文摘

胃蠕动障碍是一种功能性胃肠疾病的主要病理生理因素。作为替代方法,针灸是有效治疗胃肠蠕动障碍;然而,潜在的作用机制尚不清楚。在目前的研究中,我们使用两个capsazepine, TRPV1拮抗剂,TRPV1基因敲除小鼠。动物分为野生型组(WT) capsazepine注射组(0.5毫克/公斤,CZP i.p),和TRPV1基因敲除小鼠组(TRPV1^−−/)。这些三组分为三个亚组,这受到EA刺激穴位Zhongwan (CV12)在不同强度(1、2或4 mA)。我们表明,电针刺激Zhongwan (CV12)明显抑制胃蠕动在2和4马在野生型老鼠intensity-dependent的方式。抑制作用也观察到在capsazepine-injected和TRPV1^−−/老鼠,但不再依赖强度,表明TRPV1部分参与electroacupuncture-mediated胃蠕动的调制。

1。介绍

胃蠕动是人体最重要的生理功能。协调胃蠕动是必要的膳食营养素的消化和吸收。胃蠕动的障碍导致胃排空延迟和症状,如恶心、呕吐、腹部疼痛和不适(1]。最近的研究表明,胃蠕动障碍的主要病理生理因素在功能性胃肠疾病,具有公共卫生成本每年超过300亿美元(2,3),包括功能性消化不良(4和胃食管返流疾病5]。

针灸已经练习了几千年的东欧国家,已成为非常受欢迎的在世界范围内作为补充和替代方法。许多研究在人类和动物支持针灸治疗胃肠道症状的疗效和/或疾病,胃肠道分泌的6,7,感觉8[],myoelectrical活动9]。针灸的腹部已被用于治疗腹痛,表明针灸这个网站可能抑制胃蠕动和/或减少胃痉挛(10]。最近,许多研究探讨电针刺激的疗效(EA)治疗胃肠蠕动障碍和得出的结论是,EA可以改变胃肠蠕动,改善胃肠蠕动障碍(11]。虽然这EA证明治疗效果,对底层机制(s)。

瞬时受体电位vanilloid-1 (TRPV1;瞬时受体电位(TRP)阳离子通道,亚V,成员1)总科的一员的阳离子通道(12]。TRPV1在EA的调制效果起着重要的作用,由于它的功能在热和机械的感觉13- - - - - -15]。然而,TRPV1和EA的研究主要局限于治疗疼痛,如癌症相关疼痛或痛觉过敏。很少有研究报道之间的关系EA和TRPV1胃肠蠕动的规定。我们之前报道的EA对胃运动的调节作用[16]。鉴于TRPV1受体在介导的新兴角色感觉和内脏功能,本研究的目的是为了进一步阐明EA-mediated胃蠕动调制机制,证实TRPV1是否参与这一机制。

2。材料和方法

2.1。动物

TRPV1^−−/老鼠(,男,22 g, B6.129X1-TRPVJ003770)和野生型同行(WT,,男,22 g)是购自南京大学模式动物研究中心(中国南京)。食物和水都可以随意,动物们被安置在控制环境条件下(22°C,相对湿度40% - -60%,12 h替代光/暗周期)。实验操作都是按照美国国立卫生研究院进行指导的护理和使用实验动物和科学调查委员会的批准,南京中医药大学、南京,中国。

2.2。实验小组

Capsazepine注射用于30 60 WT老鼠(CZP组),但不是在剩下的30 WT老鼠(WT组)或30 TRPV1基因敲除小鼠(TRPV1^−−/组)。这些三组10只小鼠被分为三个亚组,每组的三个子组受到EA刺激在不同强度(1、2或4 mA)。

2.3。实验的程序

动物禁食过夜有免费水和氨基甲酸乙酯麻醉(1.2克/公斤i.p。;美国σU2500)。气管插管是保持呼吸道的专利,和胃蠕动记录使用先前描述的方法(17]。一个小切口是在从幽门十二指肠1 - 2厘米。一个小气球的柔性橡胶避孕套是通过切口插入幽门区。气球的压力测量传感器(YP200;成都仪器厂,成都,中国)和记录生理信号采集系统(RM6240;成都仪器厂)进行进一步分析。在实验中,动物的温度保持在37°C±0.5°C,使用一个电热板。

实验过程在WT和TRPV1^−−/组织图所示1(一)。每个刺激的时间尺度capsazepine注射组如图1 (b)。Capsazepine(0.5毫克/公斤,i.p。;美国σC191)溶解在车辆(1%二甲亚砜;美国σD8418)。

2.4。艺电刺激

一对电极针(直径0.3毫米)约5毫米深插入Zhongwan点(CV12),位于腹部的中心,在身体的中线17]。EA强度设置为1、2、4,交2赫兹的频率和15赫兹2分钟。

2.5。统计分析

数据分析使用SPSS 17.0软件(SPSS,芝加哥,美国)。治疗前后差异使用paired-sample比较以及,两组之间比较使用一个独立样本以及。用方差分析比较组间进行。被认为是具有统计学意义。所有数据都表示为±SE。

3所示。结果

3.1。胃蠕动

在静止条件下(EA)之前,有节奏的胃收缩的频率在TRPV1观察3 - 6 /分钟^−−/和WT老鼠,海浪有节奏的收缩幅度大约是0.05 - -0.3 kPa,当气球压力维持在0.4 - -0.6 kPa用气球填满0.1 - -0.2毫升温水。注入0.5毫克/公斤capsazepine i.p。,caused no change in gastric movement or amplitude.

3.2。胃在CV12 EA不同强度的刺激

在WT老鼠,EA刺激CV12 1 mA(的强度)产生胃蠕动(图上没有显著的影响2(一个))。相比之下,EA刺激2马稍微抑制胃蠕动,刺激时4马强烈抑制。因此,抑制胃蠕动的EA刺激强度的依赖。

3.3。TRPV1参与由EA刺激胃蠕动调制

确定机制在CV12 EA刺激的抑制作用,我们使用capsazepine, TRPV1的特定的对手。WT老鼠,显著抑制胃蠕动了EA刺激后在马2和4,但不是在1马;此外,这种抑制作用强度的依赖,被马马在4比2(图4 (e))。在1 mA (capsazepine注射后,艺电刺激)没有产生显著的抑制作用,而在马2产生轻微的抑制(图3(一个));然而,EA的影响刺激部分屏蔽(图4马4 (e))。因此,EA刺激后消失的intensity-dependent特点TRPV1通道堵塞。类似的结果在TRPV1^−−/老鼠(图4(一)- - - - - -4 (e)),这意味着一个重要的角色EA-mediated调制TRPV1的胃蠕动。

4所示。讨论

EA的报告改善效果胃节律障碍是一贯的和可再生的,建议一个健壮的EA治疗胃蠕动障碍的作用[11]。针灸的临床效应背后的主要机制似乎是传入神经纤维的活化皮肤和肌肉的分布18]。在这项研究中,我们确定TRPV1是否参与EA-mediated调节胃蠕动刺激CV12后具有不同的强度。为了这个目的,我们使用两个capsazepine, TRPV1拮抗剂,TRPV1基因敲除小鼠。针灸刺激身体的各个节段部位已被证明改变胃蠕动在麻醉动物(19,20.];这种改变已经促进或抑制,这取决于穴位刺激。符合这些报告,我们的数据显示,EA CV12显著地抑制胃蠕动,但只有在强度2和4。此外,这种抑制作用强度(图的依赖4),这是按照先前的报道20.]。躯体传入神经纤维组成的A -α,- - - - - -β,- - - - - -δ和c fibers。均值阈值的动作电位δ马纤维大约是2 (20.),而无髓鞘的纤维大约是3 mA [21]。与这个一致20.],EA刺激只能调节胃运动的强度大于阈值的激活-δ和/或c fibers。换句话说,EA马2的抑制作用是由A -δ纤维,在EA的影响4马是由无髓鞘的纤维。

TRPV1协调内部和细胞外信号转导和调节器官功能通过激活各种内源性和外源性刺激如机械刺激、有害的热量,蛋白质,和辣椒素(22]。一类内脏和躯体传入背根的起源和其功能意义的痛感已经有据可查的(23]。最近,TRPV1在穴位被发现被表达,表明它导致EA刺激的影响24]。上述结果表明TRPV1在EA刺激的重要性。确认是否TRPV1参与胃蠕动CV12刺激后的规定,我们评估的影响在CV12 EA TRPV1-null动物的胃蠕动。TRPV1堵塞或敲除后,EA在CV12继续抑制胃运动,尽管如此,有趣的是,EA-mediated抑制的intensity-dependent性质消失,尤其是在马强度2和4。Caterina et al。25)报道,VR1-null老鼠,没有一个c fibers检查被辣椒素激活,一个特定的TRPV1受体激动剂;而11 22野生型传入神经刺激反应强烈。在有髓痛觉受器中,只有13个野生型纤维之一,没有九纤维从VR1^−−/老鼠对辣椒素。这些结果表明,TRPV1主要是coexpressed c fibers,而不是有髓痛觉受器(25]。与此一致的是,Koerber et al。26)报道,TRPV1在分组人口特别是本地化C-fiber痛觉受器的回应(CH-fibers)而不是机械或热冷刺激。大多数c fibers正常皮肤是C-polymodal回应机械和热刺激的传入纤维。TRPV1 coexpression和c fibers结合相同的神经动作电位阈值的启发式和EA的反应表明,TRPV1参与胃蠕动的intensity-dependent监管EA CV12刺激。

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

确认

作者感谢教授x h .京(针灸研究所、中国中医科学院)建议和y王(南京中医药大学)援助在实验。这项工作是支持由国家重点基础研究计划(973计划,没有。2011 cb505206),中国国家自然科学基金(81202744和81202744号),自然科学江苏省高等教育研究项目(没有。11 kjb360008)和江苏省Qinglan项目科技创新团队。