文摘
客观的。观察艾灸热刺激的影响在不同的温度下对心脏功能brachycardia鼠模型和肥大细胞在当地网站上在西门穴位艾灸和艾灸的效果比较的差异在不同的温度下。方法。与普萘洛尔建立brachycardia鼠模型,观察艾灸热刺激的影响在不同的温度下(38°C和46°C)。结果。通过艾灸热刺激温度2可能会增加人力资源,地图,LVSP,和+ dp / dtmax和减少t-dp / dtmax brachycardia老鼠;46°C艾灸组显示更大的调节对心脏功能的影响在老鼠比38°C艾灸组()。热刺激通过艾灸2温度可以促进本地站点的肥大细胞脱粒在西门穴位艾灸;46°C的脱粒率艾灸组高于38°C艾灸组()。结论。有一定的对靶器官的影响之间的联系和艾灸在当地网站的影响。艾灸的效果可能是由于当地肥大细胞脱颗粒和不同的温度感受器激活在不同温度下的热刺激。
1。介绍
作为中国传统医学的重要方法,艾灸是主要的“温暖”的优势,通过它进行刺激穴位或病变,通过“从外部刺激和从内部监管”。艾灸刺激的皮肤直接行动网站;选择适当的温暖的热刺激局部皮肤,对刺激的反应特点,和激活相关的调节机制是基于皮肤的生物学特性,也就是说,探索艾灸法和作用机理的影响,必须注意艾灸的作用特点和艾灸的操作对象的特点。现代神经生物学的研究已经证明,(1身体和皮肤组织分布与蛋白质受体(瞬时受体电位(TRP))传感温度范围不同,有各自的阈值感应温度和可能由不同的温暖的热刺激被激活。在当地气温的变化特征,由于艾灸疗法,非常符合有关热敏亚型的分类和分布特征,如TRPV1 TRP家族可能是由热激活刺激(> 43°C) (2]。最近的研究发现,TRPV1的表达和激活皮肤角质细胞可能诱发炎症反应(3]。激活TRPV1能使肥大细胞脱颗粒释放促炎和瘙痒导致媒体参与炎症反应(4]。与病理生理功能相关的炎症反应是在心律失常5]。此外,TRPV1具有重要的调节对心血管系统的影响(6]。艾灸能有效调节血液,血液循环和微循环状况,和舒张功能7,8]。研究表明在穴位acu-moxibustion与肥大细胞的影响9]。从前面提到的,需要注意什么影响可能产生的热刺激在两个温度低于43°C以上心脏功能在利率,以及皮肤的本地站点艾灸,或协会的影响是否存在差异,以及他们是否可能提供任何优化艾灸的临床操作程序的基础。
2。材料和方法
2.1。材料
2.1.1。动物和分组
健康清洁级雄性SD大鼠,体重280 - 380克,没有证书。SCXK(上海)2007 - 0005,购自上海Slac实验动物有限公司有限公司和批量。实验将在1周后,大鼠进行适应。老鼠被分为以下组随机数字表:模型对照组,艾灸组1,艾灸组2。每组大鼠的数量将支持成功获得8完整的数据。在动物实验中,治疗措施是严格按照规定的指导意见实验室动物的人道主义待遇发表在2006年的科学技术部中华人民共和国和实验室动物保健和使用规定由南京中医药大学。
2.1.2。主要实验设备
艾条动物(直径7毫米,南洋中药艾公司),恒温动物手术台(承泣模型、成都仪器厂),多道生理信号采集系统(RM 6240模型、成都仪器厂),温度测量装置(宏昌HC-04模型、杭州科技公司),微量调节注射器泵(ALC-IP800,上海爱尔考特生物技术有限公司),全自动组织处理器(TP1020,德国徕卡公司),石蜡切片机(RM2145,德国徕卡公司)、光学显微镜(BX60、日本奥林巴斯公司),和摄像机(DP71图像采集系统、日本奥林巴斯公司)。
2.2。方法
2.2.1。电生理实验方法
快12小时的雄性SD大鼠在一夜之间,与免费水,权衡老鼠,实施麻醉的大鼠20%氨基甲酸乙酯(氨基甲酸乙酯)的剂量1克/公斤体重,修复大鼠在恒温动物手术台,和连接心电图仪和温度传感器(通过肛门鼠);一旦大鼠的心电图和体温稳定(37°C),左心室进行插管,在股动脉和股静脉的右下肢,测量左心室压力和动脉压,和管理药物静脉注射。模型对照组手术后10分钟,如果测量指标稳定,开始记录数据;5分钟后,迅速注入0.4%心得安(4毫克/公斤)经股静脉;然后慢慢注入剂量的静脉注射心得安保持0.25毫克/公斤/分钟的微量调节注射器泵60分钟,建立心动过缓模型;不进行任何干预。艾灸组1:建立模型中描述的模型作为对照组。心得安在20分钟的维持剂量,点燃定制的细长的艾条(20厘米长,直径7毫米),直接进行艾灸西门(PC4)穴位的刺激大鼠的左上肢10分钟,把探头的温度控制器表面的皮肤在艾灸穴位监控实时温度,并控制温度在当地皮肤为艾灸38°C±1°C(图1(一));燃烧的艾条和皮肤相距35±5毫米;艾灸后,继续观察另一个30分钟。艾灸组2:建立模型中描述的模型作为对照组。在20分钟的管理心得安在维持剂量进行艾灸热的刺激10分钟46岁°C,执行中描述的干预与艾灸组1;在艾灸热刺激,控制温度在当地皮肤艾灸在46岁°C±1°C图1 (b),燃烧的艾条和皮肤相距12±2毫米;艾灸后,继续观察另一个30分钟。在艾灸,轻敲任何艾灰的艾条烟灰缸,艾条燃烧状态的基础上,始终保持清洁的操作接口。选择左侧肢体的西门穴位;穴位的定位方法是拟人化的比较方法,也就是说,西门:在1/2内边折叠前臂,中间的半径和尺骨之间的差距。温度的选择的原因是,根据我们的观察,不到38°C热刺激,人体的温暖的感觉不明显,46°C以上热刺激,人体的热感觉很明显,难以继续忍受。在整个过程中,使用RM6240B多道生理记录仪(参数:采集频率1 kz,扫描速度40 ms / div,和滤波器频率30 Hz)同时监测和记录许多心脏功能和血流动力学指标,包括心率(/分钟),平均股动脉压力(毫米汞柱),左心室收缩压(毫米汞柱),最大的左心室压力上升速度(毫米汞柱/ s)和时间(ms)从一开始的左心室收缩最大的左心室压力速度,等等。
(一)
(b)
2.2.2。形态学实验方法
(1)获得的材料。完成后的监测和记录的电生理学实验中,牺牲的老鼠和获取材料。快速提取皮肤组织在当地的网站在每个组的老鼠西门穴位眼科镊和手术剪刀,和地点到10%甲醛溶液存储和修复1星期。
(2)染色前处理。(1)削减:取出剪切的皮肤组织,然后再将他们10%甲醛溶液和修复1周,修剪的组织外科刀的大小约0.7厘米0.7厘米0.3厘米,再把它们放进70%酒精去除任何残留的甲醛溶液的组织。(2)脱水:把修剪组织为脱水全自动组织处理器。(3)嵌入:进行石蜡包埋的组织处理。(4)切片:执行常见的切片机切片获得片5 - 6的厚度μm,把它们放进热水被夷为平地。然后慢慢取出切片,迅速摆脱水,然后慢慢地将它们放在已标示玻璃幻灯片,以防止任何组织和幻灯片之间形成气泡;如有气泡,仔细挑选出针灸针。slice-baking板上烤,直到石蜡变成透明的,和地点slice-baking烤箱,烤在一夜之间在60 - 64°C,然后允许冷却使用。
(3)甲苯胺蓝染色法。(1)通常移除石蜡切片,然后用水洗;(2)浸染0.5甲苯胺蓝的解决方案(甲苯胺蓝染料的0.5克,加水100毫升)的体积;(3)用水清洗,消除过度染色解决方案;(4)实施的差异化解决方案(0.5毫升的冰醋酸混合和99.5毫升蒸馏水和摇匀);(5)与水清洗和风干;(6)开展与酒精梯度脱水;(7)治疗二甲苯,直到透明;(8)与中性胶进行固定片。
2.2.3。统计方法
数据表示为平均值±标准偏差和SPSS17.0统计软件进行了分析和处理。获得的数据从每组第一个方差的同质性测试。方差的同质性,使用单因素方差分析;如果有不同的人口意味着,LSD进行成对比较的测试(方差异质性,成对比较是由Brown-Forsythe近似方差分析和Games-Howell方法);测试是用来比较两个独立样本。它被认为是重要的。
3所示。结果
在实验中,所有死亡由于麻醉,手术事故,或药品管理局,等等,以及所有异常反应建立模型的干预,不包括观察;8有效实验每组病例获得,所以总共有24例。
3.1。电生理实验的结果
统计分析是由5分钟意味着每个指标的收集,如人力资源、地图,心脏功能(LVSP + dp / dtmax, t-dp / dtmax)。减少任何统计错误由于个体差异,干预前后的变化在每个实验动物是用百分比表示:变化率(%)=(干预前值后干预−值)/值之前干预×100%。提供的结果如下。
3.1.1。在人力资源和地图的变化特征Brachycardia老鼠模型,心得安
心得安的管理导致快速减少人力资源和地图的老鼠(平均而言,在60分钟,人力资源是下降了34.98%±5.86%,和地图是下降了33.21%±5.63%)。在20分钟后管理心得安,模型稳定成功;在40分钟20分钟后维护管理心得安,人力资源的平均变化率−0.16%±1.98%,地图是0.37%±2.09%。结果表明,该方法能够与稳定的影响(表建立brachycardia鼠模型1)。
3.1.2。波形的变化前后左心室压力和动脉压模型建立和艾灸干预
成功地建立了模型与心得安后,左心室压力的波形比正常和动脉压明显下降;在艾灸热刺激后在38°C和46°C,左心室压力和动脉压力波形的恢复到一定程度上比模型(图2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.1.3。组间比较意味着变化的每个索引,如人力资源、地图,LVSP, + dp / dtmax和t-dp / dtmax,干预后艾灸
与模型对照组相比,艾灸组1的热刺激能够增加人力资源,地图,LVSP, + dp / dtmax和减少t-dp / dtmax老鼠;然而,没有显著的影响()。与模型对照组相比,热刺激艾灸组2能增加人力资源,地图,LVSP,和+ dp / dtmax和减少t-dp / dtmax老鼠,和影响显著();此外,热刺激的影响在艾灸组2在艾灸组高于1 ()(表2)。
3.2。结果形态学实验
肥大细胞的形态学观察10×40光学显微镜下,皮肤被数和肥大细胞脱粒。
3.2.1之上。肥大细胞的形态观察的结果
发现肥大细胞在皮肤组织切片的面积西门穴位光学显微镜下观察。(1)模型对照组:肥大细胞的细胞壁光滑和完整的形态(图3(一个));(2)艾灸组1:肥大细胞在当地网站的完整形态和细胞膜破裂(图3 (b));(3)艾灸组2:肥大细胞在细胞膜破裂的当地网站,和大量的颗粒分散在身体细胞,并有显著的脱粒(图3 (c))。
(一)
(b)
(c)
3.2.2。肥大细胞脱粒率
的标准计算肥大细胞脱粒是:计数为1时,肥大细胞与细胞壁破裂,有分散颗粒的矩阵。脱粒率=的肥大细胞脱颗粒数/总肥大细胞数×100%。均值的脱粒率从4片接近艾灸的本地站点是计算在每个组织样本中,添加的脱粒率这一组一起组织样本,并除以每组样本的数量,然后肥大细胞脱粒率的计算。
如果没有干预进行了西门穴位的皮肤,当地网站是洛瓦的脱粒率12.9%;热刺激bymoxibustion后,肥大细胞脱粒率显著增加(表3)。
4所示。讨论
从远古时代,艾灸是一种重要的方法在治疗心血管疾病的临床实践。艾灸是一个关键问题研究如何客观地评估艾灸对心脏和血管的影响,探索影响的可能机制的差异,导致从艾灸刺激在不同温度作为影响因素,并提供一个基础优化艾灸的临床操作程序。在这个实验中,普萘洛尔,一个β受体阻断剂,用于建立急性brachycardia动物模型(10,11]。这是一个容易和简单的技术,具有良好的可重复性。氨基甲酸乙酯麻醉代理,是广泛的安全裕度,容易控制剂量和毒性小。心血管疾病大鼠模型稳定性好,在西门穴位艾灸有很好的效果对心律失常;他们已经证实在先前的研究的研究小组12,13]。在这个实验中,索引包括人力资源、地图,LVSP, + dp / dtmax和t-dp / dtmax全面分析;通过这种方式,它可以完全反映了艾灸的热刺激对心肌收缩性的影响和末梢循环中心功能。人力资源变化可能反映了心肌收缩性视觉和清楚。主动脉瓣打开后,左心室放出血液的动脉。较强的左心室收缩,更多的血的鞋子然后血压越高;左心室的后负荷抵制弹射主要是外围血压(平均股动脉压力主要是观察在这个实验中)。左心室收缩功能与左心室的后负荷有关。末梢循环中心的地图可能反映了变化的功能。+ dp / dtmax非常敏感的干预的压力和各种变量,在一定程度上,是受到呈正相关,心率和前负荷和后负荷; the increase of +dp/dtmax with concurrent reduction of t-dp/dtmax suggests increase of myocardial contractility. The results of this study found that the thermal stimulation by moxibustion at 2 temperatures (38°C and 46°C) may promote increase of HR and MAP in propranolol-induced brachycardia model rats, recovery of LVSP and +dp/dtmax, and reduction of t-dp/dtmax, suggesting that the thermal stimulation by moxibustion at 2 temperatures (38°C and 46°C) has the effects of improving cardiac function in brachycardia rats, and the effects of the thermal stimulation by moxibustion at 46°C are obviously stronger than those of the thermal stimulation by moxibustion at 38°C. Our results are in conformity with ancient doctors’ point of view that enough strength of thermal stimulation achieve good curative effect.
古代的医生强调艾灸热刺激皮肤局部炎症反应有利于疾病的治疗。我们的研究表明,艾灸热的刺激可能影响肥大细胞的形态在艾灸的本地站点,促进他们的脱粒,同样的,艾灸热刺激的46°C显然是比艾灸在38°C。结果表明,高或低肥大细胞脱粒率影响心脏功能的改善,所以温暖的热刺激的特点通过艾灸当然是与对靶器官的影响,以及艾灸的本地站点。的本地站点的直接对象是艾灸灸行动,并启动机制的关键环节之一,艾灸的效果。艾灸的治疗效果是通过刺激穴位,调节身体的调节效果依赖于受体在穴位区。最近的研究认为,皮肤是一种重要的神经内分泌器官,可合成和分泌许多神经递质和肽物质(14],TRP通道可能是温暖的重要潜在的分子目标通过艾灸热的影响。TRP通道是广泛分布在肥大细胞在体内15),主要包括TRPV1 TRPV2,开放影响可能直接影响肥大细胞的功能和疗效。特别是,TRPV1钙离子通道的肥大细胞可能参与调节肥大细胞生理功能和病理过程(16]。一些学者提出了“轴突reflex-linkage假说”(17),肥大细胞和神经纤维之间的突触连接作为接力棒和信息传播的形式刺激肥大细胞布满和释放活性物质,然后激活邻近神经终端。加利提出“肥大细胞细胞因子级联反应”18),基于肥大细胞分泌的特点很多发射器和细胞因子。因此,我们推断不同的艾灸方法可能产生不同的温度变化的特点,激活TRP亚型不同,产生不同的生物效应,最终实现不同的治疗效果。
在这项研究中,有关新皮肤的生物知识作为本研究的基础,关注差异的影响由于温暖的热刺激通过在不同的温度和探索艾灸与生理反馈响应来自不同温度感受器。这是因为,在先前的研究在艾灸的作用机理,我们更加关注艾灸疗法在病变靶器官的影响,忽视了独特的路径和机制开始艾灸在靶器官的影响。每一个有效的治疗措施可能会产生对靶器官的影响,和特异性的行动路径方法的存在的重要基础。根据艾灸热的刺激响应过程刺激当地接待→→温度→化学结合生物信息链接→→效果实现级联反应(19),我们认为,由于不同温度下的热刺激,激发受体存在差异;热刺激在46岁°C可能激活TRPV1艾灸,促进本地站点的肥大细胞脱粒,和随之而来的影响可能参与调节心脏功能;因此,热刺激在46岁°C具有更好的改善在brachycardia老鼠对心脏功能的影响。热刺激和由此产生的炎症反应是最基本特征的艾灸效果(20.),因此在我们的研究中,是注意的特点艾灸的效果在当地网站;可能有助于进一步研究路径的神经学、内分泌和免疫网络交互的艾灸,也提供了新的路径明确艾灸的效果的作用机理。
缩写
| 记者: | 动脉压 |
| + dp / dtmax: | 最大的左心室压力上升 |
| 人力资源: | 心率 |
| LVSP: | 左心室收缩压 |
| 地图: | 平均动脉压 |
| 主持人: | 肥大细胞 |
| TRP: | 瞬时受体电位 |
| TRPV1: | 瞬时受体电位草酸亚科成员1 |
| t-dp / dtmax: | 从左心室收缩的开始到左心室压力的最大速率。 |
承认
本研究得到了国家重点基础研究计划(NKBRP): 2009 cb522905,由中国的大部分。