文摘

苦瓜被发现具有抗癌活性,除了著名的治疗功能。我们已经证明了叶中提取的苦瓜(MCME)凋亡在几个人类癌症细胞通过半胱天冬酶-和mitochondria-dependent通路。在这项研究中,一个不同的易感性MCME被发现在人类不同转移性肺腺癌CL1细胞能力,导致细胞生存能力和侵袭性的显著差异之间MCME-treated CL1-0和CL1-5细胞。MCME发现移植Wnt-2的表达和影响CL1的迁徙和入侵能力细胞通过抑制MMP-2 MMP-9酶的活动。我们建议MCME介导抑制对迁移CL1细胞减少Src和降低FAK的表达和激活下游的表达一种蛋白激酶,β连环蛋白和基质金属蛋白酶。

1。介绍

肺癌是最常见的癌症,已经成为一些国家第一大癌症死因。主要的健康威胁通过肺癌转移一个多步过程(1]。在肿瘤进展,肿瘤细胞能逃脱控制他们的周围的微环境,入侵并穿透淋巴或血液的血管壁上,并最终体内迁移到遥远的网站(2]。关键特征转移的癌细胞获得包括能够穿透基底膜和降解细胞外基质(ECM)是介导主要由基质金属蛋白酶(MMPs)。粘着斑激酶(FAK),胞质激酶,参与ECM / integrin-mediated信号通路,在各种癌症,建议调节肿瘤细胞的迁移和入侵3,4]。FAK定位焦点联系网站和有关细胞生存的一代,细胞周期进展,和细胞活性,部分通过招聘Src和其他适配器蛋白质成焦contact-associated信号复杂(5]。Src变得激活响应信息粘附和激活在大多数侵袭性癌症(6]。需要激活,Src磷酸化FAK的细胞粘附和细胞传播(6,7]。激活功能的相互依赖的蛋白激酶级联,包括Src和FAK,一直在建议中发挥的关键作用细胞迁移和入侵8]。发生转移的肺癌被报道通过基质金属蛋白酶FAK的规定(1,9]。越来越多的证据表明,Wnt信号通路参与了肿瘤发展和/或进展(10]。Wnt-2超表达被认为是参与人类肺部致癌作用和抑制Wnt-2-mediated信号诱发细胞程序性死亡在非小细胞肺癌细胞11]。规范化Wnt通路调节糖原合成酶激酶3β(GSK-3β),β连环蛋白活性调控细胞定位通过一连串的事件,导致核本地化β连环蛋白和激活转录的转录因子相互作用[12,13]。

肿瘤细胞的浸润和转移特征的高度恶性肿瘤,临床疗效不佳,被认为是为癌症治疗最困难的问题。不像在非小细胞肺癌,广泛转移在肺腺癌发生相对较晚14]。临床更有效的治疗肺腺癌是禁止尽早侵袭性的发展。因此,互补策略可能需要与非手术治疗来预防肺癌进展和改善病人的存活率。

苦瓜(MC),也被称为苦瓜,在热带地区广泛用作一种蔬菜。大量的在体外和在活的有机体内研究发现,MC具有治疗糖尿病药(15),堕胎药(16,打虫药17),和避孕18)的影响。此外,一些研究已经表明,叶或水果提取物的MC对各种癌症起到抗肿瘤的作用。提取的MC可以抑制人类乳腺癌细胞的增殖诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡19]。叶提取物抑制P-glycoprotein-mediated药物流出,导致增加化疗药物的疗效在人类颈椎KB-V1癌细胞耐多药20.]。他们也有报告称,阻止的分泌基质金属蛋白酶(MMPs)和抑制细胞迁移的大鼠前列腺癌细胞系(21]。生物活性的性质MC对许多癌症被证明是由化合物有抗癌潜力。在MC已记录的植物化学物质对癌细胞的细胞毒性包括蛋白质,常用药用,其苷(22]。Ribosome-inactivated蛋白质和化学模拟,MAP30 MC已报告具有细胞毒性,抑制转移的高转移性人乳腺癌mda - mb - 231细胞和被认为是潜在的治疗药物对乳腺癌癌(23,24]。在先前的研究中,我们证明了MC的甲醇提取物诱导细胞凋亡(MCME)对人肺腺癌CL1-0细胞通过细胞凋亡蛋白酶mitochondria-dependent通路,从而改变的antiproapoptotic bcl - 2和proapoptotic Bax蛋白包括(25]。我们已经测试了MC提取的细胞毒性的一系列人类肺腺癌CL1细胞,发现MCME CL1细胞的敏感性取决于他们的入侵能力。这里,MCME对CL1细胞的影响不仅是细胞生存能力评估,而且迁移和入侵,为了描述MCME-reduced转移的机制通过比较CL1-0和CL1-5肺癌细胞,分别用不同的入侵能力。

2。材料和方法

2.1。化学品和抗体

DMEM培养基,rpmi - 1640中,3 - (4 5-Dimethyl-thiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT) Trypsin-EDTA、青霉素、链霉素、蛋白酶抑制剂、二甲亚砜(DMSO)、EDTA、明胶、水晶紫、SDS,特里同x - 100,三,Tween-20 CaCl₂氯化钠,南₃、醋酸、甲醇和本研究中使用的所有其他杂项化学物质从西格玛化工有限公司购买(美国密苏里州圣Loius)。抗体对MMP-2 (GTX104577) MMP-9 (GTX100458), Src (GTX63364) phospho-Src (GTX50210), FAK (GTX100764) phospho-FAK (GTX24803), PI3K (GTX111173),一种蛋白激酶(GTX13990) Wnt-2 (GTX62603) GSK-3β(GTX59752) phospho-GSK-3β(GTX59576)、波形蛋白(GTX100619),β连环蛋白(GTX101435),β肌动蛋白(GTX11003),合共轭山羊anti-mouse或anti-rabbit免疫球蛋白都购自Genetex Inc . (ICON-GeneTex、台北、台湾)。

2.2。制备MC甲醇提取

MC种植在花莲农业研究与推广车站(野兔、Hualein、台湾)introgressed特色品种和野生物种之间被确认,把凭证标本,编号为2381。叶子的身份验证MC在35 ~ 40°C和干浸泡在甲醇室温下两个月后收获的野兔。之后,提取甲醇的过滤和离心500 g×10分钟通过旋转蒸发去除沉淀和浓缩。提取的残留随后冻干在−−80°C,然后保持20°C,直到所需的治疗。甲醇提取的MC (MCME)溶解在DMSO溶液与股票的浓度稀释与媒体前200毫克/毫升。

2.3。细胞培养

人类肺腺癌细胞株CL1-0 CL1-5 A549和使用两个人类胚胎细胞系,HEK293和WI-38细胞,正常控制细胞在这项研究。CL1细胞最初建立了从单个细胞克隆从患者的肺腺癌组织中分离低分化腺癌(24]。CL1-0 CL1-5细胞,CL1一系列细胞系与独特的侵袭性和转移性能力(13),请提供美国博士大肠壮族(国家癌症研究所,国家卫生研究所、台湾)。A549细胞被用来比较CL1的敏感性细胞MCME在这项研究中。CL1-0 CL1-5细胞维持rpmi - 1640年媒介,而DMEM培养基是用于维护A549细胞,HEK293细胞,和WI-38细胞,补充10%胎牛血清,0.1毫克/毫升的链霉素,青霉素100单位/毫升。所有的细胞都在37°C的环境在湿润的气氛中含有5%的股份有限公司₂。

2.4。MTT试验

MTT试验是一个比色测定基于可行的细胞变化的能力从可溶性黄色蓝色甲瓒四唑盐晶体。细胞系评估在这项研究中被保持,脱落,悬浮在每个适当的媒介。一个适当的添加到96孔板的细胞数量和培养24小时,成为近汇合的。与MCME治疗后24 h, MTT刚做好的孵化和细胞浓度为0.5毫克/毫升4 h。甲瓒晶体于100年解散μL DMSO和光学密度由ELISA读者阅读(美国VT Bio-tek仪器)在570海里。每个治疗测试8次在至少三个独立的板块。细胞生存能力的细胞治疗MCME决心通过比较未经处理的细胞的吸收能力。

2.5。细胞迁移和入侵检测

迁移和入侵测定使用伤口愈合和transwell化验CL1-0和CL1-5细胞,分别。确定细胞运动性,相同数量的CL1-0 CL1-5细胞(/)被播种,种植在一夜之间在12-well板块90 - 95%融合。在愈合化验使用文化迁移测试插入(ibidi, Martinsried,德国)。细胞碎片被用磷酸缓冲盐和细胞培养介质包含0.15,0.3,0.6和1.25毫克/毫升MCME。伤口闭合是评估和拍照在24 h倒置显微镜(奥林巴斯IX71荧光显微镜,梅尔维尔,纽约,美国)。

细胞入侵检测进行了使用transwell钱伯斯(美国新泽西州,正欲富兰克林湖)。细胞(细胞/毫升)被放置在参议院充满rpmi - 1640中等或中等补充了0.15,0.3,0.6,和1.25毫克/毫升MCME, rpmi - 1640补充添加了10%的边后卫在室底部。孵化进行24小时的37°C。8的聚碳酸酯过滤器μm毛孔被移除和细胞上过滤器表面是用棉球擦去。过滤器随后被固定在室温下以100%甲醇8 - 10分钟,0.2% w / v结晶紫染色,水洗和PBS ()和光学显微镜下数在200 x放大操作。入侵指数被定义为入侵获得百分比的比值与入侵CL1-0或CL1-5细胞百分比与noninvaded细胞入侵了。

2.6。明胶Zymography

CL1-0和CL1-5细胞饥饿24 h和无血清培养基。随后,细胞在媒体包含0.5%的边后卫服用1.25毫克/毫升MCME不同时期,此后,上层的收集。样本分析明胶zymography 0.1% (w / v)的酶活性基质金属蛋白酶通过使用明胶作为衬底。每个车道加载总蛋白浓度的3μg和sds - page电泳在48°C。凝胶是在50 mM三(洗两次)包含2.5% (v / v)特里同x - 100 1 h,紧随其后的是重复10分钟冲洗在50毫米三()。凝胶在一夜之间被孵化的50 mM三(包含10毫米CaCl)₂0.15米,氯化钠,0.1% (v / v)特里同x - 100和1%的南₃在37°C和温柔一夜之间晃动。孵化后,凝胶沾0.25%考马斯亮蓝和7.5%醋酸20%甲醇使退色。基质金属蛋白酶在加载上层清液导致白明胶酶带出现在蓝色背景白色。

2.7。免疫印迹分析

CL1-0和CL1-5细胞收获和1.25毫克/毫升MCME治疗后不同时间间隔。细胞细胞溶解与含有1% Triton x - 100的缓冲区,50毫米三(南),10毫米EDTA, 0.02%₃和蛋白酶抑制剂混合物。收集蛋白质和由布拉德福德蛋白质化验设备(Amresco,哦,美国)电泳样品缓冲的沸腾5分钟。平等对待细胞中的蛋白质含量以12% sds - page凝胶得到了解决。蛋白质被涂抹在硝化纤维膜(美国微孔有限公司)和阻塞1 h在屏蔽解决方案(脱脂奶粉5%,1%在PBS Tween-20)在室温下。膜与三羟甲基氨基甲烷缓冲液洗盐水Tween-20(0.1%)和探测特定主要抗体在室温下1 h。与TBS-T洗后,屁股被孵化的1/5000稀释合共轭山羊anti-mouse或anti-rabbit免疫球蛋白在室温下1 h。蛋白质乐队是由西方化学发光合止动剂基质(微孔有限公司)和观察下UVP Bioimaging系统(UVP Inc .)、高地、钙、美国)。

2.8。统计分析

进行了量化的实验使用密度计(个人密度计SI、分子动力学、钙、美国)进行统计分析。数据提出了均值±SD。至少有三个独立的实验。在所有的实验中,两组之间的差异显著性计算图基的测试单向方差分析后,采用SPSS 13.0软件(方差分析)。

3所示。结果

3.1。MCME人类肺腺癌细胞的细胞毒性

MCME的细胞毒性三个人类肺腺癌细胞系,CL1-0, CL1-5, A549, MTT试验评估。如图1(一),细胞治疗与不同浓度的MCME(0.15, 0.3, 0.6,和1.25毫克/毫升)24 h导致显著减少细胞增殖CL1-0 A549细胞,而不同的易感性CL1-5被发现。每个细胞的减少可行性线接触MCME 24 h后55.2 ~ 95.8% CL1-0细胞A549细胞,59.2 ~ 92.6%和83.3 ~ 105.8%为CL1-5细胞。这些结果表明,MCME抑制A549和CL1-0细胞的增殖方式,存在剂量依赖的相关性对CL1-0最强有力的抗增殖作用细胞而不是高度侵袭性CL1-5细胞(14]。如图1 (b)正常细胞,细胞的可行性MCME-treated表示,正常人类胚胎肾细胞毒性的MCME HEK293细胞和肺WI-38细胞是重要的在1.25毫克/毫升,而不是在0.15毫克/毫升。HEK293细胞代表一个不太容易MCME比WI-38细胞。因此,可行性MCME-treated正常细胞没有减少CL1的A549细胞。MCME在24 h之间的不同的抗增殖效果CL1-0 CL1-5细胞表明MCME-induced CL1的不同细胞毒性细胞。微分人类正常细胞和肺腺癌之间的细胞毒性细胞显示了上升的癌症预防使用MCME作为补救措施。因此,CL1-0 CL1-5细胞随后被选择在调查antimetastatic MCME对肺腺癌的细胞。

3.2。CL1细胞MCME对迁移的影响

如图1(一)为代表的CL1-0和CL1-5细胞,细胞生存能力显著差异MCME在0.3,0.6,和1.25毫克/毫升。我们选择1.25毫克/毫升,浓度降低了约45%和17%在24小时细胞生存能力CL1-0 CL1-5,分别为最高浓度进一步评估MCME的影响细胞迁移和侵袭性属性。

伤口关闭在24小时检查后治疗。如图2(一个)、控制细胞迁移到伤口上,满是该地区在24 h,特别是对于CL1-5细胞。细胞的迁移MCME-treated CL1-0几乎抑制浓度为1.25毫克/毫升。伤口关闭被证明是抑制MCME治疗0.15毫克/毫升,浓度不影响细胞的生存能力,CL1-0和CL1-5细胞。量化数据表明MCME抑制CL1-0的能动性和CL1-5细胞剂量依赖性的方式削减91.8%和78.7%在1.25毫克/毫升孵化24 h后,分别(图2 (b))。

3.3。影响MCME CL1的入侵细胞

CL1-0 CL1-5细胞治疗在1.25毫克/毫升MCME 24小时导致明显降低入侵比未经处理的细胞(图3(一个))。一个类似的结果是细胞处理低浓度MCME所示。入侵CL1-0 CL1-5细胞被禁止MCME剂量依赖性的方式,即使在浓度没有明显的细胞毒性CL1-5细胞。量化数据表明MCME浓度从0.15到1.25毫克/毫升明显减少入侵细胞CL1细胞(图3 (b))。Src和FAK的表达下降在细胞治疗与MCME 1.25和0.6毫克/毫升(图3 (c))。如图3 (d),MCME抑制激活CL1-0 FAK和Src蛋白质的细胞剂量依赖性的方式,而只是发现FAK在CL1-5细胞的激活。抑制Src激活被MCME诱导治疗在0.6和1.25毫克/毫升CL1-5细胞。MCME-inhibited激活Src和FAK显著不同CL1-0和CL1-5细胞在1.25毫克/毫升。

3.4。MCME对基质金属蛋白酶的表达和活性的影响

阐明CL1-0 MCME-mediated抑制细胞迁移的影响,CL1-5细胞,MMP2和MMP9表达和活动确定。如图4(一),MMP-2 MMP-9 MCME CL1-5治疗细胞蛋白质含量逐渐下降,而MMP-9 CL1-0细胞显著减少12 h 24 h(图4 (b))。收集细胞培养媒体对待MCME和MMP的活动是通过明胶zymography来衡量的。明胶zymography化验表明,这两种细胞系对待MCME MMP-2活动减少和MMP-9展出。如图4 (c),MMP-2 MMP-9活动显著降低在24小时CL1细胞,表明一个强有力的抑制基质金属蛋白酶诱导了MCME CL1-0和CL1-5细胞。

3.5。MCME影响PI3K / Akt / GSK-3和Wnt通路CL1细胞

PI3K / Akt途径促进细胞存活率提高抗凋亡蛋白的表达和抑制proapoptotic的活动的。相反的失活Wnt蛋白质,糖原合成酶激酶3 (GSK-3)是由一种蛋白激酶磷酸化Ser9 [26]。灭活GSK-3阻碍蛋白质表达的具体目标为细胞增殖或转移(27]。如图5Akt的表达式在12 h, CL1-0细胞显著下降而CL1-5细胞表现出缓慢减少Akt MCME治疗后,在24小时达到最低点。PI3K常数,Wnt-2蛋白的表达增加从12 h细胞系。GSK-3β磷酸化在Ser9遵循了类似的时间依赖性Akt表达式。然而,GSK-3的表情βCL1-0细胞减少,而这是CL1-5增加细胞,治疗后24 h MCME。对面两CL1 Wnt-2细胞表达的增加表达的β连环蛋白被MCME治疗24小时下降。波形蛋白,这是在肺癌和关联与加速肿瘤的生长和入侵27),保持不变在MCME-treated CL1细胞。这些数据清楚地表明一种蛋白激酶,Wnt GSK-3β,磷酸化GSK-3β,β连环蛋白参与了MCME诱导细胞毒性和antimigration活动。

4所示。讨论

肿瘤通常定义为恶性反映更高的细胞增殖能力和侵入周围组织,可能是由于增长压力或细胞的迁移能力28]。迁移和入侵被报道是肺腺癌的关键生物特性细胞(29日]。据报道CL1细胞致瘤的但不是高转移性,除非培养与异构的不同等级的段落和一系列进步的侵袭性克隆。细胞系中使用在这项研究中,据报道CL1-5细胞以及A549细胞表现出高度侵袭性和转移性势(9,14]。然而,我们的研究结果表明,CL1-0和A549展览更容易比CL1-5 MCME细胞浓度范围从0.15至1.25毫克/毫升。此外,MCME在即使没有明显的细胞毒性浓度正常肾和肺细胞导致延迟CL1-0和CL1-5细胞迁移。antimetastatic效应MCME CL1-0和CL1-5细胞是剂量依赖性,暗示的影响除了抗主导MCME CL1细胞的作用。

FAK被报道通过MAPK信号促进肺癌细胞迁移和基质金属蛋白酶通路1,30.]。几个FAK下游信号通路参与调解FAK促进细胞迁移。特征特别好途径之一是通过适配器的协会和磷酸化分子的Src / FAK复杂[31日]。FAK PI3K结合,导致增加适配器的活化分子或下游效应器,另一种途径调解FAK促进细胞迁移(32]。此外,FAK促进MMP2和9的表达通过Src-mediated信号级联,导致激活的细胞生存信号以及基质金属蛋白酶的分泌到矩阵在癌细胞33]。FAK,作为发展的关键因素和病理血管生成,发现Src-dependent的方式形成一个信号复杂,这对血管生成与肿瘤的转移反应是至关重要的(34,35]。事实上,控制FAK信号被建议作为一种潜在的抗癌和antimetastasis策略36]。有趣的是,我们发现m . charantia在小鼠模型中具有抗癌和抗血管生成与乳腺癌mda - mb - 231细胞(网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2012/819632)。在这项研究中,MCME-inhibited Src和FAK的表达和磷酸化CL1-0,虽然他们没有Src CL1-5细胞在0.15和0.3毫克/毫升MCME-induced细胞毒性并不重要。与细胞生存能力,抑制细胞迁移和侵袭性CL如图所示在低浓度是MCME-induced独立的细胞死亡。进一步澄清antimetastatic MCME对CL1-0和CL1-5细胞的影响,我们比较了一些能动性因素管理转移。金属蛋白酶如MMP-2和MMP-9降解酶,在入侵扮演关键角色(37]。他们高度表达,与肿瘤侵犯和侵袭性肺腺癌的临床预后差(38,39]。一个微分的基质金属蛋白酶的表达,尤其是MMP-9, CL1-5细胞被调节的入侵能力高于CL1-0细胞(14]。阐明基质金属蛋白酶诱导的变化特别MCME,我们量化和评估MMP-2 MMP-9单独CL1细胞。除此之外对待MCME 12 h,表达MMP-9没有发现CL1-0和CL1-5细胞之间明显不同。因此,抑制MMP的活动是很重要的决定的能力由MCME antimetastasis CL1细胞。抑制激活Src和FAK恰逢MMP-2的减少表现和MMP-9,表明MCME-inhibited迁移和入侵是通过介导的Src / FAK /基质金属蛋白酶级联CL1-0和CL1-5细胞。在Src没有明显灭活MCME-treated CL1-5细胞浓度较低,这表明入侵能力的抑制MCME被其他FAK通路介导。

水平的增加β连环蛋白伴随着增强MMP-9表达式是目前公认的有效的促有丝分裂的信号分子,导致β-catenin-driven细胞增殖(37]。MCME抑制MMP-2和MMP-9表情的表达但没有显著影响β连环蛋白CL1-5细胞治疗后24小时之前,表明的重要性β连环蛋白稳定细胞增殖。与细胞的可行性MCME-treated CL1细胞,PI3K / Akt信号通路,另一种途径调解FAK促进细胞迁移以及肿瘤细胞的促有丝分裂的过程,包括在这项研究中。PI3K催化磷脂酰肌醇的生产3、4、5-triphosphate (PIP3),第二信使是必不可少的一种蛋白激酶信号在质膜(40]。Akt是一种丝氨酸/苏氨酸激酶功能调节的规定涉及大量基质细胞增殖/生存,血管生成,和组织入侵41]。Akt在转移性肿瘤和减少Akt表达显著抑制高转移性癌细胞转移(42]。我们发现MCME CL1细胞抑制一种蛋白激酶的表达。MCME能够抑制prosurvival PI3K / Akt通路CL1细胞延长从Src和/或FAK表达下调,导致其抗癌活性。此外,Akt的基本功能之一是GSK-3的磷酸化β(26]。GSK-3β有本构激酶活性显著降低由磷酸化Ser9 [43]。减少激活GSK-3β在MCME-treated CL1表明,抑制细胞迁移和入侵是由Src的失活,FAK和下游GSK-3β通过PI3K / Akt / GSK-3β途径。

Wnt信号通路发挥重要作用在发展和转移44]。Wnt蛋白质结合受体属于卷曲的家人(Fz)和激活一个涉及GSK-3的失活细胞内的级联β,最终导致了稳定和胞质核易位β连环蛋白(45,46]。核β连环蛋白与多种转录因子相互作用,或如MMP-2和MMP-9 Wnt-regulated目标基因,导致细胞增殖或转移(38,45,47]。在缺乏Wnt信号,β连环蛋白通过GSK-3退化β端依赖或独立通路47]。因为失调Wnt /β连环蛋白信号通路,导致肿瘤细胞增殖、转移、抗细胞凋亡已报道在肺癌48,49),Wnt及其下游目标,GSK-3β,β连环蛋白和基质金属蛋白酶,包括研究在CL1 MCME细胞的影响。尽管GSK-3β被灭活的增加表达Wnt-2 MCME-treated CL1细胞,表达的吗β连环蛋白减少。的表达下调β连环蛋白在MCME-treated CL1细胞伴随着MMP-2拒绝表达和MMP-9表明胞质退化β连环蛋白被GSK-3介导β独立的途径。有多个信号介质β连环蛋白的降解是由Wnt / GSK-3β通路(50]。此外,许多β-catenin-independent Wnt信号通路被发现说明,并不是所有的功能Wnt信号可以归因于规范β-catenin-mediated转录调节(51- - - - - -53]。我们的研究结果表明,增加表达Wnt-2并不紧密相关的表达β连环蛋白和基质金属蛋白酶MCME-treated CL1细胞。此外,抑制Src活动MCME-treated CL1细胞减毒GSK-3 FAK-induced激活β,抑制基质金属蛋白酶的表达和细胞的能动性。因此,MCME,虽然没有完全阐明,可能抑制肺腺癌细胞入侵通过抑制基质金属蛋白酶的表达通过Src的规定,FAK, PI3K / Akt, GSK-3β,β连环蛋白。

在这项研究中,我们调查的蛋白质含量β连环蛋白、细胞标记包括MMP2和MMP9,入侵和细胞增殖指标包括PI3K Akt, GSK-3βCL1细胞具有明显的转移能力。一个显著的不同表达式的一种蛋白激酶,β连环蛋白和基质金属蛋白酶以及GSK-3的激活β被发现在MCME-treated CL1-0 CL1-5细胞在更早的时间。减少的Src和FAK磷酸化细胞治疗MCME,在细胞生存能力的浓度没有显著下降,表明Src不仅参与MCME-mediated antimetastatic效应但宽容MCME-induced细胞毒性。此外,显著增加的Wnt-2 MCME-treated CL1-5细胞意味着以外的一个过程β连环蛋白生存调控其下游目标。这些Wnt / GSK-3的进一步研究β信号通路及其目标蛋白质应该提供有价值的见解Wnt和GSK-3的机制和监管β信号通路在MCME-induced细胞毒性。

5。结论

Src的表达和磷酸化降低FAK,和下游的监管机构,PI3K / Akt、基质金属蛋白酶在细胞接受MCME关键事件导致细胞死亡和antimetastasis CL1细胞。细胞暴露于MCME最终也导致GSK-3β失活。这个模型MCME-induced细胞死亡和antimietastasis肺腺癌CL1细胞如图6。这是第一篇论文提出一系列事件MCME-induced细胞死亡和人类肺腺癌转移抑制CL1细胞与不同的迁移和入侵的能力。我们的数据表明,Src、FAK和Wnt-2上游监管者在调节细胞增殖和/或迁移,导致GSK-3的失活β和/或随后的减少β连环蛋白和基质金属蛋白酶MCME-treated CL1细胞。由于anti-invasive效应浓度没有明显的细胞毒性,CL1-5 MCME细胞被认为是更加宽容。这些结果可能会导致进一步的研究来评估的可能性MCME作为膳食补充剂在减少人类肺癌肿瘤发生和/或发展。

利益冲突

没有利益冲突,可以视为损害公正性的研究报道。

确认

作者感谢Jih-I叶博士帮助统计分析和Ching-Yu楚易涌技术援助。本研究支持由农业委员会(95年as-6.2.1-st-a1和96 as-1.2.1-st-a1),授予委员会中国医学和药学(ccmp100 - rd - 045)和慈济大学(TCIRP96005和61040055 - 10),台湾。

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