进行进一步的实验。为了确定肝脏中糖原含量,其溶解产物在3000转离心10分钟和1.5 N的上层清液脱去蛋白质的高氯酸。葡萄糖浓度的糖原含量计算来源于糖原水解α淀粉转葡糖苷酶在酸缓冲18]。甘油三酸酯提取chloroform-methanol(2: 1卷/期)从肝脏和resuspended纯氯仿(19]。三酰甘油浓度确定使用装备一条对付责难者(年轻的东制药。首尔,韩国)。

2.5。Euglycemic血糖钳

导管插入后右颈动脉和左颈静脉在第七周的实验时间,一个euglycemic血糖钳进行禁食有意识的老鼠来确定胰岛素抵抗(如前所述)(19,20.]。[3 -³H]葡萄糖(NEN生命科学,波士顿,MA)不断注入的速度在4小时内0.05μCi /分钟。基底肝葡萄糖输出测量血液收集在100年和120年开始几分钟后(3 -³H]葡萄糖输液。然后启动连续注入人类常规胰岛素(Humulin,礼来公司,印第安纳波利斯)发起的速度20 pmol×公斤⁻¹×敏⁻¹血浆胰岛素浓度提高到约1100点210 - 240分钟。动脉血液样本收集每隔10分钟对葡萄糖估计,和25%葡萄糖注入的比例都是需要夹血糖水平约6毫米。等离子体的测定[3 -³H]葡萄糖浓度,血浆与ZnSO脱去蛋白质₄和Ba(哦)₂、干去除³H₂O, resuspended水,衰变/分钟(dpm)³H记录。的血浆浓度³H₂O是由之间的区别³H数没有和干燥。全身葡萄糖摄取和基底葡萄糖营业额确定的比率(³H]葡萄糖输注率的具体活动血浆葡萄糖(dpm /μ摩尔)在最后30分钟的各自的实验。肝葡萄糖生产血糖夹紧状态是由减全身葡萄糖吸收的葡萄糖输注率。

2.6。免疫印迹分析

收集到的老鼠肝脏与胰岛素刺激10分钟和裂解细胞溶解缓冲区包含一个20毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH值7.4)包含2毫米EGTA, 137毫米氯化钠,NP40 1%, 10%的甘油,和12毫米α甘油磷酸和蛋白酶抑制剂。30分钟后在冰上,溶解产物离心10分钟12000转4°C。后测量蛋白质含量溶菌产物通过生物Rad蛋白质分析工具包(大力神,CA)、溶菌产物与等量的蛋白质(30 - 50μg)是解决与sds - page及免疫印迹的磷的抗体一种蛋白激酶,phospho-glycogen合成酶激酶- (GSK) 1β,GSK-1β(细胞信号技术,贝弗利,MA)和磷酸烯醇丙酮酸carboxykinase (PEPCK),慷慨地提供了获得博士的范德比尔特大学(16,19]。蛋白表达的强度是决定使用ImageQuant TL (Amersham生物科学,皮斯卡塔韦,新泽西)。每组实验重复三次。

2.7。体外刺激葡萄糖摄取和胰岛素信号

刺激葡萄糖吸收进行了分析通过测量吸收2-deoxy-D - [³H]葡萄糖3 t3-l1脂肪细胞,如前所述[21]。短暂,脂肪细胞被播种在24-well板块(4×10⁴细胞每)在高葡萄糖杜尔贝科的修改鹰中(DMEM;表达载体,卡尔斯巴德,CA)含胎牛血清(的边后卫)6小时。媒体转向低葡萄糖DMEM(表达载体)含0.3%牛血清白蛋白(BSA)和两个浓度(5和50μ米)的桦木醇、桦木酸或齐墩果酸;他们培养16个小时37°C。抗糖尿病的药物罗格列酮(0.5或2μ米)作为一个积极的控制。媒体随后转向Krebs-Ringer-Hepes缓冲区(KRH)包含相应的化合物和0.2或10纳米胰岛素和孵化30分钟37°C。潜伏期后,葡萄糖吸收测量使用0.1 10分钟μCi 2-deoxy-D - [³H]葡萄糖和1毫米葡萄糖作为最终浓度。特异性的葡萄糖吸收测定与提取在缺乏胰岛素治疗后,和放射性保留的细胞溶解产物是决定Wallac液体闪烁计数器(珀金埃尔默,沃尔瑟姆,MA)。

治疗后50μM的桦木醇、桦木酸或齐墩果酸16小时,细胞溶解产物的溶解磷的缓冲区,然后用抗体免疫印迹一种蛋白激酶,phospho-GSK-1β,GSK-1βphospho-AMPK, AMPK(细胞信号技术)。

2.8。过氧物酶体Proliferator-Activated受体(PPAR)γ受体激动剂活性

293年人类胚胎肾细胞是暂时性的转染与过氧物酶体扩散者响应要素(PPRE)荧光素酶构建(萤火虫pGL3-DR-1-luciferase;0.12μDNA g·好⁻¹),pSV-SPORT-PPAR -γ表达载体(0.12μDNA g·好⁻¹),pSV-SPORT-retinoid X受体-α向量(0.08μDNA g·好⁻¹),renilla phRL-TK向量(10 ng DNA·⁻¹)与Lipofectamine +试剂(表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的协议。PPAR -γ活动测量所述在先前的研究21,22]。转染2 h后,车辆(DMSO)或5或50μM桦木酸、齐墩果酸或桦木醇添加到媒体40 h和媒体改变血清DMEM包含0.1% BSA,也包含了各自的提取,12 h (22]。萤火虫(PPRE-luciferase)和renilla荧光素酶活动测量使用Dual-Luciferase记者分析系统(Promega) Aureon PhL光度计(Aureon生物系统公司,维也纳,奥地利)。萤火虫荧光素酶活动的比率和renilla荧光素酶活动计算。

2.9。分子生物学胰岛素分泌和细胞生存能力

小鼠胰岛瘤细胞(Min6细胞)生长如前所述,公园等。22在6×10 24-well板⁴细胞每口井的高葡萄糖DMEM含有0.3% BSA和车辆或5或50μ米的桦木酸、齐墩果酸或桦木醇16 h。Exendin-4 (2.5 nM,σ有限公司,圣路易斯,密苏里州)治疗细胞作为一个积极的控制。与PBS洗细胞后,Min6细胞治疗与车辆或各自的萜类化合物在低(2毫米)或高葡萄糖(20 mM) KRH缓冲区包含20毫米消息灵通的pH值7.4为30分钟。胰岛素浓度在上层清液从所有治疗方法是使用放射免疫检定法测量的工具(Linco研究、圣查尔斯、钼)和帕卡德眼镜蛇gamma-counter(帕卡德仪器有限公司公司,梅里登,CT)。

Min6细胞细胞生存能力是衡量处理车辆(DMSO)或5或50μ米的桦木酸、齐墩果酸和桦木醇与细胞增殖和2.5 nM exendin-4 WST-1从罗氏诊断试剂测定工具有限公司(印第安纳波利斯,)Aureon板读者(Aureon生物系统公司,维也纳,奥地利)。工具包是一个修改四唑盐可以通过新陈代谢活跃的细胞裂解水溶性甲瓒,这是估计的数量在450 nm ELISA板读者(23]。

2.10。统计分析

所有数据都表示为意味着±标准差(SDs),和所有统计分析使用SAS 9.1版(SAS研究所,卡里,NC)。在动物研究中,Px-control显著差异,KME-W, KME-E,正常控制集团与单向方差分析(方差分析)。在细胞研究,控制之间的显著差异,单一化合物,和积极的控制条件也与单向方差分析。在两组研究中,在主效应显著差异组中发现使用事后图基的测试。一个值< 0.05被认为是显示统计学意义。

3所示。结果

3.1。总酚类化合物和黄酮类化合物

KME-E含有1.7 - 70%和2.7倍更高水平的总多酚和类黄酮,比KME-W分别。此外,KME-E包含桦木醇、桦木酸和齐墩果酸,而KME-W没有(表1)。

3.2。能量代谢

Px-control集团8周实验期间获得更少的体重和有附睾的脂肪量低于正常控制集团(表2)。然而,在Px-control卡路里摄入量高于正常控制组即使日常能源支出没有差别。这表明,较小的体重由Px-control老鼠尿葡萄糖损失有关。KME-W和KME-E群体倾向于获得更多的重量比Px-control组,但差异不显著(表2)。每日能量摄入和能源支出KME-W和KME-E组没有显著差异,但KME-W组的累积能量摄入低于KME-E组。因此,治疗KME-W KME-E可能减少尿葡萄糖的损失。

有趣的是,附睾的脂肪大量KME-W和KME-E组低于Px-control组(表2);事实上,脂肪量血清中瘦素水平最高的正常控制集团和后代的顺序Px-control, KME-W, KME-E组。这些差异可能与身体使用的能源。老鼠Px-control和正常控制组织通常使用脂肪和碳水化合物作为主要能源,而老鼠KME-W和KME-E组脂肪作为主要能量源(表使用2)。因此,糖尿病Px老鼠表现出有点恶化能量代谢与非糖尿病患者相比正常控制(假的)老鼠。KME-W和KME-E预防损伤在糖尿病老鼠,尽管在一个不完整的方式。

因为特制产品可能有潜在的负面影响肝脏、血清ALT和AST活动已知的肝损伤指标测量在当前研究。水平在正常范围内,他们在KME-W和KME-E治疗而减少。他们不是在糖尿病和非糖尿病患者控制明显不同。

3.3。葡萄糖耐量

后一夜之间快速、Px-control组的血清葡萄糖水平明显高于非糖尿病患者的正常控制集团,而正常控制组血清胰岛素水平明显高于Px-control组。这些结果与部分切除胰腺。葡萄糖负荷后,糖尿病组的血清葡萄糖水平增加了50分钟,但他们达到40分钟的非糖尿病患者组(图1);这些Px-control组和减少最低水平的顺序KME-W, KME-E,正常控制。然而,鼎盛时期,KME-E组的血清葡萄糖水平并不低的正常控制集团(图1)。口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的结果表明,分子生物学胰岛素分泌和胰岛素敏感性可能是摄入KME-W和KME-E修改。

3.4。分子由高血糖的夹胰岛素分泌

在目前的研究中,分子生物学胰岛素分泌能力的存在β细胞的功能。高血糖的夹过程期间,血清胰岛素水平见顶2到5分钟后注入葡萄糖进入颈静脉,然后拒绝最低点在10分钟;这被称为第一阶段胰岛素分泌。血清葡萄糖水平持续超过100 mg / dL高于基线血清葡萄糖水平60 - 90分钟,和血清胰岛素水平也增加了从最低点在10分钟,然后被维持在一定的水平,称为第二相胰岛素分泌(图2)。糖尿病Px-control组表现出胰岛素水平,约59%和81%的第一和第二相胰岛素分泌水平,分别为非糖尿病患者的正常控制集团(表2)。这些发现表明减少β细胞质量后切除胰腺主要导致第一阶段胰岛素分泌的减少。KME-E,但不是KME-W,阻止这些削减在第一和第二相胰岛素分泌Px-control组,但没有这样做同样的程度就像在正常控制集团(表中2)。

必要的葡萄糖输注率血清葡萄糖水平维持在5.5毫米高于基线水平在高血糖的夹Px-control组低于正常控制组,而在高血糖的胰岛素敏感性降低Px-control组(表状态3)。在高血糖的状态,KME-E增加了葡萄糖输注率和胰岛素敏感性水平高于发现Px-control组但低于在正常控制集团而KME-W增强胰岛素敏感性KME-E(表3)。这些结果表明,KME-E促进分子胰岛素分泌能力和胰岛素敏感性在糖尿病大鼠高血糖的条件下,KME-W增强胰岛素敏感性,但并不影响胰岛素分泌能力。

3.5。β电池的质量

胰岛素分泌能力与胰腺癌有关β细胞质量(24,25]。在目前的研究中,胰腺β电池质量是由胰腺的重量乘以计算β单元格区域。我们发现Px-control组更大β细胞面积比正常控制集团,这增加的显著扩张β细胞质量由于胰岛素的胰腺再生的作用。由于切除胰腺,胰腺β细胞的质量Px-control组正常控制的集团56.4%的股权。KME-E组,但不是KME-W集团表现出增加β细胞面积和β细胞质量与Px-control组相比,但这种增长是不一样大的正常控制集团(表4)。这增加了β细胞面积与个人的数量和大小β肽。事实上,个人β肽在Px-control规模更大的集团比正常控制集团,这意味着有更少的细胞比正常控制Px-control组相同大小β细胞面积(表4)。这是通过评估确认β细胞增殖和细胞凋亡。β细胞增殖是正常控制组大于Px-control组,但Px-control组的细胞凋亡要高得多,这意味着Px-control组有更少β肽。

KME-W和KME-E组显示较小尺寸的个体β肽相对于那些Px-control组。另一方面,KME-E,但不是KME-W组显示增加扩散β肽与Px-control组相比,而KME-W和KME-E组表现出减少β细胞凋亡(表4)。这些结果表明,KME-E增加β细胞增生和质量可以保持胰岛素分泌,维持足够弥补胰岛素抵抗β细胞的功能。

3.6。胰岛素敏感性在Euglycemic血糖钳

在euglycemic血糖钳,全身葡萄糖利用率的措施表示正常下全身胰岛素抵抗的存在。夹中,胰岛素被注入到颈静脉血清胰岛素水平可以达到约1100点,和注入葡萄糖导致胰岛素水平100 mg / dL或euglycemic状态。约1100点,葡萄糖输注率和全身葡萄糖摄取低糖尿病Px-control组比非糖尿病患者的正常控制集团(图3(一个))。葡萄糖吸收被KME-E和KME-W改变,但血糖状态下葡萄糖输注率增加到最大程度的对照组;这是紧随其后的是KME-W KME-E,正常控制组织,按升序(图3(一个))。基底下肝葡萄糖输出水平和血糖状态没有抑制糖尿病Px-control组相对于非糖尿病患者正常控制集团(图3 (b))。KME-E,但不是KME-W,减少肝脏葡萄糖输出基础状态下大约27.4%相对于比较图Px-control组。血糖状态,肝葡萄糖输出Px-control集团相比增加1.9倍的正常控制集团,而KME-E KME-W镇压这增加了18.2%和43.0%,分别。KME-E-induced抑制导致正常控制集团的价值观类似(图3 (b))。

3.7。肝脏胰岛素信号

糖尿病Px-control组少糖原存储,但增加肝脏甘油三酯含量与非糖尿病患者相比正常控制。KME-E防止肝糖原的恶化和甘油三酯储存(图4(一)),这些变化是肝胰岛素信号,这是由评估一种蛋白激酶的磷酸化和GSK-1决定β并在肝脏PEPCK的表达。一种蛋白激酶和GSK-1的丝氨酸磷酸化率β是减毒Px-control组较正常控制集团(图4 (b))。这种磷酸化是升序的强KME-W和KME-E,此外,磷酸化增加KME-E组在正常控制组。与一种蛋白激酶磷酸化,PEPCK Px-control组的表达高于正常控制集团,这是减少KME-E组(图4 (b))。

3.8。刺激3 t3-l1脂肪细胞葡萄糖摄取和PPAR -γ活动

最可能有效成分的特制产品解决方案是桦木醇,桦木酸、齐墩果酸,这些化合物的insulin-sensitizing影响测试通过用低剂量的胰岛素治疗(0.2海里)。后管理0.2 nM的胰岛素、葡萄糖吸收衰变(dpm) /每分钟μg蛋白。此外,桦木醇浓度的5和50 mM刺激葡萄糖摄取增加了2.1和3.2倍,分别,但这些增长不到那些罗格列酮治疗引起的。桦木酸治疗也升高刺激葡萄糖吸收剂量依赖性的方式比桦木醇治疗但程度较轻。相比之下,齐墩果酸只有最低限度增强刺激葡萄糖摄取。因此,桦木醇和桦木酸表现出适度的insulin-sensitizing活动(图5(一个))。所有的桦木醇、桦木酸和齐墩果酸改进刺激胰岛素信号(一种蛋白激酶的磷酸化和GSK-1β)3 t3-l1脂肪细胞和桦木酸会使它最(图5 (b))。此外,桦木酸增强AMPK的磷酸化(图5 (b))。

桦木醇,桦木酸增加PPAR -γ活动,但桦木醇是PPAR激动剂——更有效γ活动比桦木酸。然而,PPAR -γ桦木醇相关竞赛的活动没有高达罗格列酮(2μ米),这是一个已知的商业PPAR -γ受体激动剂(图6)。因此,桦木酸和桦木醇导致轻度和中度PPAR -γ织活动,分别。

3.9。分子生物学在Min6细胞胰岛素分泌和细胞生存能力

在胰岛瘤Min6细胞胰岛素分泌增加high-glucose倍(20 mM) DMEM媒体较低(2毫米)媒体。桦木醇、桦木酸和齐墩果酸不刺激胰岛素分泌的低糖媒体(数据未显示),但齐墩果酸会使胰岛素分泌剂量依赖性的方式在high-glucose媒体。不过,这种增长是不相同的学位,由exendin-4(2.5海里),这是一个已知insulinotropic代理(图7(一))。

相对于对照组,齐墩果酸细胞增殖增加剂量依赖性的方式,和桦木酸也增强了细胞增殖,但小于50所造成的μ齐墩果酸的M(图7 (b))。因此,齐墩果酸对insulinotropic行动。

4所示。讨论

KME-W有更高浓度的外源凝集素和viscothionins,与免疫相关的调制,而KME-E常用药用的浓度,与代谢相关疾病。在目前的研究中,常用药用KME-E但不是KME-W中发现,这种差异导致了不同的糖尿病大鼠的抗糖尿病的活动。2型糖尿病时诱导增强胰岛素分泌不能弥补增加水平的胰岛素抵抗。因此,胰岛素抵抗和的严格监管β细胞功能扮演重要角色在2型糖尿病的预防和延缓其进展。

目前的研究结果表明,在高血糖的夹,分子生物学胰岛素分泌,尤其是第一阶段胰岛素,KME-E是强,但不是在KME-W组相比Px-control组。KME-E也增强β细胞质量更大程度比Px-control观察组。此外,KME-E减少全身胰岛素抵抗相对于观察Px-control组,而肝胰岛素抵抗是减毒Px-control, KME-W和KME-E组,按照降序排列。因此,KME-E预防糖尿病的葡萄糖代谢恶化Px老鼠通过桦木醇的行为、桦木酸和齐墩果酸。桦木醇强刺激葡萄糖摄取增加PPAR -γ活动在3 t3-l1脂肪细胞,而齐墩果酸增强分子胰岛素分泌和细胞增殖Min6胰岛瘤细胞。因此,KME-E可能是一个潜在的2型糖尿病患者治疗代理。我们所知,没有研究评价胰岛素分泌和胰岛素抵抗的调制的抗糖尿病的活动。

特制产品一直被用作中药在欧洲,非洲和亚洲国家,包括韩国。分析各种原油的酒精提取物和纯化特制的分数显示,这些产品具有降血压药,低血糖,antilipidemic,抗氧化,抗炎,抗菌活动和倾向于改善健康问题,如糖尿病、高血压、关节炎、癌症疼痛,(26]。Adaramoye et al。8)报道,3周的治疗与非洲槲寄生methanolic提取降低空腹血糖浓度和糖化血红蛋白(HbA1c)水平的程度与格列本脲治疗糖尿病大鼠体外实验。然而,这些发现并没有透露任何变化在胰岛素分泌和胰岛素抵抗。Orhan et al。27)发现槲寄生提取物的抗糖尿病的活动高度依赖于寄主植物物种和提取溶剂使用。例如,这些作者证明了7天的治疗ethanolic提取欧洲槲寄生在松树种植生产最大的降低血清葡萄糖水平在OGTT在正常和糖尿病大鼠体外实验。此外,最大的影响methanolic非洲槲寄生提取物(400毫克/公斤)Persea美国,鳄梨树,减少alloxan-induced糖尿病大鼠的血糖水平和格列本脲治疗24小时后管理(28]。这项研究还没有发现毒性在槲寄生提取物来自五个不同的宿主树木。本研究第一次使用特制生长在橡树提取物的抗糖尿病的活动进行调查。大多数以前的研究用四氧嘧啶或链脲霉素诱导糖尿病实验动物,这些化合物被摧毁β通过自由基的生成肽(8,27,28]。因此,槲寄生可能降低血糖水平,减少自由基的水平,部分预防β细胞损伤。

在目前的研究中,KME-E发挥优越的抗糖尿病的活动相对于KME-W增效β细胞的功能和质量,减少胰岛素抵抗在2型糖尿病老鼠Px。这些影响很可能与常用药用的行为有关,如桦木醇、桦木酸、齐墩果酸,KME-E在场。目前的研究中,细胞培养分析的桦木醇、桦木酸通过PPAR -增强刺激葡萄糖摄取γ在脂肪细胞活动,而齐墩果酸会使分子生物学在胰岛瘤细胞胰岛素分泌。与这些结果一致,多项研究表明,桦木醇,桦木酸提高葡萄糖代谢。使用食源性肥胖动物模型,唐et al。29日)表明,桦木醇降低胆固醇和脂肪酸的生物合成通过抑制固醇调节元件结合蛋白(如)的途径。它也表明,桦木醇系统大大提高了脂联素的表达,脂蛋白脂肪酶,PPAR -γ白色脂肪组织,可以改善胰岛素敏感性和葡萄糖代谢29日]。此外,Wan et al。30.)报道,桦木醇和桦木酸抑制SREBP-1及其目标基因的表达与脂肪酸在肝细胞合成,导致保护急性ethanol-induced脂肪肝。同样,桦木酸更容易减轻非酒精性脂肪肝病的AMPK /哺乳动物的雷帕霉素靶细胞,如信号通路与食源性肥胖小鼠(31日]。在目前的研究中,通过磷酸化桦木酸激活AMPK在3 t3-l1脂肪细胞。因此,桦木醇KME-E和桦木酸组件可能扮演了一个重要的角色在葡萄糖代谢的改善提高胰岛素敏感性的脂肪组织和肝脏糖尿病老鼠Px。

2型糖尿病强烈与胰腺癌有关β细胞功能障碍,影响β电池质量。在目前的研究中,KME-E,但不是KME-W,强分子胰岛素分泌β在糖尿病Px老鼠细胞增殖,表明这个KME-E的齐墩果酸成分造成的。齐墩果酸对糖尿病动物的抗糖尿病的活动;这些活动主要是通过增强胰腺解释道β细胞功能和减少β细胞凋亡(32,33]。此外,齐墩果酸变弱肝胰岛素抵抗通过抗氧化、降血脂药和抗炎活动(34,35]。因此,齐墩果酸可以改善糖尿病症状更容易β细胞功能,从而改善胰岛素抵抗,特别是在肝脏。

有人建议,特制产品是有毒的肝脏由于几个组件,包括凝集素(7]。初步研究结果从我们研究小组表明,特制产品时通常是无毒煮超过10个小时,因为有毒物质可能变性;我们还发现KME-W含有凝集素但KME-E不(10]。因此,KME-E低得多的机会诱导肝毒性。金等。36)也表明提取槲寄生生长在橡树的LD50老鼠和5000毫克/公斤以上的不透露extract-related副作用高达1000毫克/公斤体重/天在大鼠慢性消耗的研究。韩国槲寄生是接受安全消费。目前的研究还表明,KME-W和KME-E没有导致增加血液中的天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶活动,这表明肝脏也不是被提取。

5。结论

KME-E改善葡萄糖耐量通过肝胰岛素抵抗的改善和改变的β细胞的功能与体积糖尿病老鼠Px。KME-E与KME-W相比的优越的抗糖尿病的作用可能是由于桦木醇的存在,ethanolic桦木酸、齐墩果酸的提取。也表明,桦木醇和桦木酸作为PPAR -γ受体激动剂和刺激葡萄糖摄取增加,AMPK的磷酸化3 t3-l1脂肪细胞。此外,齐墩果酸增强β细胞的功能和质量。因此,KME-E可能是一个潜在的治疗剂用于治疗2型糖尿病患者。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Byoung-Seob Ko和Sunmin公园设计研究协议,分析了统计分析,并准备期末论文。宣儿康和Bo Reum月球进行实验和分析数据。金啊琉克参与讨论和修订。所有作者通过了期末论文。

承认

这项工作是支持的东方医学研究所的资助(批准号K12080)。