文摘

客观的。本调查研究的神经保护作用就双取代巴西橡胶树(AbS)对STZ-induced糖尿病神经性疼痛在实验室老鼠。STZ-induced糖尿病大鼠与AbS的口服药物。体重、血清葡萄糖,和行为参数测量实验前和结束时看到AbS对这些参数的影响。6周的治疗后,所有动物都牺牲了学习各种生化参数。AbS 80毫克/公斤治疗糖尿病动物显示,体重显著增加,疼痛阈值,和爪子撤军阈值显著降低血清葡萄糖、法律事务外包,没有水平,Na-K-ATPase水平,TNF -α和il - 1β水平相比汽车治疗糖尿病动物以时间和剂量依赖的方式。AbS可以在生产提供缓解疼痛。这可能是潜在的收益管理在临床实践中糖尿病神经病变。

1。介绍

糖尿病神经病变是最常见的继发性并发症糖尿病和神经传导速度的放缓,提高疼痛、感觉丧失、和神经纤维变性。糖尿病引起的神经性疼痛被认为是最困难的一种疼痛治疗与常规止痛剂。

目前治疗糖尿病神经病变(生产)包括外围三环抗抑郁药的使用,选择性5 -羟色胺再摄取抑制剂(1),抗痉挛药、阿片类药物和抗氧化蛋白激酶C抑制剂,cox - 2抑制剂(2),非甾体类抗炎药温和止痛剂,等等。然而,这些疗法提供救援只有一小部分病人和他们的副作用概要限制他们使用[3,4]。因此,有必要对新治疗针对生产主要机制导致神经损伤的干预措施。最近,从的角度来看“自我药疗”或“预防医学”,几个膳食补充剂用于预防生活方式相关的疾病,包括糖尿病。

蘑菇和主要basidiomycetous真菌是宝贵的食物是低热量,富含矿物质、必需氨基酸、维生素和纤维(5]。其中一些物质生产与潜在的医疗效果,被称为药用蘑菇(6]。的担子菌类就双取代巴西橡胶树(AbS)原产于巴西和日本广泛种植,因为它的药用价值。广泛用于nonprescript,药用目的,作为一个可食用的蘑菇和提取物的形式。AbS历来用于预防各种疾病,包括癌症、肝炎、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、糖尿病和皮炎(7- - - - - -9]。

然而,AbS在糖尿病并发症的作用没有被调查。本调查的目的是评价AbS对STZ-induced糖尿病神经性疼痛的神经保护效应在实验室老鼠通过评估各种行为和生化参数。

2。材料和方法

2.1。动物

健康成年雄性Wistar鼠(2个月大,体重g)被用于这项研究。本研究按照指南进行的护理和使用实验动物。被小心地减少不适、痛苦和疼痛的动物。

2.2。化学物质

链脲霉素从σ(美国)购买,溶解在0.1 N柠檬酸缓冲。

2.3。发酵的蘑菇AbS提取

AbS的发酵蘑菇生产的生产方式鬼伞属comatus(10]。水提取是由加入100毫升沸水10 g风干菌丝体。注入站在室温下30分钟。冷却和过滤后,冻干法提取被冻结和集中的五天一夜之间,为了获得AbS (0.68 g)。

2.4。糖尿病大鼠的归纳和评估

实验性糖尿病是由一个感应STZ腹腔注射(i.p。)(50毫克公斤⁻¹柠檬酸)新鲜溶解在缓冲博士血清葡萄糖水平评估利用酶葡萄糖氧化酶过氧化物酶商业化工具方法,STZ诱导后72 h。只有大鼠血糖浓度超过240 mg / dL被认为是糖尿病研究和使用。体重和血清葡萄糖测定实验前和结束时看到药理干预措施对这些参数的影响。老鼠的身体重量测量每两周。

2.5。治疗计划和实验协议

四十大鼠高血糖的选择和分配同样分成4组。从那时起,4组高血糖的老鼠口服药物(填喂法)和生理盐水,AbS(20毫克/公斤/天)、AbS(40毫克/公斤/天),和AbS(80毫克/公斤/天),分别。AbS是溶解在等量的生理盐水。另10正常老鼠口服生理盐水和作为对照组。

所有动物的体重记录0,2日,4日,第六周的治疗。所有动物的血收集通过最初retro-orbital路线和治疗6周测定血清葡萄糖水平。

2.6。行为测试

神经病变的发展是在控制和评估糖尿病动物的所有组评估疼痛阈值0,第二,第四和第六周的各自评估治疗的热/机械痛觉过敏和热异常性疼痛(11- - - - - -13]。

2.7。生化评估

所有的动物都在研究结束的牺牲;即6周和坐骨神经被迅速删除和重。组织匀浆准备了0.1 Tris-HCl缓冲区(pH7.4)和匀浆上清液是用来估计超氧化物歧化酶(SOD) (14),脂质过氧化(法律流程外包)15),一氧化氮(无内容)16),和膜结合无机磷酸盐(Na + K + atp酶)17]。肿瘤坏死因子-α和il - 1β浓度是由ELISA量化(Neobioscience,中国)。根据制造商的指示,吸光度(A)检测在450 nm (A450)。每个样本获得的内容根据标准曲线。

2.8。急性毒性研究

AbS是管理的剂量2000毫克/公斤口头十个健康的成年女性Wistar鼠。动物被观察到第一剂量4小时后单独存在的任何临床症状,如皮肤改变皮毛,流泪,唾液分泌,立毛、腹泻、和死亡率。粗鄙的行为观察。幸存的动物被观察到的结果在一段时间内24小时。动物被保存14天的监督下任何毒性的迹象或死亡率(经合组织指导,2000)。

2.9。统计分析

所有数据被单向方差分析分析,和之间的差异意味着建立了邓肯的多个测试。数据显示为均值±SEM。5%的显著水平()是作为最低可接受的概率的方法之间的区别。

3所示。结果

3.1。AbS对体重和血糖水平的影响

STZ-treated动物比对照组大鼠体重显著降低。STZ-treated动物的平均血糖水平明显比对照组高。AbS治疗糖尿病动物的80毫克/公斤体重显著增加(图1),显著降低血清葡萄糖(表1)车辆相比治疗糖尿病动物以时间和剂量依赖的方式。

3.2。AbS治疗热痛觉过敏的效果

疼痛的阈值显著低于糖尿病大鼠与对照组相比在尾巴浸(图进行测试2)。治疗与AbS 80毫克/公斤诱导糖尿病大鼠痛阈显著增加治疗4周后,治疗6周后进一步增加以剂量依赖的方式。AbS 40毫克/公斤治疗显示显著增加疼痛阈值水平与糖尿病控制后6周的治疗。

3.3。AbS机械痛觉过敏治疗的效果

没有明显的变化意味着爪子撤军阈值控制的老鼠在6周的时间。显著降低()是指爪撤军阈值是在糖尿病大鼠(g) 2周后注射STZ相比控制动物(g)。老鼠接受治疗的AbS(40和80毫克/公斤),意思是爪子撤军阈值显著和剂量依赖性增加(和g resp)相比,糖尿病控制老鼠(图3)。

3.4。AbS热异常性疼痛治疗的效果

标志热异常性疼痛中观察到糖尿病的动物就是明证减少疼痛阈值来控制动物相比(图4)。治疗与AbS诱导糖尿病大鼠痛阈显著增加相比,糖尿病动物以剂量依赖的方式治疗6周后。

3.5。AbS治疗脂质过氧化的影响和Nitrosative压力

6周注射STZ后,法律事务外包,没有水平在糖尿病大鼠控制老鼠相比显著增加。AbS的法律流程外包水平80 -治疗大鼠下降(nM /毫克的蛋白质,糖尿病大鼠相比显著),剂量依赖性。没有水平的同时,AbS 80 -治疗大鼠显著和剂量依赖性降低(μg / mL,糖尿病大鼠相比(表)2)。

3.6。AbS治疗对超氧化物歧化酶的影响和膜结合无机磷酸盐

STZ腹腔内管理导致显著下降()在糖尿病大鼠SOD和Na-K-ATPase水平相比,控制老鼠。abs - 80治疗大鼠SOD水平增加(点U /毫克的蛋白质,显著),剂量依赖性糖尿病大鼠相比。同时,AbS的Na-K-ATPase水平80 -治疗大鼠明显和剂量依赖性悬而未决的增加(.40μ摩尔/毫克的蛋白质,糖尿病大鼠相比(表)3)。

3.7。AbS治疗对肿瘤坏死因子的影响α和il - 1β水平

如表所示4,肿瘤坏死因子的水平α和il - 1β在注射STZ后显著增加。AbS 80年镇压STZ-induced TNF -α和il - 1β生产()。此外,肿瘤坏死因子-α和il - 1β在AbS治疗大鼠是剂量依赖性降低水平。

3.8。毒性资料

所有的动物都没有显示任何迹象的毒性或死亡后的头四个小时,剂量和之后下一个14天。

4所示。讨论

糖尿病神经病变的特点是临床特征像触诱发痛和痛觉过敏由于高架疼痛的反应。STZ-induced显示类似症状的糖尿病动物(18]。STZ抗生素提取链霉菌属acromogenes和致糖尿病的是由于选择性对胰腺癌细胞毒性作用β细胞(19]。注射STZ大鼠表现出临床病理的特点包括生化、氧化、代谢变化也呈现在人类20.]。

在目前的调查,在体重损失是停在AbS对待动物与STZ-induced糖尿病动物相比。这表明改善体重可能归因于改善代谢功能障碍在糖尿病大鼠。AbS的降糖效果显著表现出观察类似于先前的报告(21]。

据报道,早些时候STZ-induced糖尿病神经性疼痛的特点是痛觉过敏和异常性疼痛22,23),本研究还发现在注射STZ后。痛阈下降在STZ-diabetic老鼠使用温和的有害刺激,如机械力。此外,也有类似的热痛觉过敏的活动增加糖尿病大鼠与正常大鼠相比,当受到热刺激。在目前的调查,我们发现AbS剂量依赖性管理逆转STZ-induced热痛觉过敏和机械触诱发痛。然而,antihyperalgesic机制和antiallodynic AbS对STZ-induced生产需要进一步研究。

在糖尿病、神经元的痛阈降低是由于氧化应激产生的自由基如超氧化物歧化酶、氢氧自由基和过氧亚硝基损害血液供应导致神经元功能受损的神经元和缺氧24,25]。这些条件进行了评估的生化标记SOD、法律事务外包,Na-K-ATPase,没有。

我们观察到显著增加在法律流程外包和减少内源性抗氧化酶SOD和Na-K-ATPase活动在糖尿病大鼠坐骨神经。治疗与AbS 6周恢复上述以剂量依赖的方式在糖尿病大鼠生化参数。

一氧化氮(NO)是一种非传统的胞内信使在各种病理和生理过程发挥着举足轻重的作用。没有增加本地化水平导致的形成过氧亚硝基反应与超氧化物阴离子导致快速蛋白质硝化或亚硝基化作用,脂质过氧化作用,DNA损伤,细胞死亡和实习有助于提高疼痛(26]。不,nitrosative压力的指标,测量,发现增加的STZ-diabetic老鼠。我们观察到AbS治疗剂量依赖性衰减亚硝酸盐水平STZ-diabetic老鼠表现出热hyperanalgaesia和机械触诱发痛。

从动物模型和人类的证据表明,系统性炎症参与了糖尿病的病理生理过程27]。此外,肿瘤坏死因子-α据报道启动等炎性细胞因子的释放il - 1β和负责导致神经性疼痛- 228,29日]。抑制细胞因子海拔一直提倡使用的代理是用来治疗糖尿病并发症。目前的调查表明,AbS能剂量依赖性降低细胞因子的人口。因此,AbS可能表现出其神经保护作用的差别,对这些细胞因子包括TNF -α和il - 1β神经性疼痛的重要介质。

5。结论

这些结果表明,AbS减毒STZ-induced神经性疼痛行为通过抑制氧化,nitrosative压力,AbS的细胞因子激活,降糖效果。这可能是潜在的收益管理在临床实践中糖尿病神经病变。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究得到了国家自然科学基金(批准号81102608和81102608)和浙江省科学技术综合骨关节病的关键创新团队。