文摘
背景。邮政寿险局医学,Shahakusan(合成),规定在后期阶段的肺部感染引起炎症。但她在呼吸道病毒感染的影响从未被报告过。目标。评价抗流感病毒活性的合成及其通过免疫系统的行为模式。方法。合成(0.3克/公斤/天)口服接种BALB / c miceforupper (URI)或下呼吸道感染(LRI)流感病毒/公关/ 8/34。鼻灌洗液的病毒效价(NLF)在5或2天postinfection (p)和细胞因子mRNA表达在下颌淋巴结或肺部5或4天为URI或LRI pi进行评估,分别。肺组织的组织病理学检查和NK细胞活性的脾细胞也被评估在LRI 4天pi。结果。当她是管理从7天前4天pi为URI,该病毒效价显著降低与处理的水控制相比,和il - 4、il - 1β,il - 10 mRNA表达减少,但IL-12A mRNA表达增加。政府的从之前一天到一天pi LRI大大减少病毒效价。她也减少了炎症细胞的浸润支气管肺泡空间和脱屑细支气管粘膜上皮细胞的损伤,降低IP-10 mRNA表达,增加NK细胞活性。结论。对流感病毒感染,但她没有直接影响发挥抗病毒效应在老鼠的immunomodulating活动通过行动的NK细胞和肺抗炎活动。
1。介绍
流感是一种病毒性感染,影响主要是上呼吸道。流感感染通常会持续一到两周,特点是突然出现高烧、肌痛、头痛、和严重不适,非生产性的咳嗽、喉咙痛、鼻炎(1]。大多数感染者在一到两周内恢复,不需要治疗。然而,高风险的并发症发生在两岁以下的儿童,成年人年龄超过65岁,和任何年龄的人有潜在疾病,如慢性心、肺(支气管哮喘等),肾脏,肝脏,血液,和代谢疾病(糖尿病,等等),或者免疫系统(艾滋病、等等)。1]。据报道,约80%的死亡率由流感病毒感染引起的肺炎(2,3]。
抗流感病毒药物可以分为M2蛋白质抑制剂如金刚烷胺和金刚烷乙胺,是有效的只有甲型流感病毒,并对流感病毒神经氨酸酶抑制剂如奥司他韦和扎那米韦,已被用于治疗甲型和乙型流感病毒。然而,出现耐药菌株和一些与这些药物相关副作用报告(3,4]。
传统中药在远东国家发挥了重要作用在这个区域卫生保健,特别是在日本、中国和韩国(5]。日本草药(邮政寿险局)的药品,Maoto(中国Ma-huang-tang)是一个历来的公式用于流感患者在日本,有报道称Maoto显示了临床退热的效果(6- - - - - -8]。然而,基于邮政寿险局传统医学理论,Maoto包含Ephedrae草草药的组件是不适合用于患者出汗或一般衰弱和适合使用在感染的早期阶段。
邮政寿险局医学,Shahakusan合成,Xie-bai-san, Sabaeksan韩国)最初是中国古典书籍中描述的治疗小儿疾病,肖怎样Yaozheng Zhijue分化和治疗儿童疾病(关键)(9),在日本也使用(10虽然不是很受欢迎。无法律已经规定了的治疗小儿肺炎、支气管炎,和早期的麻疹。合成是由四个草药:Mori皮层,地骨皮质,Glycyrrhizae基数,Oryzae玫瑰,被用于感染的后期阶段,揭示炎症由于肺热积累(9]。这四个组件草药显示轻微的动作,因此被认为是适合一般衰弱患者如儿童和老年人。虽然在活的有机体内抗炎作用的脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤模型(11),和一些在体外抗炎活动报告(12,13),合成对呼吸道病毒感染的影响从未被报告过。
在目前的研究中,因为她没有直接在体外抗流感病毒作用,我们检查了在活的有机体内其在小鼠口服抗病毒效果。如果无显示在活的有机体内抗流感病毒活动,它有可能给host-mediated效应增强等体液免疫和/或细胞毒性NK细胞活动,和/或抑制炎症由病毒感染引起的。为了评估这些假设,她对免疫功能的影响也进行了研究。
2。材料和方法
2.1。准备的提取及其草药组件
四个药用植物被用于制备合成:Mori皮层(根树皮桑属阿尔巴Linne,很多没有。0410240,2006年种植在中国的安徽省),地骨皮质(根树皮枸杞研究方面米勒,很多没有。C05321,种植在2006年在中国四川省),Glycyrrhizae基数(根Glycyrriza解费舍尔,很多没有。9 b31621,种植在中国的内蒙古和宁夏回族自治区2007 - 2010年),和Oryzae果实(颖果栽培稻Linne,很多没有。039009003,在2006年在日本新泻县种植)。Mori皮层和Glycyrrhizae基数买来田Wakanyaku有限公司(日本东京),地骨皮质是购自Tsumura &有限公司(日本东京),和Oryzae果实是购自Tochimoto Tenkaido有限公司(日本大阪)。凭证标本的这些植物都需要在实验室的生化药理学植物学期刊,北里研究所生命科学,在东京,日本北里大学。合成提取准备如下:Mori皮层的混合物(4.0 g),地骨皮质(4.0 g), Glycyrrhizae基数(2.0 g),和Oryzae果实(2.0 g)提取了600毫升蒸馏水,直到体积的一半。过滤过的水提物(绿色荧光蛋白;Kiriyama玻璃有限公司、日本东京)和滤液是冻干(收益率:14.4%)。冻干物质悬浮在蒸馏水和用于口服老鼠(0.3克/公斤/天)。
2.2。三维高效液相色谱法(3 d-hplc)分析
合成提取(10毫克)溶解在水中(1毫升)涡mixier和声波降解法。解决方案是使用DISMIC-13HP聚四氟乙烯膜滤器(0.45过滤μm, Advantec,日本东京)。分析滤液进行安捷伦1100 3 d-hplc系统(安捷伦科技有限公司,圣克拉拉,CA,美国)配备了二极管阵列检测器。啧啧凝胶ods - 80 - ts列(4.6×250毫米)(日本东京Tosoh有限公司)保持在40°C。流动相的洗脱是由10毫米的线性梯度磷酸acid-acetonitrile(95: 5→5: 95) 60分钟的流量0.8 mL / min。3 d-hplc简介水合成提取的图所示1。分析基于紫外(UV)吸收明显显示的存在以下合成的主要成分:甘草甙,liquiritigenin,和甘草甜素(来自Glycyrrhizae基数),和其他成分确定它们的起源与组件的草药的3 d-hplc的草药水提物从四个组件。3 d-hplc概要文件显示的主要成分来源于三个组件草药除了Oryzae果实(图1)。
2.3。细胞、病毒和疫苗
Madin-Darby狗肾细胞(MDCK)是生长在鹰的最低基本培养基(EMEM) (Gibco英杰公司有限公司,卡尔斯巴德,CA,美国)含有碳酸氢钠(2.2毫克/毫升),消息灵通的(0.3%),heat-inactivated胎牛血清(10%)、青霉素G(100单位/毫升),链霉素(100μg / mL)、两性霉素B(二性霉素B) (2.5μg / mL)在37°C公司为5%2。Mouse-adapted流感病毒A /公关/ 8/34 (H1N1)在北里研究所生命科学维护,北里大学(日本东京)。尿囊腔的病毒生长10-days-old孵化蛋48小时34°C。尿囊液是收获和离心机在1000 g×20分钟,然后得到的上层清液储存在一小部分−80°C。流感病毒血凝素(HA)从mouse-adapted流感病毒疫苗制备方法/公关/ 8/34的达文波特et al。14]。生物素酰化HA疫苗进行了使用生物素酰化工具包(Sulfo-OSu) (Dojindo实验室、熊本、日本)根据制造商的指示。
2.4。动物
具体无菌雌性BALB / c小鼠(6 - 7周)从克丽购买日本(东京,日本)。动物们被安置在塑料笼子在有空调的房间°C的相对湿度% 12小时光/暗周期下,标准实验室饮食的情况下,鉴于水随意。动物实验是北里大学,动物研究委员会批准和执行按照实验动物保健和使用指南在北里大学动物实验和适当的行为准则的日本从科学委员会。
2.5。在体外抗流感病毒的实验
MDCK细胞的病毒滴度文化的上层清液被病毒神经氨酸酶的活动估计上层清液(15]。Mouse-adapted流感病毒A /公关/ 8/34 (H1N1)中使用在体外抗病毒试验。合成提取的溶液制备无菌水。MDCK细胞(3×105细胞/毫升,100μ信用证)被放置在一个96孔细胞培养板(BD猎鹰,富兰克林湖,新泽西,美国),和培养2天在37°C公司为5%2。流感病毒加入细胞培养的单层膜融合感染复数(MOI) 0.0001空斑形成单位(PFU) /细胞(ca。11 PFU)在180年μL (MEM培养基含有2%牛血清白蛋白(BSA)和acetyltrypsin (Sigma-Aldrich有限公司,圣路易斯,密苏里州,美国)(3μg / mL)。样品(20μ信用证,最终浓度为0.39 - 100μg / mL)或消毒的水(控制)添加到MDCK细胞培养3天在37°C。0.1毫米的水溶液中2′- (4-methylumbelliferyl)α- d- - - - - -N-acetylneuraminic酸(4-MU-NeuAc,多伦多的研究化学品公司,多伦多,加拿大)(50μ左)和磷酸缓冲盐(PBS;50μL)被添加到文化上层清液(50μ在37°C L)和孵化10分钟Labsystems Fluoroskan II(日本住友制药,大阪,日本)。MDCK细胞培养板的单层膜与PBS洗,和可行的细胞测定比色法,这是基于原位5-dimethylthiazol-2-yl减少3 - (4)2,5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)可行的细胞(15)根据渡边等的过程。16]。一百年μL PBS的MTT(1毫克/毫升)被添加到每个的单层膜,和内容是孵化2小时37°C。结果甲瓒沉淀与异丙醇溶解包含0.04 M盐酸(100μ信用证),溶液的吸光度测定spectrophotometrically在570 nm无限200标(Tecan、Mannedorf、瑞士)。奥斯他韦(达菲,罗氏、巴塞尔、瑞士)(20μ信用证,最终浓度的10μg / mL)被用作抗病毒剂的积极控制流感病毒a /公关/ 8/34。细胞毒性试验,测试样品的解决方案准备消毒的水,被添加到汇合的MDCK细胞没有病毒如上所述。细胞培养在37°C公司为5%23天,和可行的细胞的数量是决定使用MTT测定如上所述。
2.6。在活的有机体内抗流感病毒的实验
上呼吸道感染的流感病毒(17]:小鼠腹腔内注射麻醉的Somnopentyl(戊巴比妥钠;默克& Co . Inc .怀特豪斯车站,新泽西,美国),然后感染鼻内下降1.5μL(流感病毒悬液(10 LD50在PBS含有0.1% BSA到每个鼻孔。合成提取口服药物在小鼠感染后的前7天到4天(p),一天4天pi或私家侦探2小时前4天pi病毒(图2(一个))。在pi工作5天。,serum specimens were prepared from mice by drawing blood from the infra-axillary artery. A nasal lavage fluid (NLF) was obtained by washing the nasal cavity of the head with 2 mL of PBS containing 0.1% BSA. A bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was obtained by injecting 2 mL of the washing solution twice into the trachea and lungs, which were separated from the body. A mandibular lymph node was harvested and stored at −80°C.
(一)
(b)
下呼吸道感染的流感病毒:老鼠被Somnopentyl腹腔注射麻醉,然后感染鼻内滴20μL(流感病毒悬液(2 LD50在PBS含有0.1% BSA成一个鼻孔。合成提取是口服药物鼠标从之前一天到一天pi或病毒的pi(图3天2 (b))。私家侦探在一天2和4天皮。,BALF, NLF, and serum samples were prepared as previously described. The lung specimens were stored at −80°C.
2.7。空斑实验
流感病毒滴度测定和描述的方法显示空斑实验Kiyohara et al。18]。短暂、重复文化MDCK细胞6-well塑胶板(BD猎鹰,富兰克林湖,新泽西,美国)暴露在100年μL BALF和独立样本30分钟37°C。这些细胞被覆盖包含3 2毫升的媒介μg / mL acetyltrypsin, 0.01%盐酸DEAE-dextran (Sigma-Aldrich有限公司)、0.1%葡萄糖,0.8%琼脂(在食品工业有限公司、长野、日本)其次是种植在37°C 2天。1毫升的细胞覆盖上述介质含有0.01%中性红(Wako纯化学工业,日本大阪)和培养37°C的一天。斑块的数量统计。
2.8。测定抗流感病毒的抗体
IgA的浓度,免疫球蛋白1对流感病毒和IgM抗体特定使用反相荧光ELISA测定(19)如下。每个96 - Immulon 4好环评板块(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)涂上100年μL的捕获抗体(BD生物科学Pharmingen,圣何塞、钙、美国)(1μg / mL纯化anti-mouse IgA免疫球蛋白1或IgM抗体0.01钠carbonate-bicarbonate缓冲区(pH值9.5)包含BSA 10μg / mL)和孵化为3小时37°C。然后,捕获抗体和300年被抛弃了μL阻止试剂(PBS) 1%的无脂牛奶添加到每个好和孵化一小时37°C。孵化后,与200年所有的井都洗了四次μL (PBST (PBS渐变20)为0.05%,和100年μL NLF双重的连续稀释、BALF或血清超块阻塞缓冲区(美国皮尔斯生物技术,罗克福德,IL)(与PBS稀释10倍)含0.05%渐变20被添加到每个。板是孵化在室温下过夜,然后用PBST洗净。生物素化的HA疫苗(1μ在100年阻止试剂(g / mL)μL)被添加到每个盘子是混合在一个微型板块混合器mpx - 96 (AGC电子玻璃、千叶、日本)在室温下一小时。与PBST洗涤后,100年μL链霉亲和素-β牛乳糖(1:1000年的阻断剂;Calbiochem, EMD化学品公司,达姆施塔特,德国)添加到每个。板是在室温下混合在一个微型板块混合器与PBST一小时,洗,之前的100年μL(0.1毫米4-MU -β半乳糖苷(Sigma-Aldrich有限公司)都在37°C和孵化2小时。最后,100年μL 0.1 glycine-NaOH (pH值10.3)被添加到每个。荧光定量的4-methylumbelliferone进行的激发波长355 nm和发射波长460 nm)使用无限200标。
2.9。NK细胞活性
小鼠脾细胞NK细胞活性的评估使用流式细胞仪(20.如前所述(21]。目标细胞溶菌作用的水平是决定使用Cytomics FC500流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特,沥青,CA),和NK细胞活性的表达为效应特异性裂解的百分比。
2.10。肺组织学
肺膨胀了10%甲醛溶液(Kokusan化工有限公司、东京、日本),然后固定在相同的解决方案。制备肺组织石蜡切片苏木精和伊红染色奉命三菱化学Medience有限公司(日本东京)。
2.11。定量的mRNA表达在下颌淋巴结和肺
总RNA提取使用Sepasol-RNA我超级G (nacalai tesque,京都,日本)从下颌淋巴结和肺。总RNA(0.5或2.0μg)然后使用ReverTra反向转录Ace (TOYOBO,大阪,日本)根据制造商的协议。结果cDNA放大的聚合酶链反应(PCR)技术使用SYBR绿色实时PCR大师混合+ (TOYOBO)定量PCR与特定的引物根据生产指令和决定使用Rotor-Gene Q(试剂盒、希尔登,德国)。引物的序列如表所示1。
2.12。IP-10 (IFN -γBALF诱导Protein-10 CXCL10)蛋白水平
蛋白质水平的IP-10 BALF决心利用酶联免疫试剂盒(研发系统公司,明尼阿波利斯,美国)根据制造商的指示。
2.13。统计分析
三个实验组之间的差异的重要性进行了分析与单向方差分析其次是事后多重比较。使用的软件是KaleidaGraph Ver.4.0(协同软件,HULINKS Inc .,东京,日本)。两组实验的意义差异与一个独立的分析t以及。一个概率(P)值<0.05被认为是显著的。
3所示。结果
3.1。二手烟对流感病毒感染的影响MDCK细胞
测试合成的影响对流感病毒的增殖及其细胞毒性活动,MDCK细胞被感染/公关/ 8/34 (H1N1)病毒或mock-infected和培养在各种浓度的合成(0.39 - 100μ克/毫升)或药物免费条件下。奥司他韦显示对病毒感染10强有力的抗病毒活性μ克/毫升。然而,合成的微不足道的影响在病毒扩散(图所示3(一个)(图)和生存受感染的MDCK细胞3 (b)),无显示非常低的细胞毒性对mock-infected MDCK细胞(图3 (b))。
(一)
(b)
3.2。合成的影响在小鼠上呼吸道感染流感病毒
3.2.1之上。二手烟对流感病毒的增殖的影响鼻腔的老鼠
合成时对BALB / c小鼠口服药物剂量的0.3克/公斤/天感染后的前7天到4天(p)的流感病毒,传染性病毒效价NLF私家侦探在5天的试处理组相比显著降低(图4)。奥司他韦在同等条件下显示出强有力的抗病毒效果。当无管理的老鼠在同一剂量从之前一天到4天皮。,the virus titer of the NLF observed a tendency of decrease compared with the water-treated control. However, when SHS was administered orally to the mice at the same dose from 2 hours p.i. to 4 days p.i., no antiviral effect was observed (Figure4)。
3.2.2。影响合成的抗流感病毒抗体滴度的老鼠
在pi工作5天。,the anti-influenza virus IgA antibody titers in NLF and BALF, IgG1在血清和BALF抗体滴度,IgM抗体滴度在SHS-treated NLF没有增强小鼠相比与处理的水组(数据未显示)。
3.2.3。二手烟对细胞因子mRNA表达的影响下颌淋巴结的老鼠
了解反应合成治疗细胞因子mRNA水平,实时定量PCR分析下颌淋巴结进行的。在pi工作5天。、il - 4、il - 1β干扰素-γ流感病毒感染小鼠,il - 10 mRNA表达显著增加与mock-infected组相比,但是IL-12A mRNA的表达显著下降(图5)。
当她从2小时口服pi pi工作4天。,IL-4 mRNA expression was decreased significantly in comparison with that of water-treated group. IL-1β信使rna表达表现出降低的趋势啦。而合成的口服5天(同一时间从2小时pi 4天皮。)不影响il - 4和il - 1β在mock-infected mRNA表达小鼠(图5)。il - 10 mRNA表达也显示趋势减少政府的私家侦探从2小时到4天皮。相反,IL-12A mRNA表达增加的趋势,当她是管理从之前一天到4天pi与处理的水组(图5)。然而,干扰素,γ和IL-12B mRNA表达SHS-treated老鼠相比没有改变与处理的水。
3.3。二手烟对流感病毒感染小鼠呼吸道症状
3.3.1。二手烟对流感病毒的增殖的影响鼻腔以及支气管肺泡腔内的老鼠
当合成的口服药物的老鼠在一个剂量的0.3克/公斤/天从之前一天到一天皮。,the infectious virus titer of the NLF was significantly reduced than that of water-treated group at 2 day p.i. (Figure6)。当合成的口服药物的老鼠在同一剂量私家侦探从之前一天到一天或3天皮。(图2 (b)),病毒效价降低BALF显示趋势的试处理组相比在2天pi和4天皮。(图6)。然而,独立的病毒效价SHS-treated老鼠在一天4 p。我似乎减少与处理的水组相比,但它并不重要。
3.3.2。影响合成的抗流感病毒抗体滴度的老鼠
在pi工作4天。,SHS did not enhance the anti-influenza virus IgA antibody titers in NLF and BALF, IgG1抗体滴度在血清和BALF和BALF IgM抗体滴度的病毒感染的小鼠相比,水是控制(数据未显示)。
3.3.3。她治疗对小鼠的肺组织的影响
在pi工作4天。,representative histological sections of lungs were harvested and stained with hematoxylin and eosin. The histological image of the control lung exhibited normal pulmonary and bronchiolar architectures and resident cells (Figure7(一))。流感病毒感染引起炎症细胞的浸润血管周围和peribronchiolar区域(图7 (b)、薄箭头)、支气管扩张和脱屑的细支气管粘膜上皮细胞肺组织(图7 (b),打开箭头)。然而,这些流感病毒诱导病理发现肺被政府的减毒(图7 (c)类似这些的控制mock-infected老鼠。
(一)
(b)
(c)
3.3.4。二手烟对IP-10 (IFN -γ诱导Protein-10 CXCL10) mRNA表达小鼠的肺和BALF IP-10蛋白质水平
流感病毒感染显著增强IP-10 mRNA表达小鼠的肺部和BALF IP-10蛋白水平在2天pi和4 pi与mock-infected老鼠相比(图8)。然而,IP-10 mRNA表达在肺似乎减少了政府的水处理相比在一天2天pi和4 p。,但明显降低只在pi工作4天。(图所示8(a))。IP-10 BALF中蛋白质含量也似乎减少了政府的水处理相比只在pi工作2天。,但并没有显著降低(图8(b))。
3.3.5。二手烟对NK细胞活性的影响小鼠的脾细胞
合成的口服药物时5天没有流感病毒感染,提高NK细胞活性的趋势观察脾细胞相比与water-administered控制(图9)。当流感病毒感染小鼠,SHS-treated小鼠的NK细胞活性增强明显比处理的水在4天皮。(图组9)。
4所示。讨论
一些邮政寿险局药品已报告他们在活的有机体内对流感的影响。退热的效力的Maoto(中文Ma-huang-tang)在人类8,22)和Gingyosan老鼠(Yin-qiao-san中文)(23,24]已报告,Kakkonto (Ge-gen-tang中文)增加了生产BALF中il - 12的老鼠(25],Shoseiryuto(中文Xiao-qing-long-tang)增强抗流感病毒扩散的IgA抗体其次是减轻呼吸道流感病毒的小鼠(26- - - - - -28]。基于邮政寿险局医学理论,这些公式在感染的早期阶段。它也被报道,Hochuekkito (Bu-zhong-yi-qi-tang中文),已用于恢复虚弱状态,已经在小鼠抗流感病毒活动(29日],Unpito(中文Wen-pi-tang)疲劳的恢复状况缓解流感病毒感染小鼠的肺部炎症抑制黄嘌呤氧化酶(XOD) [30.]。
Shahakusan(合成)已经被用于晚期阶段引起的感染,炎症由于肺热积累(9),这个公式显示轻微的动作,因此被认为是适合一般衰弱患者如儿童和老年人。然而,她对流感病毒感染的影响从未被报告过。
本研究澄清,无有一个微不足道的影响病毒的增殖和生存受感染的MDCK细胞(图3),这表明她没有直接影响对流感病毒感染。然而,目前的研究清楚地表明,合成的口服之前可以保护的扩散/公关/ 8/34 (H1N1)流感病毒在呼吸道的老鼠(数字4和6),但是她没有增强抗病毒抗体NLF BALF和血清感染小鼠上和下呼吸道感染。这些结果表明,合成显示host-mediated抗流感病毒活动通过作用机理不同于Shoseiryuto。
本研究还表明,il - 1βmRNA表达下颌淋巴结(鼻咽局部淋巴结之一)增加了流感病毒感染但表达下调的政府的私家侦探2小时至4天pi在上呼吸道感染(图5)。一个促炎细胞因子il - 1β是一个重要的调停人的炎症反应,参与多种细胞活动,包括细胞增殖、分化和细胞凋亡31日]。il - 1β也容易产生的甲型流感病毒感染白细胞(32]。合成的报告抗炎效应在LPS诱导的小鼠肺损伤模型还显示il - 1的减少β信使rna表达在肺BALF和蛋白质水平(11]。在目前的研究中,她本身并不影响il - 1β信使rna表达的下颌淋巴结mock-infected老鼠(图5)。这些结果表明,il - 1的减少β行动的mRNA表达的本研究可能发生由于鼻腔炎症的抑制而不是直接抑制啦。与这些结果,阅读起来可能有可能抑制炎症由于流感病毒感染。il - 4是一种细胞因子,诱导分化天真的辅助T细胞(Th0细胞)Th2细胞(33]。il - 10的产生主要是由单核细胞和淋巴细胞,一定程度上,会使Th1细胞因子的表达34]。据报道,当流感病毒感染小鼠,增加il - 4和il - 10 mRNA表达观察肺(35]。在目前的研究中,il - 4和il - 10 mRNA表达也增加了小鼠的下颌淋巴结中流感病毒感染,但她并不影响il - 4 mRNA表达mock-infected老鼠(图5)。细胞因子il - 12是一个heterodimeric由两个独立的编码基因,IL-12A (p35区域)和IL-12B (p40)。众所周知,白介素激活T细胞和NK细胞,并具有广泛的生物活性。这种细胞因子被发现是重要的维持足够数量的内存/效应Th1细胞协调长期保护细胞内病原体(36和诱发细胞介导的免疫反应37]。本研究表明,il - 4和il - 10 mRNA表达下调,和IL-12A mRNA表达在下颌淋巴结调节合成政府对流感病毒感染小鼠(图5)。这些结果表明,无明显影响Th1 / Th2平衡和激活Th1细胞在鼻咽。二手烟可能抑制流感病毒的增殖在鼻腔细胞介导的免疫反应的激活通过Th1细胞的激活。在目前的研究中,从有一天政府的前病毒感染抑制流感病毒的增殖在鼻腔pi工作5天。私家侦探,但是政府从2小时没有抑制上呼吸道感染(图4)。IL-12A mRNA表达增加合成时管理从之前一天到4天pi在上呼吸道感染(图5)。因此,这些结果表明,增加IL-12A mRNA表达涉及抗病毒效果的合成是一个可能的行动。据报道,当另一个邮政寿险局医学Kakkonto是前一天的口服药物的小鼠流感病毒感染,BALF中il - 12水平增加2天pi BALF和病毒产量减少3天皮。25]。这些观察表明,至少有部分合成的抗流感病毒活动,Kakkonto对呼吸道造成upregulation的il - 12。此外,支气管哮喘病人是流感病毒感染的高危人群,和il - 4是一个典型的th2型细胞因子起着关键作用在人类过敏哮喘反应(38]。il - 4 mRNA表达的减少二手烟的作用表明,她也有一个潜在的保护和/或治疗疾病,如严重的哮喘。
组织学实验表明,合成具有抗炎效果在老鼠的肺下呼吸道感染(图7)。IP-10 (CXCL10)是一个Th1闲暇的趋化因子是重要的招聘Th1细胞参与宿主免疫防御细胞内病原体如病毒感染(39]。IP-10表达水平是已知的与炎症性疾病,包括传染病(40]。这个观察趋化因子mRNA表达的减少在SHS-treated老鼠的肺下呼吸道感染(图8)。因此,这些结果表明,合成显示抗炎效应通过减少IP-10肺。
本研究还表明,口服合成增强NK细胞活性的下呼吸道感染小鼠的脾细胞和未受感染的老鼠(图9)。在这方面,她可能增强细胞免疫和保护流感病毒感染,因为NK细胞是淋巴细胞的先天免疫系统发挥着至关重要的作用在宿主防御各种病毒感染早期(41,42]。我们不能测量NK细胞活性在流感病毒感染小鼠的肺啦政府在目前的研究中,因为它是很难收集到足够数量的淋巴细胞肺癌的小鼠NK细胞试验。说明她对NK细胞活性的影响的肺必须等待进一步的研究。
甘草甜素Glycyrrhizae基数是一个主要组成部分,合成组件草本植物之一,其在活的有机体内抗流感病毒活动报道由于ip管理老鼠(43]。然而,在活的有机体内抗流感病毒活动的其他组件草药合成从来没有被报道。虽然口服甘草甜素的影响尚未报道,它有一个可能性是合成活性物质之一。说明口服抗流感药物的合成和抗流感病毒的进一步作用机理活动由我们组啦现在的进展。
5。结论
因此,这项研究显示,二手烟在活的有机体内抗流感病毒首次活动。此外,合成发挥其抗流感病毒在小鼠的影响通过其immunomodulating活动如NK细胞活性在肺脾细胞和抗炎活动。
确认
作者感谢美国牧野先生和美国Ikegami博士(食品科学研究实验室。,Meiji Co., Ltd.), for their valuable advice and help in the measurement of NK cell activity. The authors also wish to thank Ms. Y. Aoki, Mr. M. Kitaguchi, and Mr. T. Chiba for their technical assistance. A part of this work was support by Grant-in-Aid for Scientific Research (C) (KAKENHI) (20590705 for T. Nagai) and (23590896 for T. Nagai) from Ministry of Education, Culture, Sports, and Technology in Japan.