药用植物的抗诱变剂的效果蓍属原和紫荆花forficata体内

文摘

传统药用植物的调查是有价值的潜在的化疗药物的来源,衡量安全的继续使用这些药用植物。蓍属原l . (AM)是一种古老的补救草本植物原产于欧洲,是用来治疗伤口,胃肠肝胆的障碍,炎症,头痛,和痛苦。紫荆花forficata链接(BF),一个亚洲植物,是一种最常用的植物在民间医学预防糖尿病。本研究的目的是评估水提取的细胞毒性和抗诱变剂的潜力是和男朋友Wistar鼠骨髓细胞的治疗在活的有机体内。这些植物提取物具有相当的抗氧化活性黄酮类和酚类化合物。这些化合物是noncytotoxic决定因素和抗诱变剂的/保护这些植物的作用,减少统计的百分比染色体改变的化学治疗剂环磷酰胺诱导同步(点,68%;男朋友,91%)、前置(点,68%;男朋友,71%)和后处理(点,67%;男朋友,95%)。因此,这项研究的结果表明,提取的原和b . forficata抗诱变剂的潜力,他们的消费可以受益的健康使用它们作为替代治疗。

1。介绍

近几十年来,信息的数量(热带植物的使用大大增加1- - - - - -3]。巴西拥有伟大的生物多样性和当地的人有丰富的知识积累直接访问这些资源性质和(4]。因此,民间医药在巴西,这是来自巴西本土文化的混合物以及从殖民时期欧洲和非洲的影响,是知识的基础,对于这些传统药用植物3]。

蓍属原l .(菊科),俗称蓍草,是一种古老的补救草本植物原产于欧洲和用于治疗伤口,胃肠、肝胆的障碍、出血,痉挛性疾病,炎症,头痛,和痛苦5,6]。植物化学的检查显示化学成分的原(AM)现在几次生代谢物,包括精油、倍半萜烯,生物碱achilleine,类固醇,三萜,和类黄酮,由De Souza et al。7]。许多这些物质有有益的影响体现在一些病理条件。一些传统的使用进行了调查和实验研究证实,包括抗炎,镇痛,抗溃疡,抗焦虑药,王亚南,低血压患者,抗增殖对人类tumoral细胞(7- - - - - -13]。尽管治疗应用的物种,人类一定的毒性作用,包括鼻炎,哮喘,和接触性皮炎,也被报道10]。

紫荆花forficata链接(豆科),一个亚洲植物适应巴西气候,是一种最常用的植物在民间医学预防糖尿病。这是通常被称为“牛的爪子”,因为它们的叶子的形状(14]。植物化学的研究表明这种植物含有生物碱、丹宁酸、粘液、精油、生氰heteroglycosides,花青素,皂甙,儿茶酚,固定的挥发性酸(15]。的血糖过低的活动b . forficata(BF)是由糖基黄酮类化合物的存在,主要是kaempferitrin,存在于植物的叶子和很容易提取,从水溶液中提取16]。Peroza et al。17]研究表明,叶的水提物的男朋友是一个潜在来源的天然抗氧化剂,可能有助于预防糖尿病并发症与氧化应激有关。除了这些活动之外,男朋友也有行动,抗菌,抗增殖和凋亡18,19]。

因为消费茶或水提取物或男朋友治疗几个条件,包括疼痛和糖尿病,与传统药物或协作的,感兴趣的是确定这些植物的使用任何好处在细胞学和染色体水平,在我们之前的工作没有伤害。研究涉及药用植物的抗诱变剂的潜力很重要,因为这些植物可以作为治疗的一种手段在不干扰正常生活方式或结果的摄入过多的合成物质。因此,本研究从站之前的评价进行了调查研究,因为潜在的抗诱变剂的/保护器功能和高炉水提取物,对环磷酰胺、诱变化学治疗剂,使用测试系统纯种老鼠的骨髓细胞鼠形,在活的有机体内。

2。方法

2.1。在活的有机体内测试

2.1.1。治疗方案

植物,蓍属原12173年l .(我)(使干燥HUEM, 07/06/2006,纬度:−23.4253长:−51.9386)和紫荆花forficata链接(BF)(使干燥HUEM 12489 23/08/2006,纬度:−23.4253长:−51.9386),收集当天治疗说教的州立大学的花园Maringa (Maringa、公关、巴西)。每个工厂的水提物由注入新鲜的叶子(我35 g / L的水和男朋友4.65 g / L的水)。开水倒在或者男朋友离开,15分钟后,注入淋溶,允许冷却。这些浓度对应于十倍浓度通常使用的普通人群,没有细胞毒性或致突变的潜在Camparoto et al。20.),特谢拉et al。21]。

2.1.2。纯种老鼠的骨髓细胞

六个Wistar鼠(鼠形),三个男性,每组三个女性得到从中央Maringa州立大学的植物园。实验使用35天的老老鼠体重约100 g (bw)。

抗诱变剂的分析,植物是由填喂法(100 mL / g bw) (2 h预处理)之前,同步(同步治疗),或(2 h后处理)后的应用环磷酰胺腹腔注射1.5毫克/毫升。

2.1.3。道德声明

在实验期间,温度控制下的动物仍然±25°C,湿度在±50%和12小时光明/黑暗的光周期。此外,所有的道德原则、协议和规定与实验室动物实验是根据国际标准建立和使用经批准的项目的机构伦理委员会Maringa州立大学(UEM)和伦理委员会在动物实验中使用(CEAE) / UEM,遵循伦理原则建立的动物实验巴西大学动物实验(COBEA),以及具体的治疗和集合协议染色体畸变试验。

2.1.4。染色体畸变试验

染色体畸变试验进行骨髓细胞从Wistar鼠使用福特和金•方法22),做了一些调整。有丝分裂细胞被打断在中期的腹腔内政府0.5毫升/ 100 g bw的秋水仙碱(0.16%)、前半小时安乐死。幻灯片的分析是由一个光学显微镜,分析100年中期/动物细胞,每个控制和治疗组共计600个细胞。

细胞被评估的外观变化,如空白,休息,碎片等。有丝分裂指数(MI)的细胞毒性评价从每5000个细胞性,计算每组共计10000个细胞。MI计算百分比如下:分裂细胞的数量除以总数量的细胞出现在字段。使用卡方检验进行统计计算(,)。

2.2。物理化学特性

2.2.1。收集和干燥的植物

部分(叶子和茎)的天线原和b . forficata收集在说教的花园Maringa州立大学和在室温下干燥。

2.2.2。水提物的制备

每个工厂准备使用的输液1.0 g的干叶子在100毫升蒸馏水大约100°C 10分钟。之后,注入过滤100毫升容量瓶和蒸馏水的半月板校准。样本冷藏24小时前分析。

2.2.3。总酚类化合物含量的测定

总酚含量的测定水提物(10000μ执行g / mL)根据Folin-Ciocalteu的比色方法。250年一个整除μL样本稀释的蒸馏水(1:10 v / v)包含1250年被调到比色皿μL Folin-Ciocalteu试剂稀释的蒸馏水(1:10 v / v)。混合物动摇了,5分钟后,1毫升的碳酸钠溶液4% (w / v)补充道。2小时后休息,在没有光,样品的吸光度是读740紫外可见分光光度计(λ750年,珀金埃尔默)。总酚含量测定用校准曲线插值构造与标准没食子酸(浓度之间的5和80 mg / L),表示为毫克每克没食子酸当量的提取(mg GAE / g)。所有的决定都是一式三份。

2.2.4。总类黄酮

类黄酮的测定进行了根据Funari描述的方法和铁23与适应性。浓度的解决方案在10000年准备μ克/毫升的水提取物。一毫升的这个解决方案被转移到10毫升容量的玻璃瓶,1.0毫升的2%铝chloride-ethanol试剂添加,完成与乙醇的体积。30分钟后,读数进行在425 nm分光光度计(750紫外可见λ,珀金埃尔默)。在阅读每个提取之前,单位重置为零的解决方案包含所有试剂除氯化铝溶液。

校准曲线的建设methanolic溶液的制备芦丁(0.5毫克/毫升)。被6整除10毫升容量的玻璃瓶所含氯化铝1毫升的2%乙醇,完成与乙醇的体积。30分钟后,读数425海里。结果表示为毫克每克芦丁的提取,或每克的植物干燥和百分比。

2.2.5。测定抗氧化活性的清除DPPH自由基的方法

测定抗氧化活性是由光电比色计的DPPH (2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl)。一毫升的注入不同浓度添加到2.0毫升(40 DPPH的解决方案μ在甲醇g / mL, 0.10毫米)。剩下的在黑暗中30分钟后,吸光度是阅读在515 nm紫外可见分光光度计(λ750年,珀金埃尔默)。甲醇装置被重置。对于每一个样品,我们准备了白色取代甲醇2.0毫升的DPPH的解决方案。消极的控制是通过增加准备1.0毫升的甲醇2.0毫升的DPPH的解决方案。DPPH自由基的抑制百分比是根据公式计算Kulisic et al。24抑制]% =,在那里=吸光度控制和负面影响=样品的吸光度−空白的吸光度。

样本的数量需要减少DPPH 50%的吸光度计算图形化描述的方法显示Kulisic et al。24]。一个图的抑制百分比(%)与样品浓度绘制,50%的DPPH的抑制是通过直线的方程。二叔丁基对甲酚作为参考化合物和决定都是一式三份。

2.2.6款。统计分析

结果提出了对应的化学平均三个复制±标准差。被认为是统计不同的抗氧化活性结果表明,零假设的概率小于5% (),应用方差分析,其次是多个图基测试比较。统计分析进行使用STATISTICA 8.0版(美国塔尔萨StatSoft, Inc .)。

3所示。结果与讨论

这项研究的结果表明,水提取物(35 g / L)和男朋友(4.65 g / L)由填喂法(1毫升的解决方案/ 100 g bw)没有细胞毒性,也就是说,没有改变的骨髓细胞的有丝分裂指数Wistar鼠相比,负控制(−SIM卡,前,POS;男朋友−SIM,前,POS)(图1)。

我们实验室以前公布的数据(20.,21),也没有细胞毒性纯种老鼠的骨髓细胞在不同浓度(−3.5 g / L = 0.90%和35 g / L = 1.40%;男朋友−0.465 g / L = 1.57%和4.65 g / L = 1.53%)证实了这些结果。

卡瓦尔康蒂et al。10)管理急性剂量的10 g / kg水是口头提取大鼠和3 g / kg腹腔内,无一例死亡报道。在长期的研究中,没有相关的毒性的迹象在Wistar鼠处理水提取物剂量高达1.2克/公斤/天填喂法长达90天的报道;然而,轻微的肝重量和血胆固醇和血糖水平的变化被观察到,虽然也不与剂量和时间的暴露或被暗示了毒性。Pepato et al。15]评价高炉的口头管理汤大鼠的影响毒性标记淀粉酶(胰腺毒性)、肌酸激酶(肌肉毒性)、乳酸脱氢酶(肌肉和肝脏毒性),胆红素(肝脏和胆毒性)和血管紧张素转换酶(肾微循环和肾毒性),得出的结论是,汤可用于糖尿病的治疗,能改善糖尿病条件下不会引起组织毒性,使用如图所示的生物标记。

林等。25)确定的抗增殖活性的提取(2000μg / mL)在不同的人类肝脏肿瘤。HepG2的平均抑制增殖是55.3% / C3A SK-HEP-1和HA22T / VGH线20.3%,线Hep3B和PLC /脉冲重复频率/ 5。同样,霍et al。26]孤立点的各种化合物,主要是类黄酮具有抗增殖潜力在乳腺肿瘤和前列腺细胞(MCF7WT曲泽,resp)。本研究中使用的植物也显示高水平的类黄酮和总酚类,如表所示1。

考虑到结果,观察到的抗氧化活性与总含量直接相关的酚类化合物和黄酮类植物。这个结果符合Droge的报告(27),这表明酚类化合物存在于大多数植物抑制自由基的形成。

因此,由于证明我和男朋友及其抗氧化活性的酚类成分,重要的是要评估是否这些药用植物的水提取物可以帮助预防或修复的细胞暴露于潜在诱变剂造成的变化,除了证明有益健康和福祉。

这些植物的保护作用的水提取物是由测试他们antimutagenicity潜力。我们的结果支持这一事实这些植物没有诱变活性在先前的研究20.,21),没有染色体改变观察Wistar鼠的骨髓细胞在相同的条件下。在我们的例子中,不同的治疗方法是显著降低(SIM卡;精准医疗;帖子)致染色体断裂的代理环磷酰胺诱导的染色体变化约68.5%的同时治疗,68.1%的预处理、后处理和67.1%(图2)。然而,这种减少在统计学上不同于消极的控制(SIM卡;精准医疗;帖子)。

值得注意的是蓍属原和紫荆花forficata植物呈现相似类型的染色体改变,缺口和优惠,主要是染色单体,主要在同时治疗(= 97.5%,男朋友= 81.8%),预处理(= 95.1%,男朋友= 35.1%),和后工序(= 92.8%,男朋友= 100%)。这些数据表明,一些化学制剂,作为我的水提取物和男朋友,不会引起许多DNA双链断裂,而是其他病变,如chromatid-type畸变。

三个治疗与高炉水提物显示比我治疗更有效的抗诱变剂的作用。同时,前,后工序显著降低(SIM卡;精准医疗;帖子)由环磷酰胺引起的损害为91.4%,同时治疗,71.1%的预处理、后处理和94.6%。此外,治疗后与男朋友提取物能够降低环磷酰胺诱导的损害负控制观测到同一水平,表明一种有效的抗诱变剂的活动(SIM卡;精准医疗;帖子)(图2)。动作发生的治疗机制的抗诱变剂的物质作用于诱发突变的形成的过程或DNA损伤的修复28- - - - - -30.]。

里贝罗et al。31日)也证明了本文的爪子的有效抗诱变剂的活动(紫荆花holophylla锣)在肝细胞癌(HepG2)。在这种情况下,有一个减少微核的频率(76%)诱导苯并[a]芘与本文的爪子同时治疗(7.5μg / mL)。

根据Stavric [32),抗诱变剂的化合物可以在细胞水平上通过提高酶的活动参与解毒的诱变剂,抑制酶的活动参与诱变剂代谢产物的形成,捕获electrophils,清除活性氧,抑制代谢激活,或保护亲核站点的DNA。

从这个意义上说,它是可能的抗诱变剂的活动是和男朋友的共同作用可能是由于组件,尤其证明了类黄酮和酚类化合物。茶多酚,尤其是黄酮类化合物清除自由基的理想结构,还可以与活动组的诱变剂或保护DNA的网站会影响诱变剂(33- - - - - -35]。这些化合物的抗氧化活性,因此提取赋予这些植物有能力拦截细胞代谢产生的自由基或外生来源,如造成环磷酰胺的作用在这项研究中,从而防止损伤脂质、氨基酸、蛋白质、不饱和脂肪酸双键,和DNA碱基(36- - - - - -38]。

点的水提取物和男朋友可以直接在化合物诱导DNA突变,化学或酶灭活,可以抑制代谢激活promutagenic代理人,或清除活性分子,解释为Kada et al。28和黑田等。30.]。因此,相当多的在这两个植物黄酮类化合物的含量肯定导致他们有效的抗诱变因素的活动。

4所示。结论

我们观察到植物的水提取物(蓍属原和紫荆花forficata),它通常用于治疗疼痛和糖尿病,有相当多的抗氧化活性,没有细胞毒性的活动,可能导致减少染色体等化疗药物环磷酰胺诱导的损害。因此,食用这些植物可以带来额外的好处和保护个人经历与环磷酰胺治疗或者使用它们治疗的目的,提高他们的生活质量和健康。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

承认

作者感谢实验室的研究小组的诱变和环境监测,Maringa州立大学,公关,巴西。

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