文摘
目的。评价抗菌埃塞俄比亚蜂蜜和姜根茎粉混合物产生的影响,提取金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923),大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)大肠杆菌(R)和肺炎克雷伯菌(R)。方法。琼脂扩散和肉汤化验这些标准进行确定敏感性和耐药临床细菌隔离使用honey-ginger粉提取混合物。结果。Honey-ginger粉提取混合物产生最高意味着抑制而使用蜂蜜或生姜提取物单独。禁忌的范围由honey-ginger提取混合物在敏感测试生物体(26 - 30日毫米)和耐药菌株(范围:19-27毫米)高于7-22毫米和0 - 14毫米标准抗生素光盘。最低抑制浓度(MIC)的混合物honeys-ginger提取物6.25% (0.625 v /毫升)的易感细菌相比,75%耐药临床分离株。最低杀菌浓度(MBC) honey-ginger提取物为12.5% (0.125 g / mL)对所有测试生物体。结论。这项研究的结果表明,honey-ginger粉提取混合物有可能作为廉价来源的抗菌制剂特别是耐药细菌菌株。
1。介绍
植物被用作治疗制剂的来源在传统医药体系自古以来由于生物活性的化合物1,2]。世界卫生组织(世卫组织)将传统医学描述为廉价的方式来实现医疗保险的世界人口和鼓励基于植物的传统药物的合理使用成员国(3,4]。在埃塞俄比亚,一个发展中国家,大约80%的人口依赖传统疗法作为卫生保健的主要来源(3,5]。最近,滥用抗菌药物来治疗传染病导致耐药病原菌耐药株的发展大肠杆菌,克雷伯氏菌肺炎,金黄色葡萄球菌(6]。耐药病原菌菌株在医院和社区的死亡率和发病率的主要原因是(6- - - - - -8]。增加抵抗细菌对现有的抗生素导致许多研究关注抗菌药物来源于植物(9- - - - - -12]。传统医学已成为一种补充医学和拥有一个伟大的承诺有效治疗多重耐药菌株来源的细菌(13,14]。
生姜有几个ethnomedicinal和营养价值,香料和调味剂在埃塞俄比亚和其他地方(15,16]。在过去的几十年里,gingeris广泛研究了其药用价值通过先进的科学技术和多种生物活性的化合物如单宁、黄酮、苷,精油,furostanol, spirostanol,皂甙、植物甾醇、酰胺、生物碱分离出植物的不同部位,分析药物(9,10,17- - - - - -19]。报道了植物抗菌素(10,18- - - - - -22],nephroprotective [22)、抗炎和免疫调节(23)活动。传统上,姜报道totreatnausea、呕吐、气喘、咳嗽、心悸、炎症、消化不良、食欲不振、便秘、消化不良,和痛苦在世界不同的地方24]。同样,姜,传统上,治疗感冒,肚子痛,咳嗽,发烧,在埃塞俄比亚和流感(25,26]。姜根茎粉和蜂蜜的混合物也用于治疗不同类型的呼吸道和胃肠道感染的传统医学的埃塞俄比亚。还发现了埃塞俄比亚蜂蜜有效生产抗菌作用敏感和具有抗药性的细菌从临床分离株在埃塞俄比亚27]。草药药物相互作用的净效应可以添加剂,或对立的协同作用的(28]。植物化学物质的添加剂和协同作用的影响在水果和蔬菜负责他们的强大的抗氧化和抗癌活性29日]。蜜蒜的联合抗菌活性(大蒜)或鲜姜叶或根茎提取物混合物被报道优于单独使用这些抗菌药物(12,30.]。药物相互作用的抗菌药物包含在埃塞俄比亚蜂蜜的混合物和干姜根茎粉提取没有评估。研究抗菌药物的类型的交互蜂蜜和生姜根茎提取物的混合物会给一个了解使用混合物的优势,而不是单独使用生姜或蜂蜜。本研究的目的是评估埃塞俄比亚蜂蜜的混合物(抗菌的效果的蜜蜂和麦蜂蜂蜜)和姜粉乙醇/甲醇提取标准和耐药的临床分离株金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,肺炎克雷伯菌。
2。材料和方法
2.1。研究区和期
蜂蜜和生姜根茎采购于9月和10月,2012年,G。C从贡德尔和提格雷地区在埃塞俄比亚和他们的抗菌效果,包括honey-ginger粉提取混合物,分析了生物技术实验室贡德尔大学从9月20日,2012年,2013年1月1日。
2.2。化学药品和试剂
甲醇(B . A5791)、乙醇(α化学B M120415数量、印度)、氯仿(BDH化工有限公司,普尔,批号27710年,英格兰),丙酮,蒸馏水等不同的化学品和溶剂用于这项研究。
2.3。测试生物
标准和临床分离株微生物等大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923),大肠杆菌(R)、甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌),克雷伯氏菌肺炎(R)是获得贡德尔大学教学医院实验室。
2.4。Honey-Ginger提取解决方案的准备
姜根茎被用胶带和蒸馏水洗净,切成均匀的块使用无菌干燥前刀在microoven 37°C 24小时。干姜块碎用电磨机获取姜粉。不同生姜提取得到将20克的姜粉加入100毫升甲醇和乙醇作为之前的研究(31日]。百分之五十姜溶液(50% v / v)是通过溶解1毫升姜中提取1毫升。姜粉水提取物被认为是负控制在之前的研究没有发现抑制区(31日]。埃塞俄比亚蜂蜜是用无菌纱布过滤100%纯蜂蜜。Honey-ginger混合物将由混合1毫升的生姜提取物和1毫升蜂蜜提取物,将在2毫升蒸馏水稀释获得Honey-ginger提取溶液(50% v / v)。
2.5。制备的穆勒辛顿琼脂(尼古拉斯)
穆勒辛顿琼脂(批号X4225F oxoid,英格兰)介质是由溶解38 g穆勒辛顿琼脂在1000毫升蒸馏水和煮沸,直到完全破裂。解决方案是在高压蒸汽灭菌(121°C, 1条),持续15分钟。暂停是把(20毫升)倒进无菌培养皿在罩在室温下固化。
2.6。准备营养肉汤(7146)
溶解后8 g营养肉汤粉一升的纯净水,混合物混合彻底形成一个清晰的介质将孵化35°C的18 - 24小时后细菌标本接种。浊度表示良好增长。在冷藏条件下营养肉汤培养基可以活得更久。
2.7。制备接种和抗菌活性的测定
细菌的接种是由裸奔的表面上拭子曲折的方式传播细菌,直到覆盖整个表面。与先前消毒软木钻孔机(4毫米)大小,无聊下降100井的距离μL不同生姜提取物和混合物的honey-ginger粉提取琼脂扩散试验。几百毫升(100μL)的蜂蜜、姜粉提取和蜂蜜生姜提取物混合物浓度为50% (v / v)接种到井的大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923),大肠杆菌(R),金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌),克雷伯氏菌肺炎(R)。文化板块在37°C孵化24 h。抑制区被清楚周围井表示以毫米的厚度以评估测试的敏感性程度的生物。
2.8。准备0.5麦克法兰标准和标准化的细菌浓度
在这项研究中,BaCl 0.5毫升的0.048米21.175% (W / V BaCl2 2 h2O)添加到99.5毫升0.18 H2所以41% (V / V)与恒定搅拌0.5麦克法兰标准。标准的分布式成螺旋封顶试管培养液的颜色对比测试。几百微升(100μL)细菌样本营养肉汤培养基(很多Himedia实验室pvt,印度)加入5毫升生理盐水浓度调整每毫升集落形成单位(Cfu /毫升)通过比较麦克法兰0.5标准化。
2.9。最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
几百微升(100μL)的细菌样本营养肉汤培养基加入5毫升生理盐水浓度调整Cfu /毫升通过比较与麦克法兰0.5标准不断搅拌在培养新肉汤中确定的最低浓度能够阻止增长的抗菌剂(最低抑制浓度(MIC))。的接种大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923),大肠杆菌(R),金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌),克雷伯氏菌肺炎(R)在不同营养肉汤培养基含有蜂蜜、姜提取解决方案,和混合物honey-ginger提取解决方案。管是在37°C的20 - 24小时观察孵化浊度(增长),表示蜂蜜的麦克风,生姜提取物,honey-ginger提取测试生物混合物。最低杀菌浓度(MBCs)接种测定营养肉汤的内容用于麦克风测试穆勒辛顿琼脂媒体使用无菌线圈,使罢工在媒体看到细菌生长在37°C孵化后24小时。缺乏增长表示的最小杀菌浓度(MBCs)的抗菌药物。
2.10。药敏
药敏的标准大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)和耐药临床分离株大肠杆菌(R),金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌),克雷伯氏菌肺炎(R)文化是决定使用甲氧西林、阿莫西林、青霉素光盘采用纸片扩散法。结果是解释为耐药、中间或易感通过比较结果与已报道的临床和实验室标准协会(CLSI) [32]。
2.11。统计分析
蜂蜜的抗菌效果(禁忌),生姜提取物,并使用描述性统计honey-ginger提取物混合物进行了比较。所有统计分析已经完成通过使用社会科学统计软件包(SPSS)版本20。比较的蜂蜜、姜提取物和honey-ginger提取物混合物的分析了总体的意思是禁忌使用单向方差分析(方差分析)。值小于0.05被认为是明显不同的。进一步图基的诚实的显著差异(HSD)测试或事后测试执行的效果个体细菌菌株的抗菌药物。
3所示。结果
抗菌药物的整体比较表明,honey-ginger提取混合物产生最高的意思是抑制(25.62毫米±2.55)测试的总生物相比,使用蜂蜜(3.30±21.63毫米)或生姜提取物(3.42±19.23毫米)。从甲氧西林获得至少意味着抑制结果是抗生素光盘(4毫米±5.26)(表1)。honey-ginger提取混合物的平均抑制敏感细菌分离株(27.74毫米±1.56)高于其抗影响隔离(1.72±23.97毫米)。同样,蜂蜜的平均抑制,生姜提取物,honey-ginger提取混合物是高敏感细菌菌株耐药临床分离株(图1)。姜水提取物不产生任何抑制指示生物活性制剂的姜粉不溶于水的。总体的意思是抑制无刺的蜜蜂和蜂蜜的蜜蜂是一样的统计分析采用方差分析和图基的诚实的显著差异(HSD)测试(多重比较),大于0.05 ()。同样,生姜提取物使用甲醇和乙醇溶剂没有差异测试细菌菌株的禁忌。但观察统计上的显著差异,总体的意思是蜂蜜的禁忌,生姜提取物,honey-ginger提取混合物进行了比较()(表1)。
最高的抑制(30毫米)是由honey-ginger提取混合物在易感细菌菌株。禁忌的范围由honey-ginger提取混合物在易感细菌隔离(26 - 30日毫米)和耐药临床分离株(19-27毫米)也大于7-22毫米敏感或0 - 14毫米对抗生素产生的耐药隔离盘(甲氧西林、阿莫西林和青霉素)(表1)。当意味着抑制结果敏感和耐药细菌隔离使用方差分析比较,有显著差异()亲爱的,生姜提取物,honey-ginger提取混合物(表1)。
进一步图基的诚实的显著差异(HSD)测试或事后测试,然而,显示没有显著区别的意思是禁忌的敏感金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)和大肠杆菌(写明ATCC 25922)当蜂蜜()、生姜提取物()和honey-ginger混合物((表)使用2)。同样,没有发现差异意味着压抑时耐药之间的结果金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和大肠杆菌(R)比较honey-ginger混合物()。
最低杀菌浓度(MBC)蜂蜜,生姜提取物,honey-ginger提取混合物为12.5% (0.125 g / mL)。这个浓度是100%的杀菌效果测试生物体。蜂蜜的最低抑制浓度(MIC),生姜提取物,honey-ginger提取混合物表所示3。Honey-ginger提取混合物有6.25% (0.0625 g / mL)所有敏感菌株MIC值比为75%耐药临床分离株(表3)。
4所示。讨论
姜粉水提取物(负控制)没有显示细菌生长抑制测试生物(图1),因为它已经被报道31日]。但是高抑制结果发现生姜乙醇或甲醇提取物(19.23毫米±3.42)测试生物体。最高的抑制(24毫米)由这姜粉提取金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)(表1)小于30毫米金黄色葡萄球菌用鲜姜根茎乙醇提取物在类似的研究11]。这种差异可以解释为水溶性抗氧化剂挥发油的损失从姜粉脱水(22,33]。尽管失去了一些抗菌药物通过蒸发在制作姜粉(33抗菌药物),有机溶剂提取的足以产生抑制敏感金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923和大肠杆菌写明ATCC 25922(24毫米)大于禁忌产生的三个积极的控制抗生素光盘(范围:7-22毫米)(表1)。根据临床和实验室标准协会(CLSI) [32标准化的抗生素光盘,抑制被认为是敏感如果≥18对阿莫西林(25毫米μ甲氧西林g),≥14毫米(5μ对青霉素g),≥29毫米(10μg),阿莫西林光盘获得的结果显示金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)被标准化手册(易感已经报道32]。非常低的抑制的结果标准抗生素光盘确定耐药临床分离株。平均(1.72±23.97毫米)和范围(19-27毫米)产生的禁忌honey-ginger提取混合物抗临床分离株大于平均(6.38毫米±5.24)和范围(0 - 14毫米)的抗生素光盘(甲氧西林、阿莫西林和青霉素)。姜粉乙醇/甲醇提取物的抑制增强(25.62毫米±2.55)通过与蜂蜜混合由于协同抗菌作用honey-ginger提取混合物已经报道的10]。姜粉乙醇/甲醇提取物是积极的已知抗菌药物如皂苷、生物碱、phlobatannin,类黄酮,和心脏苷(10]。不同蜂蜜的抗菌效果可能与植物化学物质如酚酸(苯甲酸、肉桂酸)和类黄酮(黄烷酮类、黄烷醇),据报道重大贡献的蜂蜜的抗氧化能力,根据植物来源的不同变化很大34]。蜂胶的存在使得无刺的蜜蜂蜂蜜的抗菌效果略有不同的蜜蜂亲爱的[35]。蜂胶(树脂保护屏障)含有黄酮类化合物、芳香酸、酯类、醛类、酮类、脂肪酸、萜烯、类固醇、氨基酸、多糖、碳氢化合物、醇、酚、和其他一些化合物在微量36]。当的蜜蜂蜂蜜(桉树)和无刺的蜜蜂蜂蜜比较,前者有酚和类黄酮含量高于无刺的蜂蜜反过来有更高的抗氧化活性37]。不同的埃塞俄比亚蜂蜜的抗菌效应已经评估麦蜂蜂蜜生产相比略大的意思是抑制的蜜蜂亲爱的[27]。但图基的诚实的显著差异(HSD)(事后测试)测试显示没有显著区别的意思是无刺的蜜蜂蜂蜜和压抑的蜜蜂蜂蜜()对敏感金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)和大肠杆菌(写明ATCC 25922)。很多,但不是全部,菌株常见的人类死于黄酮类化合物,即使的机制尚不清楚38]。honey-ginger提取混合物的协同抗菌作用可能相关的主要是这些类黄酮混合物的体积增加因为成分包含这些抗菌药物。
抗菌活动(抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫)蜂蜜的报道由于渗透性高,酸度,过氧化氢,植物化学物质39- - - - - -45]。在活的有机体内使用蜂蜜对人类作为治疗剂的评价取决于nonperoxide植物化学的组件的蜂蜜为过氧化氢可以被过氧化氢酶在体内组织和血清(46]。同样,高渗透性和蜂蜜的酸度摧毁人类的消化系统或血液循环。麦卢卡蜂蜜Apinae的nonperoxide的植物化学成分成分(由处理后去除氧化氢/酶过氧化氢酶)从新西兰已经发现大量的抗菌活性水平(47]。这样的麦卢卡蜂蜜是测试七种细菌和发现麦克风(最低抑制浓度),范围从1.8%到10.8% (v / v) (48]。也许,口服honey-ginger提取物混合物,临床评价和药理标准化后,可能对一些耐药治疗疾病导致细菌菌株。最低杀菌浓度(MBC),本研究为12.5% (0.125 g / mL)敏感和耐药细菌菌株。honey-ginger提取物的最低抑制浓度(MIC)混合了6.25% (0.0625 g / mL) 75%(100%)敏感和耐药细菌菌株(表3)。事实上,蜂蜜和姜都是用于人类营养和他们的混合物作为抗菌剂的有效性在非常低的浓度使honey-ginger混合物的一种新型有效的药物来源菌株耐药细菌。进一步的临床评价和药理的标准化honey-ginger提取混合物之前建议使用混合物对耐药细菌菌株用于治疗目的。
5。结论
总之,honeys-ginger粉提取混合物被发现的抗菌效果比单独使用蜂蜜或生姜提取物的解决方案。使用蜂蜜和生姜提取物等耐药细菌的混合物金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)大肠杆菌(R)和克雷伯氏菌肺炎建议(R)。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
Yalemwork Ewnetu Wossenseged引理,Nega Birhane参与选择研究区和准备的建议。Yalemwork Ewnetu实验作为硕士论文的一部分和Nega Birhane监督整个活动和回顾了文档。Wossenseged引理参与统计分析和准备的。
确认
我们想感谢贡德尔大学资助这项研究和生物技术部门为我们提供所有的设备在实验室活动。我们感激地承认先生Mehari Birhane,理科硕士的学生部门生物技术(贡德尔大学),购买白色的提格雷蜂蜜从Adwa镇(提格雷区)。我们还要感谢贡德尔大学教学医院实验室提供测试生物体。也感谢去实验室生物技术部门的技术人员请支持。