文摘

确定有效的草药治疗肥胖,我们筛选了115草药提取物抑制猪胰脂肪酶(triacylg-ycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3)活动在体外。提取的测试,Cudrania tricuspidata叶子最明显表现出对脂肪酶活性的抑制作用 值为9.91μ克/毫升。Antilipid吸收的影响c . tricuspidata叶子检查后在大鼠口服脂质乳剂含有50或250毫克c . tricuspidata/公斤体重。血浆三酰甘油水平2 h后口服乳剂的包含c . tricuspidata治疗组相比均有显著降低( )。这些结果表明,c . tricuspidata叶子可能会是有用的治疗肥胖。

1。介绍

肥胖是一个重要的危险因素增加心血管疾病和糖尿病的发病率和死亡率;然而,它也涉及许多其他疾病包括癌症、肝脏和肾脏疾病,睡眠呼吸暂停,和抑郁1]。最近的全国健康和营养调查显示,68.0%的研究被认为是超重(基础代谢率(BMI)≥25)和33.8%的人肥胖(体重指数≥30)(2]。膳食脂肪吸收的抑制是一个逻辑的目标管理肥胖,和胰脂肪酶是一种关键酶参与甘油三酯在小肠吸收。由胰腺分泌和甘油三酯水解成甘油和游离脂肪酸。因此,消化脂酶抑制剂建议函数作为典型代理(3]。奥利司他,可以发现在全球市场,抑制胃肠道脂肪酶的作用,从而减少膳食脂肪的吸收。然而,它有严重的副作用,如脂肪痢,胃疼,月经不规则,和头痛4]。最近,有研究寻找新的脂肪酶抑制剂副作用最小的自然资源。在一系列的调查,评估潜在的脂肪酶抑制剂来源于植物,研究人员表明,某些植物提取物显著抑制猪胰脂肪酶在体外(5,6]。在这项研究中,自然典型产品的初步评估,我们测试了115草药提取物抑制胰脂肪酶活性在体外并验证了脂质吸收的抑制c . tricuspidata叶子在活的有机体内。的成果c . tricuspidata抑制发展的过敏性皮肤炎动物模型和它的根具有免疫调节和抗氧化活动在体外(7,8]。这些结果表明,c . tricuspidata叶提取物对脂肪酶和膳食脂肪absorptionactivities和可能是有用的治疗肥胖和代谢疾病。

2。材料和方法

2.1。植物材料和化学品

草药收集从韩国从2005年9月到2009年7月,被金教授,生命科学分工,Gachon大学,韩国。样本存放标本的糖尿病并发症的研究团队,东方医学研究所。猪胰脂肪酶(II型),奥利司他,p-nitrophenyl丁酸买来Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。所有试剂都是生化的年级。

2.2。动物

雄性Wistar鼠(6周的年龄)从Koatech购买(Kyungkido、韩国)和安置1星期12 h / 12 h光/暗周期在一个温度和湿度的房间里。动物有免费的食物和水。适应这些条件后1周,健康的动物被用于研究。东方医学研究所动物研究委员会批准了实验性的协议。

2.3。准备草药提取物

和地面干草药提取(200克)与1 L浸渍EtOH 3 * 80%。提取浓缩,干燥在真空内在40°C。集中提取存储在−20°C进行进一步的研究。提取溶解在二甲亚砜浓度的总量(3%)不影响酶活性。

2.4。猪胰脂肪酶抑制测量活动

抑制胰脂肪酶的草药的能力使用之前报道的方法测量了金et al。9,10]。简单地说,一种酶缓冲准备的6μL猪胰脂肪酶溶液(Sigma-Aldrich)缓冲区包含10毫米拖把(morpholinepropanesulphonic酸)和1毫米EDTA, pH值6.8,到169年μL三羟甲基氨基甲烷缓冲液(CaCl Tris-HC1 100毫米和5毫米2,pH值7.0)。然后,20μL的草药提取物在测试浓度(0,0.313,0.625,1.25,2.5,5,7.5,10日,50和100μ克/毫升)或奥利司他(瑞士巴塞尔罗氏公司)与175年涨跌互现μL酶缓冲和孵化15分钟与5 37°CμL底物溶液(10毫米p-NPB (p-nitrophenylbutyrate)二甲基甲酰胺);酶促反应被允许继续在15分钟37°C。通过测量的水解脂肪酶活性测定p-NPB来p硝基酚在405 nm使用ELISA读者(BIO-TEK、协同HT Winooski, VT,美国)。抑制脂肪酶活性表达为百分比减少OD当猪胰脂肪酶孵化与试验材料。脂肪酶抑制(%)按下列公式计算: 在哪里 活动没有抑制剂, 消极的控制没有抑制剂, 是活动和抑制剂, 消极的控制与抑制剂。结果表示为平均 。

2.5。估计血浆三酰甘油口服后在大鼠脂质乳剂

血浆三酰甘油水平被金正日使用之前报道的方法估计et al。11]。老鼠(7周的年龄、体重 g),禁食过夜的口头管理3毫升玉米油(6毫升)组成的脂质乳剂,胆酸(80毫克),cholesteryloleate (2 g)和盐(6毫升)有或没有c . tricuspidata树叶(50或250毫克的剂量c . tricuspidata叶子/公斤体重)。血液从尾静脉(0,1,2,3,4 h后口服脂质乳剂和离心机在5500 g×5分钟获得等离子体。三酰甘油水平测定使用清洁技术TS-s工具包(ASANPHARM,首尔,韩国)。

2.6。统计分析

所有的实验都重复三次,和代表性的数据显示。数据表示为均值±s.d组之间的差异进行了分析使用一个单向方差分析其次是图基多重比较检验(棱镜软件,图形垫、钙、美国)。的值 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果与讨论

3.1。胰脂肪酶活性的草药提取物

目前,肥胖被认为是一个全球性的流行,许多药物研究和开发治疗这种情况。然而,目前只有1个drug-orlistat-globally批准超重患者的长期治疗后西布曲明被撤回2010年1月从欧洲市场12,13]。尽管这种化合物强烈抑制胰脂肪酶的活动,这是一个重要的酶与脂肪消化,奥利司他可能导致严重的胃肠道不良反应,神经、内分泌、肾系统和干扰许多药物和维生素的吸收和有效性(4,14]。因此,研究一种安全有效的天然抑制剂胰脂肪酶的主要目标发展的新的药物来治疗肥胖15]。其中,从天然来源中提取分离等花楸属commixta,桑属bombycis,人参,银杏叶已报告作为潜在药物抑制胰脂肪酶作用[16- - - - - -19]。我们以前的研究也发现一些天然产物作为新胰脂肪酶抑制剂(11,18,19]。在这项研究中,115年草药提取物是从选定的植物部分准备和测试在不同浓度胰脂肪酶抑制剂。脂肪酶的抑制效应的提取比例(%)和IC表示50值(表1)。十八提取物有集成电路50值小于50μg / mL,这些提取物(即三个样品。,整个一枝黄花serotina植物的树枝和树叶宏碁mono的叶子c . tricuspidata)集成电路50值小于10μ克/毫升。值得注意的是,c . tricuspidata叶子展出一个集成电路50值为9.91μ克/毫升(图1)。

表1
脂肪酶抑制活动从草药提取物。
(一)
(一)
(b)
(b)
图1
的抑制作用Cudrania tricuspidata叶提取物对猪胰脂肪酶。(一)在不同浓度的猪胰脂肪酶活性c . tricuspidata叶子。(b)使用奥利司他是一个积极的控制。数据均值±道。( )。
3.2。的抑制作用c . tricuspidata在脂类分解在活的有机体内

接下来,我们关注c . tricuspidata在脂类分解在活的有机体内。c . tricuspidata已经作为一种重要的民间药物用于治疗癌症的韩国,也被用作传统医学用于治疗高血压、神经炎,炎症在亚洲20.- - - - - -22]。评估的antilipolytic效应c . tricuspidata叶子在活的有机体内口服后,我们分析了血浆三酰甘油水平脂质乳剂有或没有c . tricuspidata叶子老鼠。图2口服后血浆三酰甘油水平显示脂质乳剂有或没有c . tricuspidata作为时间的函数。口服后,低浓度c . tricuspidata(50毫克/公斤体重)减少血浆三酰甘油水平和高浓度的c . tricuspidata(250毫克/公斤体重)延迟明显脂质吸收;然而,这些影响比积极的控制较弱,奥利司他。


图2
的抑制作用Cudrania tricuspidata在大鼠血浆三酰甘油水平开。血浆三酰甘油水平,当时由星号标记,控制和之间的显著不同c . tricuspidata(250毫克/公斤)组( )。奥利司他(脂肪酶抑制剂)作为一个积极的控制( 与控制)。

c . tricuspidata富含氧杂蒽酮和黄酮类化合物,包括cudraflavone C [23]。最近的一项研究报道,cudraflavone C面包果nitidus抑制胰脂肪酶活性(IC50= μ米)(24]。因此,cudraflavone C可能是一个潜在的活性物质对预防和治疗肥胖。

4所示。结论

在这篇文章中,我们筛选了115草药提取物抑制猪胰脂肪酶识别有效的草药来治疗肥胖。c . tricuspidata叶子显示最明显影响胰脂肪酶活性,能够抑制膳食脂肪吸收在活的有机体内。直到现在,c . tricuspidata叶子提取物没有报道absorptionactivities脂肪酶和膳食脂肪。因此,值得进一步调查这些提取的典型药物的潜在药理效应和应该尝试描述phytoactive化合物用作将来更安全的药物。

作者的贡献

y y s金姆和李的贡献同样这项工作。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究受到了赠款(K11040和K12040)从东方医学研究所(KIOM)。