文摘

在目前的研究中,我们调查了水溶性多糖的抗炎活性摘要blazeiMurill (WSP-AbM)对切除卵巢的老鼠osteopenic。老鼠口服WSP-AbM(200毫克/公斤体重)8周。随后血清马来二醛(MDA)水平,总抗氧化状态(陶斯),核转录因子(NF -κBκB)水平,多形核细胞(中性粒细胞)水平,interleukin-1β(il - 1β),诱导一氧化氮合酶(间接宾语)水平,肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)水平、粘附分子(ICAM-1)和cyclooxygenase-2 (cox - 2)是由酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫组织化学,分别。WSP-AbM管理明显( )降低血清il - 1β和肿瘤坏死因子-α水平的表情ICAM-1、cox - 2和伊诺NF -κB与OVX大鼠相比。WSP-AbM管理alsomarkedly ( )降低中性粒细胞浸润。总之,我们观察到WSP-AbM补充在骨质疏松症的疾病模型抗炎作用。

1。介绍

骨吸收一些炎性疾病相关。慢性炎性疾病与继发性骨质疏松症和骨折的风险显著相关(1,2]。目前的证据表明,在慢性炎症可能导致骨质疏松症发展的抑制骨形成,与系统性的促炎介质生产过剩有关,如细胞因子(3,4]。因此,寻找有效的药物可以控制炎症的骨量减少骨量减少患者具有重要意义。

的担子菌类摘要blazeiMurill (AbM),俗称“阳光蘑菇,”原产于巴西和广泛种植在日本和中国,因为它的药用价值。广泛用于nonprescript,药用目的,作为一个可食用的蘑菇和提取物的形式(5]。反弹道导弹传统上被用于预防各种疾病,包括癌症、肝炎、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、糖尿病和皮炎(6]。考虑所有发现WSP-AbM免疫刺激活性的影响及其与许多生理过程的关系,本研究的目的是评估抗炎效果的WSP-AbM切除卵巢的老鼠osteopenic。

2。材料和方法

2.1。制备的水溶性多糖摘要blazeiMurill (WSP-AbM)

AbS是由发酵的蘑菇鬼伞属comatus(7]。水提取是由加入100毫升沸水10 g风干菌丝体。注入站在室温下30分钟。冷却和过滤后,提取浓缩体积的十分之一,与4卷95%乙醇沉淀在4°C 24 h。收集的沉淀离心deproteinated蛋白酶消化,其次是详尽的透析用水48 h。然后95%的浓缩透析液沉淀了4卷EtOH在4°C 24 h。绝对的沉淀被乙醇,丙酮,乙醚,分别给予的水溶性多糖摘要blazeiMurill (WSP-AbM)。

2.2。实验设计

三十岁女性Wistar鼠(2个月大,体重 g)被用于这项研究。良好的动物实验的实践是根据国际标准进行动物实验。动物的老鼠被随机分为三组,两个切除卵巢的(OVX),另一组是给定一个虚假的操作(控制)8]。然后组1 ( 虚假的)和2 ( ,OVX)口服药物载体(PBS)和组3 ( )的口服药物WSP-AbM (WSP-AbM 200毫克/公斤/天)为8周。在牺牲,血清使用血清分离器通过离心管,然后立即存储−20°C估计炎症细胞和炎症介质。

2.3。顺丁烯二醛估计(MDA)

MDA决心与硫代巴比土酸(稍后通知)使用制造商的指令(南京建成生物工程研究所)。总蛋白质含量的样品进行了分析使用coomassie蓝试验(南京建成生物工程研究所)。

2.4。估计血清il - 1β和肿瘤坏死因子-α水平

血清样本解体在冰冷的5卷里帕缓冲区。孵化冰上30分钟后,样本离心两次在20000 Xg 15分钟在4°C。得到的上层清液用于试验。il - 1的浓度β和肿瘤坏死因子-α决定使用一个商业酶联免疫试剂盒(上海Jinma生物科技有限公司,中国)后生产的指令。

2.5。估计血清cox - 2,进气阀打开,ICAM-1水平

根据协议的程序处理推荐cox - 2,进气阀打开,ICAM-1免疫组织化学用品(Hengdabaisheng生物技术,北京)。

2.6。量化的NF -κB活动

激活NF -κB是量化通过ELISA技术使用PathScan Phospho-NF -κB p65 (Ser536)夹心ELISA抗体对(上海Yubo生物科技有限公司,中国),后生产的指令。

2.7。总抗氧化状态的测量

血清总抗氧化状态(陶斯)是如前所述取决于Laight et al。9]。吸光度的增加在405纳米测量的标(上海迅达医疗科技有限公司,中国)。

2.8。统计分析

所有数据被单向方差分析分析,和之间的差异意味着建立了邓肯的多个测试。数据显示为±SEM手段。5%的显著水平( )是作为最低可接受的概率的方法之间的区别。

3所示。结果

3.1。WSP-AbM在MDA的影响

为了评估WSP-AbM对血清脂质过氧化作用的影响,我们确定了MDA的水平。从sham-operated控制包含低血清MDA水平。切除卵巢的组MDA水平明显高于对照组( )。老鼠接受WSP-AbM显著( )降低血清MDA ethanol-induced海拔(图1)。


图1
WSP-AbM对MDA的影响水平。值显示为±SEM手段。 与OVX组和 与OVX组。
3.2。WSP-AbM TNF -的影响α和il - 1β

肿瘤坏死因子-的过度α和il - 1β引起OVX被ELISA评估在蛋白质水平。图2表明,OVX il - 1的蛋白质含量显著增加β在血清中。WSP-AbM治疗降低il - 1的水平β27.3%相比OVX组( )。如图2,肿瘤坏死因子的水平αOVX-induced骨质疏松后显著升高。WSP-AbM抑制这种反应( )。


图2
WSP-AbM对肝肿瘤坏死因子的影响α和il - 1β的水平。值显示为±SEM手段。 与OVX组和 与OVX组。
3.3。WSP-AbM对cox - 2的影响,进气阀打开,ICAM-1水平

老鼠受到OVX-induced骨质疏松症显示典型的炎症标志物upregulation粘附分子和感应prooxidative酶(cox - 2和间接宾语)。蛋白质OVX组cox - 2的表达与虚假的组相比显著增加。蛋白质WSP-AbM-treated组(表中cox - 2的表达减少1)。在这项研究中,WSP-AbM抑制OVX-induced伊诺表达式。

表1
WSP-AbM对ICAM-1,进气阀打开,cox - 2蛋白的生产(immunopositive数量/毫米2)。

蛋白质的表达ICAM-1 OVX组与虚假的组相比显著增加。WSP-AbM治疗减少ICAM-1水平相比OVX组( )(表1)。

上面我们假设WSP-AbM可能产生有利影响的表达减少NF -κ如图3,OVX显著诱导激活NF -κB高于控制水平,假设,WSP-AbM显著抑制这种反应。它与图中给出的结果是一致的2。


图3
WSP-AbM对NF -κB的活动。值显示为±SEM手段。 与OVX组和 与OVX组(对照组设置为1)。
3.4。WSP-AbM对总抗氧化状态的影响(陶斯)

血清陶斯的结果如表所示2。陶斯OVX-treated组显著( )高于那些虚假的组。那些WSP-AbM-treated组明显低于OVX-treated组( )。

表2
影响WSP-AbM陶斯活动( 米L-ascorbate)。

4所示。讨论

骨质疏松症是一种广义的代谢性疾病,其特征是元素骨组织的逐步丧失,导致骨质疏松和骨折的风险增加10,11]。目前用于治疗骨质疏松症的药物可能产生副作用为磷酸盐[颚骨坏死或上消化道疾病12]。因此,生物活性膳食天然化合物对骨骼健康具有积极作用管理骨质疏松症的一个有吸引力的选择。在目前的实验中,我们使用WSP-AbM体内动物模型的OVX osteopenic老鼠。我们的结果表明,补充WSP-AbM减毒OVX大鼠炎症反应。

MDA是一个主要的反应性醛出现在生物膜的脂质过氧化反应的最后阶段多不饱和脂肪酸(13]。MDA活动是常用的作为组织损伤的指标涉及一系列的连锁反应(14]。因此,我们试图确定WSP-AbM将提供抗氧化作用通过测量MDA水平。sham-control动物的血清MDA水平低。OVX组MDA水平明显高于那些虚假的l(组 )。WSP-AbM组MDA水平显著低于OVX组( )(图1)。诱导的氧化应激被确定为关键元素在骨质疏松症的病理生理学15]。这些结果表明,血清中的自由基释放被WSP-AbM有效回收,也占了其抗炎作用。

激活的炎症级联被确认为另一个关键因素在骨质疏松症的病理生理学15]。细胞因子的异常代谢是骨质疏松症的一个主要特点。肿瘤坏死因子的表达式α和il - 1β被发现在动物模型和增强骨质疏松症患者(16]。在这项研究中,WSP-AbM治疗显著减毒OVX-induced TNF -α和il - 1β在蛋白质表达水平。因此,我们假设在OVX-induced WSP-AbM骨质疏松症的保护作用至少部分由其抗炎。

没有诱导产生的NOS(间接宾语)在发展中扮演重要角色的炎症性骨质疏松症(17,18]。伊诺是引起IFN-c和肿瘤坏死因子等细胞因子α(19- - - - - -21]。因此,我们怀疑WSP-AbM,抑制细胞因子表达式,对伊诺任何积极的治疗效果。结果表明,WSP-AbM治疗抑制炎症的发展,抑制cytokines-induced伊诺表达式。

考克斯还没有激活酶导致产生PGE2显著增加(22]。cox - 2主要负责产生PGE2在炎症,增加和PGE2通常被认为是促炎的代理(23,24]。如表所示2WSP-AbM治疗显著降低OVX大鼠中cox - 2蛋白的表达。

的活动模式WSP-AbM OVX-induced骨质疏松的预防还包括抑制ICAM-1表达式。细胞粘附分子ICAM-1诱导的NF -κB激活和炎症细胞因子如TNF -α和il - 1β(25,26]。表达ICAM-1肝细胞与骨质疏松的程度(27]。在OVX-induced骨质疏松模型,我们发现ICAM-1的过度表达,减少WSP-AbM-treated组。这表明WSP-AbM会抑制淋巴细胞粘附的内皮细胞和抑制淋巴细胞的迁移从血管内皮下膜和渗透。

很多报告显示OVX-induced活性氧可以激活redox-sensitive核因子NF -κB (28]。NF -κB炎症基因的诱导和激活触发器的发生和发展中发挥着重要作用OVX疾病(29日]。据猜测,WSP-AbM显著抑制这种反应。它符合前面的研究28,29日]。

总抗氧化状态(陶斯)是一个迹象 和其他氧化剂种类。我们测量陶斯活动作为一种间接的形成 和其他氧化剂种类。 是由多形核白细胞和巨噬细胞NADPH氧化酶的酶活性和黄嘌呤氧化酶在炎症性网站。WSP-AbM组最低级别的陶斯活动相比,OVX组。我们假设WSP-AbM产生抗炎效应通过减少陶斯活动的水平。

总之,目前的数据表明WSP-AbM补充可以抑制OVX引起的炎症。激活NF -κB在骨质疏松症的发病机制中扮演一个重要的角色的upregulation TNF -α,il - 1βICAM-1,进气阀打开,cox - 2的表达。WSP-AbM降低TNF -α,il - 1βICAM-1,进气阀打开,cox - 2表达和抑制NF -骨质疏松症κB激活。因此,目前的结果首次表明,抗炎作用的WSP-AbM骨质疏松疾病的模型。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究得到了教育部的黑龙江省的基础(没有。14521635)。彭王,李小陶,Lei太阳co-first作者。