Antiherpetic的影响Gynura procumbens

文摘

的乙醇提取物Gynura procumbens显示杀病毒的,对单纯疱疹病毒1型单纯疱疹病毒和HSV-2 antireplicative行动。这是进一步对MCI凝胶色谱仪CHP20P列提取分数F1(水),F2(甲醇)F3(甲醇),和F4(乙酸乙酯)。所有对两种病毒类型但F1杀病毒的行动。这里我们报道F2和F3的活性化合物。F2的antiherpetic化合物的混合物dicaffeoylquinic酸和杀病毒的antireplicative行动HSV-2 (IC₅₀96.0和61.0μg / mL,职责)。F3的杀病毒的化合物的混合物β谷甾醇和豆甾醇(IC₅₀250.0μ对1型单纯疱疹病毒),g / mL的混合物β-sitosteryl和stigmasteryl糖甙(IC₅₀50.0μ对HSV-2)和1,g / mL 2-bis-dodecanoyl-3 -α-D-glucopyranosyl -sn甘油(集成电路₅₀40.0μ针对HSV-2 g / mL)。草药产品包含1和2%的标准化的乙醇提取准备。双盲随机对照临床试验的产品进行患者复发性疱疹口唇。结果表明,患者的数量,其病变7天内愈合,平均愈合时间两组不同无关紧要的。病毒文化D7表示减少受感染的患者在治疗组从48.7%到7.69%而安慰剂组受感染的病人从31.25%下降到20.00%。减少病毒治疗组显示产品的好处。微不足道的结果可能出现较低的参与病人和植物提取物的浓度不足草药产品。

1。介绍

Gynura procumbens不悦之色。稳定。是中国传统医学中提到作为一个局部抗炎药物(1]。在东南亚,Gynura植物分布得很广。在泰国,g . pseudochinavar。hispida(泰国名字:广域网Mahakaan)外部用作止痒,抗炎,antiherpes病毒(2]。在新加坡、马来西亚和印度尼西亚,工厂一直在传统上用作治疗斑疹伤寒,皮疹,肾病,偏头痛,便秘,高血压,糖尿病和癌症3]。叶的乙醇提取减少鼠标巴豆油引起的耳水肿(4]。植物化学的研究Gynura工厂发现了pyrrolizidine生物碱(5- - - - - -7],spirostanol [8],香豆素类[7- - - - - -9),和花青素10]。自g . procumbens到目前为止还没有探索对antiherpes病毒活动,另一方面,根据泰国传统医学,植物的利用率可能与疱疹病毒感染有关;植物的调查antiherpetic活动执行组件。

2。材料和方法

植物材料。Gynura procumbens收集来自Chanthaburi省,泰国,1994年10月。Leena Phupatpong女士发现的植物是一个专家在森林植物学家标本(BKF),皇家森林部、农业部和合作社,曼谷,泰国。凭证标本(BKF没有。127362)是沉积在同一个地方。

提取和分离。天线的部分植物(25公斤,新鲜)洗,切成块,在热空气干燥炉(60°C),和地面,产生1.7千克的coarse-powdered药物。这是先后在索氏提取器使用石油醚(40 -°C),二氯甲烷和乙醇。减压下的溶剂被移除。干燥乙醇提取物(114克)使用色谱进一步分离列有不同的包装材料。CHP20P MCI凝胶柱分离提取到分数F1(水),F2(甲醇1:1),F3(甲醇),和F4(乙酸乙酯)。F2、F3, F4积极对抗疱疹病毒。

F2(12.3克)和F3 (6.4 g)逐步在MCI凝胶色谱仪CHP20P使用含水甲醇(1:1)F2和F3的甲醇溶剂系统,导致F2.1 (8.7 g), F2.2 (0.75 g),和F2.3(0.8克)和F3.1 (2.0 g), F3.2 (3.0 g),和F3.3 (0.8 g),分别。化合物1,2,3,4,5被隔绝F2(图1),而化合物6,7,8,9被隔绝F3(图2)。F4没有进一步研究。

细胞系。维罗细胞系(非洲绿猴肾细胞)生长和维护在鹰的最低基本培养基(MEM)补充10%胎牛血清和抗生素(细胞每)。

病毒。1型单纯疱疹病毒,病毒科斯,HSV-2应变贝勒186,得到的微生物学,医学院里拉吉医院,Mahidol大学,泰国曼谷。100空斑形成单位的数量每毫升(PFU)被用于实验。

细胞毒性评价。连续2倍稀释测试样本的维护维罗单层介质被加入。孵化后37°C 5天,细胞毒性是由活体染色结晶紫1% 10%福尔马林30分钟。测试的最高浓度的样品不具有细胞毒性代表最大无毒剂量(MNTD)。系列二倍稀释MNTD被用来执行抗病毒试验。

抗病毒试验。抗病毒活性决定通过蚀斑减少化验汇合的维洛细胞增长在96年组织培养板。测试包括三个治疗,失活和预处理和后处理。

失活(确定中和活动测试样本对病毒的传染性(杀病毒的动作):病毒(100μL)与测试样本(100孵化μ在37°C L) 1 h。单层细胞的混合物添加在复制井和孵化37°C 1 h。洗后的细胞,MEM和半固体的媒体(黄蓍胶0.4%)被添加到文化,然后在37°C孵化3天,并与结晶紫染色。

预处理(确定抑制病毒吸附或渗透的活动):测试样本(100μL)被添加到复制井单层细胞和孵化24小时37°C。洗后文化,细胞被感染病毒(100μ在37°C L)和孵化1 h。半固体的媒体被添加到复制井单层细胞后洗出非吸附病毒。文化是在37°C孵化3天,然后用结晶紫染色。

后处理(确定细胞内病毒复制的抑制活性):单层细胞感染病毒和孵化37°C 1 h。洗后的细胞,测试样本(100μL)和半固体的媒体被添加在重复的井,在37°C孵化3天,然后用结晶紫染色。

控制。在MEM细胞控制:单层细胞和半固体的媒体。无环鸟苷作为积极的控制。病毒控制:单层细胞感染100空斑形成单位/毫升的病毒,MEM和半固体的媒体。

计算空斑抑制能力:蚀斑减少的百分比比文化没有治疗(病毒控制)进行了计算。50%抑制浓度(IC₅₀)的活性物质或样本确定斑块数量减少了50%的最低浓度处理与未经处理的文化。

样品溶解在二甲亚砜(DMSO)和稀释的维护中。最后的测试样本0.3% DMSO溶液的浓度。

病毒文化。维洛细胞生长在生长介质,MEM(厄尔的盐、小科学,Inc .)、林地、钙、美国)补充10%胎牛血清(美国大岛屿Gibco)和100单位/毫升青霉素G,和100年μg / mL链霉素(M和h制造有限公司、有限公司、泰国),和0.01玫瑰(N-2-hydroxyethyl-piperazine-N′2-ethane磺酸)(美国大岛屿Gibco)。维护媒体准备增长媒体除了胎牛血清的浓度降低到2%。

维洛细胞单层培养瓶分散使用0.25% (1 x)胰蛋白酶(小科学,Inc .)、林地、钙、美国)。后执行删除增长媒体与5毫升PBS和洗涤两次。丢弃PBS后,附加的一毫升的胰蛋白酶和细胞孵化37°C 2 - 5分钟;然后培养瓶轻轻摇动直到细胞分离和5毫升的增长媒体了。这些细胞被数到10⁵细胞/毫升和1.5毫升的细胞被添加到包含盖玻片培养管然后37°C 5%孵化有限公司₂过夜。孵化后,汇合的0.1维洛细胞接种感染复数(MOI)的1型单纯疱疹病毒和HSV-2病毒(100μL /文化管)(Nunclon表面,Nunc品牌产品,丹麦)积极控制。文化孕育了37°C的5%股份₂1 h用颤抖的在15分钟间隔时间增加维护媒体。从泡拭子样本中收集病毒传输媒体(VTM)是由冷冻离心处理10000 rpm 10分钟。然后,100年μ在10 L的上层清液接种⁵细胞/毫升汇合的维洛细胞培养管含盖玻片和孵化病毒在37°C公司5%₂1 h用颤抖的在15分钟间隔时间增加维护媒体。10的维罗细胞汇合的⁵细胞/毫升每培养管添加与维护媒体作为消极的控制。每个实验进行重复的管子。所有文化管样品,积极的和消极的控制是孵化了细胞病变效应(CPE)。盖玻片上的维洛细胞测定HSV-infected细胞和上层清液保持在−70°C为了subpassage文化了。盖玻片上的维洛细胞与冷丙酮固定10分钟和风干。HSV州立细胞的检测使用一个特定的抗血清共轭与异硫氰酸荧光素(FITC)(多克隆抗体,DAKO / S,丹麦),稀释1:40和用于固定细胞和孵化为30分钟37°C。固定细胞被清洗和复染色与伊文思蓝5分钟,然后再清洗用蒸馏水,风干,装PBS-glycerol缓冲区。的直接免疫荧光HSV-infected维洛细胞荧光显微镜下检查。负控制acetone-fixed未感染的细胞处理一样的测试。受感染的细胞观察,得分,并记录荧光模式,本地化和强度抗血清的荧光共轭。

植物提取物的制备,草药和安慰剂凝胶。植物与乙醇浸渍和蒸发干燥提取,这是标准化7作为一个特定的标记化合物或标准。标准化的乙醇提取物被用作药物材料,准备1和2%草本凝胶。羧乙烯聚合物的胶凝物质,是分散在冷开水,用氢氧化钠溶液中和。植物提取物在丙二醇溶解,加入凝胶,彻底和混合。安慰剂凝胶制备类似,但着色剂(焦糖)是用来代替植物提取物。

患者和方法。本研究是一个双盲安慰剂试验治疗复发性疱疹口唇g . procumbens凝胶与安慰剂相比。这是经伦理委员会批准人权涉及人体受试者的研究有关。依照ICH-GCP执行临床试验指导原则和《赫尔辛基宣言》。病人被告知在审判开始前,并提供书面共识的参与。它是由三个医院,Ramathibodi,朱拉隆功,Phra Mongkutklao医院。

参与患者超过18岁,被诊断为复发性疱疹口唇,48小时内出现症状。排除标准是患者孕期或哺乳期和慢性疾病患者和艾滋病毒感染。

第一天(D0)的审判开始,历史和症状的患者记录和受感染的病灶拍摄。Tzanck涂片和病毒文化进行确认诊断。基线实验室检查包括CBC,血清血糖,包子creatinin,尿液检查。

病人被随机块分配分成三组。他们接受1%草本凝胶,接受草药凝胶2%,B组和C组接受安慰剂凝胶。所有患者提供相同的管子的凝胶。

他们建议应用凝胶薄在受感染区域每两个小时在第一天,每天四次,直到第二天病变愈合。疼痛和瘙痒的严重性被记录每天的病人在一个线性的视觉模拟量表清廉从没有到非常严重。日期的结壳和完整的愈合也记录下来。病人被调查人员评估天2或4和7天之后,病变完全愈合。评估在每个后续访问包括疼痛和瘙痒的严重性和天满结壳和完整的病变愈合。不良反应或任何病人投诉也记录下来。D2-D4和D7,病变进行拍摄和病毒文化。血液和尿液收集并再次检查最后一次访问。

统计方法。我们计算,如果成功率在80%的病人发生药物治疗和安慰剂的患者为50%,它需要药物治疗和45安慰剂的病人检测成功率在5%显著性水平的80%。我们的计算样本大小50个病人随访率来补偿10%的损失。Fisher精确检验是用来比较药物治疗和安慰剂组之间的成功率。描述性统计报告为平均值与标准偏差。在完成学习的基础上进行了统计分析。

3所示。结果

的隔离水甲醇甲醇F2和F3分数导致四个antiherpetic组件,也就是说,2从F2(图1、表1),7,8,9从F3(图2、表1)。类黄酮(的混合物3所示。1和3所示。2和5)从F2和分离6从F3没有抗病毒活性。化合物2,7,8,9确定了用光谱方法,特别是与磁场梯度核磁共振技术(11- - - - - -14]。

2:Dicaffeoylquinic酸的混合物(2。1和2。2)

2。1(图4):3,5-Di-O-Caffeoylquinic酸。非晶黄色粉末;R_f0.55、硅胶60 CHCl₃/甲醇/小时₂O /乙酸/ (21:15:3:1);紫外线(甲醇)326海里。¹核磁共振(CD₃OD、300 MHz)δ7.62、7.58 (d,J= 16赫兹,第7′,第7′′,每个)7.08,7.06 (d,J= 8.2,2′,2′′,每个)6.98,6.96 (dd,J= 8,2赫兹,6′,6′′,每个)6.78 (d,J= 8.0,H-5′, H-5′′,每个)6.41,6.30 (d,J= 16赫兹,H-8′, H-8′′) 5.55 (ddd,J= 10.2,9.7,6.0,5.38 H5ax) (ddd,J= 3,3,3赫兹,H-3eq) 3.90 (dd,J= 7,3赫兹,H-4ax) 2.28 (dd,J= 15.1,3.1赫兹,2)。

2。2(图5):4,5-Di-O-Caffeoylquinic酸。非晶黄色粉末,R_f0.50、硅胶60 CHCl₃/甲醇/小时₂O /乙酸/ (21:15:3:1);紫外线(甲醇)326海里。¹核磁共振(CD₃OD、300 MHz)δ7.57、7.49 (d,J= 16赫兹,第7′,第7′′,每个)7.02,6.98 (d,J= 2赫兹,2′,2′′,每个)6.89,6.86 (dd,J= 8,2赫兹,6′,6′′,每个)6.73,6.71 (d,J= 8赫兹,H-5′, H-5′′,每个)6.26,6.18 (d,J= 16赫兹,H-8′, H-8′′,每个)5.69 (ddd,J= 10.3,9.7,7.0赫兹,H-5ax) 5.10 (dd,J= 10.0,3.0赫兹,H-4ax) 4.31 (ddd,J= 3.0,4.0,3.0赫兹,H-3eq) 2.0 - -2.4(广义m H₂2,H₂6)。

7:的混合物β-Sitosteryl(7.1,图11)和Stigmasteryl(7.2,图12)糖甙。白色粉末;议员254 - 256°C(分解);R_f0.48、硅胶60 CHCl₃/甲醇/小时₂O / (20: 5: 0.5);FAB-MS [M-Na]⁺m / z599年和597年(计算的C₃₅H₆₀O₆576和C₃₅H₅₈O₆574年7.1和7.2);EI-MS (pos.离子模式)m / z414年和412年[M + H]⁺(相应的苷配基);m / z396年和394年(低强度)[M +高度差₂O)⁺;¹核磁共振(C₅D₅N, 300 MHz)δ5.35 (dd,J= 4.5,1.5赫兹,6)5.23 (dd,JH-22 = 15.5, 9赫兹,7.1)5.08 (dd,JH-23 = 15.5, 9赫兹,7.1)5.04 (d,J= 7.9赫兹,h′) 4.55 (dd,J= 11.6,1.8赫兹,6′)4.40 (dd,J= 11.6,4.9赫兹,6′b) 4.26 (dd,J= 15.6,8.5赫兹,H-3′, H-4′) 4.04 (t)J= 8.2,7.9赫兹,2′)3.96 (m, H-3, H-5′) 2.72 - -2.47 (m, H-4) 2.14 - -1.74 (m, 2) 1.93 (h - m) 1.7 (m, H-25) 1.4 (m, H-20) 1.0 - -1.8 (m, H-8, H-9、H-14 H-17) 1.28 (m, H-28) 1.09 (d,J= 6.7赫兹,H₃-21年,7.2)1.0 (d,JH = 6.4,₃-21年,7.20.94),0.96 (m, H-24) 0.93 (d,J= 6.9赫兹,H₃-27年)0.92 (d,J= 7赫兹,H₃-26年)0.95(年代,H₃-19)0.90 - -1.30 (m, H-23 H-23,7.2)0.90 (d,J= 6.1赫兹,H₃-27年)0.89 (d,J= 6.7赫兹,H₃-26年)0.88 (t)J= 7.67,7.67赫兹,H₃-29)0.8 - -2.2 (m,第7,H-11、H-12 H-15,犯)0.69(年代,H₃-18年,7.1)0.67 (s、H₃-18年,7.2);¹³理化性质(C₅D₅N, 75 MHz)δ140.955 (C - 5) 138.833 (C-22) 129.521 (C-23) 121.921(其他)102.607(颈- 1′)78.605(颈- 3、3′)78.440 (C - 5′) 75.331 (C - 2′) 71.761 (C - 4′) 62.894 (C 6′, 6′b) 56.971(碳14,7.2)56.889(碳14,7.1)56.297 (c - 17,7.1)56.132 (c - 17,7.2)51.460 (C-247.1)50.404 (C-9) 46.097 (C-247.2)42.527 (c13、7.1)42.396 (c13、7.2)40.783 (C-207.1)40.010(技术)39.368 (c - 4) 37.526(颈- 1)36.967 (C-10) 36.424 (C-20,7.2)34.269 (C-227.2)32.196(即)32.114(8,25岁7.1)30.290 (c - 2) 29.531 (C-257.2)29.317 (C-167.1)28.560 (C-167.2)25.714 (C-287.1)24.579 (C-157.2)24.546 (C-157.1)23.444 (C-287.1)21.502 (c - 21,7.1)21.305 (C-11) 19.446 (C-197.2)19.216 (C-197.1)19.051 (c - 21,7.2)12.191 (C-187.1)12.010 (C-187.2)。

8:1,2-bis-Dodecanoyl-3 -α-D-Glucopyranosyl-sn-Glycerol(Monoglucosyl甘油二酯,图13)。无色蜡质量,R_f0.15、硅胶60 CHCl₃/甲醇/小时₂O / (20: 5: 0.5);¹核磁共振(CD₃OD)、300 MHz)δ5.28 (dddd,J= 7.0,6.4,4.0,4.1赫兹,2)4.77 (d,J= 3.8赫兹,h′′′) 4.50 (m, H-1a) 4.14 (dd,J= 12.0,7.0赫兹,h - 1 b) 4.00 (dd,J= 10.8,6.4赫兹,H-3a;ddd,J= 9.8,9.0,3.4赫兹,H-5′′′) 3.60 (dd,J= 9.5,9.0赫兹,H-3′′′) 3.56 (dd,J= 10.8,6.4赫兹,H-3b) 3.41 (dd,J= 9.7,3.8赫兹,2′′′)3.28 (dd,J= 14.3,9.7赫兹,6′′′)3.19 (dd,J= 9.7,9.0赫兹,H-4′′′) 3.00 (dd,J= 14.3,3.4赫兹,6′′′b) 2.30 (t)J= 7.6,7.6赫兹,2′,2′′)1.57 (m, H-3′, 3′′) 1.25 (m, H-4 -13′′, 4′′-13′′) 0.84 (t)J= 6.4,6.0赫兹,H-14′, 14′′);¹³理化性质(CD₃OD, 75 MHz):δ192.31(颈- 1′,1′′)99.08(颈- 1′′′)74.00(颈- 3′′′,4′′′)73.00 (c - 2′′′) 71.50 (c - 2) 70.00 (c - 5′′′) 66.00 (C-3a 3 b) 64.00 (C-1a 1 b) 61.00(其他′′′,6′′′b) 34.69 (c - 2′, 2′′) 29.52 - -30.06 (c - 4′-11′, 4′′-11′′) 25.27(颈- 3′,3′′)23.02 (c13′, 13′′)。

9:的混合物β谷甾醇(9.1,图14)和豆甾醇(9.2,图15)。白色的针,mp 145 - 148°C;R_f0.75、硅胶60 CHCl₃/甲醇/小时₂O / (20: 5: 0.5);¹核磁共振(CDCl₃,300 MHz)δ5.34(广义dJ= 5.4赫兹,6)5.15 (dd,JH-22 = 15, 8.5赫兹,9.1)5.01 (dd,JH-23 = 15, 8.5赫兹,9.1)3.52 (ddddJ= 11、10、5、4赫兹、H-3) 2.26 (m, H-12) 2.08 - -1.78 (m, H-22,9.2)1.3 - -0.8 (m, H-23,9.2)1.7 (m, H-25) 1.28 (m, H-28) 1.2 (d,J= 6.4赫兹,H-21) 1 - 1.18 (m, H-9, 14日,17日,20)1.0(年代,H₃-19年)0.95 (m, H-24) 0.84 (d,J= 6.4赫兹,H-26 *) 0.82 (d,J0.80 = 6.4赫兹,H-27 *) (t)J= 6.5,6.5赫兹,H-29) 0.8 - -2.2 (H - m, 2、7、11、15、16) 0.68(年代,H₃-18年,9.2)0.70 (s、H₃-18年,9.1);¹³理化性质(CDCl₃,75 MHz)δ140.77 (c - 5) 138.30 (C-22,9.1)129.30 (C-239.1)121.70(其他)71.82(颈)56.88(碳14,9.1)56.79(碳14,9.2)56.09 (c - 17,9.2)55.99 (c - 17,9.1)51.24 (C-249.1)50.19 (C-99.1)50.16 (C-99.2)45.87 (C-249.2)42.33 (c - 4) 42.23 (c13) 40.47 (C-20) 39.80(技术,9.2)39.70(技术,9.1)36.53 (C-109.1)36.52 (C-109.2)36.15 (C-209.2)33.97 (C-229.2)32.27(颈- 1)31.92(即9.1)31.88(即9.2)31.69 (c - 2) 29.19 (C-259.2)28.91 (C-169.1)28.24 (C-169.2)26.13 (C-239.2)25.40 (C-289.1)24.37 (C-159.1)24.31 (C-159.2)23.09 (C-289.2)21.21 (C-26 *,9.1)21.09 (c - 21,9.1)19.81 (C-26 *,9.2)19.39 (C-19) 19.05(印度* *,9.1)18.99(印度* *,9.2)18.79 (c - 21,9.2)12.23 (c29) 12.05 (C-189.1)11.86 (C-189.2)。^{*,* *}对可互换。

的antiherpetic活动1和4不确定,因为微量。的化合物3,5,6是不活跃的。的化学结构1,3,4,5,6确定了如下。

1:5-O-Caffeoyl-D-Quinic酸(绿原酸,图3)。无色无定形粉末;紫外线(甲醇)326海里,肩膀在299海里;ESI MS (pos.离子模式)m / z355年[M + H]⁺;(计算的C₁₆H₁₈O₉354);¹核磁共振(DMSO -d₆,300 MHz)δ7.40 (d,J= 16.0赫兹,第7′),7.00 (d,J= 2.0赫兹,2′),6.94 (dd,J= 8.0,2.0赫兹,6′),6.73 (d,J= 8.0赫兹,H-5′), 6.14 (d,J= 16.0赫兹,H-8′), 5.10 (ddd,J= 8.0,7.0,6.0赫兹,H-5ax), 3.90(广泛,H-3eq), 3.48 (dd,J= 7.0,4.0赫兹,H-4ax), 1.97 (m, h - 2 a), 1.86 (m - 6), 1.71 (m, h - 2 b);¹³理化性质(DMSO -d₆,75 MHz):δ175.00(即),165.90 (C-9′), 148.20 (c - 3′), 145.47 (c - 4′), 144.67(即′),125.56(颈- 1′),121.18(其他′),115.68 (c - 5′), 114.70 (8′), 114.45 (c - 2′), 73.20(颈- 1),71.50(颈),71.19 (c - 5), 69.52 (c - 4), 36.92 (c - 2)。

3:Kaempferyl-3-O——的混合物α-L-Rhamnosyl(1→6)- - - - - -β-D-Glucopyranoside(3所示。1,图6)和Kaempferyl-3-O -α-L-Rhamnosyl(1→6)- - - - - -β-D-Galactopyranoside(3所示。2,图7)。黄色无定形粉末,议员188 - 190°C(文学议员学生198 - 200°C) (12];紫外线(甲醇)265海里(II)和349海里(带我);¹核磁共振(DMSO -d₆,300 MHz)δ12.48 (d,J= 3.7赫兹,2×5-OH) 10.10 (OH) 8.04 (d,J= 8.9赫兹,2′,6′,3所示。1)7.96 (d,J= 9.0赫兹,2′,6′,3所示。2)6.87 (d,J= 8.9赫兹,H-3′, H-5′,3所示。1)6.85 (d,J= 8.9赫兹,H-3′, H-5′,3所示。2)6.18 (d,J= 2.0赫兹,H-6a H-8a) 6.40 (d,J= 1.8赫兹,H-6b) 6.38 (d,J= 2.0赫兹,H-8b) 5.31 (d,J= 7.5赫兹,h′′) 5.27 (d,J= 1.5赫兹,h′′) 5.16 (d,J5.05 = 4.4赫兹,哦)(d,J5.03 = 4.7赫兹,哦)(d,J4.88 = 6.3赫兹,哦)(d,J4.55 = 5.0赫兹,哦)(d,J4.52 = 5.3赫兹,哦)(d,J4.38 = 4.1赫兹,哦)(d,J= 6.0赫兹,h′′′) 4.37 (d,J= 6.0赫兹,h′′′) 3.68 (d,J3.58 = 10.0赫兹,哦)(m, 2′′, H-4′′, 6′′) 3.10 - -3.58 (m, H-3′′, H-5′′, 2′′′, H-3′′′, H4′′′, H-5′′′) 1.05 (d,J= 6.1赫兹,6′′′ch₃-Rha) 0.97 (d,J= 6.3赫兹,6′′′ch₃-Rha)。

¹³理化性质(DMSO -d₆,75 MHz)δ177.00 (c - 4) 165.00(即)161.00 (c - 5) 160.00 (c - 4′) 156.00 (c - 2, C-9) 133.00(颈)131.00 (c - 2′,其他′)121.00(颈- 1′)115.01 (c - 5′, 3′供给3所示。2c - 5′) 115.00 (c - 3′,3所示。1)103.00 (C-10) 101.00(颈- 1′′)100.00(颈- 1′′′)98.50(其他)93.50(8)75.65(颈- 3′′,3所示。1)75.50 (c - 5′′,3所示。1)73.93 (c - 2′′,3所示。1)73.31 (c - 5′′,3所示。2)72.74 (c - 3′′,3所示。2)71.50 (c - 2′′,3所示。2)71.50 (c - 2′′′, c - 4′′′,3所示。1)70.33 (c - 2′′′, c - 4′′′,3所示。2)70.33 (c - 3′′′) 70.02 (c - 4′′,3所示。1)67.66 (c - 4′′,3所示。266.49)67.66 (c - 5′′′)(其他′′)17.41(其他′′′,3所示。2)17.31(其他′′′,3所示。1)[13]。

4:Quercetin-3-O -β-D-Glucopyranoside(图8)。黄色无定形粉末;紫外线(甲醇)256海里(II)和358海里(带我);¹核磁共振(CD₃OD、300 MHz)δ7.72 (d,J= 2.1赫兹,2′)7.52 (dd,J= 8.5,2.2赫兹,6′)6.89 (d,J= 8.5赫兹,H-5′) 6.36 (d,J =2.0赫兹,H-8) 6.21 (d,J= 2.0赫兹,6)5.15 (d,J3.71 = 7.5赫兹,h′′) (dd,J= 11.9,2.4赫兹,6′′)3.56 (dd,J= 11.9,5.2赫兹,6′′b) 3.48 (dd,J= 8.0,7.5赫兹,2′′)3.42 (dd,J= 9.0,8.0赫兹,H-3′′) 3.34 (dd,J= 10.0,9.0赫兹,H-4′′) 3.22 (ddd,J= 10.5,5.5,2.5赫兹,H-5′′);¹³理化性质(CD₃OD, 75 MHz):δ179.49 (c - 4) 166.19(即)159.04(颈)158.49 (c - 2, C-9) 149.86 (c - 4′) 145.92 (c - 3′) 135.60(颈)123.19(颈- 1′)123.09(其他′)117.56 (c - 5′) 116.03 (c - 2′) 105.39 (C-10) 104.31(颈- 1′′)99.65(其他)94.78 (8)78.38 (c - 3′′) 78.11 (c - 5′′) 75.72 (c - 2′′) 71.24 (c - 4′′) 62.56(其他′′)。

5:Kaempferyl吡喃葡萄糖苷(图9)。黄色无定形粉末,议员165 - 170°C(分解)14];紫外线(甲醇)266海里(II)和349海里(带我);红外(KBr)3350 - 3450(地),2933 (aliph。(碳氢键)),1633 (C = O), 1611 (C = C)、1604 (C = O)厘米⁻¹;ESI MS:米_R448年。¹核磁共振(DMSO -d₆,300 MHz)δ12.50(广泛的年代,5-OH), 8.01 (d,J= 9.0赫兹,2′,6′,每个),6.84 (d,J= 9.0赫兹,H-3′, H-5′,每个),6.38 (d,J= 2赫兹,H-8), 6.17 (d,J= 2 Hz - 6), 5.41 (d,J= 7.1赫兹,h′′), 5.24(2′′-哦),4.96(5′′-哦),4.86(3′′-哦,4′′-哦),4.16(6′′-哦),3.55 - -3.30(广泛的年代,6′′),3.18 (H-5′′), 3.16(广泛的年代,2′′),3.06(广泛的年代,H-3′′, H-4′′);¹³理化性质(DMSO -d₆,75 MHz) 177.13 (c - 4), 165.10(即),161.09 (c - 5), 156.43 (C-9), 155.88 (c - 2), 133.08(颈),130.75 (c - 2′,其他′),120.88(颈- 1′),115.02(颈- 3′,c - 5′), 103.43 (C-10), 100.97 (D,颈- 1′′),99.00(其他),93.78 (8),77.41 (c - 3′′), 76.39 (c - 5′′), 74.17 (c - 2′′), 69.84 (c - 4′′), 60.80(其他′′)。

6:山柰酚(3、5、7,4′-tetrahydroxyflavone,图10)。黄色无定形粉末;紫外线(甲醇)260海里(肩膀)和365海里(带我);¹核磁共振(CD₃OD 300 MHz)δ8.07 (d,J= 8.5赫兹,2′,6′),6.91 (d,J= 8.5赫兹,H-3′, H-5′), 6.40 (d,J= 1.7赫兹,H-8), 6.19 (d,J= 1.7赫兹,6);¹³理化性质(CD₃OD、75 MHz)δ177.42 (c - 4), 165.56(即),162.46 (c - 5), 160.56 (c - 4′), 158.24 (C-9), 148.10 (c - 2), 137.16(颈),130.68 (c - 2′,其他′),123.76(颈- 1′),116.31(颈- 3′,c - 5′), 104.56 (C-10), 99.29(其他),94.486 (8)。

评估的antiherpetic有效性g . procumbens我们进行了双盲、随机、对照临床试验患者的复发性疱疹口唇的草药产品,包含1和2%的标准化植物提取物。

共有65名患者参加了实验。三在安慰剂组,4名患者(治疗组)并没有出现跟踪。一个病人在治疗组没有记录完整的结壳的日期和完成治疗。一个病人在安慰剂组无法继续治疗变应性接触性皮炎。因此,只有59对患者进行评估。他们被分成治疗组有1%草本凝胶(19例),治疗组有2%草本凝胶(22名患者),和安慰剂组(18例)。的antiherpetic结果治疗组(1和草药凝胶2%)没有显著不同。两个治疗组因此结合的数据(41名患者,10雄性和雌性31日)和安慰剂组相比,由18例(15 3雄性,雌性)。两组人可比的年龄、性别、疼痛、瘙痒评分,比例的病人遭受痛苦,患者的比例为Tzanck涂片阳性和病毒文化。唯一的显著差异是瘙痒的病人的比例。 It was greater in the treated group as shown in Table2。

Tzanck涂片阳性结果的处理和控制组分别为72.2%和70.0,分别。病毒文化显示1型单纯疱疹病毒的治疗和对照组46.2和31.3%,分别。治疗的病人和对照组没有显著不同,除了瘙痒治疗组,从控制(表明显不同2)。

第一个跟踪(D2, D4)表明,治疗组仍然遭受痛苦,但数量减少来自27个病人(65.90%)20例(34.15%),瘙痒从68.29下降到48.78%。病人遭受痛苦的安慰剂组下降从11在18 18例病人(61.10%)到6(33.33%),但患者瘙痒的比例保持不变(7在18例,38.89%)。与安慰剂治疗组的平均疼痛评分分别为1.11和1.41,分别。平均瘙痒治疗和安慰剂组的得分分别为1.60和1.44,分别。结果两组没有显著差异(表3)。

21岁的41名患者在治疗组(51.22%)已经完全在4天内结硬皮。堪比9的18例(50%),安慰剂组。7天内病变完全愈合治疗组的26例(63.41%)而在18例8(44.44%),安慰剂组。治疗组中,完整的结壳的平均时间是4.9天,完全的愈合是8.7天。相同的安慰剂组数据分别为5.1和9.4天,分别。病毒文化D7显示,治疗组患者的数量曾积极的文化从19个减少到3而服用安慰剂的那一组降低从5 3例。结果不同于安慰剂无关紧要的(表3)。

副作用。血液化学(CBC, UA、血清血糖,面包,和Cr)的参与患者治疗后是正常的。在安慰剂组有一个病人患有过敏性接触性皮炎,所以治疗停止。有10个病人(24.4%),治疗组和安慰剂组有5例(27.8%)有轻度瘙痒和刺激,但所有的病人可以容忍的症状不中断治疗。治疗的副作用和安慰剂组没有显著不同。

4所示。讨论

植物化学的工作g . procumbens表明气生植物的乙醇提取部分,该药物材料,有对1型单纯疱疹病毒和HSV-2 (IC杀病毒的行动₅₀625.0和675.0μg / mL, resp)和IC阻止病毒复制₅₀584.0和568.0μ分别g / mL。几个antiherpetic化合物提取分离。其中一些如dicaffeoylquinic酸(2)是著名的抗病毒活性(15]。我们发现提取包含其他antiherpetic化合物,即7,8,9。对HSV-2 antiherpetic活动8鞘糖脂,是比2(dicaffeoylquinic酸)。此外,一些在提取黄酮类化合物被发现。他们可能施加浓度高于MNTD活动。测试浓度不应超过MNTD因为培养细胞会受到损害。然而,类黄酮的存在可能的抗炎效应(1,4,16),这可能会减轻感染的症状。

实验室证据指导我们进行临床研究。双盲随机对照临床试验的复发性疱疹口唇草药和安慰剂凝胶。乙醇提取使用sitosteryl和标准化stigmasteryl糖甙作为一个标记化合物(标准),因为它可能是孤立在一个足够没有困难。标准化提取成立于草药凝胶凝胶基础1和2%。安慰剂凝胶制备类似的,颜色像草药凝胶但没有提取。

我们不能实现参与病人的数量计算每组(50),虽然在三家医院进行了试验。只有65个病人参与试验,但只有59名患者完成了这项研究。因此,这种临床试验的力量仅从80%降低到50%。虽然草药的antiherpetic结果从安慰剂凝胶不同无关紧要的,它往往会有一些好处。其中包括人数的减少的趋势在治疗组患者患有发痒,更多的病人治疗7天内,和1型单纯疱疹病毒感染的患者数量较小。从传统、实验室和临床证据,我们可以假定g . procumbens倾向于减少患有1型单纯疱疹病毒感染,可能有一些antiherpetic行动。我们进行中药凝胶的稳定性试验,发现外观和标记化合物的内容保持不变,当存储25°C的凝胶为24个月,在40°C 6个月。改善这种草药的疗效结果凝胶治疗复发性疱疹的口唇,我们建议改变凝胶基础减少刺激和提高它的能力。为进一步的临床研究,我们建议增加患者数量和高浓度的植物提取物植物凝胶。

5。结论

Gynura procumbens由antiherpetic化合物,caffeoylquinic酸衍生品,丁糖甙,和glycoglycerolipids。这种植物的黄酮类化合物可能的抗炎效应有利于疱疹的病人。实验室证据和减少患者感染发生率的支持的antiherpetic效果g . procumbens。微不足道的结果的临床研究可能出现低参与病人数量和草药产品中提取浓度不足。

利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。

确认

作者感谢德国(德意志)学术交流服务,Mahidol大学的高等教育委员会、泰国和泰国研究基金会的奖学金(DBG4780002)。

引用

1. 中药学的字典,上海科学技术出版社,上海,中国,1997。
2. 传统医学学院窟Phra Chetuphon窟phra Chetuphon,曼谷,泰国,1978年。
3. “由于属性和使用”东亚和东南亚的药用植物l·m·佩里,艾德,麻省理工学院出版社,伦敦,英国,1980年。视图:谷歌学术搜索
4. m·n·伊斯坎德尔,y的歌,i m . Coupar和j . w . Jiratchariyakul”抗炎药用植物的筛选Gynura procumbens”,人类营养的植物性食物卷,57号3 - 4、233 - 244年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. h . Wiedenfeld“两个pyrrolizidine生物碱Gynura飞”,植物化学,21卷,不。11日,第2768 - 2767页,1982年。视图:谷歌学术搜索
6. x t梁和e·罗德SenecionineGynura segetum”,足底》,51卷,p。362年,1984年。视图:谷歌学术搜索
7. j·r·马西森,d·j·罗宾斯Pyrrolizidine生物碱Gynura sarmentosa”,Fitoterapia,卷63,不。6,557年,页1992。视图:谷歌学术搜索
8. m . Takahira y近藤、g . Kusano和野,“四个新3α羟基spirost-5-ene衍生品从Gynura粳稻牧野,”四面体的信,18卷,不。41岁,3647 - 3650年,1977页。视图:谷歌学术搜索
9. f . Bohlmann和c Zdero”, Gynuron静脉新terpen-cumarin-derivat来自Gynura crepioides”,植物化学,16卷,不。4、494 - 495年,1977页。视图:谷歌学术搜索
10. k . Yoshitama m . Kaneshige n . Ishikura荒木,s . Yahara和k·安”,红紫色的叶子中花青素稳定Gynura树蛙简历。(紫色激情),“《植物研究,卷107,不。3、209 - 214年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. s . Jarikasem植物化学的研究种抗单纯形组件Gynura procumbes稳定。[博士。论文),Mahidol大学研究生学院,曼谷,泰国,2000年。
12. k . Yasukawa和m . Takido”,黄酮醇糖苷珍珠菜mauritiana”,植物化学,26卷,不。4、1224 - 1226年,1987页。视图:谷歌学术搜索
13. p . k . Agrawal碳13核磁共振的类黄酮Elservier,纽约,纽约,美国,1989年。
14. j .浸渍、f·m·麦克唐纳和h·m·布拉德利Eds。字典的天然产品Chapman&Hall卷。5日,伦敦,英国,1994年。
15. p . p . h . y . Li,但和v . e . c . Ooi“抗病毒活性和作用方式的caffeoylquinic酸鹅掌柴heptaphylla(l)Frodin。”抗病毒研究,卷68,不。1、1 - 9,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. E.-J。李,G.-E。霁,M.-K。唱”,槲皮素和山柰酚抑制免疫球蛋白E-mediated过敏炎症RBL-2H3和Caco-2细胞,”炎症反应的研究卷,59号10日,847 - 854年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2013 Siripen Jarikasem等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。