文摘

百合Dihuang唐(BDT)是一个著名的中药配方是常用的治疗患者的心理不稳定,心不在焉,失眠,烦躁不安,不足和其他心理疾病。这些主要症状与抑郁障碍密切相关。BDT是广受欢迎的使用治疗emotion-thought疾病多年来在中国。在目前的研究中,研究了小鼠的抗抑郁效果BDT使用强迫游泳试验(置)和尾悬挂试验(TST)。底层机制决定的影响,探讨了BDT脑单胺神经递质水平。BDT(9和18 g /公斤,14天)卖方管理显著降低浮置板轨道和静止时间的结核菌素不改变运动在公开作实地试验(OFT)。此外,BDT治疗剂量的18 g / kg抑制reserpine-induced下垂。同时,BDT老鼠大脑增强5 -和NA含量以及降低5的比率相比,其代谢物,5-HIAA,结核菌素后(营业额,5-HIAA / 5)。结果表明,抗抑郁效应BDT介导,至少部分,通过中枢单胺能的神经递质系统。

1。介绍

抑郁症是一种精神疾病,严重影响一个人的思想,行为,情感,和身体健康,已成为全球最主要的精神问题。在全球大约有4.5亿人患有抑郁症或行为障碍。据预测,抑郁症将成为2020年第二常见的疾病(1]。经典抗抑郁药包括三环抗抑郁药(柠檬酸)、单胺氧化酶抑制剂(毛),选择性5 -羟色胺再摄取抑制剂(SSRI),去再摄取抑制剂(百合)和5 -羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(去甲肾上腺素重摄取抑制剂)2,3]。虽然这些药物显示良好的功效,其中大部分是经常产生不良的负面影响。因此迫切需要探索更有前途的抗抑郁药物临床抑郁患者的需求。

传统草药配方临床上用于在中国几千年了。如今,使用传统的草药配方提供了我们一个潜在的替代治疗抑郁症(4,5]。百合Dihuang唐(BDT)是一位著名的中药配方,首先描述了“黄金商会简介”(Jinkui Yaolue)写的张钟京三世纪初。它是由两个组件草药:百合(球茎Lilii)和地黄(生地)。BDT在民间常用治疗治疗精神不稳定,心不在焉,失眠,烦躁不安,不足和其他心理疾病(6]。这些主要症状与抑郁障碍密切相关。BDT是广受欢迎的使用治疗emotion-thought疾病多年来在中国。一些临床研究显示抗抑郁效应BDT [7,8]。最近,药理研究也验证,植物的BDT和他们的一些化学成分,包括皂苷、环烯醚萜苷、多糖,显示神经系统的活动。准备地黄、蒸的根源地黄,对类似抑郁障碍的影响,抗氧化作用可能是其抗抑郁作用机制之一(9]。Catalpol、环烯醚萜苷、包含丰富地黄发现神经保护作用,抗氧化能力,能显著降低认知障碍(10- - - - - -12和治疗潜在的与炎症相关的神经退行性疾病13]。组件草本药物,百合或从百合皂苷还depressant-like参与影响血清素激活的系统(14,15)和-肾上腺轴(HPA)在动物(16]。

在目前的研究中,我们的目标是调查BDT通过强迫游泳的抗抑郁作用和尾巴悬挂在老鼠身上测试。具有抗抑郁是底层机制探索通过测量单胺神经递质在老鼠大脑的水平。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

去郁敏,去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5 -羟色胺(5 -),8-O-acetylharpagide, 5-hydroxyindoleacetic酸(5-HIAA)获得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。注射利血平(1毫克/毫升)是由广东Bangmin药业有限公司有限公司人参皂苷,槲皮素,是由国家提供药物分析研究所(中国,北京)。所有其他试剂和溶剂用于研究均为分析纯。

2.2。植物材料和制备BDT

球茎Lilii(提单)和生地(RR)从同仁堂购买中国制药有限公司(中国,北京)。两个草药研磨成粗粉,分别。BDT制定了混合两种草药粉的相对比例根据比率2:1(提单:RR)。草药粉混合物煮8卷是水(v / w)回流60分钟。提取过程重复两次45分钟。集中提取过滤清除残骸。集中提取冻干法获取提取当时干的收益率为32.84% (w / w)。提取存储在干燥器在4°C到使用。内容总皂苷(17)、总类黄酮(18),总环烯醚萜苷(19),和总多糖(20.在BDT提取被修改的方法,测量使用人参皂苷再保险,槲皮素,8-acetylharpagide,分别和右旋糖酐作为标准。结果表明,BDT含有皂甙、黄酮总环烯醚萜苷和总多糖的浓度为0.91%,0.52%,0.66%,和4.36% (w / w)。

2.3。动物和治疗

雄性ICR小鼠权重从实验动物中心,获得20 - 25 g是解放军总医院,北京,中国。动物们保持在12 h光/暗周期调节温度(22±2°C)和湿度(50±10%)和美联储与标准饮食和水随意。他们被允许适应三天前使用。本研究的实验协议经伦理委员会批准的中国人民解放军总医院,依法进行指导的实验室动物保健和使用(中国卫生部)。09:30-14:00之间所有实验进行,每个动物都只使用一次。

动物被随机分配到组50个人。蒸馏水是动物组1(汽车集团)。动物组2与积极管理化合物(去郁敏20毫克/公斤)。动物组3、4和5收到胃内的剂量的BDT提取粉为4.5 g,分别9 g和18 g / kg。药物有每天上午9点半到十点半之间是14天。测试2 h后进行治疗。老鼠,执行测试行为测试后,被牺牲的决心单胺神经递质。

2.4。强迫游泳测试(置)

强迫游泳测试是根据Porsolt描述的方法进行et al。21与修改)。短暂,老鼠被迫游泳在一个透明的玻璃容器(直径25厘米高14厘米)充满了10厘米的水在24±2°C。静止的总持续时间(秒)测量如前所述22)在一个6分钟的最后4分钟测试会话。老鼠被认为是固定时停止了挣扎和保持漂浮在水中一动不动,除了必要的运动来保持他们的头露出水面。

2.5。尾部测试(TST)

尾部进行测试根据Steru等的方法。23]。短暂,老鼠暂停5厘米以上地板通过胶带放置约1厘米的尾巴。静止的总持续时间(s)是6分钟的量化测试期间。老鼠被认为只有当他们挂被动无法移动。

2.6。开放田地试验(OFT)

动态行为评估在一个开放田地测试如前所述24,25]。开放田地装置由一个广场的木制舞台(40厘米×60厘米×50厘米),黑色的表面覆盖在墙上。木质的地板领域同样分为12等于正方形的黑色线条。每个鼠标放置单独的中心舞台,允许自由探索。广场的数量在鼠标经过后爪和饲养的数量记录在测试期间的5分钟。试验之间的舞台地板清洁洗涤剂,和测试进行了温度、噪音和光控的房间。

2.7。在老鼠身上的逆转Reserpine-Induced下垂

利血平测试进行描述的方法显示Bourin et al。26与修改)。利血平(2.5毫克/公斤)是腹腔内的动物,和上睑下垂是评估利血平处理后120分钟。动物被放置在架子上(桌面上方20厘米)和眼睛下垂的分数计算如前所述[27),眼睛睁开= 0;四分之一封闭= 1;一半封闭= 2;四分之三封闭= 3;完全封闭的= 4。

2.8。单胺神经递质水平的测量

探讨详细的神经化学机制参与的抗抑郁效果BDT,老鼠接受BDT 14天被用于决定NE、DA、5 -, 5-HIAA(5)的代谢物水平测试后在大脑中。老鼠被斩首了。整个大脑迅速从老鼠,加权,并立即在液态氮冷冻。组织样本存储在−80°C到化验。在10卷的组织样本均质裂解缓冲(0.5 0.6更易/ L高氯酸,更易与L Na2EDTA和0.1 g / L半胱氨酸)离心机在15000克15分钟。上层清液与相同体积的混合缓冲(1.2 mol / L K2HPO4, 2.0更易与L Na2EDTA)和离心机15000克15分钟。得到的上层清液用于试验。5的内容,NA、DA和5-HIAA测量如前所述使用高效液相色谱法(HPLC)和荧光检测与少量修改28]。分析了上层清液通过高效液相色谱使用一个Alltech Alltima C18柱(粒度5毫米,4.6毫米×250毫米)。高效液相色谱分离是通过权力平等主义的洗脱(1毫升/分钟)与流动相组成87%的缓冲溶液(50 L更易与柠檬酸,50 L更易与醋酸钠,0.5更易1-sodium heptanesulfonate, 5更易/ L三乙胺,和0.5更易与L Na2EDTA PH = 3.8)和13%甲醇(v / v)。洗出液是由荧光监控探测器设置在发射波长280 nm和激发波长315纳米。校准曲线和极限定量网上列出(表2,补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2012/419257)。5 -的浓度、NE、DA, 5-HIAA估计使用校准曲线的标准溶液。单胺神经递质水平表示为μg / g湿重的组织。

2.9。统计分析

结果表示为±SEM。多个组比较进行使用单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett测试以检测组间差异。决心当一个重要的区别。

3所示。结果

置和结核菌素是最广泛用作评估抗抑郁活性[行为的工具29日,30.]。结果BDT浮置板轨道中演示了在固定时间图1。与车辆组相比,只有BDT政府连续14天剂量18 g / kg静止时间降低了33.8% ()。相同的治疗方案BDT剂量的9和18 g /公斤也显著降低了静止时间测试。静止的时间分别减少了37.3%和42.2%相比,车辆(图2)。在相同的实验条件下,类似的效果观察小鼠接受的剂量去郁敏20毫克/公斤,而作为一个积极的控制实验。减少小鼠的静止时间去郁敏浮置板轨道和结核菌素为55.9%和46.1%,分别为(数字1和2)。

如图3,BDT或去郁敏管理连续14天并没有显着影响的口岸和饲养在开放田地测试(OFT)相比,汽车集团。这是一个迹象表明,小鼠的运动活动常常是不影响治疗BDT或去郁敏。

如图4,只在每日剂量的治疗与BDT 18 g / kg 14天明显引起了利血平引起的上睑下垂。相同的治疗协议使用去郁敏20毫克/公斤也引起显著reserpine-induced上睑下垂。

数据显示BDT对老鼠的大脑/身体没有影响(表1)。NA的水平,哒,5,5-HIAA后小鼠的大脑中结核菌素测定并记录如表所示1。与正常组相比,显著降低了反应体系暴露在5和NA含量在老鼠的大脑。BDT 9点和18 g / kg显著增加5 -水平(,、职责),而BDT 18 g /公斤显著升高5代谢物,5-HIAA水平()。NA水平显著增加的高剂量治疗后BDT (18 g /公斤)。积极控制,去郁敏(20毫克/公斤)产生的水平的增加不仅5和东北。没有显著变化,DA观察小鼠测试后在任何治疗方案。5 -营业额,由5-HIAA / 5的比率,计算。5 -营业额的显著差异观察组5收到在18 g / kg BDT口服剂量()(表1)。

4所示。讨论

强迫游泳测试和尾巴悬挂测试是广泛使用的抑郁症动物模型筛选抗抑郁的活动(21,23]。在这些测试中,动物是他们不能逃避压力的密闭空间。在最初一段时间的努力后,他们将成为固定。这样静止代表了绝望的状态类似于人类精神抑郁和服从逆转的抗抑郁药物(21,23]。在目前的研究中,BDT评估使用的抗抑郁的影响两个经典动物模型。此外,对运动的影响BDT评估公平贸易局的排除假阳性的影响归因于任何精神刺激剂BDT的效果。处理后BDT 9点和18 g / kg 14天,小鼠表现出显著减少静止时间的强迫游泳(图1(图)和尾巴暂停测试2)。此外,BDT治疗不增加过境点的数量和饲养(图3)。我们的发现表明静止时间的减少引起了BDT浮置板轨道结核菌素并没有治疗相关精神兴奋药效果,而是BDT的抗抑郁效果。

抑郁症与干扰有关的脑单胺神经递质(31日,32]。作为抑制剂,利血平可以不可逆抑制疱疹吸收类,包括去甲肾上腺素、多巴胺和5-hydroxytrytamine及其代谢物。因此,我们的底层抗抑郁的机制进行了探讨BDT reserpine-induced动物抑郁模型基于抑郁症的单胺假说(33]。单胺类缺失上睑下垂是观察储备或刺激类,再吸收34,35]。reserpine-induced上睑下垂的测试,结果表明,抗抑郁效应BDT可能参与保护单胺神经递质。

中枢神经系统的功能障碍涉及神经递质5 - NA, DA一直建议抑郁症的发病机制中发挥重要作用。进一步的证据相关的抗抑郁效果BDT单胺神经递质,NE的内容,哒,5,5-HIAA大脑结核菌素的测定。结核菌素通常被用于检测和描述抗抑郁药物的疗效,具有敏感性大于置(36]。我们的结果表明,BDT(9和18毫克/公斤)增加了5 -水平剂量依赖性的方式在老鼠的大脑。这些影响与积极的药物去郁敏所观察到的类似。神经传递素的比率相比,其代谢物(营业额)可以作为神经递质代谢指数,营业额的减少表明新陈代谢放缓神经递质(37]。在本研究中,减少营业额(5-HIAA / 5)观察,表明减少5 -新陈代谢。我们的研究结果表明,BDT会导致大脑中血清素激活的激活,这是符合行为变化在TST展出。与血清素激活的并行系统,去系统也是很重要的在抑郁和中介行为的影响抗抑郁药物(38]。老鼠的大脑BDT NE水平治疗后也显示增加测试。增加与reserpine-induced上睑下垂的效果是一致的。因此,目前的研究证实,血清素激活的系统和去甲系统可能涉及的抗抑郁效果BDT。

总之,BDT浮置板轨道和结核菌素具有抗抑郁作用的老鼠。结果表明,抗抑郁效应BDT介导,至少部分,通过中枢单胺能的神经递质系统。

确认

m·l·陈和j·高贡献同样这项工作。本研究支持部分由中国国家自然科学基金(没有。30973599)。

补充材料