文摘
本研究的目的是探讨穴位敏化现象的机制在脊髓和髓质水平。实验进行成年男性Sprague-Dawley老鼠和内脏有害刺激是产生的结直肠扩张(CRD)。宽动态范围的活动(世界发展报告》)和subnucleus网状带背的(阶跃恢复二极管)神经元记录。世界发展报告》和阶跃恢复二极管神经元的反应的变化对穴位电针刺激(EA)的“Zusanli-Shangjuxu CRD刺激前后观察。结果表明,内脏伤害感受能促进神经元的反应穴位刺激。EA-induced在脊髓背角WDR神经元的激活进一步增加到106.84±17.33% (1.5 mA) (马)和42.27±13.10% (6)(CRD之前)相比,神经反应。在延髓,EA-induced阶跃恢复二极管神经元的激活进一步增加到63.28±15.96% (1.5 mA) (马)和25.02±7.47% (6)(比之前CRD)。综上所述,这些数据显示,viscerosomatic convergence-facilitation WDR神经元和阶跃恢复二极管的影响可能是穴位敏化机制的基础。但是内脏伤害感受的敏化效果WDR神经元比阶跃恢复二极管神经元。
1。介绍
由于不同结构功能单位相关的体节,存在特定的穴位和靶器官之间的关系。虽然以前的研究穴位和器官的关系主要集中于穴位的调节内脏功能健康状态反映内脏疾病的忽视其功能,最近,Yu et al。1)提出“动态的穴位,”的概念认为,穴位的规模和功能不是静态的,而是动态变化。穴位的功能和大小随着身体的状态会有所不同。临床研究表明,pressure-pain阈值相关的穴位减少肠功能障碍患者(2和胃溃疡3]。这些发现表明,穴位是一个动态的功能单位,可以敏感当脏器病理过程。
穴位敏化现象的许多特性相似的特性称为西医的疼痛。牵涉性痛是一个重要的内脏过敏或发炎的症状4- - - - - -6]。它的特点是内脏过敏,扩大影响的感觉,和体细胞痛觉过敏包括温柔的存在考试的皮肤或肌肉7,8]。许多研究表明,称为疼痛往往发生在身体地区支配不同靶器官的网站(9,10和节段性模式与靶器官11),这表明中央的参与痛觉过敏的机制(12]。我们的工作的假设是中枢敏化在敏化穴位产生疼痛的敏感性增加。
宽动态范围(WDR)神经元13,14在脊髓背角和subnucleus网状带背的(阶跃恢复二极管)神经元15]尾部分的髓质可以通过传入信号激活穴位和内部器官。许多形态研究观察了脊髓神经元之间的预测和阶跃恢复二极管区域(16- - - - - -20.),这表明神经电路互连的存在脊髓和延髓。在我们先前的研究[21,22),我们观察到内脏炎症可以促进世界发展报告》和阶跃恢复二极管神经元的反应穴位刺激和疼痛的刺激强度之间存在着线性关系,内部器官和相关穴位的敏感性。这些发现表明,功能viscerosomatic convergence-facilitation脊髓和髓质水平也许相关穴位敏化现象。
进一步测试世界发展报告》的不同的角色和阶跃恢复二极管神经元的动态变化的敏感性穴位,在这项研究中,我们比较了世界发展报告》和阶跃恢复二极管神经元穴位刺激的反应前后大鼠内脏伤害感受。本研究的目的是为了获得穴位敏化现象的机制在脊髓和髓质水平。
2。方法
2.1。动物和准备
实验进行成年男性Sprague-Dawley老鼠(体重250 - 280克),获得的中国军事医学科学院实验动物中心(许可证号码:SCXK(军事),2007 - 004年)。老鼠被安置在标准实验室条件下人工12 h光/暗周期和环境温度°C的一个星期。食物和水都可以随意。100年的后腹腔内注射μg硫酸阿托品,动物麻醉的腹腔内注射10%氨基甲酸乙酯(1.0 - -1.2 g / kg、ip)和通过气管插管人工通风。动物的体温维持在°C的回馈控制恒温的加热毯系统(RWD CL-8)。
实验过程都是按照批准指导实验室动物保健和使用的中国中医科学院颁发。
2.2。动物手术
2.2.1。脊髓手术
进行椎板切除术在脊柱椎骨段L1-L3和相应的安装在一个刚性框架。脊髓被删除暴露脊髓硬脑膜和软脑膜。
2.2.2。手术延髓
动物被安装在一个立体框架与头部固定ventroflexed位置金属条巩固了头骨。尾髓质被删除整个肌肉组织暴露,硬脑膜。
手术后,襟翼缝在皮肤细胞和覆盖38°C石蜡油,避免干燥。
2.3。实验的程序
2.3.1。录音
单一细胞外记录是用玻璃微量吸液管装满的混合2% pontamine天蓝色和0.1米的钠aceticum(尖端:5μ米,阻抗:8 - 12 MΩ)。根据核的三维空间坐标,微量吸液管插入到核微量吸液管机械手的控制下(SM-21、日本)。WDR神经元的坐标是0.5 - -1.5毫米的中线侧脊髓和500 - 1500μ在脊髓的表面之下。阶跃恢复二极管的坐标神经元尾obex, 1.0 - -2.0毫米0.5 - -1.5毫米外侧延髓的中线。
单机制活动送入鉴频器和一个示波器屏幕上显示的窗口。输出窗口的鉴别器和放大器被领进了一个数据采集系统(PowerLab)和个人计算机数据采集系统(图5.0)编译直方图或波痕文件。
2.3.2。识别的神经元
Nonnoxious和有毒电刺激是用来隔离统一的活动,和皮肤接受字段都映射通过温柔攻和刷刺激。记录的神经元分类的基础上,对不同刺激的反应应用于他们的外围接受字段。实验的脊髓神经元,可以激活nonnoxious和有害刺激皮肤接受应用领域被确定为WDR神经元。实验在延髓,神经元可以被有害刺激激活应用于任何皮肤的一部分,但不能激活nonnoxious刺激被确定为阶跃恢复二极管神经元。
2.3.3。刺激
内脏痛觉结直肠扩张刺激生成。一个4 - 6厘米的充气气囊导管插入到老鼠的colorectum 4厘米的深度。CRD刺激是由压力由60年代的80毫米汞柱血压计。为了防止可能的致敏colorectum过度刺激,引发了两个CRD刺激之间的间隔至少10分钟。其他技术细节描述在我们以前的报告。
应用EA刺激穴位的“Zusanli-Shangjuxu”记录的同侧的神经元放电与15赫兹的频率为30秒。EA刺激输出来自刺激器(88 - 102克,日本Kohden)和强度为1.5马和马6。
2.3.4。记录程序
一套标准条件记录过程如下:60年代背景的活动被记录了下来,从30年代到60年代EA刺激管理。60年代后神经元放电的恢复时间,神经元活动被记录了30年代,后跟一个神经元的反应CRD的考验。神经元放电的另一个复苏的60年代后,EA相同的刺激强度时应用穴位CRD之前,和神经元EA CRD刺激后的反应。
2.4。组织学的位置
单元记录后,记录网站被标记和电泳沉积pontamine天空蓝的检查他颜色。记录网站的位置被确定关于老鼠的脑图谱(Paxinos &华生,2007)。
2.5。数据收集和统计分析
神经元放电和激活/抑制率(每秒确定为与PowerLab %)计算,借助SPSS13.0统计软件图5.0,。描述性分析的平均和差异进行了预处理和postintervention数据(确定为%)。配对以及用于跨领域使用的比较。被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。脊髓实验的结果
3.1.1。WDR神经元的一般特性
30 WDR神经元从背景中分离。大多数WDR神经元位于计算IV和V,和一些在计算我和VI的灰质,电泳pontamine天空的蓝色染料试验(见图1(一))。皮肤接受领域的《世界发展报告》的大部分神经元响应体刺激分布沿着侧尾的身体部位,包括阴囊,髋关节区域,尾根,后肢,后爪(见图1 (b))。
(一)
(b)
当神经元记录,我们观察到它对不同刺激的反应应用于皮肤接受字段和内脏。图2说明WDR神经元不仅回应nonnoxious刺激(刺激触觉、猪鬃等),但也对不良刺激的反应明显(如缩放和针灸的刺激)应用于皮肤接受字段。我们记录8 WDR神经元和观察他们的排放80毫米汞柱CRD的刺激引起的反应。CRD后,神经元放电增加峰值/ s的背景峰值/ s。增加率% (),表明80 mmHg CRD刺激可以激活WDR神经元的活动。WDR神经元,可以由EA的穴位激活“Zusanli-Shangjuxu”和CRD被选为研究神经元进行进一步的实验。
3.1.2。比较的影响EA WDR神经元CRD之前和之后
不同强度的EA是应用于穴位的“Zusanli-Shangjuxu”之前和之后的老鼠有80毫米汞柱CRD 60年代。WDR神经元的反应EA CRD前后观察。结果表明,数字WDR神经元诱发放电的EA在CRD(见表后显著增加1和图3)。
马当EA强度被设定为1.5,在CRD、WDR神经元的激活率由EA%,而CRD之后,EA的激活率具有相同的强度上升%,进一步增加的速度% CRD前相比,其效果。有一个非常重要的区别CRD(之前和之后)(见图4)。
当EA强度是马6,WDR神经元的激活率由EA%,% CRD前后分别有进一步增加的速度在CRD %。CRD前后有显著性差异()(见图4)。
3.2。延髓实验的结果
3.2.1之上。阶跃恢复二极管神经元的一般特性
28个阶跃恢复二极管神经元记录背髓质及其位置映射的电泳沉积pontamine天蓝色的实验(见图5)。神经元的反应接触,刷毛,必要时,CRD,观察不同强度的EA刺激。结果表明,阶跃恢复二极管神经元有明显的对有害刺激的反应(如捏,CRD 4马EA)但没有反应任何nonnoxious刺激(如接触,刷毛,和1.5 mA EA)(见图6)。
3.2.2。比较的EA对阶跃恢复二极管的影响神经元CRD之前和之后
我们记录了8阶跃恢复二极管神经元和观察他们的排放80毫米汞柱CRD的刺激引起的反应。CRD后,神经元放电增加峰值/ s的背景活动峰值/ s。增加率% ()。它表明,疼痛的CRD刺激能明显激活阶跃恢复二极管神经元的活动。
不同强度的EA是应用于穴位的“Zusanli-Shangjuxu”之前和之后的老鼠有80毫米汞柱CRD 60年代。图7表明,阶跃恢复二极管的反应神经元EA CRD前后是不同的。CRD之后,EA的阶跃恢复二极管神经元诱发放电的数量相同的强度在CRD也显著增加(见表2)。
刺激反应10阶跃恢复二极管神经元nonnoxious EA (1.5 mA) CRD比较之前和之后。CRD之前,阶跃恢复二极管神经元没有激活反应EA与背景活动(),但在CRD EA对阶跃恢复二极管的影响显著激活神经元。背景活动相比,激活率% ()。EA在CRD的影响相比,激活率%;有一个非常重要的区别在EA CRD(之前和之后的效果)(图8)。
花药11阶跃恢复二极管神经元的反应有害EA刺激马(6)CRD比较之前和之后。结果表明,马6 EA刺激对阶跃恢复二极管的影响显著激活神经元前后CRD, CRD后观察但更强的激活效应。神经元放电增加%在CRD CRD之前相比。有一个显著差异EA CRD(之前和之后的效果)(图8)。
4所示。讨论
穴位被视为特定点在身体表面气从经络和脏腑的注入。相信穴位有内脏疾病的诊断和治疗的双重功能。内脏病变可以表现在身体表面,导致敏感的穴位与各种病理反应主要由压时疼痛。穴位的规模和功能随着内脏的状态会有所不同。所谓的穴位敏化现象是内脏疾病通过穴位的具体反映21,22]。
最近,一些研究人员专注于穴位敏化的现象。形态学研究显示,在炎症状态,生病的器官可以促进身体表面的伊文思蓝的溢出。对大鼠卵巢炎症,,EB点主要分布在“Guanyuan (RN4)”——“子宫”区域和“等(BL23)”——“品名门(DU4)”区域(23]。对大鼠急性胃粘膜炎症,EB点分发以及神经段和高度配合“Pishu (BL20),”“等(BL23)”和附近穴位(24]。但EB的溢出点是很少观察到在健康的老鼠。它表明穴位是一个动态的功能单位。当器官改变健康状态的病理状态,穴位从沉默的模型转移到敏化模型。
穴位敏化现象的机制在很大程度上是未知的。但这两个穴位的功能相关的内脏疾病的诊断和治疗的内脏和躯体传入脊髓和/或脊椎上的中枢。本研究的结果显示,疼痛的CRD的刺激可以促进世界发展报告》的响应和阶跃恢复二极管神经元Zusanli-Shangjuxu EA适用于穴位刺激”。“这是依照convergence-facilitation机制,解释了痛苦。许多研究表明body-viscera收敛脊髓背角神经元和脊椎上的椎体可以通过刺激敏感的内部器官,和敏化会聚神经元的响应输入从身体表面也变得更强。例如,对于动物称为肌肉输尿管结石引起的痛觉过敏,背景排放的数量和频率的脊髓细胞超过正常的动物(25];化学刺激膀胱后,背景放电水平脊髓背角神经元的升高[26];与正常大鼠相比,老鼠在输尿管结石有更大数量和更高频率的背景放电从脊髓背角的神经元;作者认为这所称痛觉过敏(27]。此外,炎症在食道28)和结肠(29日)可能导致减少响应阈值。这些发现表明,功能viscerosomatic convergence-facilitation在脊髓(世界发展报告》)和延髓(阶跃恢复二极管)可能是穴位敏化机制的基础。
此外,大量的形态学研究[16- - - - - -20.)观察到神经元投射脊髓和阶跃恢复二极管之间的区域。实验比较了世界发展报告》和阶跃恢复二极管神经元穴位刺激的反应前后大鼠内脏伤害感受。结果表明,脊髓(世界发展报告》)和延髓(阶跃恢复二极管)穴位敏化中起着不同的作用。内脏伤害感受的敏化效果WDR神经元比阶跃恢复二极管神经元。因此,我们得出结论,脊髓神经元之间的预测和阶跃恢复二极管区域形成一个神经元电路和发挥重要作用的交互体输入和发自肺腑的输入。这些研究提供了科学证据的现象称为疼痛在西方医学和中医穴位敏化。
穴位的本义是“引起疼痛的位置或缓解。“最初的定义完全覆盖穴位的两个基本功能:诊断(造成疼痛)和治疗(缓解)。当脏器改变生理状态的病理状态,相应的穴位在人体表面敏化模型改变沉默的模型。这种现象的具体表现的诊断和治疗疾病的穴位的功能。我们假设激活穴位不仅是新分的病理反应在身体表面,而且内脏疾病的治疗的最佳点。激活穴位镇痛效应的相应的内脏器官比沉默的穴位。但是还需要进一步的研究来测试这个假说。
5。结论
上述结果表明,内脏伤害感受神经元可以促进世界发展报告》的响应和阶跃恢复二极管对穴位的刺激。的功能viscerosomatic convergence-facilitation在脊髓和延髓或许构成了穴位敏化机制。但是脊髓和延髓穴位敏化中起着不同的作用。内脏伤害感受的敏化效果WDR神经元比阶跃恢复二极管神经元。
利益冲突
所有作者都通过了论文,宣布没有经济利益的竞争。
确认
这个科学工作是由中国国家基础研究计划(973计划,没有。2011 cb505201)和中国国家自然科学基金(没有。81102649也没有。81403475)。