抗菌活性的Salvadora persical . (Miswak)提取物对临床分离耐药细菌

文摘

工作主要集中在研究的抑制作用Salvadora persica在口腔微生物(miswak),但信息关于它对其他人类病原体的抗菌活性,尤其是耐多药耐药(MDR)隔离,是稀缺的。因此,本研究旨在评估的体外抗菌活性Salvadora persical .提取物对10 MDR除了口腔临床分离细菌病原体。水和甲醇miswak提取物的抗菌活性是评估使用琼脂稀释和最低抑制浓度(MIC)的方法。总的来说,400毫克/毫升的miswak提取在所有菌株是最有效的。甲醇提取物表现出更强的抗菌活性对革兰氏阴性(3.3 - -13.6毫米)比革兰氏阳性细菌(1.8 - -8.3毫米)。MIC值被视为最低大肠杆菌(0.39,1.56µg / mL),紧随其后的是酿脓链球菌(1.56µg / mL)。最高的MIC值(6.25、12.5µg / mL)耐甲氧西林的记录金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)鲍曼不动杆菌,Stenotrophomonas maltophilia。本研究表明,第一次强抗菌活性的温和miswak MDR-pathogens提取物对所有测试。甲醇提取似乎是一个有效的抗菌剂,可以视为对耐药病原体的补充和替代医学。进一步研究大量的MDR生物是必要的调查和规范miswak提取物的抑制作用与这些新兴病原体。

1。介绍

的出现人类致病菌耐多药耐药(MDR)在1990年代和最近广泛耐药临床分离株是阻碍努力控制和管理由这些生物(人类感染1]。由于滥用抗生素抗菌素耐药性的发展是令人担忧的2]。此外,持续增加在全球隔离耐甲氧西林的比率金黄色葡萄球菌耐甲氧西林(MRSA)葡萄球菌epidermidis(MRSE)和特拉革兰氏阴性杆菌临床分离株构成了严重的问题,因为没有新的抗菌药物治疗是目前治疗受感染的病人(2- - - - - -4]。

植物是很重要的在人类的生活和满足每天的需求。他们被用作化妆品、食品、风味,装饰,和药品。药用植物已经成为全球补充医学的一部分,因为他们的潜在的健康益处。各种植物提取物对传染性病原体的巨大潜力和可用于治疗的目的5,6]。

牙刷树,Salvadora persicaL,也叫做miswak,属于刺茉莉科的家庭,是一种最重要的182种植物中,被用作嚼棒。它已广泛应用于许多亚洲、非洲和中东国家。这种植物的根、枝和茎用于口腔卫生和小miswak棒已经用作维护口腔卫生(牙签7,8]。据报道,水和甲醇提取miswak拥有各种生物学性质对生物被认为是重要的牙菌斑和牙周炎的发展9]。

以前的体外研究报道的抗菌和抗真菌作用miswak生龋齿的细菌和牙周病原体包括金黄色葡萄球菌,变形链球菌,粪链球菌,酿脓链球菌,嗜酸乳杆菌,铜绿假单胞菌,Aggregatibacter actinomycetemcomitans,Porphyromonas gingivalis,流感嗜血杆菌,白色念珠菌(10- - - - - -16]。此外,控制临床研究的数据显示Salvadora persica提取时也是一种有效的抗菌剂使用临床作为irrigant牙齿坏死的牙髓学的治疗纸浆(17- - - - - -20.]。

工作主要集中在研究的抑制作用Salvadora persica口腔生物,但信息的抗菌活性Salvadora persica对其他人类病原体,特别是MDR隔离,是稀缺的14,15]。因此,本研究旨在评估的体外抗菌活性Salvadora persical .提取物对10 MDR菌临床分离株(除了口腔病原体)包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐甲氧西林(MRSA)葡萄球菌epidermidis(MRSE),抗青霉素酿脓链球菌,粪肠球菌6特拉革兰氏阴性杆菌:大肠杆菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌,粘质沙雷氏菌,鲍曼不动杆菌,Stenotrophomonas maltophilia。

2。材料和方法

这在体外进行了描述性研究从2015年3月至8月期间。总共10除了口腔病原体致病耐多药菌株被纳入本研究。

2.1。临床分离细菌

所有菌株都从临床标本分离的住院患者医院感染的确定根据疾病控制和预防中心/国家医疗安全网络(CDC / NHSN)标准(22]。选择生物耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,MRSE,抗青霉素酿脓链球菌,粪肠球菌6特拉革兰氏阴性杆菌:大肠杆菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌,粘质沙雷氏菌,鲍曼不动杆菌,Stenotrophomonas maltophilia。隔离所有被发现的物种水平使用标准方法和验证使用VITEK-2系统(Biomerieux, Marcy-l 'Etoile,法国)根据制造商的指示。七院内菌株被分离从尿路感染,两菌株被分离血液感染,和一个应变与机械通气相关肺炎被隔绝。抗菌素耐药性模式的分离测定使用引用汤后采用方法指南的临床和实验室标准协会(CLSI) [21]。甲氧西林耐药中金黄色葡萄球菌和美国epidermidis被确认的PCR扩增mec一个基因如前所述23]。碳青霉烯耐药革兰氏阴性杆菌中证实了使用改性霍奇测试按照CLSI指南(21]。多药耐药性(MDR)隔离被抵抗≥3以下抗菌类:青霉素、头孢菌素、氨基糖甙类、碳青霉烯,喹诺酮类(21]。

2.2。Miswak集合

Salvadora persica嚼棒Jazan省的当地市场买来的沙特阿拉伯在2015年春季植物开花时。棒用蒸馏水洗净,切成小的物种,并允许在室温下晾干2周。然后,他们停飞粉使用电布林德。

2.3。提取制备

准备水和甲醇提取物是由混合100克Salvadora persica粉1 L的蒸馏水(水提物)和95%甲醇(美国圣路易斯Sigma-Aldrich),用甲醇提取24 h。混合物然后使用1号绘画纸滤纸过滤,滤液是然后在真空蒸发器蒸发60°C(水)和40°C(甲醇)。提取存储在无菌瓶和保持冻结在−20°C到进一步使用24]。重新在测试之前,miswak提取新鲜甲醇(methanolic提取)和水(水提物)最终浓度为400毫克/毫升用来进一步准备连续稀释(400 - 50毫克/毫升)。

2.4。剂制备

所有细菌分离株生长对数期的大豆胰蛋白酶的肉汤(TSB)(美国底特律Difco实验室)37°C 18 h。细菌的增长估计使用分光光度计测量浊度的光吸收微生物质量由光学密度在620 nm (OD数据_620年)。增长是每30分钟检查,细菌生长对数期的确定的OD增加_620年阅读。然后,每个细菌悬液的培养液密度调整最终密度相当于0.5麦克法兰标准(1.5×10⁸CFU /毫升)无菌生理盐水(0.84%氯化钠)。

抗菌测试。miswak提取物的抗菌活性进行了使用琼脂扩散和最低抑制浓度(MIC)的方法。

2.4.1。琼脂扩散法

抗菌测试进行穆勒辛顿琼脂板使用琼脂扩散法(Difco实验室)。简单地说,100年µL的细菌悬液琼脂板顺利传播。所需数量的井,每个直径3毫米,使用无菌玻璃毛细管的琼脂确保适当的孔分布在外围,一个在每个琼脂板的中心。然后,井满心50µL无菌提取物(水或甲醇)制成的Salvadora persica股票的解决方案(400、200、100、50毫克/毫升)。其次是2 h在室温下预培养适当的植物提取物的扩散到媒体。然后,板块在37°C孵化24小时(25]。完成生长抑制带的平均直径(毫米)测量没有井的直径和视为抑制区。抗生素光盘(美国底特律Difco实验室),30岁µg万古霉素对革兰氏阳性分离株和10µg妥布霉素对革兰氏阴性菌株,被用作积极控制,甲醇和水(水提物)或(甲醇提取物)作为消极的控制。每一个微生物的测试是重复三次,以确保再现性。区平均直径值三个重复被确定最终的抑制区。这样做是为了确保所有抑制区域内每个实验在相同的实验条件下获得的。

2.4.2。最低抑制浓度(MIC)

的麦克风Salvadora persica提取是决定使用标准的采用在96多井微量滴定板的方法,如前所述[26),用细微的修改。短暂,溶解提取第一个稀释的浓度为50毫克/毫升,然后50µ从每个水和甲醇提取物的L用移液器吸取第一的微量滴定板的每一行,和50µL TSB的分布从1日到12日的每一行。双重的连续稀释是通过转移50µL标量稀释的每一行的第一个后续井。的最终浓度提取采用评价抗菌活动包括从25毫克/毫升0.003毫克/毫升。最后,10µL(每个细菌悬液添加到每个。两个排线板被用作控制:一行与万古霉素作为革兰氏阳性分离株的积极控制和另一行与妥布霉素对革兰氏阴性细菌的好药菌株(连续稀释的32 - 0.015µg / mL)。盘子在37°C孵化为18 - 24 h。没有发生浊度的最低浓度作为麦克风的价值。板分别进行分析来确定麦克风和麦克风的平均价值从三个重复拍摄的决心最终每个提取麦克风值,以确保准确性和重现性。

3所示。结果

水和甲醇提取物的抗菌活性Salvadora persica对10个表列出MDR致病菌1。总的来说,400毫克/毫升的miswak提取物在所有菌株是最有效的。miswak有增长的甲醇提取物抑制对病原体测试超过水提物的影响。甲醇提取物表现出更强的抗菌活性对革兰氏阴性(3.3 - -13.6毫米)比革兰氏阳性细菌(1.8 - -8.3毫米)。增长最快的抑制被记录大肠杆菌(4.8 - -13.6毫米),紧随其后的是k .肺炎(4.6 - -12.7毫米)粘质沙雷氏菌(4.5 - -12.5毫米)。酿脓链球菌甲醇提取在所有最敏感的革兰氏阳性病原体与抑菌圈直径2.2 - -7.4毫米。

水和甲醇提取物的MIC值表2。MIC值被视为最低大肠杆菌(0.39毫克/毫升甲醇提取物和1.56毫克/毫升水提物),紧随其后酿脓链球菌(1.56毫克/毫升的提取物)。MIC值最高(12.5毫克/毫升水提物和6.25毫克/毫升甲醇提取物)被记录为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,鲍曼不动杆菌,Stenotrophomonas maltophilia。

4所示。讨论

抗菌素耐药性全球健康问题一直是一个具有挑战性的治疗MDR-bacterial造成人类感染的病原体(1]。这个问题打开了一个广泛的研究调查可能在传统医学中使用天然植物提取物。在目前的研究中,各种各样的MDR革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌被用于筛查水和甲醇提取物的抗菌活性Salvadora persica。

在这项研究中,400毫克/毫升miswak提取是最有效的一个在所有病原体和甲醇提取物表现出更强的抗菌活性比革兰氏阳性对革兰氏阴性细菌。这些结果与之前的研究相一致的其他研究[10,11,13,16,17]。这些研究结果相反,Al-Bayati和Sulaiman的水和甲醇提取物调查Salvadora persica对7个口腔病原体的抗菌活动(12]。在他们的研究中,水提物抑制所有孤立的微生物和比甲醇提取更有效。众所周知,抗菌性能Salvadora persica提取是归因于不同的植物化学的成分。穆罕默德调查的植物化学的成分Salvadora persica提取并显示黄酮类化合物的存在,甾醇类、皂苷、丹宁,基本的生物碱,并减少组件在甲醇提取物和皂甙,单宁和减少组件在水提物可负责甲醇提取物的观察抗菌财产与水提物(16]。Sofrata等人发现了一种挥发性化合物:异硫氰酸苄酯(BITC)Salvadora persica提取(27]。在他们的研究中,BITC表现出快速和强大的杀菌效果对革兰氏阴性细菌但低影响革兰氏阳性细菌。作者推测BITC可能穿透细菌外膜和可能干扰细菌氧化还原系统,从而阻碍细菌的能力来维持其膜电位(27]。

在这项研究中,甲醇提取物有前途的MIC值大肠杆菌,k .肺炎,铜绿假单胞菌,美国marcescens革兰氏阴性细菌和酿脓链球菌在革兰氏阳性细菌。先前的研究已经报道说Salvadora persica提取有效的反对金黄色葡萄球菌,变形链球菌,酿脓链球菌,粪大肠,铜绿假单胞菌(9- - - - - -13,16,17]。然而,高MIC值被报道对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在这项研究中,答:baumannii,美国maltophilia。我们所知,这是第一个研究调查对这些MDR-pathogens miswak提取物的抗菌活性。我们发现是相当大的忧虑。这些新兴病原体成为一个重大的健康问题,因为他们与生俱来的非凡的能力和获得抵抗多种抗生素类和在医院环境中生存1,3,4]。

5。结论

本研究表明,第一次,甲醇和水的强大而温和的抗菌活动miswak MDR-pathogens提取物对所有测试。然而,甲醇提取物具有较强的抗菌效果,它似乎是一个有效的抗菌剂,可以视为补充和替代药物对耐药病原体。进一步的体外和体内研究大量的临床分离株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,答:baumannii,美国maltophilia需要进一步研究和规范miswak提取物的抑制作用与这些新兴病原体。

信息披露

默罕默德·赛义德扎耶德Al-Ayed应用医学科学学院院长和艾哈迈德Morad项目是微生物学部门的协调员,Najran大学医学院。

利益冲突

作者有一种利益冲突。

作者的贡献

艾哈迈德Morad项目和米尔阿卜杜勒贾巴尔哈迪AlMarrani设计这一研究中,米尔阿卜杜勒贾巴尔的哈迪AlMarrani miswak植物。艾哈迈德Morad项目Hany Goda阿迪,穆罕默德二甲胂酸库雷希执行实验室工作。默罕默德·赛义德扎耶德Al-Ayed和米尔阿卜杜勒贾巴尔哈迪AlMarrani收集的数据和引用。艾哈迈德Morad项目和穆罕默德二甲胂酸库雷希写的论文,由默罕默德·赛义德修订扎耶德Al-Ayed。所有作者阅读和批准了期末论文。

承认

这项工作是支持的资助从科研院长以来,Najran大学(ν/中期/ 14/066)。

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