文摘

中国草药的消费(chm)呈几何倍数增长。许多患者利用化学加工与处方药的频率。Herb-drug交互也因此成为一个重要的研究焦点。Transporter-mediated herb-drug相互作用有可能严重影响药物疗效和毒性。自有机阴离子转运蛋白1 (OAT1)在肾活跃分泌和药物之间的相互作用是至关重要的,调制OAT1-mediated药物运输的可能性应该认真关注。六十三年临床使用chm进行评估的研究。用于hOAT1-overexpressing细胞系在体外chm筛选和有效候选人管理Wistar鼠访问肾血流动力学。OAT1 mRNA表达的调控也检查chm影响OAT1-mediated运输的进一步证据。在所有63 chm,公式Gui智富凌Wan(广州)和贾魏萧姚圣(CW)表现出显著的抑制hOAT1-mediated (³H] pah吸收在体外和多环芳烃间隙和净分泌在活的有机体内。此外,广州显示浓度的举止在体外和在活的有机体内,rOAT1 mRNA表达的减少表明,广州不仅抑制OAT1 OAT1还镇压的函数表达式。

1。介绍

传统中药(THM)被广泛用作补充替代药物(CAM)在过去的几十年里持续增长和三卤甲烷的使用作为一个最受欢迎的世界各地的凸轮(1- - - - - -5]。

三卤甲烷、中草药(CHM)是一种定义良好和建立治疗系统。CHM的治疗概念的使用草药配方平衡阴阳、气和血6]。CHM配方的方法是将不同的草药化合物增加或提高治疗效果,减少毒性和副作用,适应促进和谐,并优化每个组件的疗效[7]。CHM配方广泛用于全球人口。例如,他们被认为是在美国膳食补充剂和自然健康产品在加拿大和澳大利亚。在亚洲,他们作为规范的药物在中国,日本,台湾,CHM广泛规定治疗各种疾病(3,7- - - - - -11]。

CHM广泛使用以来,世界各地,herb-drug交互的可能性(潜在的风险而CHM被病人与药物)应认真注意。调制的药物转运蛋白化学加工是一个适当的例子来阐明herb-drug上面提到的交互。药物转运蛋白跨膜蛋白,提供跨细胞膜各种内源性和外源性的化合物。等流出运输车22 (P-gp)位于肠道顶端膜增强CHM,药物可以通过P-gp高度抽出,导致可怜的药物的生物利用度12,13]。事实上,调制transporter-mediated药物运输要复杂得多;不仅会影响药物的吸收,但也分布、代谢和消除(14- - - - - -17]。一旦chm调节转运蛋白,它们可能会影响药代动力学的药物使用的与此同时,进一步造成不利影响。

活跃分泌发生在近端小管的肾脏是药物消除的主要途径之一。transporters-mediated活跃分泌,有机阴离子转运蛋白(OAT)系统被认为起着重要的作用,因为它能分泌出许多二期代谢物除了非结合的阴离子化合物浓度梯度。因此OAT系统消除了大量的阴离子外源性物质,包括各种药物(18- - - - - -20.]。

OAT1是第一个克隆燕麦家族的成员(21- - - - - -23]。OAT1的mRNA表达主要在人类和大鼠肾脏而似乎弱在其他器官22,24]。在肾脏,OAT1局限于近端肾小管细胞的基底膜(20.,25]。起初,OAT1的功能被确认为p-aminohippuric酸(PAH) / dicarboxylate换热器:dicarboxylate OAT1传输直接向外(生理、α酮戊二酸)的电化学梯度向下运动换取多环芳烃的吸收对其电化学梯度(21- - - - - -23,26,27]。

OAT1 multispecific在基板,从内生物质环境毒素和药物。药物经由OAT1包括非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药),抗病毒药物,抗生素、利尿剂,antineoplasmics,抗癫痫药和降压药20.,28- - - - - -30.]。因此,抑制OAT1可能可能减少肾排泄,增加身体积累这些药物,这可能会导致不利影响。在日本,据报道,严重的骨髓抑制发生在患者coadministered甲氨蝶呤(MTX)和非甾体抗炎药。抑制OAT1-mediated MTX肾排泄的非甾体类抗炎药中也被认为是扮演一个角色在积累和副作用的MTX [31日,32]。与副作用,几项研究已经报道,OAT1-mediated细胞积累的抗病毒药物肾毒性的原因;因此,抑制OAT1非甾体抗炎药或丙磺舒可能,在某些情况下,减少肾毒性(15,33- - - - - -36]。此外,OAT1也传输尿毒症毒素来自膳食蛋白质如硫酸吲哚酚,扮演着一个重要的角色在肾损害的进展。因此,OAT1不仅在药物的运输很重要,而且在肾脏疾病的进展。

自从OAT1肾活跃分泌和药物之间的相互作用是至关重要的,调制OAT1-mediated药物运输的可能性应该认真关注。逐渐增加的流行的CHM出现更多关于药品安全的警告。一旦CHM显著影响OAT1-mediated肾脏分泌活跃,尤其是当CHM coadministered nonherbal药物,herb-drug交互可能会导致严重的副作用。

不同种族和文化,亚洲人更容易遇到中国草药。这项研究集中在herb-drug与常用的交互chm在台湾,中国和日本,由于chm用于疾病治疗和大量补充日常饮食。本研究的目的是评估临床常用的调制效应CHM OAT1-mediated运输。首先,hOAT1-overexpressing细胞株用于屏幕CHM,然后是有效候选人重申他们是否表现出了同样的模式在活的有机体内。最后,本研究分析了这些chm如何影响OAT1-mediated运输;功能调制,表现的规定,或两者兼而有之。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

控制和稳定表达Madin-Darby hOAT1犬肾脏II型细胞(MDCK / hOAT1)请提供从普里查德博士的实验室(美国国家环境健康科学研究所)。控制第二MDCK细胞生长在鹰的最低基本培养基(美国Sigma-Aldrich EMEM)补充1毫米丙酮酸钠和10%胎牛血清(美国HyClone);MDCK细胞/ hOAT1生长在同一EMEM中额外的200μg / mL Geneticin(美国表达载体)。而在文化、细胞生长和维持在湿润的气氛中含有5%的有限公司₂在37°C。细胞分裂1/10每4到5天。

2.2。中草药Formulae-Plant材料:来源、采样、鉴定、苛捐杂税收购,和生化的分析

CHM公式都从太阳购买十GMP制药公司。每个工厂的CHM公式从不同的地区在中国收集。每个植物被保存为凭证标本的标本,把布里研究所(砖、台北、台湾)。身份验证的植物被发现使用显微镜和高效液相色谱法(HPLC)。所有植物部分分类根据药典的中华人民共和国37]。

生草本植物被煎煮提取使用热蒸馏水和集中使用即时喷雾干燥和低温吸尘。验证进行了薄层色谱法和高效液相色谱法作为化学加工质量控制单药草和CHM公式,分别。

2.3。提取的中草药配方在体外研究

临床常用的CHM公式和单一的药草被选为候选人在体外筛查试验(38]。CHM公式都是购买从一个GMP制药公司(Sun十制药有限公司、台湾)。所有的CHM公式是可用的市场产品,经常在台湾医院规定。提取CHM公式准备的方式来模拟生理条件下当一个CHM公式被口服吸收生物;CHM公式第一次暴露在极酸性条件在胃里,然后流入十二指肠中性条件。适量的CHM公式加权,准备在2 g / L 5毫克/毫升生理盐水(pH值1.2,调整1 N HCl)在37°C。首次ultrasonicated暂停5分钟在37°C和调整pH值6.8和1 N氢氧化钠。另一个5分钟超声破碎法在37°C,然后暂停离心10分钟。最后,上层清液过滤是一个0.22μm过滤,滤液进一步稀释到500μ与汉克的缓冲盐溶液g / mL(哈佛商学院;美国Sigma-Aldrich)。

2.4。功能分析hOAT1

在第二MDCK细胞转染hOAT1表达稳定行成立于普里查德博士的实验室。顶端的表达hOAT1和低背景吸收的有机阴离子允许固体板到屏幕上的细胞生长的物质参与hOAT1-mediated运输(39,40]。PAH的过程吸收研究其次是Zalups和Ahmad研究少量修改(41,42]。首先,5×10⁵MDCK细胞/ hOAT1被播种在24-well盘子总量的2毫升,和媒介改变了在第一个24小时。培养48小时后,每一个好与1毫升的37°C preincubated hbs补充10毫米4 - (2-hydroxyethyl) piperazine-1-ethanesulfonic酸(玫瑰,pH值7.4)连续三5分钟时间。缓冲然后吸气,350μ包含5 L(前面提到的哈佛商学院μ米(³美国H] pah (PerkinElmer)被添加到每个在200年的存在与否μ丙磺舒。吸收期(³H)多环芳烃在37°C孵化器1小时。反应就熄了清洗每个与1毫升的“阻止缓冲区”,这是由冰冷的哈佛商学院包含10毫米玫瑰(pH值7.4)。确定的细胞吸收³H] pah, 1毫升1 N氢氧化钠添加到每个lyze细胞。与轨道板动摇了瓶隔夜(至少12小时)。随后,700μL细胞溶解产物转移到一个计数管形瓶和中和同等体积的1 N盐酸。细胞溶解产物随后添加15毫升Opti-Fluor(美国PerkinElmer)。放射性测量了液体闪烁计数器(2100 tr Tricarb,帕卡德,美国)。总蛋白的每个是由布拉德福德的方法根据蛋白质的指令分析工具(美国BioRad)。

2.5。功能性hOAT1 CHM调制的影响

一个典型OAT1衬底,³H] pah,管理/ hOAT1 MDCK细胞的存在与否CHM提取物。常用的30个CHM公式和33个CHM单一草药被选作在体外研究。(³控制([H] pah吸收速度差异³H] pah治疗)和CHM组织测量评估如果CHM提取物调节hOAT1-mediated [³H)多环芳烃的吸收。首先,5×10⁵在24-well板/ hOAT1 MDCK细胞培养条件如上所述。第二,350年μ包含50 L(前面提到的哈佛商学院μg / mL CHM提取和2μ米(³H)多环芳烃被添加到每个好1分钟暴露在37°C。最终暴露,每个被冲洗1毫升阻止缓冲区。随后程序测定细胞内的³H)多环芳烃和总蛋白与多环芳烃的吸收都是相同的实验如上所述。

2.6。对MDCK细胞毒性的化学加工和MDCK / hOAT1细胞

控制MDCK二世和MDCK细胞/ hOAT1被播种在96孔板的密度5×10⁴细胞每口井。细胞培养48小时中茶点在第一个24小时。治疗前CHM提取的细胞,每个被洗两次,37°C哈佛商学院。二百年μL CHM提取在不同浓度(5,50和500μg / mL)被添加到每个好,培养48小时。与化学加工处理后提取,每个与37°C hbs洗一次。100μL(0.5毫克/毫升噻唑基溴化四唑蓝(MTT)添加到每个孵化1 h。最后,细胞被lyzed 100μL DMSO 15分钟,吸光度测量在570 nm ELISA阅读器(Witec AG)、德语)。

2.7。动物

动物研究机构批准的动物保健和使用委员会国防医学中心(台北,台湾)。雄性Wistar鼠体重350 - 400克(8 - 10周大)被用于这项研究。所有的动物都被安置在一个标准的动物维护设施至少1周与实验前应免费的食物和水。每个CHM准备10毫升milli-Q水人类×的推荐剂量/重量重的重量。口服填喂法有效的CHM配方的去离子水(从-70年的10.5毫克,请参考补充1,网上doi: 10.1155 / 2012/967182)进行了7天。直接填喂法草药配方动物的原因是目前研究真正的生理条件下,草药的是生物体所吸收。对照组的老鼠去离子水。老鼠在学习小组有1毫升CHM配方和注射器是与另一个1毫升milli-Q水清洗,确保所有的配方管理。麻醉进行第八天戊巴比妥钠腹腔注射(ip)(50毫克/公斤)。动物被放在thermo-regulated加热毯在整个研究保持体温。 PE-50 catheters were rinsed with normal saline (NS) and 50 IU heparin in NS for femoral vein and femoral artery cannulation, respectively. After cannulating of both the femoral vein and femoral artery, a priming dose of PAH/inulin (30 mg/kg) in NS was injected through the venous catheter; immediately, a continuous intravenous infusion of PAH/inulin (12 mg/mL) was given at a rate of 1 mL/100 g body weight to reach steady-state by an infusion pump (Harvard Apparatus, USA). Blood samples were taken from femoral artery at predose, 30, 45, and 60 min postdose. Plasma was obtained from centrifugation of blood samples at 13,000 rpm for 10 min. After blood sample collection, the animals were sacrificed with potassium chloride and left kidneys being excised and immediately stored in liquid nitrogen. Concentrations of PAH and inulin in plasma samples were then determined by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).

2.8。示例鼠肾血流动力学的分析和估计

多环芳烃的分析和在大鼠血浆菊粉质/女士是我们实验室中开发和验证43]。提出了稳态模型没有收集尿液样本(44]。间隙(CL_x)可以由以下方程:CL_x=我_x×我_Y/ PL,是药物的浓度(PAH和菊粉)在输液,我呢_Y注入率,和PL血浆中药物的浓度(45]。因为菊粉和多环芳烃是由肾脏重吸收,消除重吸收在肾血流动力学的影响可以忽略46- - - - - -48]。多环芳烃净分泌(结关),肾血流动力学的最重要参数,相关OAT1在这项研究中,可以通过以下方程:估计= CL_多环芳烃－CL_在。

2.9。信使rna隔离和互补脱氧核糖核酸的合成

总RNA分离试剂盒试剂(美国英杰公司)从粉鼠肾组织根据制造商的指示。总RNA提取悬浮在DEPC-treated水。RNA浓度和纯度估计通过测量光密度260/280 nm。的质量和完整性RNA被琼脂糖凝胶电泳分析,样本存储在−80°C到使用。为了避免基因组DNA污染,每个样本DNase对待我(美国英杰公司)根据指导手册。

使用上标第一链合成第一链cDNA合成装备(美国英杰公司)根据制造商的指示。逆转录(RT)是在42°C包含0.2 50分钟μ0.5 g的RNAμ50克的低聚糖(dT) 12 - 18, U(上标2核糖核酸酶H^{- - - - - -}RT,随后,RT被孵化灭活在70°C,持续15分钟,接着用核糖核酸酶H在37°C为20分钟。互补脱氧核糖核酸是储存在−PCR前20°C。

2.10。反向Transcriptase-Polymerase连锁反应(rt - pcr)

使用DNA进行PCR引擎珀尔帖热循环(BioRad,促进城市、钙、美国)。PCR扩增了33周期和使用的反应条件的初始变性2分钟在94°C,变性15 s在94°C,退火30年代在57°C,伸长为1分钟68°C。rOAT1引物的5′-TGGCATAATACCGAAGAGCC-3′(向前)和3′-TGCTGCTGTTGATTCTGCTT-3′(反向),导致340 -英国石油产品。GAPDH,引物5′-CGGCAACTTCAACGGCACAGTCA-3′(向前)和3′-GGTTTCTCCAGGCGGCATGTCA-5′(反向),导致560 -英国石油产品。GAPDH是用作控制输入的RNA的变化。相对数量计算的比率gene-specific和适当的GAPDH表达式。rt - pcr产品解决在1%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色和可视化在紫外线照射下。rt - pcr产品生成与引物rOAT1被测序检测(MB使命生物科技、台湾)和被发现代表各自的mrna的预测部分。

2.11。统计分析

统计分析是由单向方差分析(方差分析)。值表示为平均值±标准错误(SE)。P值小于0.05被认为是重要的。所有分析软件使用社会科学统计软件包(SPSS公司SPSS 12日,2003年,美国)。

3所示。结果

3.1。吸收多环芳烃

的吸收速度³H] pah MDCK / hOAT1和控制二MDCK细胞OAT1抑制剂的存在与否,丙磺舒,评估。对MDCK细胞/ hOAT1率pmol /毫克蛋白/分钟的治疗与³H] pah,而添加丙磺舒大大减少利率0.54±0.01 pmol /毫克蛋白/分钟。另一方面,控制第二MDCK细胞只显示的速度pmol /毫克蛋白/分钟,几乎是同样的甚至在丙磺舒的存在。结果控制第二MDCK细胞和MDCK细胞/ hOAT1类似Zalups Ahmad研究[41,42),证明hOAT1在等离子体膜的功能,在我们实验室实验的可重复性。

确定一个合适的吸收段(³H)多环芳烃在接下来的CHM筛选实验,一个依赖于时间的动能(³H] pah MDCK / hOAT1吸收。结果表明,吸收速度的³H] pah 1分钟(图之前保持线性1)。因此,吸收的速度(³H)多环芳烃在MDCK 1分钟/ hOAT1被定义为最初的吸收速率。在hOAT1函数调制的实验CHM, (³H)多环芳烃和化学加工提取的混合物是管理/ hOAT1 MDCK细胞和暴露了1分钟。

一个过度的³H] pah吸收/ hOAT1 MDCK细胞中观察到。现象也报道和解释为陆et al。24)和Ueo et al。49),曾经hOAT1转染海拉细胞和HEK细胞,分别。超调现象符合exchange-mediated继发性主动转运的表面上(可能直接梯度胞质交换伙伴α酮戊二酸)耗尽在吸收实验,因为大量的外部交流伙伴。

3.2。化学加工在体外筛选

评估的可能性OAT1-mediated herb-drug交互在体外,常用的提取30 CHM公式和33单草药被测试来评估临床使用CHM配方是否会影响hOAT1-mediated [³H)多环芳烃的吸收。CHM公式和化学加工单一草药的结果总结在表中1和2,分别。有趣的是,几乎所有的测试CHM公式hOAT1功能有明显抑制作用,而没有观察到hOAT1功能的增强。七的CHM formulae-Gui智富凌Wan(广州),刘伟Ti黄琬(LW),贾魏萧姚圣(CW),气楚Ti欢Wan (CC),池玉兰阿宝Ti黄琬(CP),新范易经唐(你好),和肺Tan谢长廷菅直人唐(LT)则在50%显著抑制hOAT1吸收能力。CHM单一的草药,一半显示显著抑制hOAT1功能,但大多数是抑制约20 - 30%。只有黄秦(总部)对hOAT1功能抑制约50%。也,两个CHM单一herbs-Jie耿和Gan曹)发现略有增强hOAT1-mediated [³H)多环芳烃的吸收。此外,七个CHM公式和两个CHM单一草药最有效的hOAT1抑制剂hOAT1功能抑制(图上显示浓度的方式2)。总体看来,CHM单一草药不是很有效的功能抑制hOAT1as CHM公式。

3.3。CHM提取物对MDCK细胞毒性/ hOAT1和控制二MDCK细胞

评估选定的CHM是否有潜在hOAT1-induced肾毒性,不同浓度(5,50和500μg / mL)的CHM提取孵化MDCK / hOAT1和控制第二MDCK细胞和细胞毒性的CHM提取物对两种类型的细胞被评估。结果表明,CHM公式是无毒的MDCK / hOAT1细胞,而似乎CHM公式控制第二MDCK细胞有害。比较/ hOAT1 MDCK细胞,LW为500μg / mL和连续波显示显著减少的细胞生存能力控制第二MDCK细胞(图3)。也观察到类似的结果CHM单5点草药和50μg / mL;/ hOAT1 MDCK细胞的细胞异常高于控制第二MDCK细胞当管理与黄芩黄(总部)和留置权(HL)。然而,总部和HL在高浓度(500μg / mL)提出了完全相反的结果之间MDCK / hOAT1和控制二MDCK细胞。在总部的实验中,控制第二MDCK细胞保持大约80%的细胞生存能力与高浓度的总部当治疗细胞;相反,MDCK细胞/ hOAT1显示dramatica减少细胞生存能力的存在相同浓度的总部。类似的现象是一个HL高浓度实验中观察到,而这是控制第二MDCK细胞被HL但不是MDCK细胞/ hOAT1(图3)。总部设在MDCK细胞毒性/ hOAT1细胞在100年可以逆转μ丙磺舒的M;然而,控制第二MDCK细胞不可逆的HL丙磺舒的同等待遇(图4)。

3.4。CHM对大鼠肾血流动力学的影响

检查是否在体外hOAT1抑制剂也影响肾脏分泌在活的有机体内,积极控制(顺铂、ip 5毫克/公斤)和有效hOAT1抑制剂(广州、LW CW、CC、CP,嗨,LT,总部,和HL)管理Wistar鼠为7天,和肾血流动力学参数进行了评估。研究结果总结在表3。与对照组相比,老鼠注射顺铂表现出显著减少CL_多环芳烃,CL_在,。另一方面,CL_多环芳烃广州和连续波有明显减少,这可能是减少造成的。同时,嗨,LT显示显著减少CL_在,而氯_多环芳烃嗨和LT没有影响。LW、CP和总部加强被发现;然而,他们并没有显示出统计学意义。广州高剂量的实验(HD),礼仪存在剂量依赖的相关性观察CL_多环芳烃和,表明高剂量的CHM应该调节肾小管分泌的能力而非肾小球滤过。

3.5。规定由CHM rOAT1 mRNA的表达

取得直接证据有关的角色OAT1肾功能被CHM, rOAT1 mRNA的表达是评估。肾脏的对照组,顺铂,广州,广州高清,LW(负控制)和连续波被切除,rOAT1 mRNA评估(图5)。控制相比,顺铂显示显著减少rOAT1 mRNA的表达。广州和广州高清的差别不仅是重要的对这些rOAT1 mRNA表达,但也表现出剂量依赖性的方式。相反,rOAT1表达LW和连续波保持稳定。

4所示。讨论

OAT1生理学的作用[50- - - - - -52),药物诱导肾毒性(34,35,53,54),和药物之间的相互作用已经深入研究。然而,大多数这些研究关注OAT1和合成药物之间的关系,而很少关注OAT1之间和草药。提出研究的贡献是,我们是第一个评价的人的影响,大量的临床规定CHM配方OAT1-mediated交通,通过在体外检查,在活的有机体内血流动力学监测,OAT1 mRNA表达鼠肾脏。从我们的结果应该是有用的信息估计潜在herb-drug交互。

提出了研究植物化学物质很少是解决因为CHM配方中植物化学物质的组合和相互作用分析太复杂。例如,组氨酸和组胺在富凌(Poriae可可)显示激活和抑制组胺H1受体,分别为(7]。一个草可能包含几个植物化学物质而一个公式包含许多其他单一的草药。的协同作用和拮抗植物化学物质在化学加工单一草药,和CHM CHM公式内单一的草药,很难评估哪一个在herb-drug交互中扮演主要的角色。因此,本研究旨在评估战略CHM为患者最常用和最无所不在地使用的每一个人。CHM配方都是购买从一个良好生产规范(GMP)制药生产排除偏差造成资源的多样性,质量,和生成过程。除此之外,这些CHM配方提取和加工的生产形成粒状粉末,这样病人就可以直接把这些CHM配方没有进一步的处理过程。也就是,我们也能够提取这些CHM配方通过模拟胃肠道的状况,对于这些CHM配方在患者接受相同的途径。

在筛选功能的调制效应CHM hOAT1,吸收速度的³H] pah评估Zalups完全相同的程序和艾哈迈德(41,42之前报道。

的实验中在体外筛选,25 30 CHM公式和16的33个CHM单一草本植物被发现显著抑制hOAT1-mediated运输。我们考虑到很多CHM配方显示他们的意义可能是由于小的标准型每组中的错误。LW,因此,我们只有选择广州连续波,CC, CP,嗨,LT,总部,霍奇金淋巴瘤(CHM公式表现出超过50%抑制hOAT1-mediated传输),和总部,霍奇金淋巴瘤(两个最有效的CHM单一草药,抑制hOAT1-mediated传输)到以下浓度和细胞毒性实验。

如图2所示,所有的CHM配方浓度展出的举止,和集成电路₅₀从18.67到44.24吗μ除了霍奇金淋巴瘤(339.26 g / mLμg / mL)。另一方面,一个有趣的观察模式是与最近OAT1介导肾毒性的假说;基底的基质从血液进入肾脏近端小管细胞OAT1引起胞内积累的基质,并进一步诱发管损伤(33- - - - - -35,55]。这些选中的CHM配方应通过OAT1-mediated运输、细胞毒性细胞/ hOAT1 MDCK细胞的生存能力将大大低于第二MDCK细胞的控制。然而,我们观察到一个完全相反的现象。即MDCK细胞生存能力/ hOAT1细胞通常高于控制第二MDCK细胞(除了总部在500μg / mL)。同时,CHM-formulations-induced细胞毒性控制第二MDCK细胞浓度,表明可能有伤害控制第二MDCK细胞非特异性因素。这意味着它不是与OAT1-mediated运输有关。它是非常有趣的,在高浓度(500μg / mL),总部和HL显示严重毒性MDCK细胞/ hOAT1和控制二MDCK细胞,分别。细胞毒性的总部可以逆转hOAT1抑制剂,丙磺舒,而HL不能。高et al。56)发现,黄芩(总部)提取不同肺癌细胞的细胞毒性,和细胞毒性黄芩可能是因为化学计量相结合的三种活性成分,黄芩苷,黄芩甙元,汉黄芩素。在这种情况下,总部提取500μg / mL显示控制MDCK细胞毒性二世在MDCK细胞,但更加剧/ hOAT1细胞;因此,我们假设在总部活性成分提取的hOAT1上述假设可能导致毒性作用。另一方面,很难弄清楚为什么HL提取500μg / mL诱发严重的细胞毒性控制第二MDCK细胞时无毒的MDCK / hOAT1细胞。虽然我们不知道HL-induced细胞毒性的可能机制控制第二MDCK细胞,值得注意的是,HL在身体可能会导致高水平OAT1-independent肾毒性,自第二MDCK细胞肾远端肾小管上皮细胞,OAT1没有表达。总的来说,在体外细胞毒性实验提供信息,大多数CHM配方研究中测试通过hOAT1-mediated运输不会导致细胞毒性,除了总部,享年500岁μ克/毫升。然而,结果不能说明这些CHM配方nephrotoxicity-free,只远端肾小管细胞进行了测试在这个研究。的确,有人建议使用不同的细胞系模型微分相应的细胞类型伤害的脆弱的感情在活的有机体内(57,58]。

腹腔内注射顺铂,常用的模型药物诱发大鼠肾毒性(59- - - - - -61年),是作为积极的控制,以确保整个动物实验系统的可行性和我们的新质/ MS分析方法。结果很满意,是否CL的显著减少_多环芳烃,CL_在,或观察(表3)。顺铂抑制rOAT1的表达在肾脏(图5没有有效的差别),但是对这些丹et al。62年)和Morisaki et al。63年)报道。其原因可能是丹等人,Morisaki等人使用高剂量顺铂(10毫克/公斤)比我们(5毫克/公斤)的注入。另一方面,广州是观察到显著抑制CL_多环芳烃,rOAT1 mRNA的表达,表明肾功能降低的广州,也许是因为不仅功能抑制OAT1 OAT1表达的差别,也对这些肾脏。也有可能CHM准备只调节OAT1-mediated运输没有调节OAT1的表达。在连续波的情况下,在体外数据显示57%的抑制hOAT1-mediated运输(表1),在活的有机体内在CL数据显示显著减少_多环芳烃和(表3),而rOAT1 mRNA的表达仍然仍然与对照组相比(图5)。还有CHM准备,呈现不同的结果在体外和在活的有机体内。例如,LW, CP,嗨,和总部是被发现的情况下有效地抑制hOAT1在体外略,而尽管nonstatistical显著增强在活的有机体内。我们也选择LW执行rt - pcr的实验测试系统误差的存在(rOAT1 mRNA的表达明显下降或调节保持稳定),发现rOAT1 mRNA的表达没有明显的监管以及肾血流动力学。

肾活跃分泌包括基底transporters-mediated吸收和顶端流出。因此,调制在这些转运蛋白的化学加工使它复杂机制的阐明herb-drug交互在活的有机体内。先前的研究已经报道,肾排泄的多环芳烃与基底OAT1而不是另一个重要的表达,OAT3,功能以及OAT1 [64年]。在这OAT1集中研究,我们选择了多环芳烃作为在活的有机体内模型底物,这意味着我们可以忽视的影响CHM OAT3阐明肾血流动力学参数在活的有机体内,但它不足以排除顶端流出转运蛋白的影响。据报道,多药耐药性蛋白4 (MRP4)位于细胞的顶面是一种新型的多环芳烃流出运输车(65年]。结果,研究调制的MRP4 CHM应该值得明确潜在的机制OAT1-mediated herb-drug交互在肾脏。

5。结论

总之,从在体外来在活的有机体内,我们开始一步一步缩小CHM配方,可能诱发OAT1-related herb-drug交互。在这种交互,广州和连续波可能减少通过抑制肾脏分泌活跃OAT1-mediated运输、OAT1的表达,或两者兼而有之。研究方法应由CHM有用的药物转运体在评估调制;这项研究的结果应该有助于CHM安全数据库的信息。

作者的贡献

c c。林和H.-Y。粉丝的贡献同样这项工作。

确认

本研究支持的部分批准号98 - 70成新综合医院和部分批准号100 - ec - 17 - 20 - s1 - 028从经济部。作者感谢Hsan-Jan日圆博士他的专家技术assistnce肾脏RNA研究。

补充材料