一个绿色氧化剂Activity-Integrated双重标准方法快速评价中药质量的在线DPPH-CE-DAD Xuebijing注入

文摘

多的关注都集中在治疗脓毒症导致的高死亡率每年在全世界范围内。抗氧化活性似乎扮演一个重要角色在治疗败血症表现出的Xuebijing注入。本研究的目的是开发一个在线1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl - (DPPH)毛细管electrophoresis-diode阵列探测器(在线DPPH-CE-DAD)方法快速评估抗氧化性能和有效的抗氧化活性的物质基础作为一种Xuebijing注射液的质量控制。几个参数影响分离研究,包括pH值和浓度的缓冲区,SDS,βcd,和有机改性剂以及电压和盒式温度。与以前的传统方法相比,这种改进的方法缩短了实验周期,成为更有效,因为它被成功地应用于分析的总抗氧化活性和内容12 Xuebijing注入相同条件下的抗氧化剂。结果显示,在线DPPH-CE-DAD reagent-saving,方法快速、可行,质量控制和绿色技术Xuebijing注入的活性成分的药理作用和内容。它也提供了新的机遇对于抗氧化活性的分析复杂的矩阵。

1。介绍

脓毒症,由感染引起的全身炎症反应综合征,证实是伴随着感染细菌或高度怀疑的焦点的存在(1]。尽管抗生素的使用组合和良好的支持治疗和护理,治疗脓毒症仍不满意。34之间的严重脓毒症的死亡率仍然很高,43% (2]。在最近的感染性免疫调节的研究,中国传统医学(中医)备受关注的治疗概念的集成和平衡的调节3]。Xuebijing (XBJ)注入,提取鉴别方法红花,Paeoniae基数Rubra,Chuanxiong根茎,Salviae miltiorrhizae,Angelicae sinensis基数,是一种中药,多年来被批准由国家食品药品监督管理局(SFDA)的中国临床治疗脓毒症(4]。最近的研究也表明,XBJ是有效治疗脓毒症的严重的并发症,如造血损伤(4),播散性血管内凝血(5],造血损伤[6),肺损伤(1]。据报道,氧化应激是由病毒感染的病理过程和抗氧化剂可以降低氧化应激(7,8]。它也表明,Xuebijing注入可以减少活性氧的水平(ROS)通过增加谷胱甘肽和超氧化物歧化酶(SOD)水平(4]。因此,可以推测Xuebijing注入具有抗氧化性能。然而,潜在的抗氧化活性的物质基础Xuebijing注入仍然被知晓。

传统的中药质量控制方法包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱分析-质谱法(gc - ms),和HPLC-MS9- - - - - -11]。因为这些方法在确定化合物的内容有限,他们不能满足我们的需求,全面评估结合中药的质量预期的药理效应(12]。因此,双重标准介绍了质量评估在这项研究中建立一种简单可行的方法来筛选抗氧化剂成分和评估Xuebijing注射液的质量。

1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)这是一个radical-containing化合物通常是用来量化各种样品的抗氧化活性13,14]。各种方法被用于评估的抗氧化剂在复杂样品,如分光光度计的DPPH自由基、点状测试在一个薄层色谱法(TLC)板,和在线HPLC-DPPH试验(14- - - - - -16]。这些药理方法会导致长周期,假阳性,可以对环境有害。最近,高效毛细管电泳(HPCE),作为绿色分离技术,提供了一种替代方法,其他方法相比有许多优点,它提供了良好的解决样本运行时间短,使用更少的有害的溶剂,不受颜色影响色素(17,18]。

在之前的论文中,我们报告的初步发现在线DPPH-CE-DAD条件确定的总抗氧化活性和抗氧化剂的内容是完全不同的18]。如果两个条件可以集成到相同的条件,因此实验所需的总时间将大大减少,减少密集劳动将会实现。考虑到这一点,我们已经开发出一种单一的方法,允许分离和DPPH量化和抗氧化剂在同等条件下,将两种分离方法集成到一个步骤。在线DPPH-capillary electrophoresis-diode阵列探测器(在线DPPH-CE-DAD)运行被选为一个典型的例子来开发一个简单的和可行的双重标准方法筛选抗氧化成分和评估的质量Xuebijing (XBJ)注入。的可行性和精度在线DPPH-CE-DAD我们现在报告中进行了讨论。在线DPPH-CE-DAD方法的示意图如图1。改进DPPH-CE-DAD方法提供了一个绿色、环保、快速定量分析方法的总抗氧化活性和抗氧化剂的内容Xuebijing注射和其他中药在短时间内。一种抗氧化剂activity-integrated双重标准方法在线DPPH-CE-DAD将成为中药质量控制的有利工具。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

标准物质包括oxypaeoniflorin hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic B酸钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷从成都必须购买生物。科学。和侦探。中国有限公司(成都)。10批Xuebijing注射了从天津追逐太阳制药有限公司(天津)。去离子水被Milli-Q学术提供超纯水系统(美国微孔,米尔福德,MA)。高效液相色谱级甲醇和乙腈是来自默克公司(德国)。1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH(1)购买从σ(美国)。其他化学试剂均为分析纯试剂级。对毛细管电泳试剂都是通过0.22过滤μ米尼龙注射器过滤器。

2.2。制备的标准解决方案

Oxypaeoniflorin, hydroxysafflor黄色、原儿茶醛peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic酸B,和钠danshensu分别用去离子水溶解。咖啡酸、阿魏酸、芦丁和异槲皮苷和50%甲醇分别溶解。Senkyunolide我用甲醇溶解。适量的标准是准备一个标准溶液混合包含12个化合物。DPPH的解决方案是用甲醇溶解在每天1毫克/毫升的浓度的分析和存储在黑暗中之前使用。标准解决方案和样本存储在4°C。

2.3。质量控制样品的制备

质量控制(QC) oxypaeoniflorin样品,hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic B酸钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁,和异槲皮苷是由适当稀释混合标准的解决方案,把三个浓度水平(低,中,高),分别。

2.4。准备样品

Xuebijing注入样本在14000转离心10分钟。上层清液通过0.22被过滤μ米尼龙注射之前。不同浓度的Xuebijing注入被HPCE与去离子水稀释和分析。

2.5。DPPH-CE-DAD方法的设备和条件

毛细管电泳进行安捷伦科技HPCE 7100(安捷伦科技公司、德国)配备一个二极管阵列检测器和样品盘的温度控制系统。安捷伦ChemStation仪器控制和数据处理软件使用。裸的分析有效长度的毛细管52厘米,内部直径50μm(瑞风、河北、中国)。在新的毛细管发起之前,10分钟刷新1.0 M氢氧化钠,紧随其后的是0.1 M氢氧化钠为10分钟10分钟和去离子水。在每个样本在整个实验过程中,毛细管与0.1 M氢氧化钠冲洗3分钟,去离子水为3分钟,3分钟和缓冲,先后。电解液包含20毫米不缓冲是一个解决方案₂阿宝₄(pH值5.5),100毫米十二烷基硫酸钠(SDS), 10毫米β环糊精(βACN cd)和5% (v / v)。估计的总抗氧化活性和屏幕的抗氧化剂Xuebijing注入,水动力喷射用于样品溶液在50岁mbar 8年代紧随其后DPPH解决方案在50岁mbar压力2 s(实验组)。随后,一个正电压被应用于25 kV,毛细管温度22°C。分析物和DPPH监控在280 nm和517 nm,分别。对照组我被定义为Xuebijing注射在线飙升甲醇,和对照组二世被定义为DPPH解决方案在线上升去离子水。

因此,与对照组相比,二世的大小减少DPPH峰值出现在实验组的电泳图可以用来评估样品的抗氧化活性。同样,减少成分峰的大小在实验组的电泳图可以用来作为基础的抗氧化活性Xuebijing注射对照组相比。

3所示。结果与讨论

3.1。优化在线DPPH-CE-DAD总抗氧化活性的测定和组分Xuebijing注入

电泳系统优化通过调整pH值和浓度的缓冲区,SDS,βcd,和有机改性剂以及电压和盒式温度。正在运行的电解质为样本分析是与前面描述的相似18),除了它是可以同时分离和量化DPPH和抗氧化剂由新DPPH-CE-DAD方法在一个步骤。

众所周知,DPPH不稳定,在酸性或碱性条件下会产生其他物质。pH值是最重要的变量影响的性能DPPH相比与其他参数。因此,pH值变化从5.0到8.0的样品分离使用运行时电解液组成20毫米不₂阿宝₄100毫米SDS 10毫米βACN cd,和5% (v / v)。当pH值在7、8、9日,所有化合物的峰形状差。pH值在5.0 - -6.0,可分离得到的成分和长时间的迁移时间和减少了pH值的缓冲区,显示弱电解质的迁移速度和电渗流量的速度(EOF)改变了通过调节pH值(19]。从结果,pH值5.5被认为是满意的对迁移时间(图2(一个))。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

离子强度或浓度的缓冲对溶质迁移和分离效率有显著影响(20.]。不₂阿宝₄缓冲区在0-40毫米范围内的浓度在恒仪器条件进行了研究。比较不的浓度₂阿宝₄缓冲区从0到10毫米不能达到基线分离,20 - 40 mM给每个分析物的分离效率和解决好。然而,长期的迁移时间得到如图30 - 40毫米2 (b)。的不₂阿宝₄缓冲样本和DPPH浓度测定被设定为20毫米。

SDS浓度(0)的影响,10、30、50、80、100和150毫米为样本进行分离。从图可以看出2 (c),长时间的迁移时间和增加了SDS的浓度。SDS浓度较低(0 - 80毫米),原儿茶醛的分离,peoniflorin, salvianolic B酸钠danshensu,咖啡酸是不够的。增加了SDS浓度从80到100毫米导致了戏剧性的改善解决。SDS浓度大幅提高到150 mM时,rosmarinic酸的分离效率和salvianolic酸B peoniflorin和钠danshensu很穷。在100毫米SDS浓度下,这些化合物中是一个很好的解决。

添加βcd与不同浓度(0、5、10、15和20毫米)正在运行的电解液进行了研究。稍微缩短迁移时间观察的浓度增加βcd(图2 (d))。时的浓度βcd是5毫米,迁移时间salvianolic B酸钠danshensu是一样的。与10毫米的浓度βcd,基线解决每个分析物被观察到。与咖啡酸钠danshensu部分重叠15和20毫米。它可能是推测βcd与相对疏水腔形式包含复合物与外亲水化合物和层已被证实对分析物的分离20.]。

有机溶剂在缓冲可能解散不溶性样品,改变疏水analyte-micelle互动所取代的分析物胶束(21]。乙腈是最广泛使用的有机改性剂在CE (22]。乙腈进行了从0%到15%不等。图2 (e)显示所有分析物的迁移时间缩短,当乙腈的比例添加到缓冲长大。salvianolic酸B的决议和钠danshensu通常是好的从0%降至5%。一个非常可怜的决议结果ACN的内容增加了运行时电解液超过5%。因此,本文选取最优有机改性剂5%乙腈。

与这些值,电压(25 - 30 kV)和盒式温度(20 - 25°C)也影响峰分离了。迁移时间短和穷人解决了在更高的电压(30 kV),而一般增加迁移的时间被发现在一个较低的电压(20 kV)(图2 (f))。因此,一个正电压25 kV被选为最优分离电压。盒的温度终于定在22°C。

基于我们之前的研究(18),20毫米Na₂HPO₄(pH值6.0)+ 50 mM分析DPPH SDS的优化条件。然而,一个最优条件组成的电解液不含有20毫米₂阿宝₄(pH值5.5)100毫米SDS 10毫米βcd和ACN 5% (v / v)的电压和温度设置在25 kV和22°C是受雇于我们所有的后续实验,从而达到一种平衡的总抗氧化活性评价和筛选抗氧化剂之间Xuebijing注入在一个步骤。

3.2。在线测定样品的总抗氧化活性

DPPH实验基于稳定的吸光度降低517海里的DPPH自由基的反激进主义的容易,而且准确测量一般的自由基清除能力的抗氧化剂(23]。依赖该DPPH-CE-DAD方法如上所述,DPPH在线飙升的吸光度Xuebijing注入(实验组)相比相对较弱的在线飙升去离子水(对照组)因为DPPH反应与抗氧化剂Xuebijing注入分别注射后的毛细管(图3)。抑制DPPH的相对比例是由以下方程:[]。峰面积的DPPH(在线上升去离子水)和峰面积的DPPH(在线飙升Xuebijing注入)。在样品的总抗氧化活性测定,Xuebijing注射不同稀释倍数与DPPH在线飙升,分别进行最大抑制浓度为50% (IC₅₀),表示样品的稀释倍数需要清除DPPH自由基的50%。表1展示了集成电路₅₀值10批Xuebijing注射。结果表明Xuebijing注射抗氧化活性和IC有显著差异₅₀值的每一批可以推测,活动的歧视是由于不同内容的抗氧化剂。


样本	集成电路₅₀(μg / mL)

1301291	16.3
1303041	14.5
1303051	17.2
1303071	16.6
1302221	9.40
1302231	16.8
1303021	17.7
1303042	11.7
1303031	6.70
1302051	7.40

3.3。方法验证

12个抗氧化剂的校准图表Xuebijing注入与峰面积比值为纵坐标建立了()与浓度μg / mL为横坐标()。他们获得超过-400 33.3的范围μg / mL, 25 - 600μ4.2 g / mL, -50μ62.5 g / mL, -2000μ5.8 g / mL, -70μg / mL, 10 - 120μg / mL, 13 - 156μ2.5 g / mL, -30μ2.5 g / mL, -60μ克/毫升,20 - 480μg / mL, 13 - 156μg / mL,和11 - 132μoxypaeoniflorin g / mL, hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic B酸钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷分别。12个化合物得到的直线从六个单独的实验有很好的相关系数。回归方程及其相关系数(),(),(),(),(),(),(),(),(),(),(),(),分别。检测极限(LOD)和定量的限制(定量限)描述为样本浓度引起的信噪比(S / N)的比例3和10个,分别。表2显示的钟表和定量限oxypaeoniflorin hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic B酸钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷。


化合物	回归方程		线性范围(μg / mL)	LOD (μg / mL)	(定量限μg / mL)	复苏
化合物	回归方程		线性范围(μg / mL)	LOD (μg / mL)	(定量限μg / mL)	平均(%)	相对标准偏差(%)

Oxypaeoniflorin		0.9991	-400 - 33.3	10.0	32.0	101.1	4.6
Hydroxysafflor黄色了		0.9999	25 - 600	1.2	3.8	97.4	2。9
原儿茶醛		0.9996	-50 - 4.2	1.2	4.1	100.1	3.5
Peoniflorin		0.9998	-2000 - 62.5	1.5	5.0	98.2	1.4
Rosmarinic酸		0.9990	-70 - 5.8	1.5	5.6	101.1	3.7
Salvianolic酸乙		0.9995	10 - 120	3.0	9.4	100.1	4.5
钠danshensu		0.9982	13 - 156	4.0	13.0	99.7	4.8
咖啡酸		0.9995	-30 - 2.5	0.8	2。5	99.3	4.8
阿魏酸		0.9995	-60 - 2.5	0.8	2。5	101.9	2。7
Senkyunolide我		0.9993	20 - 480	5.0	17.4	97.7	3.9
芦丁		0.9990	13 - 156	4.0	13.0	99.5	3.9
异槲皮苷		0.9991	11 - 132	3.5	11.0	102.3	2。5

该方法的精密度和准确度的基础上评估峰面积表示为相对标准偏差(RSD)。盘中、interday精度的三种典型分析每种组分的浓度和DPPH评估六个复制一天之内连续超过三天,分别。内部和interday十二抗氧化剂的精度是92.1% - -105%的范围内。平均精度的rsd为十二个抗氧化剂interday盘中低于5.1%和4.9%,分别为(表3)。内部的rsd为interday DPPH分别为2.4%和0.9%,分别。每个组件的复苏从标定图计算由样品掺入了等量的标准解决方案。复苏的12个化合物的结果列在表中2都在97.4% - -102%,rsd为4.8%以下。


化合物	浓度(μg / mL)	盘中		Interday		稳定24小时
化合物	浓度(μg / mL)	精度(%)	相对标准偏差(%)	精度(%)	相对标准偏差(%)	仍然(%)	相对标准偏差(%)

Oxypaeoniflorin	66.7	94.9	3.4	97.8	2。8	97.2	3.7
	133.3	97.6	2。3	97.5	0.5	99.9	3.4
	400年	96.6	2。7	98.1	1.4	96.5	0.9

Hydroxysafflor黄色了	50	97.8	1.1	97.5	0.2	100.9	4.5
	One hundred.	92.1	4.1	97.0	4.9	95.0	4.7
	300年	96.7	5.1	98.4	2。3	97.1	0.8

原儿茶醛	8.3	103.7	4.9	97.8	4.9	97.4	8.5
	16.7	97.4	2。6	100.3	2。8	99.4	3.0
	50	100.6	0.9	98.5	3.1	101.3	0.9

Peoniflorin	166.7	102.1	0.4	98.7	3.0	101.9	0.3
	333.3	100.6	0.8	98.6	1.9	101.5	1.3
	1000年	101.8	0.2	99.2	2。7	103.4	2。2

Rosmarinic酸	11.7	95.8	3.7	98.8	4.5	95.6	0.2
	23.3	102.2	3.5	102.8	1.5	102.6	0.6
	70年	101.9	3.0	102.3	0.4	101.9	0.6

Salvianolic酸乙	20.	96.5	4.0	98.2	1.7	97.7	2。0
	40	98.7	2。9	96.1	2。2	99.2	0.8
	120年	98.4	4.0	96.7	4.1	98.0	0.4

钠danshensu	26	101.6	4.4	101.7	0.2	103.6	2。9
	52	104.7	2。4	104.2	1.3	103.7	1.3
	156年	102.9	3.6	101.5	1.1	102.1	1.0

咖啡酸	5	105.2	4.5	99.5	4.6	103.9	1.5
	10	100.2	2。8	96.5	3.6	98.9	1.8
	30.	97.8	2。8	97.2	1.2	97.7	0.3

阿魏酸	5	102.0	4.7	100.4	3.7	100.3	2。0
	10	100.7	2。8	97.7	3.1	101.9	1.8
	30.	94.4	1.7	97.0	2。5	97.4	4.5

Senkyunolide我	40	99.2	3.9	100.3	2。8	97.9	1.7
	80年	101.4	2。3	100.2	1.3	101.7	0.4
	240年	100.7	0.8	101.8	0.9	101.2	0.7

芦丁	26	103.0	3.6	101.3	1.4	100.1	3.8
	52	97.0	1.5	97.8	0.8	94.3	4.0
	156年	99.7	2。2	97.5	2。5	99.5	0.3

异槲皮苷	22	100.0	3.3	97.4	2。2	97.8	3.0
	44	100.7	4.9	100.2	1.3	99.8	1.0
	132年	104.2	1.7	100.6	3.6	101.4	3.7

DPPH	1000年	- - - - - -	2。4	- - - - - -	0.9	- - - - - -	1.4

稳定表达的峰面积被注入重复评估质量控制样品的十二个化合物在低、中、高浓度和DPPH CE设备超过24小时。表3表明,抗氧化剂的精度是94.3% - -104%的范围内,所有化合物和DPPH的rsd为8.5%以下,分别。结果证实,他们稳定24小时在4°C。

这些数据表明,电泳分析方法是可以接受的,可以应用于确定的总抗氧化活性组分的Xuebijing注入。

3.4。网上筛选样品的抗氧化剂

虽然Xuebijing注入已经证明的抗氧化活性,目前还不清楚哪些组件负责抗氧化活性。考虑到活性成分的鉴定,所有成分的峰面积Xuebijing注射比较样本之间先后在线飙升DPPH(实验组)和样本在线飙升甲醇(对照组2)(图4)。峰面积下降的组件检查比较与参考标准可以识别和确认Xuebijing注入的抗氧化剂,包括oxypaeoniflorin hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic酸B,钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷(图4)。新在线DPPH-CE-DAD方法促进中药的主要抗氧化剂的快速筛查和意义进行进一步的质量评估使用键选中标记。

图4

Xuebijing注入毛细管重复:Xuebijing注入(红色)和在线混合DPPH(蓝色)。峰:1 = oxypaeoniflorin, 2 = hydroxysafflor黄色,3 =原儿茶醛,4 = peoniflorin, 5 = rosmarinic酸,6 = salvianolic酸B, 7 =钠danshensu, 8 =咖啡酸,9 =阿魏酸,10 = senkyunolide我11 =芦丁,12 =异槲皮苷。实验条件:50μ×375 m身份证μm外径。×60.5厘米长度有效长度)(52厘米,裸露的;20毫米不₂阿宝₄(pH值5.5)100毫米SDS 10毫米βcd, 5% (v / v) ACN,电压,25 kV;温度、22°C;检测波长280 nm;注射压力,50 mbar 8年代。

3.5。样品分析

发达DPPH-CE-DAD方法应用分析的内容12抗氧化剂的10批Xuebijing注入在优化条件下。图5显示典型的色谱概要文件的示例。oxypaeoniflorin样本分析的结果,hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic B酸钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷在39.1到-54.6之间μ-529.4 g / mL, 381.2μ-27.3 g / mL, 15.4μ-1980.9 g / mL, 1736.6μ-25.4 g / mL, 10.8μ-17.4 g / mL, 6.9μ-24.7 g / mL, 13.1μ-14.6 g / mL, 9.4μ-37.0 g / mL, 32.0μ-382.4 g / mL, 266.1μ-28.0 g / mL, 18.8μg / mL, -40.2和26.7μg / mL,分别说明主要区别在十二的抗氧化剂的浓度每批Xuebijing注入(表4)。


样品	Oxypaeoniflorin	Hydroxysafflor黄色了	原儿茶醛	Peoniflorin	Rosmarinic酸	Salvianolic酸乙	钠danshensu	咖啡酸	阿魏酸	Senkyunolide我	芦丁	异槲皮苷

1301291	49.4	381.2	15.7	1962.9	19.1	17.4	21.6	12.4	36.5	332.4	23.0	32.0
1303041	44.2	482.2	24.5	1806.2	16.9	11.0	22.6	9.5	33.9	382.4	26.6	32.7
1303051	39.3	466.7	15.4	1892.3	15.7	18.4	22.1	9.4	36.7	362.3	28.0	32.1
1303071	39.1	456.2	13.9	1894.1	14.1	12.6	17.9	9.4	34.8	368.3	18.9	32.3
1302221	39.3	529.4	19.2	1736.6	14.0	18.4	24.7	7.4	33.2	266.1	20.9	32.3
1302231	40.9	440.2	21.3	1899.8	16.6	13.9	23.6	9.6	35.3	352.0	23.8	32.6
1303021	48.1	415.4	21.1	1980.9	15.2	11.94	13.7	11.4	32.0	369.3	18.8	31.8
1303042	46.3	426.6	27.3	1881.6	25.4	12.2	23.5	14.0	37.0	312.6	21.2	40.2
1303031	54.6	389.9	24.1	1751.2	10.8	6.9	13.1	9.7	34.6	371.5	21.2	26.7
1302051	46.1	405.7	24.3	1840.6	18.4	13.3	19.7	14.6	34.8	280.9	21.1	36.6

(一)

(b)

图5

毛细管重复的标准12个化合物的混合物(a)和Xuebijing注入(b)。山峰:1 = oxypaeoniflorin, 2 = hydroxysafflor黄色,3 =原儿茶醛,4 = peoniflorin, 5 = rosmarinic酸,6 = salvianolic酸b, 7 =钠danshensu, 8 =咖啡酸,9 =阿魏酸,10 = senkyunolide我11 =芦丁,12 =异槲皮苷。实验条件:50μ×375 m身份证μm外径。×60.5厘米长度有效长度)(52厘米,裸露的;20毫米不₂阿宝₄(pH值5.5)100毫米SDS 10毫米βcd, 5% (v / v) ACN, 25 kV;温度、22°C;检测波长280 nm;注射压力,50 mbar 8年代。

集成电路中的差异₅₀值10批次,可能是由于不同内容的抗氧化剂。如图6,数据从12个化合物的总含量与抗氧化活性在10批Xuebijing注射表现出良好的相关性()与above-referred数据样本的总抗氧化活性的测定。结果说明,十二个选择抗氧化剂可以作为关键质量控制标记保持批次一致性和有效性。也验证了该方法是可行的、准确的确定的总抗氧化活性与多个活性成分的中药质量控制。

4所示。结论

改善前DPPH-CE-DAD方法,我们开发了一个简单的方法,使人们有可能分离和量化DPPH和抗氧化剂在同等条件下。在网上和DPPH混合样本,减少DPPH峰值的大小在电泳图可以看到计算的总抗氧化活性Xuebijing注入。同样,包含oxypaeoniflorin十二抗氧化活性成分,hydroxysafflor黄色,原儿茶醛,peoniflorin, rosmarinic酸,salvianolic酸B,钠danshensu、咖啡酸、阿魏酸、senkyunolide我,芦丁和异槲皮苷快速筛选依赖减少成分峰的大小。结果说明,这种开发方法的优点是reagent-saving,快速、可行的,和绿色技术不是对环境有害。改进在线DPPH-CE-DAD方法实现目标的总抗氧化活性和抗氧化剂的内容分析Xuebijing注入在一个步骤,适用于评价中药的质量产生直接的抗氧化剂对自由基本身的影响。此外,这种方法可以应用在评估未知的抗氧化活性分子。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

李娇刘和第一作者金本研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

这项研究受到了中国国家自然科学基金(81503213和81503213),所述关键中国基础研究发展计划(没有。973:2012CB723504),大多数中国的国家科技委员会(2014年zx09304307——001 - 005年和2014年zx09201022 - 004)。

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以证据为基础的补充和替代医学