文摘
客观的。本研究调查的元素组成不加糖的天然可可粉(UNCP),它对一氧化氮的影响,及其与大剂量王亚南潜力同时执政期间蒿甲醚/ lumefantrine (A / L)。方法。宏观和微量元素UNCP和荧光光谱进行了分析。三十(30)男性因为豚鼠被分成五组。组3(低剂量),4(中等剂量)和5(高剂量),采取预防性口服UNCP 14天收到的动物。组1收到蒸馏水(14天)和组2 A / L在过去3天(12到14天)。euthanisation后,生化和在所有组织进行组织病理学检查。结果。UNCP植物化学的分析显示,皂甙,黄酮类、单宁和心脏苷。38(38)宏观和微量元素被发现。UNCP产生显著降低ALT、高山、GGT、AST水平。观察总蛋白质含量显著增加一个/ L + UNCP执政期间相比,75毫克/公斤/ L组。组织病理学检查支持可可政府的保护作用。UNCP管理增加一氧化氮水平149.71% ()控制。结论。UNCP增加一氧化氮水平和潜力王亚南在/ L。高水平的铜是观察在高每日消耗的UNCP可能是有害的。
1。介绍
疟疾是一种感染的雌性按蚊传播。这是一个重大的公共卫生问题在热带和世界领先的传染病杀手疾病之一。不能过分强调疟疾带来的高死亡率特别是在非洲的一些地区。每年有350万人患疟疾在加纳(1,2]。抵抗疟疾的管理是一个重大挫折,因此需要国家审查和实施新的抗疟药物政策,以确保有效的病例管理,减少发病率和死亡率(3]。由于增加了治疗效果,降低细胞毒性,延缓或预防耐药性的发展,结合药物治疗方案建议在单一疗法(4]。以青蒿素为基础的联合疗法(ACT)已被世界卫生组织推荐使用(5,6]。蒿甲醚/ lumefantrine (A / L)是目前使用的联合疗法之一。
青蒿素衍生物有令人印象深刻的parasiticidal属性在活的有机体内和在体外但是目前有问题的治疗失败,阻力,增加情况下的肝毒性作用[7- - - - - -9]。一些国家已经考虑增加剂量的A / L治疗为了逮捕阻力的问题(10),但剂量的增加意味着会有副作用,增加不良反应,肝毒素的影响(9]。事实上,人们担心频繁使用/ L的一些器官系统(9]。考虑到目前为止/ L是一个最有效的组合疗法,药物引起的肝毒性的问题需要解决。A / L的另一个效应是影响一氧化氮的水平,它可以降低一氧化氮水平。然而,其他研究表明,l提高一氧化氮水平作为补偿机制在一氧化氮水平降低的情况下(9]。
不加糖的天然可可粉(UNCP)是加纳人用作饮料和营养食品。可可粉的抗氧化性质已经被充分研究过(11- - - - - -13),甚至各种制造过程后发现不变(14]。据报道,它包含被称为黄酮醇的抗氧化多酚王亚南[15,16)和抗疟效应(17,18]。可可的化学成分已经被研究使用不同的方法。UNCP含有约1.9%的可可碱和0.21%的咖啡因(19- - - - - -21]。多酚在不同化合物也被证明在几项研究施加王亚南活动(22- - - - - -25]。例如,polyphenol-rich分数由核桃仁薄膜已经评估了其在小鼠(王亚南23]。研究在可可粉表明其定量组件,比如14 N-phenylpropenoyl-L-amino酸,N -[4′羟基- (E)肉桂酰]-L-tryptophan,和N - [4′-hydroxy-3′甲氧基- (E)肉桂酰]-L-tyrosine [26]。其他研究也证明茶多酚的角色如cynarin isochlorogenic酸,绿原酸,luteolin-7-glucoside,和两个有机酸、咖啡和奎尼,从Cynara scolymus王亚南活动(27]。此外,可可或黄酮醇提高一氧化氮水平也被发现有王亚南在急性肝损伤的影响他们的抗氧化性能18,28,29日]。进一步,丹宁酸,配糖体、类黄酮和皂苷也被卷入王亚南在几项研究。UNCP也被确定的总类黄酮含量(30.- - - - - -34]。这是一个强烈的背景调查有益影响UNCP可能在改善这一重要药物的肝毒素的影响a / L。
重要的是尽管所有这些组件的影响UNCP注意微和宏元素出现在UNCP也能够干扰的可用性次生代谢物在UNCP容易调节其药理作用[35]。药用植物中的有毒重金属的存在可以另一方面对消费者健康造成威胁(35,36]。尽管UNCP包含一些基本粒子,相关性UNCP的药理作用,这些宏观和微量元素没有被建立。它已经建立,例如,锌有益王亚南行动37,38]。同时摄入UNCP和A / L是一个常见的做法在加纳人遭受简单的疟疾接受治疗/ L。重要的是建立的有益效果和明显的不利影响的同时消费UNCP和一个/ L是一种生活方式对加纳人尤其是UNCP和高度的可负担得起的价格补贴/ L。
本研究旨在确定UNCP的元素组成及其对一氧化氮水平的影响和评估其王亚南潜力/ L-induced肝脏毒性在他们同时摄入雄性豚鼠。
2。材料和方法
2.1。能量色散x射线(EDXRF)测量
UNCP样品(批号BT620IT;FDA / dk06 - 070)是获得从一个超市。180微米的样本已筛使用筛和三个样品准备和已筛筛孔尺寸(孔径)的180年μ米成细粉。这是保存在干燥well-labelled容器。pelletation之前,样品保存在烤箱在一夜之间60°C。一式三份重样本,4000毫克/样本,分别添加到900毫克Fluxana H Elektronik bm - 0002 - 1 (Licowax C超细粉PM-Hoechstwax)作为粘结剂(由于其形态和自然宽松的);混合使用RETSCH混合器是均质机(MM301) 3分钟,按下手动SPECAC液压机为2分钟的最大压力限制15吨(15000千克)的成球32毫米直径3毫米厚度的后续光谱仪测量。时间pelletation和测量之间保持短,以避免变形的平面丸(39]。工厂校准斯派克光谱仪实验室2000(从地质调查部门,阿克拉,加纳)增强与多轴几何用于同时分析和测量样品的元素含量。
2.2。UNCP解决方案的准备
计算量(9.6 g)的温暖UNCP是溶解在蒸馏水(40毫升)与搅拌(直到一切进入解决方案)的浓度为240毫克/毫升(UNCP)。这是管理的豚鼠组3,4,5,通过口服填喂法各自的剂量。
2.3。准备一个/ L的解决方案
20毫克/毫升的浓度的分散/ L(参照蒿甲醚)准备和管理的豚鼠UNCP治疗组每日剂量为75毫克/公斤体重3天通过口服填喂法。剂量计算参照蒿甲醚的剂量药物的组合。为实现这一目标,七十(70)平板电脑的诺华复方蒿甲醚®分散片(20/120毫克),这相当于1400毫克的蒿甲醚,溶于70毫升蒸馏水,搅拌直到完全同质的。
在所有情况下,新的解决方案UNCP和/ L在每个剂量之前就做好了准备。
2.4。植物化学的分析
植物化学的分析进行确定不加糖的天然可可中的各种成分(40]。
2.4.1。皂素测试
约0.5克UNCP在试管中加入水。试管中观察动摇了泡沫的形成。
2.4.2。单宁测试
约0.5克UNCP溶解在甲醇水溶液的80%(10厘米3)。刚做好的铁(III)氯的解决方案是添加和颜色变化进行了观察。
2.4.3。类黄酮试验
约0.1克UNCP加入80%乙醇(15厘米3)。镁钢屑被添加到滤液浓盐酸(0.5厘米3在10分钟),观察颜色变化。
2.4.4。强心苷的测试
约0.5克UNCP是溶解在氯仿(2厘米3)在试管中浓硫酸是精心添加到试管的一侧形成一个较低的层。
2.5。畜牧业
三十(30)雄性豚鼠(450 g和600 g)从野口购买纪念医学研究所,加纳大学的实验。动物们适应实验室环境前一周被用于研究和提供欧颗粒饲料和自来水随意。房间温度维持在20°C和12:12小时光/暗周期。自发行为的观察豚鼠实验过程进行了之前在笼子里。没有动物实验阶段之前显示出疾病的迹象。研究协议批准部门伦理和协议审查委员会和野口纪念堂医学研究所机构动物保健和使用委员会协议批准文号2013 - 01 - 3 e。
2.6。药品监督管理局
组的豚鼠分为5个,3 - 5收到UNCP在300年,900年和1500毫克/公斤,分别为14天。剂量的A / L是可可行政管理在过去的3天。组2只动物被给予一个/ L在过去3天而组1只收到车辆(水)。动物的重量被相应地每周和剂量调整。所有实验动物符合道德标准的指导方针诱导动物毒性(缴送工作,1996)。组1。控制(蒸馏水)组2。75毫克/公斤/ L(3天)组3。可可300毫克/公斤(14天)+ 75毫克/公斤/ L(3天)组4。可可900毫克/公斤(14天)+ 75毫克/公斤/ L(3天)组5。可可1500毫克/公斤(14天)+ 75毫克/公斤/ L(3天)。
2.7。生化检测
收集血液样本降主动脉和整除EDTA-2K管和普通管,分别的剂量。这样做是euthanisation后在乙醚麻醉动物。EDTA血液立即被分析为血液学的参数使用SYSMEX血液学Autoanalyser(神户,日本),而血清准备从平原管用于血液生化检查等临床化学测量丙氨酸转氨酶(ALT)或谷氨酸丙酮转氨酶(血糖)水平,碱性磷酸酶(ALP)、血清谷氨酸草酰乙酸的转氨酶(血清)、天冬氨酸转氨酶和伽马谷酰基转肽酶(GGT)。这些测定肝功能测试(融通)给肝脏的状态。
一氧化氮水平也是衡量使用格里斯试剂系统。总一氧化氮装备研发系统被用于这项研究。在此系统中,硝酸盐转化为亚硝酸盐使用硝酸还原酶之后总亚硝酸盐测量。
这个试验的原则决定了一氧化氮浓度硝酸酶转换的基础上通过硝酸还原酶亚硝酸盐。亚硝酸盐的反应是紧随其后的是比色检测作为一种偶氮染料格里斯反应的产物。然后基于格里斯反应两步酸化的重氮化反应产生一个nitrosating代理,与磺胺酸反应生成重氮离子。然后该离子耦合N——(1-naphthyl)乙二胺形成发色团的azo-derivative吸收光在540 - 570海里。
2.8。组织病理学研究
豚鼠迅速被安乐死,他们的肝脏切除和0.9%盐水洗。肝脏是存储在10%中性缓冲福尔马林。肝脏组织被切割和分段。用微分音切2μ米厚与haematoxylin-eosin肝脏切片和染色检查。染色组织观察与奥林巴斯显微镜(BX-51)和拍摄无穷4 USB科学相机(加拿大Otawa Lumenera公司)。
研究协议批准部门伦理和协议审查委员会和野口纪念堂医学研究所机构动物保健和使用委员会协议批准文号2013 - 01 - 3 e。
2.9。统计数据
结果报告为±SEM。执行统计分析使用单向方差分析(方差分析)学生紧随其后纽曼- - - - - -Keuls事后测试。统计学意义是;Dunnet多重比较分析中使用的测试是一氧化氮的水平。所有统计分析使用图垫棱镜5软件。
3所示。结果
3.1。能量色散x射线(EDXRF)测量
共有38(38)元素组成12个宏单元,(钠(Na),镁(毫克),铝(Al),硅(Si)、磷(P)、硫(S)、氯(Cl)、钾(K)、钙(Ca),钛(Ti)、锰(Mn)和铁(Fe)和26个微量元素,钒(V)、铬(Cr),钴(Co)、镍(镍)、铜(铜)、锌(锌),(Ga),镓砷(),铷(Rb)锶(Sr), (Y)、钇锆(Zr)、铌(Nb), (Mo)、钼锑(某人),(I)碘,铯(Cs)、钡(Ba), (La)、镧铈(Ce)、铪(高频),钽(Ta)、铅(Pb)、铋(Bi)、(Th)、钍和铀(U))(表1),识别和评估。
3.2。植物化学的分析
不加糖的天然可可粉的植物化学的分析显示,皂甙,黄酮类、单宁和心脏苷。
3.3。生化检测
3.3.1。肝功能测试
AST水平增加动物收到L / 75毫克/公斤81.97%相比,接受蒸馏水(对照组)治疗的患者而UNCP管理组下降变化百分比为80.91%,75.33%,和63.86%,分别与A / L相比管理集团()(图1)。
高山水平下降相比,组1组2 10.82%。高山水平组3、4、5增加变化百分比为14.95%,9.13%,和36.94%,分别相比,组2 ()(图2)。
GGT水平增加动物接受75毫克/公斤/ L 37.61%,减少了39.5%的可可治疗组相比,对照组()(图3)。
ALT水平增加集团给75毫克/公斤/ L 35.76%与对照组相比。ALT水平剂量300毫克/公斤,900毫克/公斤,和1500毫克/公斤下降百分比变化为43.05%,41.49%,和35.76%,分别比A / L管理集团()(图4)。
血清白蛋白水平略有减少/ L管理组,而水平略增加动物对待UNCP控件(相比)。总蛋白质含量降低(图/ L组7.89%5),胆红素水平与对照组相比增加了80.4%(图7)。UNCP管理组,总蛋白质含量增加了12.77%在1500毫克/公斤组胆红素水平减少39.35%在900毫克/公斤集团()(图6)。
3.3.2。一氧化氮水平
组3产生最大的增加(,,即,149.71%) in nitric oxide followed by group 4 (,,即,34.25%) and then group 5 (,,即,4.88%) when compared to group 1 (Figure9)。在剂量为900毫克/公斤(可可),被认为是最优在大多数研究中,只有轻微增加一氧化氮(,)。
3.3.3。组织病理学分析
肝组织学检查的样本是基于肝组织变化与接触毒素。这主要从急性慢性炎症相关的变化改变中央和microcirculatory血管扩张等,中央静脉充血,白细胞浸润,肝实质的干扰(坏死)。部分肝来自几内亚猪只接受为期3天的HD / L政府(75毫克/公斤)显示干扰肝实质(necrotised肝细胞)与高度拥挤和中央静脉扩张以及淋巴细胞浸润(图10 ())。这一发现表明严重肝损伤(摩门教的4 - 5)41]。
相比之下,从14日不加糖的天然可可政府检查肝部分(300、900和1500毫克/公斤),后跟一个为期3天/ L政府(75毫克/公斤)显示原状肝实质,不拥挤但中央静脉扩张,稍微扩张正弦曲线(数据10 (c),10 (d),10 (e))。这表明是一个轻微的改变(1 - 2的摩门教)具有高程度的可逆性。从对照组肝脏部分,只有蒸馏水显示安静的肝实质与拥堵中央静脉(图10 (b))。
4所示。讨论
上述研究表明,UNCP包含38个基本粒子组成12个宏观和26个微量元素被认为在执行药理作用的天然产物中扮演角色。粉的植物化学的成分也确定为黄酮类化合物,丹宁酸、皂苷、萜类、苷。
肝细胞薄膜变形与膜渗漏的肝细胞胞质内容体现的血清或血浆酶的重要高程。ALT、AST和高山已被证明是可靠的标记物的急性肝细胞损伤。标志酶,ALT AST是最可靠的,因为丰富的心脏肌肉,骨骼肌肉,肾脏和睾丸。因此,任何疾病状态影响肝组织显著提高血清水平的这些酶(42,43]。
在我们的研究中,A / L的ALT水平增加,AST, GGT,和胆红素,而白蛋白和总蛋白的水平减少表明肝毒性(人物的存在1- - - - - -4)。增加AST和ALT剂量依赖。正常情况下,肝毒性伴随着ALT水平显著升高超过正常上限的3倍。高山水平也会增加两倍多的上限水平或总胆红素时增加两倍多高山或ALT。此外,肝损伤可以是肝细胞(主要初始丙氨酸转移酶高度)或淤胆型(初始碱性磷酸酶升高)类型。然而,他们没有相互排斥和混合类型的伤害经常遇到[44]。为了区分肝脏疾病和提高高山相关条件下,血清GGT进行了测量。海拔在GGT可能表明肝细胞细胞膜的完整性被破坏(44,45]。
A / L管理是伴随着高海拔GGT水平。类似的研究也发现了一个/ L和其他青蒿素衍生物的肝毒性作用[9,45- - - - - -47]。此外,等其它抗疟药氯喹,阿莫地喹,奎宁,halofantrine也有报告称,提高血清ALT和高山和可能引起肝损害9,46,48- - - - - -50]。它也被证明在其他的研究中,A / L增加氧化剂如过氧化水平()和过氧化物(H2O2),导致氧化应激(48]。虽然这不是测量在这项研究中,众所周知,活性氧(ROS)生成过程中药物生物转化与蜂窝组件可以绑定和反应在肝脏引起肝脏损伤,从而损害肝功能(49]。考虑到这些机制,合理的药物有抗氧化活性或有能力减少氧化应激可用于防止有害的A / L对肝脏的影响。值得注意的是,海拔在豚鼠血清肝酶缺席使用UNCP 14天前一个/ L。UNCP及其衍生产品已被证明含有重要的抗氧化多酚抑制不同tumoral过程,表现出抗氧化和消炎作用50- - - - - -53]。王亚南展出的可可可能可能是由于多酚的抗氧化效果(54- - - - - -56]。
此外,UNCP增加动物中总蛋白和白蛋白水平与A / L管理集团(数字5和6)。总蛋白和白蛋白是用来评估肝脏的合成功能。总蛋白和白蛋白水平的降低进一步支持/ L的肝毒素的效果。相比之下,UNCP诱导显著提升总蛋白质,这可能是其王亚南的反映。UNCP并未导致白蛋白显著增加。此外,研究表明,可可不显著增加白蛋白水平(57]。这支撑了发现从这个实验。胆红素水平没有显著影响/ L和UNCP(图8)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
王亚南UNCP进一步证实的事实,没有管理后的组织学异常UNCP前/ L。我们的组织病理学研究显示,动物肝组织的损伤,仅接受一个/ L,干扰(坏死)肝实质(NeLP),高度拥挤和中央静脉扩张(闭路)和淋巴细胞浸润(LYM)在所有动物(图10 (b)),这种情况可以被描述为严重的摩门教根据Krastev[4和5之间41]。UNCP政府减少肝损伤的程度体现的不受干扰的肝实质的拥堵但是扩张中央静脉(轻微肝损伤)。总蛋白质含量往往是恢复(图6)。
动物收到各种剂量(300毫克/公斤,900毫克/公斤,和1500毫克/公斤)UNCP显示正常的拥堵和中央静脉扩张。然而,在一个动物接受1500毫克/公斤UNCP,观察,中央静脉扩张,充血。血液中高浓度的铜已被证明负责肝脏和胃肠道功能紊乱58]。因此,这可能观察受损肝脏的完整性可能是由于高水平的铜(表1在这个高剂量的UNCP)。这种级别的铜也被观察到在我们的研究中,能量色散x射线(EDXRF)分析UNCP显示宏观和微量元素的存在,包括铜0.2984毫克每4 g UNCP(1.71±表1)。1500毫克/公斤UNCP的铜含量超过正常的推荐日摄食量(RDA) 900μg(即。,more than 103.6% of RDA). Thus, caution should be taken against frequent high consumption of UNCP as a beverage.
本研究首次报道的王亚南UNCP / L-induced肝损伤豚鼠。类似UNCP效应在其他的研究已经证明,这是表明UNCP减少肝损伤小鼠的感染鼠体内(59),避免饮酒导致的肝损伤大鼠(60),对肝脏和肾损害和保护四氯化碳(61年]。
UNCP在一氧化氮的影响也被研究。一氧化氮已发现王亚南在急性肝损伤的影响。900毫克/公斤UNCP管理集团增加一氧化氮的水平。这个剂量水平已经被其他研究人员作为有利影响的最佳剂量的可可。观察到的适度增加一氧化氮是有益的(30.)可以归因于总黄酮含量的不加糖的天然可可29日]。可可中一氧化氮水平的增加人类作为类黄酮的观察研究涉及消费丰富的巧克力和可可饮料(62年,63年]。已发现超氧化物和过氧化物清除一氧化氮(61年]。一氧化氮引起的上升/ L在本研究观察到可能与人一致认为是由于代偿机制试图恢复一氧化氮水平(62年]。一氧化氮增加UNCP和A / L组合以最大的增量在动物接受300毫克/公斤和900毫克/公斤UNCP。这可能表明,王亚南可能会变得更加明显在这些群体的动物生化(数据证实了1,4,9(图)和组织病理学结果10 (c))。
这项研究表明,正常的做法UNCP消费与A / L疟疾感染和治疗期间可能有额外的有利影响17,18,59可可]的事实也抗疟属性。建议进行更多的研究来评估可能的协同抗疟效应在伴随UNCP和A / L除了进一步调查UNCP王亚南的机制。本研究的结果与之前的研究相一致,表明UNCP减少肝损伤小鼠的感染鼠体内(59),避免饮酒导致的肝损伤大鼠(60],显示对四氯化碳中毒(王亚南活动61年]。进一步说,可能是高度的王亚南潜力UNCP可能是由于宏观的药理性质和微量元素及其植物化学的成分。经常食用UNCP巨大的健康益处,同时政府和一个/ L在疟疾治疗可能是有益的,应该鼓励。日常管理300毫克/公斤,900毫克/公斤,和1500毫克/公斤bwt UNCP在这些动物相当于每天4.54克,13.42 g和22.70 g UNCP,分别在一个70公斤的人根据Reagan-Shaw et al。64年]。
5。结论
不加糖的天然可可粉38宏观和微量元素,增加一氧化氮的水平,和潜力王亚南在高剂量/ L。同时消费UNCP / L是不可能导致肝损伤或功能障碍。然而必须注意在日常消费由于高铜含量高。
缩写
| 食品药品监督管理局: | 食品和药品管理局 |
| 而已: | 能量色散x射线 |
| RDA: | 推荐日摄食量 |
| UNCP: | 不加糖的天然可可粉 |
| 一个/ L: | 蒿甲醚/ lumefantrine |
| ALT: | 丙氨酸转氨酶 |
| AST: | 天冬氨酸转氨酶 |
| 铝青铜: | 白蛋白 |
| 高山: | 碱性磷酸酶 |
| 方差分析: | 方差分析 |
| GAFCO: | 加纳农业食品公司 |
| LD: | 低剂量 |
| MD: | 中等剂量 |
| 高清: | 高剂量 |
| 源: | Sprague-Dawley |
| 特别提款权: | Sprague-Dawley老鼠 |
| NeLP: | 坏死肝实质 |
| 闭路: | 一个高度拥挤和中央静脉扩张 |
| LYM: | 淋巴细胞浸润 |
| 直流电压: | 中央静脉扩张 |
| UCV: | 不拥挤的中央静脉。 |
附加分
可用性的数据和材料:复方蒿甲醚样品和不加糖的天然可可粉是合法注册的产品在加纳和沉积样品加纳大学药学院上述研究数据和显微照片在药理学和毒理学,加纳大学。本研究的局限性是动物特定的疟疾寄生虫感染的事实可能是用作比较的来源以及其他种类的动物也可以用来进行这项研究。建议另一项研究调查的影响进行UNCP在寄生虫血症/ L管理疟疾感染动物和具体机制,这种保护作用发生。
伦理批准
研究协议批准部门伦理和协议审查委员会和野口纪念堂医学研究所机构动物保健和使用委员会协议批准文号2013 - 01 - 3 e。
相互竞争的利益
作者特此声明没有利益冲突在上面的研究和论文的出版。