文摘

针灸是一种常见的和有效的治疗方法来治疗面神经麻痹(FNP)。然而,其潜在的机制仍不清楚。本研究旨在探讨电针刺激对症状的影响和内容FNP 1型单纯疱疹病毒DNA的老鼠。老鼠被随机分为四组,电针刺激治疗组,生理盐水组,动物模型组和空白对照组。电针刺激是应用于Jiache (ST6)、风(合谷)电针刺激组每天一次14天,而电针刺激并不应用于模型组动物。电针刺激组、老鼠更快恢复和1型单纯疱疹病毒DNA含量也下降更快,而模型组动物。我们得出这样的结论:电针刺激是有效缓解症状,促进FNP减少1型单纯疱疹病毒。

1。介绍

周围面神经麻痹(FNP)是一种急性外围面部神经紊乱,通常影响单侧面部肌肉,孔和相关组织。临床症状变化根据面部神经的病变的位置沿肌肉但包括下垂的眉毛,不完整的眼睑闭合,下垂的角落的嘴,关闭受损的嘴巴,眼睛干涩,听觉过敏,受损的味道,或者耳朵痛1]。一个FNP病人可以出现面无表情当他或她是微笑2]。FNP的年发病率估计有20 - 25例(每100000人3- - - - - -5]。在美国,每年的发病率是25/100,000人2,6与之相比,中国每年新建的有258/100,000 [7]。FNP可能会影响个人的所有年龄组(4),躺在20到40岁之间发病高峰。女性和男性同样的影响(4]但轻微的女性比男性更易被观察到8]。的病因FNP是有争议的,但病毒感染,血管缺血,遗传,和自身免疫性炎症已经被提议作为可能的根本原因(9,10]。证据表明,病毒感染单纯疱疹病毒1型(1型单纯疱疹病毒)可能主要发生如果免疫系统受损4,11- - - - - -13]。此外,1型单纯疱疹病毒DNA检测在临床标本,endoneurial液体,和唾液从FNP病人14,15]。单纯疱疹病毒(HSV)介导病毒炎症免疫机制是因此被广泛接受的主要原因FNP [14,16]。

治疗方法FNP仍有争议。临床试验调查具体的抗病毒治疗的疗效并没有显示出显著的好处与另类疗法(17- - - - - -19]。针灸是中国传统医学(中医)的重要组成部分,它有几千年的历史。电针刺激是一种针灸与电流相结合的技术。许多研究提供证据的有益影响针灸FNP [20.- - - - - -22]。然而,机制的影响针灸在FNP 1型单纯疱疹病毒感染引起的不完全理解。

因为很难获得病人临床标本,使用动物模型基础研究是必要探讨电针刺激的影响在FNP23]。在这项研究中,我们建立了一个FNP由1型单纯疱疹病毒感染的小鼠模型(24- - - - - -27]。本研究的目的是探讨电针刺激对减轻症状和内容FNP 1型单纯疱疹病毒的老鼠。

2。材料和方法

2.1。动物

我们使用还是Balb / c小鼠(18.5 - -20.5 g)从成都Dashuo生物科技公司购买这个实验。所有的老鼠都保持在成都中医药大学实验动物中心照顾按照指南在特别大学医学院动物实验。

2.2。病毒接种和组

老鼠被随机分为三组,一个FNP模型组(),生理盐水组(),空白对照组()。科斯的1型单纯疱疹病毒是在维洛细胞砂plaque-titrated准备的点状单位(PFU)每毫升。FNP模型组小鼠通常是与戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(50毫克/公斤),右面部神经和耳后的分支切割2毫米和25接种μL病毒解决方案(空斑形成单位)2毫米×3毫米明胶海绵,放在切口。然后,关闭切口。应用生理盐水组,正常生理盐水代替。没有用于老鼠的空白对照组。动物们回到笼子里完成的过程。

2.3。FNP模型的评价

瞬目反射的模型评估分数,鼻毛运动,顶点位置米饭每天病毒接种后(27]。瞬目反射诱发两次,吹气到眼睛通过18-gauge 5毫升注射器针头。瞬目反射的程度分级规模0到2(0,双方之间没有区别;1、瞬目反射被推迟而不受影响;2,瞬目反射完全消失)。观察鼻毛运动了30年代和得分0到2范围(0,双方之间没有区别;1、鼻毛运动弱于健康方面;2、鼻毛运动完全消失)。顶点的位置米饭得分在0到1的范围内(0,中间的位置;1:位置是不受影响的一方)。 The total score was defined as the sum of all scores. When the total score was 3 or 4 points, we recognized that the FNP model was established.

只老鼠,开发了一种瞬态和同侧的FNP原发感染后被用于以下实验。九十只老鼠(58%)开发FNP完全相同的一侧接种,和60 FNP模型小鼠随机分为两组,电针刺激组()和动物模型组()。

2.4。实验程序

与30老鼠有四组:A组,空白对照组;B组,生理盐水组;C组,模型组动物;D组,电针刺激组。

2.4.1。电针刺激治疗组

基于之前的研究(22),两个常用穴位,Jiache (ST6)、风(合谷),被选中。这两个穴位的位置根据被发现实验针灸(28]与Jiache (ST6)、风(合谷)瘫痪。两个穴位都扎3 - 5毫米深度。电针刺激后是由G6805修复老鼠(青岛鑫盛实业有限公司、有限公司、青岛、中国)。丝状针是一次性无菌Hwato针灸针,批准毫米长度和直径0.30毫米(苏州医疗用品厂有限公司,苏州、中国)。刺激频率是3 - 4赫兹和强度在连续波(CW) 1 - 2 V模式使针轻微震动老鼠并保持安静。针保留20分钟,每天一次,治疗持续了14天。电针刺激从业者在这项研究中有10年的针灸和中医培训和6年的经验在学术和临床针灸。

2.4.2。对照组

有3对照组、空白对照组、生理盐水组和模型组动物。所有老鼠都是固定一天一次20分钟没有任何干预。

2.5。评价FNP症状

电针刺激后3天、7和14的治疗期,症状是瞬目反射的评估分数,鼻毛运动,先端米饭的位置。

2.6。1型单纯疱疹病毒DNA的量化

1型单纯疱疹病毒DNA intratemporal面部神经,膝状神经节,脑干,和大脑皮层组织量化电针刺激后3天,7和14的治疗时期。

2.6.1。1型单纯疱疹病毒DNA的提取

每组10只老鼠被戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(50毫克/公斤)被杀头很快在3天,7和14的治疗时期。intratemporal部分正确的面部神经,膝状神经节,脑干和大脑皮层被解剖,不惜−80°C。面部神经,膝状神经节、脑干和大脑皮层被剪刀剪,放置在一个包含200个样品管μL缓冲溶液,彻底动摇了,直到他们被停职。删除后上层清液和添加20μL蛋白酶K(20毫克/毫升),组织消化在56°C为30分钟,其次是短暂离心和上层清液。220年之后,μL缓冲溶液GB和示例添加了动摇了15秒和10分钟在70°C的环境,其次是短暂离心和上层清液。后增加220μ无水乙醇,样本被剧烈振荡15秒和混合彻底动摇了15秒。在短暂离心,这个解决方案是涌入CB 3吸收列,放入2毫升收集管和离心30秒的9660克。废液收集管中移除,并吸收列放回相同的集合管。500年之后,μ和700 L脱去蛋白质的解决方案μL和500μL洗脱液GW添加连续和样本离心机30秒每次添加后的9660克。废液收集管中移除,并吸收列放回相同的集合管和离心机在9660 g 2分钟去除残余液体。CB 3吸收列放在一个干净的离心管1.5毫升,孵化在室温为2.5分钟。缓冲TE 50μL是添加到吸附膜吸收塔的中心。样品在60°C 2.5分钟孵化,离心机在9660 g 2分钟。

2.6.2。1型单纯疱疹病毒基因的反转录PCR

合成引物的编码部分1型单纯疱疹病毒(5′-CCACCGAGCGGCAGGTGATC-3′,上游引物和5′-GCCGACCGCCTGCTCGTGCT-3′下游引物)和β肌动蛋白基因(5′-CGTTGACATCCGTAAAGACCTC-3′,上游引物和5′-TAGGAGCCAGGGCAGTAATCT-3′下游引物)用于PCR扩增。引物的瞬时离心后,去离子水添加100µM解决方案。去离子水的380μL添加另一个EP管,10μL上游引物和10μ下游引物被添加(400 Lμpmol / L和2.5μL)。去离子水稀释cDNA中添加一个合适的浓度。提取的DNA和引物变性最初。四十的循环放大(15秒95°C变性;15秒95°C的复性;45秒的72°C扩展)进行的样本在72°C扩展5分钟,在4°C孵化。测试和特异性的引物,扩增效率标准曲线和融化曲线。PCR方法24μL为12.5μL SYBR预混料Taq (2×), 0.5μL PCR引物(10μ0.5米),μL反向PCR引物(10μ米),3μL模板cDNA、和8.5μL dH₂实时PCR管O和孵化。梯度稀释2μL互补脱氧核糖核酸是补充道。四十的循环放大(15秒95°C变性;15秒95°C的复性;45秒的72°C扩展)进行,样品在72°C扩展为5分钟。荧光数据融化曲线收购每0.5°C时温度从58°C到85°C。荧光定量的标准曲线。实时PCR是一式三份。简单地说,信使rna是纠正β肌动蛋白通过CT(循环阈值水平)。1型单纯疱疹病毒的相对mRNA表达/β肌动蛋白是量化的公式。分析CT进行使用序列检测软件版本1.2.3(应用生物系统公司组)。

2.7。统计分析

所有分析都使用社会科学统计软件包的版本17.0(美国SPSS,芝加哥,IL)。描述性统计包括平均值±标准偏差(SD)、中位数、最小(最小值),和最大(max)用于连续变量。单向方差分析(方差分析)是用来确定统计学意义差异组变量正态分布的数据。最低差异(LSD)测试是用于方差的同质性,而Tamhane T2测试是用于异质性的方差。分层数据测试组与非参数检验,以确定差异。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。融化的结果曲线

1型单纯疱疹融化曲线只有一个峰值,融化在85±1°C。这一步是复制几次。放大产品预期的产品。

3.2。症状缓解急性病毒性FNP老鼠

空白对照组和盐水组的老鼠显示任何症状——,这两组中每一项的分数是0。瞬目反射的分数,鼻毛运动和位置模型的顶点米饭动物组和电针刺激组随着时间的减少。然而,电针刺激组的分数下降更快。瞬目反射的分数,鼻毛运动,顶点位置米饭电针刺激组明显低于模型组动物(在第三天,在第七天,治疗期14天)。FNP症状的差异在所有组如表所示1。

3.3。1型单纯疱疹病毒DNA的数量

没有1型单纯疱疹病毒DNA检测在生理盐水组或空白对照组小鼠。1型单纯疱疹病毒DNA检测在模型动物组和电针刺激组。然而,1型单纯疱疹病毒的数量显著降低电针刺激组较模型组动物(在第三天,在治疗期天7和14),如表所示2。在7天的治疗期间,1型单纯疱疹病毒DNA电针刺激组减少,而1型单纯疱疹病毒DNA与前4天仍高于模型组动物。1型单纯疱疹病毒DNA在第14天模型组动物减少的治疗时期。

4所示。讨论

瞬目反射分数,鼻毛运动得分,顶点位置米饭分数,总分显著高于在电针刺激和模型动物比生理盐水组和空白对照组建模后,这表明FNP小鼠模型成功地接种1型单纯疱疹病毒引起的。的发展——一些面部神经功能恢复和1型单纯疱疹病毒DNA含量也降低模型动物组。这些结果反映FNP的疾病进展。电针刺激组面神经功能恢复的更快。症状缓解后针灸临床试验符合评估针灸的疗效FNP [20.- - - - - -22]。此外,1型单纯疱疹病毒DNA量电针刺激组明显低于模型组动物在第三天。在第七天,1型单纯疱疹病毒DNA电针刺激组的数量减少,而1型单纯疱疹病毒DNA量模型动物组仍高于4天前。这些结果表明,电针刺激对FNP疗效,促进减少1型单纯疱疹病毒。

4.1。机制的底层针灸缓解FNP症状

有人建议,细胞自身免疫机制对髓鞘碱性蛋白可能FNP的发病机制。FNP是一种自身免疫性脱髓鞘颅神经炎,在大多数情况下,这是一个mononeuritic变体的格林-巴利综合征,神经系统疾病与细胞介导免疫反应对周围神经髓鞘抗原。——病毒感染或潜伏病毒再活化的自体免疫反应可能引发对周围神经髓鞘组件,导致炎症和面部神经的髓鞘脱失(29日]。在其进展,FNP伴随着显著的海拔在一些促炎介质,包括肿瘤坏死因子-α(TNF -)、白细胞介素- 6 (il - 6)和interleukin-1β(il - 1β)[30.]。肿瘤坏死因子-、il - 6和il - 1β与广泛的炎症、感染、自身免疫,恶性条件(31日]。异常高水平的血清TNF -也通过炎症会导致面部神经的髓鞘脱失(32,33]。针灸可以显著减少血浆TNF水平在慢性头痛患者34)和mRNA水平的il - 6和il - 1β在老鼠lipopolysaccharide-induced发烧35]。最近发表的一项研究发现一种新的抗炎通路电针刺激的途径。电针刺激坐骨神经控制的系统性炎症诱导迷走神经的激活芳香L-amino酸脱羧酶,导致多巴胺的生产在肾上腺髓质,然后降低TNF -(36]。通过抑制促炎介质的生产,针灸可以帮助减轻面部神经炎症和髓鞘脱失,从而促进面神经修复改善症状。总的来说,针灸可能潜在好处的炎症炎症和传染病通过调节促炎介质的生产。然而,没有直接观察支持,针灸可以降低TNF -的内容、il - 6和il - 1β在1型单纯疱疹病毒诱导FNP在活的有机体内。

4.2。针灸的作用机理来帮助控制1型单纯疱疹病毒感染

4.2.1。准备针灸可以帮助减少1型单纯疱疹病毒复制和传播的效率

1型单纯疱疹病毒可以激活自身免疫途径,包括核转录因子激活B细胞(NF - kappa-light-chain-enhancerB)信号通路。证据表明NF - 1型单纯疱疹病毒能引起持久的易位B (37]。NF -B复合物注定NF -抑制剂(我Bs)如果细胞,从而维护NF -B的活性。我的磷酸化我的B激酶(IKK)复杂的NF -参与激活B,导致我释放NF - B降解B,然后允许它可能促使成核(38,39]。NF -的持久的易位B随后增加了病毒复制的效率(37]。NF -的易位B到受感染细胞的核是一个必要的组件来防止宿主细胞在1型单纯疱疹病毒感染的细胞凋亡,这有助于1型单纯疱疹病毒逃避免疫监视和传播有效的主机(40]。针灸可以抑制NF -异常通过抑制NF - B的表达和激活的在宿主细胞(B信号转导通路41,42]。这可能有助于免疫监测和减少1型单纯疱疹病毒复制和传播的效率。然而,没有直接观察支持,针灸可以抑制NF -1型单纯疱疹病毒诱导FNP B的表达和激活在活的有机体内,这需要进一步研究。

4.2.2。针灸调节免疫反应可能消除1型单纯疱疹病毒

1型单纯疱疹病毒感染后,体液免疫和细胞免疫激活消除1型单纯疱疹病毒。细胞毒性T淋巴细胞抗原在细胞介导免疫性,一种T淋巴细胞杀死癌细胞和感染细胞,激活诱导细胞凋亡在感染病毒的细胞显示外国抗原表面的抗原表位。关于针灸对免疫系统的影响,研究显示刺激对细胞免疫的影响。针灸可以帮助在T淋巴细胞增殖43]。针灸后,辅助T淋巴细胞,T淋巴细胞的一种,帮助其他免疫细胞的活动,和细胞毒性T淋巴细胞显著增加(44,45]。针灸调节免疫应答的能力可以帮助免疫系统消灭1型单纯疱疹病毒。因此,针灸可能有潜在的感染控制传染病通过激活一些免疫途径和调节免疫应答。

4.3。的兼容性FNP Distal-Proximal穴位针灸治疗

穴位针灸处方兼容性是一个关键点,影响治疗效果。有许多古典穴位兼容性的方法,如yuan-source穴位和luo-collateral穴位组合,back-shu穴位和front-mu穴位组合,distal-proximal穴位组合。Distal-proximal穴位常用于治疗FNP组合。例如,风池(合谷)在上肢和一些地方在脸上是针刺穴位组合。穴位之间的协同效应存在,所以穴位兼容性可以加强针灸的有效性。

机制风(合谷)治疗疾病的脸和嘴仍不清楚。形态研究表明,半月神经节接收神经投射风(合谷)46]。此外,神经在风池(合谷)间接项目的孤束核和面部神经直接与孤束核(47]。这可能是风的形态学基础(合谷)治疗疾病的脸和嘴。至于Jiache (ST6),这个穴位附近subbuccal和边际下颌面部神经的分支,它提供的形态学基础,以缓解症状FNP [48]。风的结合(合谷)和Jiache (ST6)刺激周围神经与针刺一个穴位。

5。限制

这项研究有一些局限性。虽然建模方法在这项研究更符合的自然发病机制——模型率是相对低于压缩面神经。此外,这项研究显示了潜在的针灸引发病人的免疫反应,从而进一步减少1型单纯疱疹病毒数量。然而,这项研究还不足以完全阐明针灸的机理在减少1型单纯疱疹病毒数量。未来的研究可能是为了阐明这种机制,如针灸和NF -之间的关系B在FNP在活的有机体内。

6。结论

我们的结论是,在治疗——电针刺激减轻症状,促进神经恢复的影响,并促进减少1型单纯疱疹病毒。针灸可能FNP在控制炎症和感染的治疗优势。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

宏志Tang和Shuwei冯同样都贡献给了工作。

确认

这项研究得到了国家基础研究项目(没有。2012 cb518501)和高等教育的博士学科点科研基金项目(没有。20105132110003)。