文摘

客观的。氧化应激导致许多生理障碍包括传染病、炎症和癌症。本研究进行调查抗氧化,抗菌,细胞毒性的甲醇粗提物的树叶和水果热带榕属植物racemosa(LCME和FCME resp)和分析其主要由HPLC-DAD生物活性多酚。方法。提取物的抗氧化能力评价DPPH自由基清除,减少功率、总酚、总类黄酮、总单宁含量测定,超氧化物自由基,氢氧自由基和过氧化氢清除试验。识别和量化由HPLC-DAD生物活性多酚的方法。“盘扩散”抗菌活性测试方法。盐水虾杀伤力化验检查进行细胞毒性的潜力。结果。LCME和FCME显示DPPH清除能力和浓度依赖的还原能力的活动。他们酚醛含量、总黄酮含量和单宁含量。两种提取物显示超氧化物自由基清除能力,羟基自由基清除能力,和过氧化氢清除能力。高效液相色谱法分析LCME FCME表示大量的没食子酸的存在以及其他酚类成分。结论。大量的没食子酸与其他酚类成分可能发挥了重要作用的观察抗氧化剂,抗菌,细胞毒性的活动。

1。介绍

许多植物物种已确定有效的药理作用与疾病(1,2]。根据世卫组织(世界卫生组织),世界上80%的人口来自发展中国家仍然依赖于植物提取药物治疗和大约25%的美国现代药物用于植物衍生品(3]。一些成员的属热带榕属植物有重要的药用价值。热带榕属植物racemosa林恩。(家庭:桑科)是一个著名的药用植物,原产于东南亚。这种植物叫做杜姆在孟加拉国(4,5]。不同部位像根,树皮,茎有被用于分离各种化学成分。的叶子f . racemosa包含四三萜烯、乙酸glauanol和racemosic酸。水果glauanol,三十一烷,β谷甾醇、惕各酸、β谷甾醇、cycloartenol cycloeuphordenol、euphol euphorbinol, isoeuphorbol,棕榈酸,等等6]。f . racemosa有各种各样的用途在次大陆的传统医学治疗一系列的疾病。树皮具有良好的降血脂药,抗利尿、打虫药、抗胆碱酯酶,记忆力增强,和镇痛的活动。也发现有用的糖尿病,痢疾,成堆,泌尿疾病。的根是有益的治疗糖尿病,痢疾,和各种炎症腺放大。haemorroids乳胶是好的,创伤性肿胀,阴道疾病。叶显示抗高血糖药、抗炎、抗菌和王亚南效果。树皮和叶注入的结合是一个很好的形式的漱口水。水果是收敛剂,可用于肾脏和脾脏疾病(7,8]。

尽管大量的药理研究中,许多科学家仍对叶子和果实的部分感兴趣f . racemosa他们都是非常丰富的生物活性化合物。本研究的目的是调查和评价抗氧化剂,抗菌、水果和叶子和细胞毒性的活动的一部分f . racemosa和分析其主要生物活性多酚的高效液相色谱法。

2。方法

2.1。工厂收集和提取

在目前的研究中,f . racemosa收集从战争怎样惊人地扩大地区,孟加拉国,孟加拉国的专家确定的国家植物标本,达卡,孟加拉国。凭证标本(DACB 38388)已提交以供将来参考。收集后,叶子和果实部分被磨床磨成粗粉的形式。工厂当时一部分由热萃取装置的帮助下索氏提取。250克的树叶和水果粉与甲醇提取。

2.2。化学物质

熊果苷(AR)、没食子酸(GA),氢醌(HQ),(+)儿茶酸水合物(CH)、香草酸(VA)、咖啡酸(CA), syringic酸(SA),(−)表儿茶素(EC)、香兰素(重要的),p香豆酸(PCA),反式阿魏酸(FA)、杨梅酮(MC),鞣花酸(EA),反式肉桂酸(柠檬酸),rosmarinic酸(RA)、苯甲酸(BA)、槲皮素(曲)、芦丁水合物(RH),和山柰酚(KF)从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。乙腈(高效液相色谱),甲醇(高效液相色谱),醋酸(高效液相色谱),乙醇,Folin-Ciocalteu试剂,抗坏血酸、三氯乙酸、铁氰化钾,碳酸钠,氯化铁,DMSO(二甲亚砜)和醋酸来自默克(达姆施塔特,德国)。双氯芬酸钠和硫酸长春新碱得到来自印度Beximco制药有限公司和Cipla公司药品,分别。

2.3。抗氧化活性测试

2.3.1。DPPH自由基清除活性

原液LCME FCME准备和连续稀释获得不同浓度。使用了标准的抗氧化、抗坏血酸。1毫升每个浓度添加到0.004% DPPH 2毫升的解决方案。混合物被关在黑暗(25°C) 30分钟完成反应。吸光度测量在517 nm双光束紫外可见分光光度计。集成电路₅₀(50%抑制浓度)值确定从抑制与浓度百分比图9]。

2.3.2。还原能力测定

确定LCME的还原能力和FCME,不同浓度(12.5 -800μ克/毫升)的提取和标准(抗坏血酸)和2.5毫升,1%铁氰化钾(K₃铁(CN)₆),2.5毫升,0.2磷酸盐缓冲剂(pH值6.6)温柔的颤抖。温度在50°C,混合物被孵化大约20分钟。孵化后,混合物在室温下保持。然后,添加10%的三氯乙酸2.5毫升紧随其后在3000转离心10分钟。0.1%氯化铁(0.5毫升)和蒸馏水(2.5毫升)涨跌互现的上层清液2.5毫升。5分钟后吸光度当时以700海里(10]。

2.3.3。总酚含量测定

植物提取物(0.5克)和80%甲醇水溶液(50毫升),用了约20分钟。2毫升的一部分来自它在14000 rpm和离心机15分钟。Folin-Ciocalteu试剂用于总酚含量的测定。没食子酸标准解决方案由连续稀释(20 - 100μg / mL)。1毫升每个没食子酸浓度的解决方案和植物提取物与9毫升蒸馏水补充道。1毫升Folin-Ciocalteu试剂添加到每个浓度连续震动。5分钟后,10毫升的7% Na₂有限公司₃添加和调整与蒸馏水的最终体积25毫升。这是保持30分钟完成反应。最后,一个吸光度是估计为750 nm (11]。

2.3.4。总类黄酮含量的测定

三百微升(0.3毫升)的每个植物提取物和标准(芦丁)和30%甲醇(3.4毫升),0.5纳米₂(0.15毫升),和0.3间变性大细胞淋巴瘤引起₃h·6₂O(0.15毫升)。5分钟后,1毫升1 M氢氧化钠补充道。然后,正确的解决方案是混合和吸光度测量在506海里。总黄酮类化合物被表示为每克干分数(毫克当量12]。

2.3.5。总单宁含量的测定

Folin-Ciocalteu总单宁含量测定的方法。这样做,0.5毫升Folin酚试剂和7.5毫升蒸馏水混合0.1毫升样品提取,然后混合1毫升35% Na₂有限公司₃解决方案,用蒸馏水稀释至10毫升。然后,混合物,动摇了在室温下保持30分钟。没食子酸的参考标准溶液(20 - 100μg / mL)准备使用相同的程序。吸光度测量样品和标准的解决方案对空白与紫外可见分光光度计在725海里。表达中的单宁含量的毫克的GAE / g的提取13,14]。

2.3.6。超氧化物自由基清除实验

反应混合物中含有1(312毫升的电视台的解决方案μ米)准备在磷酸缓冲的pH值7.4和1毫升的NADH的解决方案(936μ7.4米)准备在磷酸缓冲的pH值。0.1毫升的植物提取物和标准在不同浓度稀释补充道。最后,通过添加100反应是放大μ(120 L PMS的解决方案μ准备在磷酸缓冲调节pH值7.4)的混合物。反应混合物在25°C 5分钟孵化,吸光度是在560 nm (15]。

2.3.7。氢氧自由基清除实验

氢氧自由基清除活性评价的基础上产生的羟基自由基清除芬顿反应的标准(槲皮素),LCME, FCME。最终体积的反应结合1.0毫升含有200μL(1.04毫米EDTA和200年μM FeCl₃(1:1 v / v), 100年μL (2-deoxy 2-ribose, 100年μL 1.0毫米的过氧化氢(H₂O₂),100μ1.0毫米的L抗坏血酸和500μL的分数在不同浓度从50到800不等μ在缓冲g / mL。样品测试是保持在37°C 1小时。衬底,脱氧核糖是估计的硫代巴比土酸测试执行的自由基损伤。然后,孵化是在1000°C 20分钟1.0毫升三氯乙酸的混合物(2.8%)和1毫升的硫代巴比土酸(1%)。之后,一个吸光度测定在532纳米16]。

2.3.8。过氧化氢清除试验

过氧化氢清除试验的完成,2毫米/ L的过氧化氢溶液与标准安排磷酸盐缓冲剂pH值7.4。0.6毫升的准备的过氧化氢溶液和不同浓度混合分数从25到400μg / mL蒸馏水。10分钟后吸光度测定在230 nm反对一个空白的解决方案包含磷酸盐缓冲剂无过氧化氢。清除活动数的百分比在不同浓度LCME FCME估计和标准(α生育酚)是用于测量集成电路的比较₅₀值(17]。

2.4。多酚化合物的高效液相色谱法检测和量化

它由HPLC-DAD在甲醇提取物进行了分析。进行一个Dionex终极3000系统配备第四纪快速分离泵(液化石油气- 3400 - rs)和光电二极管阵列检测器(爸爸- 3000 - rs)。使用好评®C分离了₁₈(5μ米)Dionex列(4.6×250毫米)在30°C 1毫升/分钟的流量和20μL注入体积。包含三个溶剂的流动相体系包括乙腈(溶剂),醋酸溶液pH值3.0(溶剂B),和甲醇(C)溶剂梯度洗脱程序5% / 95% B(0 - 5分钟),10% / 90% B(6 - 9分钟),15% / 75% B / C(第11 - 15分钟),10% 20% 15% / 65% B / C(16 - 19分钟),30% / 50% B / C(为20 - 29分钟)20%,40% / 30% B / C(30分钟),30%和100%(36-40分钟)。紫外检测器被设定为22.0分钟280海里,改变为28.0分钟320海里,再改为280海里35分钟,最后为36分钟,380海里,其余的分析段,二极管阵列检测器被设定为一个收购范围从200纳米到700纳米。制备校准曲线的标准储备溶液制备甲醇包含AR和ECA (5μ每g / mL)、GA、总部,弗吉尼亚州,RA和MC (4μ每g / mL)、钙、SA,六世和FA (3μ每g / mL), PCA,瞿,KF (2μ每克/毫升),CH和EA (10μ每g / mL)、柠檬酸(1μg / mL), RH (6μg / mL),英航(8μg / mL)。提取是溶解在甲醇的浓度为10毫克/毫升。高效液相色谱分析前,所有的解决方案准备0.20过滤μm注射器过滤器,然后脱气的超声波浴(Hwashin、韩国)15分钟。所有的计算包括峰值集成、数据采集和校准完成Dionex Chromeleon软件(版本6.80 RS 10) (18,19]。

2.5。抗菌活性试验

抗菌活性被纸片扩散试验研究。股票的微生物转移到营养琼脂板,接种在一夜之间在37°C。使用无菌循环,亚文化的一部分转移到试管中含有营养肉汤和孵化4 h在37°C到增长达到对数阶段。营养琼脂媒体被设置为标准培养液悬挂和允许凝固。光盘(美国Cockeysville洗液)浸渍植物提取物(250年和500年μg /盘),标准抗生素光盘(四环素30μg /盘、Oxoid有限公司、英国),和空白(甲醇)放置在培养皿和无菌钳轻轻按压确保接种琼脂表面接触。最后,接种板块在37°C 18 h和孵化的抑制区决心在毫米20.]。

2.6。细胞毒性活性试验

细胞毒性活性试验,卤虫盐沼(盐水虾)。约一汤匙的囊肿的盐水虾在盐水孵化大约48小时。盐水是由溶解30毫克纯氯化钠和53毫克食盐1.5 L水溶液制备的不同浓度提取用二甲亚砜(DMSO)作为溶剂。一组八个试管使用10虾被和应用不同浓度的溶液。最后,最终的成交调整与盐水和保持24小时。氯霉素作为标准浓度的200μ克/毫升。准备的结果,盐水虾无节幼虫死亡率的比例估计来确定信用证₅₀(致死浓度)20.]。

2.7。统计分析

数据提出了均值±标准差(SD)。单向方差分析Dunnett紧随其后的测试被执行,结果被认为是显著时。

3所示。结果

3.1。抗氧化活性

3.1.1。DPPH自由基清除活性

在径向清除DPPH免费化验,叶甲醇粗提物的一部分(LCME) IC展出₅₀= 10.29μ克/毫升,而水果甲醇粗提物的一部分(FCME) IC展出₅₀= 8.59μg / mL,与标准的抗坏血酸(IC₅₀= 4.15μg / mL)(图1)。

3.1.2。还原能力

还原能力测定,LCME RC显示₅₀= 45.564μg / mL和FCME RC显示₅₀= 40.443μ克/毫升,相当于标准抗坏血酸(RC₅₀= 27.589μg / mL)(图2)。

3.1.3。总酚含量

LCME的总酚含量和FCME GAE 20.2和26.2毫克/克干提取,分别(表1)。

3.1.4。总类黄酮含量

LCME总类黄酮含量和FCME量化宽松是22.81和10.63毫克/克干提取,分别(表1)。

3.1.5。总单宁含量

LCME总单宁含量和FCME sGAE 19.72和21.39毫克/克干提取,分别(表1)。

3.1.6。超氧化物自由基清除活性

在这个试验,LCME SC显示₅₀= 130.104μg / mL和FCME SC显示₅₀= 122.264μ克/毫升,相当于标准抗坏血酸(SC₅₀= 83.003μg / mL)(图3)。

3.1.7。氢氧自由基清除活性

在这个试验,LCME SC显示₅₀= 103.163μg / mL和FCME SC显示₅₀= 91.353μ克/毫升,相当于标准抗坏血酸(SC₅₀= 84.148μg / mL)(图4)。

3.1.8中。过氧化氢清除活动

在这个试验,LCME SC展出₅₀= 48.80μg / mL和FCME SC展出₅₀= 51.825μ克/毫升与标准抗坏血酸(SC₅₀= 36.058μg / mL)(图5)。

3.2。量化的多酚类化合物的高效液相色谱法

高效液相色谱分析表明LCME和FCME都有大量的没食子酸含量(37.82和50.11毫克/ 100克干提取)。LCME也含有微量的熊果苷和表儿茶素(23.91和20.75毫克/ 100克干提取、职责)。而FCME含有微量的水合儿茶素和表儿茶素(25.34和22.14毫克/ 100克干提取,分别地。)(表4和5,数据6,7,8)。

3.3。抗菌活性

甲醇粗提物的叶子和果实部分显示适度的抗菌活动主要是针对革兰氏阴性细菌(−)(表进行测试2和3)。

3.4。细胞毒性的活动

在盐水虾杀伤力生物测定,50%致死浓度的叶子和果实的一部分热带榕属植物racemosa甲醇粗提物为65.271μ和48.081克/毫升μg / mL,分别显著,与标准硫酸长春新碱(LC₅₀= 0.229μg / mL)(数据9和10)。

4所示。讨论

我们想运行一系列的体外抗氧化活性测试的甲醇粗提物f . racemosa树叶和水果后最初有两个积极的结果。这两个定性的提取物有单宁的植物化学成分分析。后来,我们还发现大量的单宁的提取。以前的报告表明,丹宁酸有抗氧化活性21]。此外,我们进行了定性的薄层色谱(TLC)试验使用不同的溶剂系统。提取显示自由基的清除属性表示的存在适度的黄色紫色背景的薄层色谱板的职位。一般来说,植物抗氧化剂部分含有酚醛一半。共振的原因恒常性的含苯氧基的自由基,酚类化合物能够给电子的活性和创建一个连锁反应(22]。

DPPH的清除试验,抗氧化化合物导致减少酒精DPPH解决方案由于其hydrogen-donating能力(23- - - - - -25]。因此,DPPH自由基清除活性提取物可能归因于某种化合物的存在直接作用捕获自由基通过捐赠氢原子。减少发电量可能提供一个关键的指示关于一种化合物的抗氧化能力26]。二羟丙烯醛的存在与提取物的还原能力能力有关。提取也含有大量的酚类和黄酮类。羟基的存在表明自由基清除活性的多酚类化合物。黄酮类化合物也有助于预防和治疗心血管疾病、神经退行性问题,和癌症。其平面结构、数量和位置的羟基以及C2-C3双键的存在是必不可少的金属螯合物、抗氧化和自由基清除活动(27]。氢氧自由基是一种有效的细胞毒性剂和视为最激进反应在生活生产系统和负责巨大生物损伤(28]。过氧化氢氧化参与不同酶的失活的重要硫醇团体可以发起氢氧自由基的生成29日,30.]。甲醇提取能够中和H₂O₂浓度的方式,可以被其级配比例的增加抑制。

抗菌评估表明任何物种正在调查是否具有抑制活性与细菌物种。在这个实验中,甲醇粗提取物有显著抑制房地产对一些致病细菌种类相比,标准卡那霉素的药物。此外,结果还展出,植物提取物具有强大的细胞毒性的活动。

我们进行了高效液相色谱法分析来证明化合物之间的相关性,这种植物的药理活性。19测试中多酚类化合物,两个提取大量的没食子酸。氢原子在酚组,移位的自由基发生酚醛结构(31日]。已经证明在许多疾病有潜在的治疗作用,氧化应激已经牵连。抗氧化活性是评价吲哚啉在高卢腙32]。约33没食子酸衍生物合成和研究潜在的抗菌和抗真菌的活动(33]。偶氮没食子酸复合物被报道的有前途的抗菌活性(34]。高卢酸碱度indanone衍生品被报道有抗癌活性35]。等化合物S - (3 4-methylenedioxyphenyl) 3、4, 5-trihydroxy-thiobenzoate (GD-3)和3,4-methylenedioxyphenyl 3、4, 5-trihydroxybenzoate (GD-1)没食子酸的衍生物显示明显的细胞毒性在癌症细胞系(36]。

我们的研究工作具有一定的意义和局限性。这是第一个研究活动热带榕属植物racemosa关注相关的多酚类化合物的药理活性的存在。此外,我们的研究结果支持传统的使用这种植物值得进一步的大规模调查。然而,潜在的局限性的研究工作如下:首先,我们使用盐水虾探讨细胞毒性效应而不是使用动物模型或癌症细胞系。其次,我们只有两个剂量和十个菌株用于抗菌调查这是不够的。随着植物表现出剂量依赖性抗菌效果,增加剂量,以及使用的菌株可能提供一个更好的照片。

5。结论

叶的甲醇提取物和水果的一部分热带榕属植物racemosa表现出显著的抗氧化活性。提取物也表现出显著的抗菌和细胞毒性的活动。观察到的药理作用可能是由于存在显著的植物提取物中没食子酸的浓度。此外,其他酚类成分在植物可能协助对这些药理作用。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢孟加拉的化学研究部门科学与工业研究理事会(BCSIR), 1205年达卡,孟加拉国,允许他们使用他们的研究机构来执行这些研究工作。