文摘
本研究旨在探讨针灸治疗的疗效和机制在老鼠胚胎植入失败。怀孕的大鼠随机分为正常组(N),植入失败组(M),针灸治疗组(A),和黄体酮治疗组(W)。胚胎植入失败模型建立了米非司酮。针灸治疗的效果被植入胚胎的数量进行评估。CCL2 CXCL8和子集的表达在子宫内膜子宫自然杀伤细胞检测到。我们表明,植入胚胎的数量大幅减少后米非司酮(M组)治疗,而针灸(一组)和孕酮(W集团)治疗显著获救胚胎植入受损。蛋白质和mRNA表达CCL2 CXCL8被米非司酮治疗显著降低,但减毒表达式CCL2, CXCL8被针灸或孕酮治疗显著逆转。更重要的是,针灸和黄体酮可以显著提高的子集uNK细胞在大鼠胚胎植入失败。这些证据表明针灸能够调节免疫微环境,从而提高胚胎植入子宫内膜在怀孕的老鼠,它提供了坚实的实验证据针灸治疗不孕症的疗效。
1。介绍
胚胎发育到囊胚阶段,成功的植入子宫内膜,并形成有功能的孕期胎盘是必不可少的步骤。成功的胚胎植入和健康胎盘发展使胎儿获得孕产妇营养供应和维持其生长和发育,直到分娩。粘膜组织,子宫内膜必须防止感染和创造一个独特的免疫microenviroment允许semiallogeneic胚胎的植入和蜕膜胎盘发展动脉重塑1]。
趋化因子是总科的结构上和功能上相关的细胞因子和趋化现象的活动针对特定白细胞数量。白细胞的趋化因子扮演重要角色在归航特定区域内组织和白细胞的强有力的催化剂。很明显,趋化因子是移植成功的重要决定因素,胎座式函数作为白细胞化学引诱物,影响滋养层迁移,和额外的功能,如调制粘附分子表达的细胞增殖和修改(2]。CXCL8,一个科学家趋化因子,是由绒毛膜滋养层(3和蜕膜4),局部的血管周的胎盘绒毛细胞在妊娠前三个月,到期5]。不仅是一种强有力的化学引诱物和激活的中性粒细胞和淋巴细胞),但是也有一些其他功能,包括作为中介对血管平滑肌的迁移6)和血管生成因子(7]。单核细胞化学引诱物蛋白质属于CC-chemokines亚科,是一种强有力的化学引诱物和激活单核细胞、巨噬细胞、t细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和自然杀伤细胞。CCL2发布的许多类型的细胞,如内皮细胞、成纤维细胞和子宫内膜细胞。丹尼森等人证明的水平明显高于CCL2被释放从孕妇外周血单核细胞相比,妊娠妇女(8]。CCL2存在高浓度的胚外体腔液在怀孕的前三个月(9]。CCL2的表达及其受体CCR2乳素可以调节荷尔蒙,例如,雌激素,孕激素,和人类choriogonadotropin (HCG),这表明CCR2和CCL2之间的相互作用可能参与调节蜕膜基质细胞功能(10]。
怀孕期间,大量的白细胞积聚在子宫内膜。这些细胞生长因子,细胞因子、蛋白酶和创建局部微环境宽松的组织重构。这些白细胞与母婴互动影响植入部位(11]。子宫自然杀伤细胞(uNK)是最丰富的终末分化淋巴细胞人口中发现mesometrial蜕膜在早期妊娠妇女和啮齿动物(12,13]。在人类中,uNK细胞(CD3的−、CD56 + CD16−)占70%的蜕膜白细胞在早期妊娠。这些细胞开始渗透到子宫内膜LH + 3天,专门积累在螺旋小动脉和decidualized基质、蜕膜中,直到怀孕第二阶段(12]。他们的存在是符合的滋养层入侵。在小鼠和大鼠,uNK细胞在过去一直称为“粒状metrial腺体细胞”(GMG)或“大颗粒淋巴细胞。“uNK细胞聚集在胎盘植入网站和metrial腺或mesometrial淋巴总怀孕(MLAp),形成一个独特的结构位于mesometrial三角形在啮齿动物怀孕期间(14]。NKR-P1作为信号转导分子,表达对所有老鼠大颗粒淋巴细胞NK活性(15]。最近的证据从小鼠NK细胞缺乏建议这些特殊免疫细胞扮演重要角色在胎儿滋养层细胞的入侵和螺旋小动脉重塑(16]。
迄今为止,辅助生殖技术(ART),如试管受精胚胎转移(IVF-ET)和胞浆内精子注射(ICSI),有效地解决了胚胎植入前的一些问题,包括输卵管阻塞和受精失败;然而,妊娠的临床成功率仍不满意,IVF-ET成本高,这不仅会导致高情感和金融危机,很多病人也让临床医生。因此,如何提高成功率IVF-ET已成为临床医生的一个关键问题。针刺疗法被广泛用于治疗急性和慢性疾病在中国。最近,一些研究表明,针灸可以提高患者的妊娠率的艺术。我们团队中的一项研究表明,针灸可以提高植入率4倍相比,老鼠胚胎植入失败(17]。安德森等人还指出,针灸可以提高试管婴儿的成功率和可能是一个安全的试管婴儿患者的辅助治疗(18]。如上所述,CCL2, CXCL8 uNK细胞扮演重要角色在胚胎植入和孕期胎盘形成,所以针灸是否可以调节这些趋化因子的表达和uNK子集的细胞已经很少了。
针灸、中药治疗的一个重要组成部分,是基于理论,有渠道(穴位)体内的“气”和“血”流传。全身经脉相连。沿着这些穴位,有特定点(穴位)。通过刺激的穴位,针刺可以调节的“气”、“血”的经络系统,正确的体内器官功能障碍,恢复其正常的功能。根据中国传统医学(中医)理论,“点”穴位是身体中最重要的一个穴位,可以有效地预防疾病和延长寿命。“Sanyinjiao”穴位被广泛用于治疗妇产科疾病。在老鼠被选这两个穴位治疗胚胎植入失败。
孕激素诱发子宫内膜decidualization,减少子宫的活动,而米非司酮抑制孕酮通过绑定到孕激素受体的功能。在目前的研究中,我们使用米非司酮生成一个老鼠胚胎着床障碍模型和黄体酮作为一个积极的针灸效应模型。然后我们调查了针灸是否影响的表达CCL2, CXCL8 uNK细胞的子集。本研究将提供有价值的实验证据关于针灸对不孕症的治疗功效。
2。材料和方法
2.1。动物
女性Wistar鼠(10 - 12周大,重量g)和成年雄性Wistar鼠(体重250 - 300克)是经湖北省疾病预防控制中心。我们跟着的保健指南和使用动物研究由湖北市科学技术委员会执行。所有协议都是批准的动物保健和同济医学院伦理委员会的机构,华中科技大学。老鼠笼在一个标准的屏障系统12小时光:12小时黑暗周期。
2.2。试剂
米非司酮片(北京紫竹药业有限公司、有限公司、北京、中国)和孕酮(浙江仙居制药有限公司,杭州,中国)是由同济医院提供。胶原酶IV型(C5138)、透明质酸酶(H3506)和phenylmethanesulfonyl氟化解决方案(93482)从σ购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。EZ-Sep鼠标(DKW33-R0100)从Dakewe购买生物技术有限公司有限公司(中国,北京)。RPMI 1640中(SH30809.01B)热费希尔科学有限公司有限公司(中国,北京)。的边后卫购买从杭州四季青生物工程材料有限公司有限公司(杭州)。HRP-goat anti-rabbit免疫球蛋白(H + L)共轭(zb - 2301)和DAB染色试剂盒用于免疫组织化学产品,北京中山生物技术有限公司有限公司(中国,北京)。里帕裂解缓冲(P0013B), BCA蛋白质化验用品(P0010S),并从Beyotime BeyoECL + (P0018)生物技术研究所(海门,中国)。鸡尾酒蛋白酶抑制剂是来自武汉Gugeshengwu科技有限公司有限公司(武汉,中国)。HRP-goat anti-rabbit免疫球蛋白(sc - 2030)和山羊或兔子anti-rat肌动蛋白多克隆抗体(sc - 1616 r)是来自圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国)。总RNA提取试剂(试剂盒)PrimeScript实时RT试剂盒完美(豆类代码:DRR037A)和SYBR预混料Taq交货(豆类代码:DRR041)来自豆类生物科技(大连)有限公司,有限公司(中国大连)。 Rabbit anti-rat CCL2 (ab7202), rabbit anti-rat CXCL8 (ab7747) were purchased from Abcam (Cambridge, MA, USA). FITC anti-rat CD3 Antibody (201403), Alexa Fluor 647 anti-rat CD161 antibody (203110), Alexa Fluor 647 mouse IgG1, and同形像Ctrl抗体(400135)来自BioLegend有限公司(美国圣地亚哥,CA)。核酸/蛋白分析仪(DU730、贝克曼库尔特公司,富勒顿、钙、美国);Mastercycler梯度PCR仪(股份公司、德国汉堡);尼康影像系统(TE2000-U、东京、日本);应用生物系统公司StepOne实时PCR系统(应用生物系统公司、表达载体、大岛,纽约,美国;标仪(BioTek Synergy2 Winooski, VT,美国);FACSCalibur (BD生物科学,圣何塞、钙、美国)。
2.3。实验设计
1周适应后,雄性和雌性老鼠交配下午6点,和第一天怀孕的定义是这样的,阴道涂片在第二个早晨。怀孕的老鼠被随机分为4组:正常组(N),米非司酮组(植入失败组)(M),针灸治疗组(A),和黄体酮治疗组(W)。同样在每组大鼠随机分为D6组()、D8集团(),D10集团(根据样本集合的时间)。胚胎植入的失败模式和治疗进行了如前所述[17]。短暂,老鼠成群M,和W与米非司酮治疗方案在5.5毫克/公斤,颈部皮下注射D1早上9点,当老鼠在N组注射等量的香油。“点”(ST36)和“Sanyinjiao”(SP6)被选为针灸。一位白手起家的约束是用来限制老鼠的活动。A组的老鼠是获得与白手起家的克制,然后接受针灸治疗的患者每天下午3点从D1到死亡的时间。针灸治疗进行了25分钟每天。相应地,老鼠在W组被给予黄体酮肌内注射40毫克/公斤。
2.4。样品收集
老鼠被下颈椎脱位6 1%戊巴比妥钠在天,交配后8、10。收集子宫和胎儿的数量统计。每组的子宫也同样分为两个子组()。一群的完整子宫立即被放在1640介质(补充10%胎牛血清(的边后卫)uNK细胞的分析。部分子宫组织与植入另一群网站石蜡嵌入在4%多聚甲醛溶液固定,而其余组织存储−80°C的RNA提取和蛋白质检测。
2.5。子宫内膜癌淋巴细胞和流的隔离uNK细胞仪分析
在PBS补充新鲜的子宫被完全50μ克/毫升庆大霉素。子宫腔沿着antimesometrial一边被割开。在解剖显微镜下,胎儿都丢弃,子宫内膜受影响的胎盘植入网站和保留。收集组织被切碎1毫米3碎片。这些作品被酶消化RPMI 1640中包含0.1%胶原酶IV型和0.1%透明质酸酶的激动在37°C水浴2小时。组织的混合物通过一个不锈钢网中使用注射器柱塞和离心机在1500 g在室温下为5分钟。细胞颗粒是resuspended RPMI 1640中有10% FCS,仔细对淋巴细胞分层分离介质,然后在2000 g离心机为30分钟22°C。白色的淋巴细胞细胞层是吸气的界面和收获。台盼蓝排斥试验发现,95%以上的孤立的细胞是可行的,然后是细胞的密度resuspended 104细胞/毫升。细胞表面染色与FITC-labeled anti-rat CD3单克隆抗体和Alexa萤石647 -标记anti-rat CD161单克隆抗体是使用30分钟完成孵化RT在黑暗中。控制,细胞染色与相应isotype-matched抗体。这些细胞被resuspended在100年μL PBS缓冲,然后用FACSCalibur分析。仪表补偿是在每个实验中使用单色彩色样本。数据分析使用WinMDI2.9软件。
2.6。免疫组织化学
石蜡切片(5μ米)都保存在烤箱1小时60°C。这些部分是deparaffinized和患者通过退化的乙醇。抗原检索是由孵化的部分在0.01 M柠檬酸缓冲(pH值6.0)20分钟的98°C。使用3% H内生氢过氧化物酶活动就熄了2O2。阻止了非特异性结合预培养的组织部分5%的牛血清白蛋白(BSA)。主要在PBS稀释的抗体(CCL2, 1: 150;CXCL8, 1: 40)和孵化组织部分一夜之间在4°C。消极的控制幻灯片在PBS孵化。合标记的部分是孵化山羊anti-rabbit免疫球蛋白然后用新鲜孵化3,3′-diaminobenzidine和哈里斯苏木精复染色。组织染色观察下一个尼康的影像系统,平均每个图片染色强度是衡量Image-Pro + 6.0软件。
2.7。免疫印迹分析
子宫内膜着床网站没有一个胎儿在里帕均质裂解缓冲然后在12000 g离心20分钟在4°C除去不溶性材料。浮在表面的收集和储存在−80°C。蛋白质浓度与BCA量化分析工具。蛋白溶解产物在98°C加热10分钟,解决12% (β肌动蛋白)或15% (CCL2和CXCL8) sds - page和electrotransferred硝化纤维膜用半干的传输装置。膜被封锁在PBST 5%脱脂牛奶在室温下2小时然后孵化与稀释抗体(β肌动蛋白1:200;CCL2 1: 500;CXCL8 1: 100)在一夜之间在4°C。膜是孵化与辣根peroxidase-conjugated anti-rabbit二级抗体(1:20000;室温1小时)。过氧化物酶活性与BeyoECL +可视化根据制造商的指示。使用爱普生成像系统信号可视化。带密度的定量是使用一个软件数量执行。结果计算比率(感兴趣的蛋白质/β肌动蛋白)。
2.8。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)
子宫内膜着床网站没有胎儿与试剂盒试剂分离,根据制造商的指示。由核酸RNA纯度和浓度测量/蛋白分析仪。互补DNA(互补)合成master-cycler梯度PCR仪器使用后PrimeScript RT试剂盒标准协议。引物的设计根据发表的序列(表1)。互补脱氧核糖核酸是储存在−20°C成批的分析。在20 PCR进行了一式三份μ包括10 L反应体积μL (SYBR预混料Taq交货(2 x), 2μL的DNA样本,10μ每个引物的米,0.4μL火箭参考染料(50 x)和6.8μL dH的2o .然后,进行放大一个应用生物系统公司StepOne实时PCR系统。β肌动蛋白作为内部标准来控制变化放大。分析的数据方法。
2.9。统计分析
所有的实验数据都表示为平均值±标准偏差(SD)。单向方差分析(方差分析)其次是LSD测试被用于数据与平等的方差。当数据以同样的差异并不认为,使用方差分析确定统计学意义Dunnett T3测试紧随其后。统计学意义是水平的。
3所示。结果
3.1。老鼠的胚胎植入子宫
子宫是检查植入胚胎的数量以及他们的形态地位。代表图像和统计分析如图1和表2,分别。与其他三组相比,大小的胚胎被植入网站的更小,分布更无序和不对称D8 D10米非司酮组。米非司酮组植入胚胎的数量显著低于正常组()。然而,与米非司酮组相比,胚胎的数量显然是更高的针灸治疗组()和黄体酮治疗组()。
3.2。免疫组织化学分析CCL2 CXCL8鼠子宫内膜
CCL2蛋白质主要是局部导管上皮,腺上皮,蜕膜间质和血管内皮。米非司酮组子宫内膜CCL2蛋白水平被发现显著低于正常组,D6 D8、D10 ()。重要的是,与米非司酮组相比,有显著增加CCL2蛋白质含量在D6针灸治疗后,D10和黄体酮治疗D6, D8、D10 ()。在少量增加大鼠子宫内膜CCL2 D8针灸治疗后()(数据2(一个)和3(一个))。CXCL8蛋白质略腔上皮和腺上皮中表达D6;然而,CXCL8是胎盘地区丰富的表达在D8和D10。与米非司酮组相比,子宫内膜CXCL8蛋白质水平显著刺激正常组和黄体酮治疗组D10 ()。同样,显著增加CXCL8蛋白在正常组和黄体酮治疗组在D6 D8,以及针灸治疗组在D8 D10 ()(数据2 (b)和3 (b))。
(一)
(b)
(一)
(b)
3.3。免疫印迹分析CCL2, CXCL8鼠子宫内膜
子宫内膜CCL2和CXCL8表达的量变是评估通过免疫印迹,如图4。与正常组相比,CCL2蛋白的表达在D6米非司酮组显著降低,D8 ()和D10 ()。米非司酮组相比,显著增加CCL2蛋白表达观察针灸治疗和黄体酮治疗组在D6, D8 ()和D10 ()(数据4(一)和4 (b))。CXCL8子宫内膜蛋白水平增加时间的方式;观察表达D8和D10就越高。与正常组相比,CXCL8蛋白的表达明显减少D6米非司酮组()、D8 ()和D10 ()。然而,CXCL8蛋白质水平显著升高的针灸治疗组在D8和D10 (D8)和黄体酮治疗组()和D10 ()相比,在米非司酮组(数字4(一)和4 (c))。无显著差异在CXCL8表达式被发现在针灸,黄体酮,米非司酮治疗D6(图4 (c))。
(一)
(b)
(c)
3.4。信使rna的表达CCL2 CXCL8鼠子宫内膜
的相对丰度CCL2, CXCL8被实时PCR数据(图检查5)。与正常组相比,CCL2 mRNA表达在D6米非司酮组明显减少,D8、D10 (,图5(一个))。米非司酮组相比,CCL2 mRNA的表达升高的针灸治疗和黄体酮治疗组在D6, D8, D10,但是只有几个比较(针灸治疗组,而在D8米非司酮组;孕酮治疗组米非司酮组相比在D8和D10)达到统计学意义(图5(一个))。没有显著差异CXCL8 mRNA的表达在D6的四组。然而,较低的CXCL8 mRNA水平确定米非司酮组与正常组在D8和D10 (,图5 (b))。更重要的是,针灸和黄体酮治疗可以挽救D8米非司酮治疗后的减毒CXCL8信使rna。黄体酮治疗也大幅增加CXCL8 mRNA D10米非司酮治疗后(,图5 (b))。
(一)
(b)
3.5。的百分比uNK (CD3−CD161 +)在大鼠子宫内膜细胞
与正常组相比,较低的百分比CD3−CD161 +细胞观察米非司酮治疗后()在D6和D8。的子集CD3−CD161 +细胞明显升高针灸和黄体酮治疗后相比,米非司酮治疗后独自D6和D8 (,数据6(一)和6 (b))。此外,CD3的子集−CD161 +细胞大幅减少D10米非司酮治疗后(),但没有重大改变的比例CD3−CD161 +细胞之间D10米非司酮和针灸治疗(数字6(一)和6 (b))。
(一)
(b)
4所示。讨论
成功的胚胎植入和完美的胎座式建立妊娠是不可或缺的。这两个过程的完成需要一个功能正常的胚胎在胚泡阶段和接受子宫内膜,以及它们之间的充分沟通下激素刺激。这段对话是由各种趋化因子和免疫细胞,调节准确,必须保持在fetomaternal immune-privileged网站界面。最近,针灸已广泛用于治疗不孕不育,包括排卵的功能障碍,体外受精和胚胎移植(IVF-ET),和男性不育。我们假设针灸调节免疫microenviroment在母胎界面,增加了移植成功的机会。
在这项研究中,我们观察到胚胎的数量在D6米非司酮治疗后明显减少,D8, D10,胚胎较小和胚胎植入网站分布是不对称的。然而,针灸治疗可以显著增加植入胚胎的数量。这些结果表明,胚胎植入失败的模型成功建立了米非司酮治疗和针灸疗法在妊娠期间可以导致胚胎植入。更重要的是,我们证实趋化因子的参与和免疫细胞通过考试CXCL8 CCL2表达式的子集uNK鼠细胞植入网站。我们还表明,针灸确实增加了表达CXCL8 CCL2和uNK子集的老鼠胚胎植入失败。
在啮齿动物中,实际胚泡植入到子宫内膜发生受精后6 - 7天(19),如果成功,正常血管重建后发生gd8.5 gd10.5完成,一旦胎盘结构完成和胎盘血流量开始(20.]。入侵的滋养层蜕膜和子宫肌层,螺旋动脉的重建是血性绒毛膜型胎盘形成的重要特征。更换母体血管壁的滋养层明显改变了血管电导和导致血流增加intervillous空间,这需要正常胎儿的生长和发育。如果滋养层入侵不能继续,孕产妇船只的变换不会完整,导致严重的临床疾病,如子痫前期,宫内生长迟缓(21]。
先前的研究表明,滋养层入侵是由自分泌因子的交互的滋养层,从子宫旁分泌因子。的分泌基质金属蛋白酶(MMP)滋养层(22)是一个关键事件。一旦宿主的细胞外基质的组织消化,滋养层入侵。一些研究表明,CXCL8参与子宫内膜接受和胚胎植入23,24]。CXCL8刺激对于妊娠前三个月extravillous滋养层细胞入侵的蜕膜通过增加分泌MMP-2 [25,扮演着独特的角色在子宫内膜血管生成,细胞凋亡、增殖、分化,对成功至关重要fetal-placental发展(26]。之前的差别的研究表明,对这些CXCL8在胎盘可能负责胎儿损失和胎儿生长迟缓(27]。在目前的研究中,免疫组织化学实验表明CXCL8主要表现在滋养层、蜕膜细胞、腺体和导管上皮。子宫内膜CXCL8 mRNA和蛋白表达在D6, D8, D10显著高于正常老鼠但被米非司酮治疗显著降低。此外,针灸和黄体酮治疗可以挽救CXCL8表达式,这是符合植入胚胎的数量增加。这些数据表明,CXCL8对怀孕至关重要。CXCL8稳定增加从D6 D10在所有组除了米非司酮组,这进一步表明,CXCL8不仅是所必需的正常胚胎植入胎盘发育所必需的但也是重要的。针灸可以通过移植促进滋养层入侵和胎座式CXCL8的表达。
盛行的理论支持辅助1 (TH1)之间的平衡和TH2反应发生在母胎界面。最初的Th1反应允许胚胎植入而转向Th2反应管理内分泌和免疫沟通确保移植成功(28]。之前的数据显示,CCL2能促进Th2极化和维持Th2-dominant环境,这CCL2-deficient存在与Th2免疫缺陷小鼠(29日]。在我们的实验中,子宫内膜CCL2米非司酮治疗后出现在低水平,这符合少植入胚胎的观察。此外,针灸和黄体酮治疗能明显上调CCL2表达式米非司酮治疗相比,这意味着针灸治疗可以促进TH2免疫反应的功能在母胎界面在植入阶段,从而促进胚胎植入。其他研究人员表明,CCL2具有强大的促生长和血管生成属性(26,30.]。范Mourik等人还指出,CCL2可以调节巨噬细胞的趋化性蜕膜或滋养层31日]。大量的巨噬细胞在妊娠着床部位观察到,导致子宫内膜周期性发展,子宫内膜滋养层交互,和子宫内膜组织再生的促炎细胞因子的分泌,如tnf、il - 6、生活(白血病抑制因子)32,33]。在我们的研究中,除了在子宫内膜蜕膜细胞,腺腔的上皮,CCL2也观察到血管内膜动脉壁的内皮细胞。这些结果表明,针灸可能导致子宫内膜螺旋动脉或胎座式的改造CCL2的上调表达。
在啮齿动物,uNK细胞只出现在怀孕期间。大约10%的uNK细胞蜕膜血管腔的存在,特别是小毛细血管。几乎25%的uNK细胞渗透到动脉壁和其余的同事与蜕膜细胞(20.,34]。Guimond等人证明uNK细胞修改子宫螺旋动脉的分支动脉使用NK-deficient鼠标应变(35]。uNK细胞可能操纵孕产妇胎儿同种异体移植物的免疫反应,以及滋养层入侵和胎盘的形成,通过调节细胞因子的表达36]。老鼠uNK细胞也表达血管生成分子,如血管内皮生长因子(VEGF),胎盘生长因子(PIGF),检验2 (ANG2)血管生成和孕产妇在植入血管增长地区(37]。此外,一些证据表明,蜕膜细胞uNK影响EVT入侵,可能通过增加MMP-9的表达,这被认为是子宫内膜基底膜的降解的关键酶(38]。在这项研究中,我们检测到的百分比CD3−CD161 + NK细胞在大鼠植入网站通过流式细胞术。我们的研究结果表明,CD3的比例−CD161 + NK细胞明显减少在老鼠胚胎植入失败,而针灸和黄体酮治疗可以显著提高CD3的子集−CD161 +米非司酮治疗后NK细胞。这些数据进一步证实uNK细胞对胚胎植入和胎座式至关重要。
在我们的研究中,我们表明,针灸促进CCL2的表达和CXCL8并增加uNK细胞的子集。与此同时,一些证据表明,子宫内膜的upregulation CCL2 CXCL8表达式和uNK细胞子集与生产相关联的孕酮(7,23,39]。Stener-Victorin等人表明,针灸可能影响下丘脑pituitary-ovarian轴调节中央脑内啡生产和分泌,调节下丘脑促性腺激素的释放和垂体分泌促性腺激素(40]。因此,我们假设当针头穿透到皮肤和肌肉,外围神经系统可能将信号传递到大脑,受性激素的Hypothalamus-Pituitary-Gonadal和肾上腺轴。虽然孕酮水平并不是衡量在这项研究中,我们假设的监管影响针灸CCL2的表达和CXCL8 uNK细胞的子集可能包括孕酮从黄体酮治疗由于相似的结果。
总之,针灸可能导致胚胎植入和在大鼠胎座式移植CCL2的表达和CXCL8 uNK细胞在母胎界面的子集。这项研究提供了新的实验证据支持nerve-endocrine-immune系统的调制通过针灸和表明,这种疗法可能是小说不孕的工具。
利益冲突
作者宣称他们没有利益冲突和金融与商业的关系本文提到的身份。
作者的贡献
所有作者阅读和批准最终的论文。维娜高设计的这项研究中,进行了实验,分析数据,并起草。小唐,Zhenyan陈,郭越,王力军辅助实验。七点半张和Guangying黄监督这项研究和论文的写作。
承认
这项研究得到了国家自然科学基金(s - 049 - 09 - 10 - 20)。